גליקוזידים של אינדוקסיל הם כלים מבוססים ונמצאים בשימוש נרחב לסינון אנזימים ולניטור פעילות אנזימים. במיוחד עבור מבנים מסוג גלוקוז, סינתזות קודמות הוכיחו את עצמן כמאתגרות ומניבות נמוכות. הגישה החדשנית שלנו משתמשת באסטרים של חומצה אינדוקסילית כחומרי ביניים יקרים כדי להניב מספר ניכר של גליקוזידים אינדוקסיל בתשואות טובות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
סינתזה של Indoxyl-גליקוזידים לאיתור של פעילויות glycosidase
במאמר זה
סיכום
תקציר
גליקוזידים Indoxyl הוכיחו להיות כלי רב ערך ורב-תכליתי לפעילות glycosidase הניטור. Indoxyls פורסם על ידי הידרוליזה אנזימטית ומהירות חמצון, למשל על ידי חמצן אטמוספרי, לאינדיגו צבעי סוג. תגובה זו מאפשרת הקרנה מהירה וקלה in vivo בלי בידוד או טיהור של אנזימים, כמו גם בדיקות מהירות על צלחות אגר או בפתרון (לדוגמא, כחולה-לבנה הקרנה, מיקרו-בארות) ומשמש בביוכימיה, היסטוכימיה, בקטריולוגיה ומולקולרית ביולוגיה. למרבה הצער הסינתזה של מצעים כגון הוכיחה להיות קשה, עקב בצד תגובות שונות ותגובתיות הנמוכה של פונקצית הידרוקסיל indoxyl. במיוחד למבנים מסוג גלוקוז תשואות נמוכות נצפו. הגישה החדשנית שלנו מעסיקה אסתר חומצת indoxylic כביניים מפתח. אסטרים חומצת Indoxylic עם דפוסי החלפה מגוונים הוכנו על מסלולי מדרגי. glycosylations העברת שלב עם אלה acceptors וperacetylatedניתן לבצע הלידים glycosyl בתנאים מקובלים בתשואות גבוהות. מחשוף אסתר וglycosylation כסף בתיווך קל לאחר מכן מניב גליקוזידים indoxyl peracetylated בתשואות גבוהות. לבסוף deprotection מתבצע על פי Zemplén.
מבוא
במשך זמן רב, ייצור האינדיגו היה תהליך בעל חשיבות כלכלית רבה. לפני שסינתזות כימיות בקנה מידה גדול אפשרו גישה זולה לאינדיגו, הושגו חומרי מוצא ממקורות טבעיים עוד מהתקופה שלפני הנצרות. גידול צמחים המספקים אינדיגו (אינדיגו טבעי) באירופה הפך לבלתי משתלם במאה ה-17th במהלך המאה, מאחר שכמות מקדימי האינדיגו בצמח האינדיגו ההודי (0.2-0.8%) גבוהה פי 30 בערך. בסוף המאה ה-19, סינתזה כימית של אינדיגו דיחקה את הגידול המסורתי1,2.
פרקורסורים של אינדיגו המופיעים באופן טבעי בצמחים כוללים Indican (1), Insatan A (2) ו-Isatan B (3) (איור 1). כולם מורכבים ממניע אינדוקסיל המקושר לשארית גליקוזיל. פירוק של הקשר הגליקוזידי, למשל על ידי הידרוליזה אנזימטית, מוביל לשחרור של אינדוקסיל (4). האינדוקסיל עצמו כמעט חסר צבע, אך ניתן להחלידו במהירות ליצירת צבע אינדיגו (5). תגובה רגישה זו הותאמה בביוכימיה, היסטוכימיה, בקטריולוגיה וביולוגיה מולקולרית לצורך ניטור פעילות אנזימטית. ניתן לבצע סריקת פעילות in vivo ללא בידוד או טיהור של אנזימים, כמו גם בדיקות מהירות על צלחות אגר או בתמיסה (למשל, סריקת כחול-לבן, מיקרו-בארים). בהתאם לשארית (למשל, אסטרים, גליקוזידים, סולפטים) המקושרת ליחידת האינדוקסיל, פותחו סובסטראטים מתאימים למחלקות אנזימים שונות (למשל, אסטראזות, גליקוזידזות, סולפטאזות)3. בהמשך הדגש יהיה על יצירה ויישום של גליקוזידים של אינדוקסיל.
איור 1: חומרי מוצא טבעיים של אינדיגו ויצירת צבע אינדיגו באמצעות הידרוליזה. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.
תבנית הסבסטיטוציה של יחידת האינדוקסיל קובעת את הצבע ואת התכונות הפיזיקליות של צבע האינדגו שנוצר. תבניות הסבסטיטוציה הנפוצות ביותר הן 5-bromo-4-chloro (מקוצר כ-X; כחול-ירקרק), 5-bromo (כחול) ו-5-bromo-6-chloro (מגנטה), מכיוון שאלו יוצרים את חלקיקי הצבע הקטנים ביותר, אינם יוצרים גרנולות ומפגינים את הדיפוזיה הנמוכה ביותר מאתרי ההידרוליזה. תכונה אחרונה זו חשובה במיוחד עבור ניסויי in vivo3.
הדיווח הראשון על שיטה אינדיגוגנית (indigogenic) לזיהוי פעילות אסטראזה פורסם בשנת 1951 על ידי Barrnett ו-Seligman, אשר השתמשו באינדוקסיל אצטט ובוטיראט4. כעשור לאחר מכן, העיקרון האינדיגוגני הותאם לאיתור של גלוקוסידאז מיונקים5. עד כה פותחו מספר גלוקוזידים של אינדוקסיל, אף על פי שהסינתזה שלהם התגלתה כקשה. מרבית הסינתזות מבוססות על שימוש באינדוקסיל N-אצטיל כקבלה (acceptor) ובגליקוזיל הליד המתאים כתורם (donor)6-14. הגליקוזילציה מבוצעת באצטון עם נתרן הידרוקסיד. בתנאים אלו מתרחב מספר של תגובות לוואי, המפחיתות את היבול באופן משמעותי. במיוחד עבור מבנים מסוג גלוקוז דווחו יבולי גליקוזילציה נמוכים מאוד (למשל, 15% עבור (N-acetyl-5-bromo-4-chloro-indol-3-yl)-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-ᴅ-glucopyranoside6 ו-26% עבור (N-acetyl-5-bromo-4-chloro-indol-3-yl)-2,3,2',3',4'-penta-O-acetyl-β-ᴅ-xylobioside14 בדוגמה עדכנית יותר). באמצעות גישה חדשנית, המשתמשת באסטרים של חומצה אינדוקסילית, הוכנו מספר ניכר של גלוקוזידים של אינדוקסיל ביבולים טובים (למשל, יבול של 57% עבור (N-acetyl-5-bromo-4-chloro-indol-3-yl)-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-ᴅ-glucopyranoside).
הפרוטוקול הבא מתאר סינתזה פשוטה של indoxylic acid allyl ester (5-bromo-4-chloro) ובסרטה סינתזה של אינדוקסיל גליקוזיד (X-Gal). ניסוי מודל פשוט מדגים את התגובתיות האנזימטית של β-galactosidase באמצעות X-Gal.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הערות כלליות:
כל התגובות בוצעו באמצעות מכסה אדים וציוד מגן אישי מתאים. כל הריאגנטים והממיסים (p.a.; תכולת מים לממיסים יבשים: MeCN <50 ppm; et2o <0.01%; CH2Cl2 <0.003%; THF <0.005%) נרכשו ממקורות מסחריים ושימשו כפי שהתקבלו. TLC בוצע על צלחות סיליקה ג'ל 60 F254 של Merck. התרכובות זוהו על ידי UV ו/או על ידי טיפול ב-EtOH/H2SO4 (9:1) וחימום לאחר מכן. כרומטוגרפיה של עמודות בוצעה עם ג'ל סיליקה Merck/Fluka 60 (230-400 רשת). הסינון בוצע באמצעות משפך Büchner ומשאבת השאיפה. ממיסים הוסרו באמצעות מאייד סיבובי (40 מעלות צלזיוס, ~200 סל"ד). המוצרים יובשו בוואקום גבוה (משאבת שבשבת סיבובית). תגובות הדורשות ממיסים יבשים בוצעו תחת אטמוספירת ארגון.
להלן מתוארת הסינתזה של X-Gal (16) המשתמשת ב-5-bromo-4-chloro-indoxylic acid allyl ester (12). לתרכובות נוספות עם דפוסי החלפה מגוונים וכן אסטרי מתיל שהוכנו על פי רצף סינתטי זה, ראה אסמכתא 17-19.
1. מקבל: סינתזה של 5-ברומו-4-כלורו-חומצה אינדוקסילית אליל אסתר18 (12)
- N-אצטילציה: סינתזה של N-(4-bromo-3-chloro-2-methylphenyl)-אצטמיד (6)
- ממיסים 10.0 גרם (45.7 מילימול) של 4-ברומו-3-כלורו-2-מתילאנילין ב-30 מ"ל דיכלורומתאן.
זהירות! דיכלורומתאן מזיק ומקרר את התמיסה באמבט קרח. - מוסיפים 6.50 מ"ל (68.7 מ"מול) אנהידריד אצטי טיפתי ומניחים לתערובת להתחמם לטמפרטורת החדר. ניתן לערבב את התערובת במשך 8 שעות או למשך הלילה. זהירות! אנהידריד אצטי הוא מאכל ודליק.
- הסר את הממס והתגבש מחדש מ-9:1 אתיל אצטט/מתנול (תשואה: 97% (11.6 גרם, 44.2 ממול), מוצק חסר צבע).< /> זהירות! אתיל אצטט מגרה ודליק. זהירות! מתנול רעיל ודליק.
- ממיסים 10.0 גרם (45.7 מילימול) של 4-ברומו-3-כלורו-2-מתילאנילין ב-30 מ"ל דיכלורומתאן.
- חמצון: סינתזה של N-אצטיל-5-ברומו-6-כלורו-חומצה אנתרנילית (7)
- ריפלוקס תערובת של 2.30 גרם (8.76 מילימול) של 6 (מוצר המתקבל משלב 1.1) ו-2.10 גרם (8.52 מילימול) MgSO4•7H2O ב-40 מ"ל מים בבקבוק תחתון עגול בעל 3 צווארים המצויד במשפך קירור ונפילה.
- הוסף תמיסת KMnO4 רוויה של 50 מ"ל במים לתערובת התגובה במשך 3 שעות. לאחר מכן מחממים למשך שעתיים נוספות תחת ריפלוקס, אמבט שמן של כ-135 מעלות צלזיוס. זהירות! אשלגן פרמנגנט מזיק ומחמצן.
- מצננים לטמפרטורת החדר ומסננים את הפירולוזיט (MnO2), שנוצר במהלך התגובה.
זהירות! פירולוזיט מזיק. - מוסיפים חומצה הידרוכלורית (37%) לתסנין עד ל-pH 1, ואז מסננים את המוצר ומייבשים בוואקום, (תשואה: 70% (1.80 גרם, 6.15 מילימול), מוצק חסר צבע).
זהירות! חומצה הידרוכלורית היא קורוזיבית.
- דה-אצטילציה: סינתזה של חומצה 5-ברומו-6-כלורו-אנתרנילית (8)
- יש להמיס 3.90 גרם (13.3 מילימול) מתוך 7 (המוצר המתקבל משלב 1.2) ב-70 מ"ל של תמיסת נתרן הידרוקסיד מימית 1 N ולחמם בטמפרטורה של כ-100 מעלות צלזיוס (אמבט שמן) למשך 5 שעות< /> זהירות! נתרן הידרוקסיד הוא מאכל.
- מצננים לטמפרטורת החדר ומוסיפים חומצה הידרוכלורית (37%) עד ל- pH 1, ואז מסננים את המוצר בעזרת משפך Büchner ומייבשים בוואקום, (תשואה: 88% (2.93 גרם, 11.7 מילימול), מוצק חסר צבע).
- היווצרות אנהידריד: סינתזה של 5-bromo-6-chloro-isatoic anhydride (9)
- השעו 8.17 גרם (32.6 מילימול) של 8 (המוצר המתקבל משלב 1.3) ב-33 מ"ל אצטוניטריל יבש.
זהירות! אצטוניטריל מזיק ודליק. - מערבבים בטמפרטורת החדר ומוסיפים 5.3 מ"ל ותמיסה של 3.22 גרם (10.8 מ"מול) טריפוסגן ב -18.5 מ"ל דיכלורומתאן יבש טיפה בו זמנית במשך תקופה של 30 דקות. לאחר מכן מחומם למשך 3 שעות בחום של 50 מעלות צלזיוס (אמבט שמן). זהירות! פירידין מזיק ודליק.
זהירות! טריפוסגן רעיל ויכול לשחרר פוסגן. - הסר כ-75% מהממס והרוה את התגובה על ידי הוספת 100 מ"ל מים מזוקקים וסנן את המוצר שלך. שוטפים עם כמות קטנה של דיכלורומתאן קר.
- יבש את המוצר בוואקום, (תשואה: 88% (7.53 גרם, 27.2 מ"מול), מוצק חסר צבע).
- השעו 8.17 גרם (32.6 מילימול) של 8 (המוצר המתקבל משלב 1.3) ב-33 מ"ל אצטוניטריל יבש.
- N-אלקילציה: סינתזה של 5-bromo-6-chloro-N-[(methoxycarbonyl)allyl]-isatoic anhydride (10)
- יש להמיס 25 גרם (90 מילימול) של 9 (המוצר שהתקבל משלב 1.4) ב-250 מ"ל דימתילפורממיד נטול מים. ולצנן עם אמבט קרח.
זהירות! דימתילפורממיד מזיק ודליק - הוסף 1.15 שווה ערך לנתרן הידריד (60% בפרפין) בחכמה.
זהירות! נתרן הידריד הוא מאכל ודליק; תגובה כבדה עם מים/קרח. - לאחר 30 דקות של ערבוב ב-0 מעלות צלזיוס אפשר להתחמם לטמפרטורת החדר ולהוסיף 1.2 שווה ערך לאליל ברומואצטט טיפה.
- לאחר ערבוב של 5 שעות, יש להרוות את התגובה על ידי הוספת 500 מ"ל מים מזוקקים ולסנן את המוצר.
- שוטפים במים (3 פעמים, 100 מ"ל) ומייבשים את המוצר בוואקום, (תשואה: 93% (31.5 גרם, 84.1 מ"מול), מוצק חסר צבע).
- יש להמיס 25 גרם (90 מילימול) של 9 (המוצר שהתקבל משלב 1.4) ב-250 מ"ל דימתילפורממיד נטול מים. ולצנן עם אמבט קרח.
- פתיחת אנהידריד: סינתזה של 5-bromo-6-chloro-N-(methoxycarbonylallyl)-חומצה אנתרנילית אליל אסטר (11)
- יש להמיס 10 גרם (27 מילימול) מתוך 10 (המוצר המתקבל משלב 1.5) ב-100 מ"ל אלכוהול אליל.
זהירות! אלכוהול אליל מזיק ומסוכן לסביבה. - יש להוסיף 350 מ"ג (8.70 מילימול) נתרן הידריד (60% בפרפין) במנה.
- לאחר ערבוב במשך 6.5 שעות או למשך הלילה, הסר את הממס.
- להכפיף את המוצר הגולמי לכרומטוגרפיה של עמודה (עמודה 30 x 6 ס"מ; 240 גרם סיליקה) אתר נפט / אתיל אצטט 2:1; RF = 0.66), (תפוקה: 80% (8.30 גרם, 21.3 מילימול), שמן צהוב).
זהירות! אתר נפט הוא דליק, מגרה ומסוכן לסביבה.
- יש להמיס 10 גרם (27 מילימול) מתוך 10 (המוצר המתקבל משלב 1.5) ב-100 מ"ל אלכוהול אליל.
- עיבוי דיקמן: סינתזה של 5-bromo-4-chloro-indoxylic acid allyl ester (12)
- מערבבים 3.0 גרם (7.7 מילימול) של 11 (מוצר המתקבל משלב 1.6) ו-1.75 גרם (15.6 מילימול) של אשלגן טרט-בוטוקסיד ב-100 מ"ל אתר דיאתיל יבש.
זהירות! אשלגן טרט-בוטוקסיד הוא קורוזיבי ודליק.
זהירות! אתר דיאתיל מזיק ודליק ביותר. - מחממים את התערובת תחת ריפלוקס (מצנן יותר) למשך שעתיים בחום של 40-45 מעלות צלזיוס.
- הסר כ- 75% מהממס, והוסף חומצה הידרוכלורית מדוללת (100 מ"ל, 1 מ ').< /> זהירות! אין לייבש לחלוטין, פירוק יכול להתרחש.
- מסננים את המוצר ומייבשים בוואקום, (תשואה: 84% (5.14 גרם, 15.5 מילימול), חסר צבע עד מעט ירוק מוצק).
- מערבבים 3.0 גרם (7.7 מילימול) של 11 (מוצר המתקבל משלב 1.6) ו-1.75 גרם (15.6 מילימול) של אשלגן טרט-בוטוקסיד ב-100 מ"ל אתר דיאתיל יבש.
2. אינדוקסיל-גליקוזיד: סינתזה של X-Gal17
- גליקוזילציה של העברת פאזה: סינתזה של (5-bromo-4-chloro-indox-3-ylic acid allyl ester) 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-ᴅ-galactopyranoside (14)
- יש לערבב 400 מ"ג (1.21 מילימול) של החומצה האינדוקסילית אלילסטר 12 (מוצר שהתקבל משלב 1.7), 410 מ"ג (1.21 מילימול) טטרה-בוטילאמוניום הידרוגנסולפט ו-500 מ"ג (1.21 מילימול) של התורם 2,3,4,6-טטרה-O-אצטיל-α-ᴅ-גלקטופירנוזיל ברומיד (α-אצטוברומוגלקטוז) ב-10 מ"ל דיכלורומתאן. זהירות! טטרה-בוטילאמוניום הידרוגנסולפט מזיק.
- הוסף 10 מ"ל של תמיסה מימית של אשלגן פחמתי (1 מ ').< /> זהירות! אשלגן פחמתי הוא מאכל.
- יש לערבב בטמפרטורת החדר עד לצריכה מלאה של התורם (TLC: אתר נפט/אתיל אצטט).
- הפרד את השלב האורגני (משפך ההפרדה), יבש מעל Na2SO4 והסר את הממס.
- הכפיף את המוצר הגולמי לכרומטוגרפיה של עמודות (אתר נפט / אתיל אצטט 1:1; RF = 0.33). (תפוקה: 86% (690 מ"ג, 1.04 מילימול), מוצק חסר צבע).
- מחשוף אסתר ודקרבוקסילציה: סינתזה של (N-acetyl-5-bromo-4-chloro-indol-3-yl) 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-ᴅ-galactopyranoside (15)
- יש להמיס 600 מ"ג (0.908 מילימול) מתוך 14 (המוצר המתקבל משלב 2.1) ב-15 מ"ל טטרה-הידרופוראן יבש.< /> זהירות! טטרהידרופוראן מזיק ודליק.
- מוסיפים 800 מיקרוליטר מורפולין ו-105 מ"ג (9.09 מיקרומול) טטראקיס (טריפניל פוספין) פלדיום (0) ומערבבים לילה בטמפרטורת החדר.< /> זהירות! מורפולין דליק וקורוזיבי.
- הסר את הממס.
- הוסף 400 מ"ג (2.40 מילימול) אצטט כסף, 800 מ"ג (5.79 מילימול) אשלגן פחמתי ו-10 מ"ל אנהידריד אצטי.
זהירות! אצטט כסף מגרה ומסוכן לסביבה. - מחממים בחום של 90-100 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
- לאחר הקירור לטמפרטורת החדר יש לדלל בדיכלורומתאן.
- שוטפים את התערובת פעמיים במים ופעם אחת בתמיסת NaHCO3 מדוללת (10%).< /> זהירות! נתרן ביקרבונט הוא מאכל.
- יבש את השלב האורגני מעל Na2SO4 (מסנן) והסר את הממס.
- הכפיף את המוצר הגולמי לכרומטוגרפיה של עמודות (PE/EA 1:1; RF = 0.24), (תפוקה: 88% (495 מ"ג, 8.00 ממול), מוצק חסר צבע).
- זמפלן דה-אצטילציה: סינתזה של (5-bromo-4-chloro-indol-3-yl)-β-ᴅ-galactopyranoside (16)
- יש להמיס 396 מ"ג (0.436 מילימול) 15 (המוצר המתקבל משלב 2.2) ב-10 מ"ל מתנול.
- מוסיפים כמות קטליטית של נתרן מתאנולט ומערבבים למשך הלילה בטמפרטורת החדר.
זהירות! נתרן מתאנולט הוא דליק וקורוזיבי. - לנטרל עם Amberlite IR-120 H+ (מסנן) ולהתרכז.
זהירות! Amberlite IR-120 H+ מגרה. - יבש את המוצר בוואקום, (תשואה: 87% (170 מ"ג, 0.416 מ"מול), מוצק חסר צבע).
3. המחשת ניסוי מודל: הוכחת פעילות של β-גלקטוזידאז המשתמש ב-X-Gal
- הכן תמיסה של 0.5 מ"מ של X-Gal במאגר של 500 מיקרוליטר (Tris-HCl 20 מ"מ; pH 7.4; 50 מ"מ NaCl, 0.1 מ"מ חומצה אתילנדיאמינטטראצטית; או כל מאגר מתאים אחר לאנזים שלך) בצינור מיקרו-צנטריפוגה (ניתן להמיס X-Gal בכמה מיקרוליטר של דימתיל-סולפוקסיד).
- יש להוסיף 1 מיקרוליטר β,1-3-גלקטוזידאז (EC 3.2.1.23 10,000 יח'/מ"ל; או כל β-גלקטוזידאז מתאים אחר) ולנער (600 סל"ד) ב-37 מעלות צלזיוס.
- עקוב אחר התגובה. הצבע מסוג אינדיגו נוצר לאחר פרק זמן קצר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הסינתסות הראשונות של אינדיקן (indicane) ו-5-bromo-indicane פורסמו על ידי רוברטסון כבר בשנים 1927 ו-192915,16. באמצעות שימוש במתיל אסטר של חומצה אינדוקסית (indoxylic acid methyl ester) כמקבל, חסמה העמדה 2 הרדיקלית ובכך דוכאו חלקית תגובות לוואי. גליקוזילציה באצטון/סודיום הידרוקסיד, בעקבות הסרת הגנה ודקרבוקסילציה (160 °C, אנהידריד אצטי, שעה אחת) ולבסוף דה-אצטילציה, הניבו אינדיקן ו-5-bromo-indicane. בהתבסס על קונספט זה, פיתחנו סינתזה משופרת של גליקוזידים של אינדוקסיל, תוך שימוש באליל אסטרים של חומצה אינדוקסית כמקב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בשל תשואות ומגבלות נמוכות, במיוחד עבור מבנים מסוג גלוקוז וסכרידים מורכבים יותר, פותחה גישה סינתטית חדשה כלפי אינדוקסיל גליקוזידים. אסטרי חומצה אינדוקסילית הוכיחו את עצמם כמתווכים מרכזיים יקרי ערך והתקבלו במסלול מודולרי וניתן להרחבה. כל השלבים מניבים תשואה גבוהה ובשל חומרי התחלה זולים וסינתזות מרובות גרם קלות אפשריות. היתרון של גישת אליל אסטר הוא חסימת העמדה הדו-מגיבתית. כך מדוכאות תגובות לוואי יורדות בתפוקה. שימוש באסטרי אליל מאפשר מחשוף סלקטיבי, וזה חשוב במיוחד על מצעים המכילים פונקציית קרבוקסיל.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
תמיכה בעבודה זו על ידי Glycom A/S, קופנהגן, דנמרק, מודה בתודה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אנהידריד אצטי | Grü ssing | 10298 | קורוזיבי, דליק |
| אצטוניטריל | סיגמא-אולדריץ' | 608-001-00-3 | מזיק, דליק |
| Aldrich | 453021 | מזיק, מסוכן לסביבה | |
| Amberlite IR-120 H+ | Fluka | 06428 | מגרה |
| Merck | 802260 | קורוזיבי, רעיל, מסוכן לסביבה | |
| 4-Bromo-3-chloro-2-methylaniline | ABCR | AB 171687 | מגרה |
| דיכלורומתאן | ACROS | 326850010 | דיאתיל מזיק |
| Grü ssing | 10274 | מזיק, דליק במיוחד | |
| דימתילפורממיד | ACROS | 348430010 | מזיק, דליק |
| דימתיל-סולפוקסיד | סיגמא-אולדריץ' | 41648 | |
| אתיל אצטט | סיגמא-אולדריץ' | 607-022-00-5 | מגרה, |
| דליק אתילנדיאמין-טטראצטי חומצה | AppliChem | A1103.0500 | מגרה |
| &בטא; 1,3-גלקטוזידאז, רקומביננטי, E. coli | Calbiochem | 345795 | |
| חומצה הידרוכלורית | VWR | 20252.290 | |
| מגנזיום גופרתי קורוזיבי הידרט | Merck | 105885 | |
| מתנול | ACROS | 326950010 | מורפולין רעיל, דליק |
| Janssen | Chimica | 15.868.57 | קורוזיבי, דליק |
| Peroleum ether | Azelis | 111053 | דליק, מגרה, מסוכן לסביבה |
| אשלגן פחמתי | Grü ssing | 12005 | |
| אשלגן פרמנגנט | Grü ssing | 12056 | מזיק, מחמצן |
| אשלגן טרט-בוטוקסיד | Merck | 804918 | מאכל |
| פירידין | סיגמא-אולדריץ' | 613-002-00-7 | מזיק, דליק |
| כסף אצטט | פלוקה | 85140 | מגרה, מסוכן לסביבה |
| נתרן ביקרבונט | Grü ssing | 12144 | |
| נתרן הידריד | Merck | 814552 | קורוזיבי, דליק |
| Riedel-de Hä en | S181200 | מתאנולט קורוזיבי | |
| Merck | 806538 | קורוזיבי, דליק | |
| Grü ssing | 12175 | ||
| Tetrabutylammonium hydrogensulfate | Lancaster | 5438 | |
| מזיק טטרה-הידרופוראן | סיגמא-אולדריץ' | 87371 | מזיק ודליק |
| טטראקיס (טריפנילפוספין) פלדיום(0) | סיגמא-אולדריץ' | 216666 | |
| טריפוסגן | פלוקה | 15217 | רעיל |
| (הידרוקסימתיל)אמינומתאן הידרוכלוריד | סיגמא | T-3253 | מגרה |
מקורות
- Clark, R. J. H., Cooksey, C. J., Daniels, M. A. M., Withnall, R. Indigo, Woad, and Tyrian Purple: Important Vat Dyes from Antique to the Present. Endeavour. 17, 191-199 (1993).
- Hunger, K. Industrial Dyes: Chemistry, Properties, Applications. , 1st, Weinheim. Wiley-VHC. (2003).
- Kiernan, J. A. Indigogenic Substrates for Detection and Localization of Enzymes. Biotechn. Histochem. 82, 73-103 (2007).
- Barnett, R. J., Seligman, A. M. Histochemical Demonstration of Esterases by Production of Indigo. Science. 114, 579-582 (1951).
- Pearson, B., Andrews, M., Grose, F. Histochemical Demonstration of Mammalian Glucosidase by Means of 3-(5-Bromoindolyl)-β-ᴅ-glucopyranoside. Exp. Biol. Med. 108, 619-623 (1961).
- Anderson, F. B., Leaback, D. H. Substrates for the Histochemical Localization of some Glycosidases. Tetrahedron. 12, 236-239 (1961).
- Van Dort, M. E., Lee, K. C., Hamilton, C. A., Rehemtulla, A., Ross, B. R. Radiosynthesis and Evaluation of 5-[125I]Iodoindolyl-3-yl-β-ᴅ-galactopyranoside ([125I]IBDG) as a β-Galactosidase Imaging Radioligand. Mol. Imaging. 7, 187-197 (2008).
- Yoshida, K., Iino, N., Koga, I. Syntheses of Halogen Substituted β-ᴅ-Glucuronides and Their Hydrolysis by Rabbit Liver β-Glucoronidase. Chem. Pharm. Bull. 32, 1759-1769 (1975).
- Horwitz, J. P., et al. Substrates for Cytochemical Demonstartion of Enzyme Activity I. Some Substituted 3-Indolyl-β-ᴅ-glycopyranosides. J. Med. Chem. 7, 574-575 (1964).
- Eschenfelder, V., Brossmer, R. 5-Bromo-indol-3-yl 5-Acetamido-3,5-dideoxy-α-ᴅ-glycero-ᴅ-galactononulopyranosidic Acid, a Novel Chromogenic Substrate for the Staining of Sialidase Activity. Glycoconjugate J. 4, 171-178 (1987).
- Fujii, I., Iwabuchi, Y., Teshima, T., Shiba, T., Kikuchi, M. X-Neu5Ac: A Novel Substrate for Chromogenic Assay of Neuraminidase Activity in Bacterial Expression Systems. Bioorg. Med. Chem. 1, 147-149 (1993).
- Berlin, W., Sauer, B. In situ Color Detection of α-ʟ-Arabinofuranisodase, a "No-Background" Reporter Gene, with 5-Bromo-3-indolyl-α-ʟ-arabinofuranoside. Anal. Biochem. 243, 171-175 (1996).
- Marmuse, L., et al. New Chromogenic Substrates for Feruloyl Esterases. Org. Biomol. Chem. 6, 1208-1214 (2008).
- Kaneko, S., Kiaoka, M., Kuno, A., Hayashi, K. Syntheses of 4-Methylumbelliferyl-β-ᴅ-Xylobioside and 5-Bromo-3-Indolyl-β-ᴅ-Xylobioside for Sensitive Detection of Xylanase Activity on Agar Plates. Biosci. Biotechnol. Biochem. 64, 741-745 (2000).
- Robertson, A. J. Syntheses of Glucosides. Part I. The Synthesis of Indican. Chem. Soc. , 1937-1943 (1927).
- Robertson, A., Waters, R. B. J. Synthese of Glucosides. Part VII. The Synthesis of 6-Bromoindican. Chem. Soc. , 2239-2243 (1929).
- Böttcher, S., Thiem, J. Indoxylic Acid Esters as Convenient Intermediates Towards Indoxyl Glycosides. Eur. J. Org. Chem. , 564-574 (2014).
- Böttcher, S., Hederos, M., Champion, E., Dékány, G., Thiem, J. Novel Efficient Routes to Indoxyl Glycosides for Monitoring Glycosidase Activities. Org. Lett. 15, 3766-3769 (2013).
- Böttcher, S., Thiem, J. Facile Preparation of Indoxyl- and Nitrophenyl Glycosides of Lactosamine and Isolactosamine. RSC Adv. 4, 10856-10861 (2014).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
