מעקב עכבר מח עצם המונוציטים In vivo

סיכום

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

תקציר

הדמיה מולטי-פוטונית בזמן אמת מספקת הזדמנות מצוינת לחקור סחר בתאים ואינטראקציות בין תאים בסביבתם התלת-ממדית הפיזיולוגית. הפעילות הביולוגית של תאי החיסון תלויה בעיקר ביכולות התנועתיות שלהם. למונוציטים בדם יש זמן מחצית חיים קצר בזרם הדם; מקורם במח העצם ומשתחררים ממנו באופן מכונן. במצב דלקתי, תהליך זה משופר, מה שמוביל למונוציטוזיס בדם ולחדירה לאחר מכן לרקמות הדלקתיות ההיקפיות. זיהוי האירועים הביומכניים השולטים בסחר מונוציטים ממח העצם לעבר רשת כלי הדם הוא צעד חשוב להבנת הרלוונטיות הפיזיופתולוגית של מונוציטים. ביצענו הדמיה ב-time-lapse in vivo על ידי מיקרוסקופ דו-פוטוני של מח עצם הגולגולת של עכבר Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP (MacBlue). עכבר ה-MacBlue מבטא את החלבון הפלואורסצנטי המשופר של ציאן (ECFP) תחת שליטת מקדם ספציפי למיאלואיד ¹, בשילוב עם תיוג רשת כלי הדם. אנו מתארים כיצד גישה זו מאפשרת מעקב אחר מונוציטים מדולריים בודדים בזמן אמת כדי לכמת עוד יותר את התנהגות הנדידה בתוך פרנכימת מח העצם וכלי הדם, כמו גם אינטראקציות בין תאים. גישה זו מספקת תובנות חדשות לגבי הביולוגיה של תת-קבוצות מונוציטים של מח העצם ומאפשרת לטפל עוד יותר כיצד ניתן להשפיע על תאים אלה במצבים פתולוגיים ספציפיים.

מבוא

מח העצם ממלא תפקיד מרכזי בהמטופואיזיס ומייצג את המאגר העיקרי של מונוציטים המסתובבים מחדש באופן מכונן בין הדם לפרנכימה המדולרית, מחדשים את מאגר המונוציטים במחזור עם תוחלת חיים קצרה ^2,3 ומשתתפים בבנייה מחדש של רקמות המצב היציב - מקרופאגים ותאים דנדריטיים ⁴. במהלך דלקת או לאחר אפלזיה חולפת, מונוציטים מגויסים באופן פעיל ממח העצם או מהטחול ^{5, 6, 7} ומתיישבים באיברים דלקתיים. מספר צירים כימואטרקטיביים היו מעורבים בתהליך גיוס תאים מיאלואידים ממח העצם ^{8, 5, 6,9}. מעבר לתא המיאלואידי, מח העצם הוא גם אתר חשוב של תחול לימפוציטים מסוג T ¹⁰ ונישה של זיכרון חיסוני ^11,12. לפיכך, רקמה זו מרכזית למחקרים רבים בתחום ההמטולוגיה והאימונולוגיה. הידע שלנו על הארגון המבני של תאים מיאלואידים מדולריים נובע בעיקר מניתוח חתך היסטולוגי של רקמות קבועות ¹³. מבט סטטי זה אינו מאפשר לחקור את דינמיקת חילופי התאים בין המדורים השונים של מח העצם, שהיא הבסיס לפעילותו התפקודית.

הדמיה תוך-חיונית מהווה קלט ביולוגי חשוב בחקר ניידות התאים, היצמדות התאים ואינטראקציות בין תאים, שתוארו בעבר רק ממערכות מבחנה. האתגרים הטכניים להדמיה תוך-חיונית נכונה כוללים את היכולת להגיע לרקמה המעניינת מנקודת מבט אופטית, ולמקסם את בידודה מסחיפה פיזיולוגית (נשימה, שרירים או התכווצויות פריסטלטיות) או מכניות (שיבוש והארכת רקמות לאחר ניתוח, וחשיפה למיקרוסקופ כמו גם הפרעות טמפרטורה וכלי דם/חמצון). סחיפות מיקרוסקופיות עשויות להגביל את היכולת לשמור על המיקוד לאורך זמן ועלולות להכניס ארטיפקטים לכימות תנועתיות התאים. חלופה אחת, שתוקפה עבור מספר רקמות כדי להפחית את הקשיים הטכניים הללו, היא לעבוד על רקמה מושתלת שהודגרה בתווך תרמוסט ומחומצן; עם זאת, הפרעה מוחלטת של זרימת הלימפה וכלי הדם עלולה להיות בעייתית. להדמיה תוך-חיונית של מח עצם הגולגולת יש מספר יתרונות בנושאים אלה. ראשית, זה דורש פעולה כירורגית מינימלית. שנית, עובי העצם באזור זה מאפשר הדמיה ישירה של נישות מח עצם ללא שחיקה, ובכך מפחית הפרעות פיזיולוגיות. ניתן לדמות את הרשת המדולרית באזור הפרסגיטלי של העצם; עם זאת, הסינוסואידים נראים יותר באזור הפרונטו-פריאטלי שבו מטריצת העצם דקה יותר^12,14.

הדמיה תוך-חיונית מסתמכת על הזמינות של המדווח הפלואורסצנטי המדויק ביותר המתייג את האוכלוסייה המעניינת. תיוג במבחנה של אוכלוסיית תאים מטוהרים לפני העברה מאמצת הוביל לאפיון חשוב של נישות תאי גזע המטופויאטיות ¹⁵ או מיקרו-דומיינים אנדותליים של מח עצם המעדיפים השתלת גידול ¹⁶, וסיפק מספר תשומות בסיסיות על מושגי מפתח באימונולוגיה ¹⁷. עם זאת, גישה זו דורשת בדרך כלל מאות אלפי תאים כדי לקבל הזדמנות לזהות אותם לאחר מכן in vivo. ניתן להסביר זאת על ידי שיעור התמותה הגבוה לאחר הצביעה, הדילול בכל הגוף והשינוי במצב ההפעלה, מה שעלול להוביל לביות מוטה. תיוג אנדוגני ממערכת עכברים טרנסגנית מתגבר במידה רבה על מגבלות אלה ואיפשר לדמות את ההתנהגות של אוסטאובלסטים אנדוגניים ⁸, מגקריוציטים ¹⁸ או תת-קבוצות שושלת מיאלואיד ⁶. עם זאת, יש להיות זהירים כאשר בוחנים את הספציפיות של המדווח הפלואורסצנטי בקרב תת-הקבוצה הנחקרת.

ה-Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP, הנקרא עכבר MacBlue ¹, הוא מערכת טרנסגנית רבת ערך לחקר מונוציטים מדולריים עם הדמיה בזמן אמת ⁶. הזרקה תוך ורידית של רודמין-דקסטרן במשקל מולקולרי גבוה מבדילה את הפרנכימה המדולרית מרשת הסינוסואידים של כלי הדם של מח העצם. באמצעות גישה זו, ניתן לעקוב אחר התנהגות המונוציטים בתאים המדולריים השונים בהקשר פיזיופתולוגי ספציפי של עניין. יתר על כן, אנו מציעים אסטרטגיה נוספת להשוואת דינמיקת מונוציטים לזו של נויטרופילים באמצעות תיוג in vivo באמצעות נוגדן ספציפי.

פרוטוקול

הערה: כל פרוטוקולי הניסוי אושרו על ידי הוועדה לניסויים בבע"ח והאתיקה הצרפתית ומאומתים על ידי "הגנת שירות et סנטה Animales, Environnement" עם מספר-75-2065. גודל מדגם נבחרים כדי להבטיח שחזור של הניסויים, ובהתאם ל3R של רגולציה אתיקה של בעלי החיים.

1. הכנת העכבר

1. אלחוש
   1. לתקופה קצרה של הדמיה (שעות פחות מ 1), לטשטש את העכבר עם זריקת intraperitoneal של 200 μl של תמיסת מלח המכילה קטמין (100 מ"ג / קילוגרם) וXylazine (10 מ"ג / קילוגרם).
   2. לחלופין, לתקופה ארוכה יותר של הדמיה (עד 4 שעות), לטשטש את העכבר עם שאיפה של 2.5% isoflurane מתאדה בתערובת 70/30 של O ₂ / N ₂ O, דרך מסכה מותאמת.
   3. הערה: בדרך זו מספקת לחוסר הכרה יציבה יותר ותמנע זריקת intraperitoneal סדרתי של תרופות.
   4. לאחר העכבר הוא הרדים, לבדוק חוסר הכרה באמצעות גירוי של כרית כף הרגל עם מצבטים.
2. צביעת כלי דם / כתמים נוספים
   1. עבור מכתים כלי דם: להזריק לוריד בוריד הזנב, 200 μl של Rhodamin-Dextran (2 מד"א, 10 מ"ג / מיליליטר במאגר מלוח).
   2. עבור מכתים נויטרופילים: להזריק 2 מיקרוגרם של Ly6G-PE (שיבוט 1A8) בתמיסת מלח לוריד בוריד הזנב 100 μl.
3. קיבוע
   1. לקיבוע, השתמש בעל stereotactic מותאמת אישית המותאם למיקרוסקופ ולמכשיר אינהלציה גז ההרדמה.
      הערה: בעל sterotactic היא תמיכת מתכת עם שני סוגריים לוחית מתכת, אחד להיות קבוע ונשלפים וישימה אחרים, להדק את ראשו של בעל החיים.
   2. התקן את הראש של העכבר בין לוחות התמך כדי להבטיח בידוד מתנועות נשימה. הדק את האוזניים בין צלחות וראש למתוח את sk שמירהב. בדקו יציבות ורווחה נשימה של בעלי החיים.
4. הסר את הקרקפת
   1. להשתמש בזהירות אתנול 70% להרטיב את השיער של הקרקפת עם המוליך סטרילי, הימנעות ממגע עם העיניים.
   2. חותך את העור עם מספריים ומלקחיים סטריליים כדי להסיר באופן מלא את הקרקפת מאחורה של העצם הקודקודית לעצם הקדמי. הרחק עד 3 מ"מ מעיניים ואוזניים למניעת דימום נרחב. הסר את רקמת חיבור הרופפת המכסה את הגולגולת (קרום עצם). לשטוף את השיער שנשאר עם מגבת נייר ספוג-PBS חם.
5. מערכת טבילה להגדיר
   1. הדבק טבעת גומי בקוטר 18 מ"מ עם דבק כירורגים ישירות על הגולגולת באמצעות מחט מד קטנה לשלוט הפצה. מדביק את כל הפריפריה של טבעת הגומי כדי למנוע דליפה (30 μl צריך להיות מספיק).
   2. נקה את הגולגולת מתחת לזירה בפעם האחרונה עם מגבת נייר ספוג-PBS ולאחר מכן להוסיף 37 ° C PBS לטבילה של שלמהגולגולת. הוסף ירידה של 0.9% NaCl פתרון או משחת עיניים ספציפי בכל עין של העכבר, כדי למנוע יובש בעיניים. גרור את בעל stereotactic תחת המטרה.
   3. כ למקם את השדה באמצעות עינית המיקרוסקופ באמצעות העברת ישירה.

2. רכישת הדמיה שני פוטונים

1. השתמש במיקרוסקופ multiphoton יחד עם Ti: לייזר גביש ספיר, המספק פולסים 140fs של אור NIR, באופן סלקטיבי מתכונן מ -680, ל- 1,080 ננומטר, ומאפנן acousto אופטי לבקרת כוח הלייזר. השתמש בתצורה כולל 3 גלאים חיצוניים-descanned שאינו (NDD) (המאפשרים הקלטה בו זמנית של 3 ערוצי ניאון) עם שילוב של 2 מראות dichroic (565 ננומטר ו690 ננומטר), 565/610 500/550 ומסנני bandpass, ו 485 מסנן קצר לעבור, עם Apochromat תכנית × 20 (NA = 1) מטרת טבילה במים.
2. הגדר את תא החימום כדי לאפשר homeothermy הטוב של anaesעכבר thetized.,
   הערה: טמפרטורה עשויה להיות מוגדרת 1 שעה לפני פגישת ההדמיה ליציבות טובה יותר. במקרה שלנו, 32 ° C נבחר כדי לקבל את טמפרטורת גוף אופטימלית של העכבר המורדם (36-37 ° C) ומתוחזק עד 4 שעות. טמפרטורה זו עשויה להיות מותאמת למערכת בשימוש (בדיקה דיגיטלית יכולה לשמש כדי לבדוק נקודה זו). בנוסף, תא החימום משמש הוא כהה / שחור ומכסה חלק מהמערכת (היעדים וצלחת ממונעת), כדי למנוע זיהום אור חיצוני.
3. הפעל את המערכת
   1. הפעל את טי: ספיר הלייזר, ולאחר מכן מערכת מיקרוסקופ כולה. הפעל את תוכנת הרכישה. הגדר את טווח אורך גל לייזר 870 ננומטר. בחר NDD המתאים להקלטה.
      הערה: במקרה שלנו, דור שני הרמוני (SHG) ¹⁹ וחלבון ציאן ניאון (ECFP) מזוהים על ידי NDD לאחר לעבור סינון קצר 485. ECFP גם זוהה על ידי NDD לאחר מסנן 500/550 bandpass וrhodamin-dextran הוא זוהה על ידי tהוא NDD לאחר מסנן 565/610 bandpass.
4. התאם את הגדרות רכישה
   1. השתמש בפקודת ההדמיה "רכישה חי" של התוכנה והשימוש בשליטה כיוונית מיקרוסקופ, לשנות את הפוקוס על אזור עם אות ECFP וRhodamine. הגדר את כוח הלייזר עד למינימום כדי להשיג יחס אות לרעש הטוב ביותר עם תמונה-נזק מינימאלי.
      הערה: הגדרת ההספק משמשת משתנה בהתאם לעומק של האזור של עניין. בדרך כלל הגדרות AOM מוגדרות כ -20%, המייצג את כוח לייזר מעבר למטרה כ -15 מילי-ואט. עדיף להגדיל את הכח הרווח על PMTs לכל NDD להפחית צילום הלבנה וצילום נזק. הגדרות רכישה אופייניות הן סריקה יחידה עם פיקסל להתעכב זמן של 1.58 מייקרו-שני, ורזולוציה של 512 x 512 פיקסלים עם הגדלה של 1.5.
5. אזורים נבחרים של ריבית
   1. ברגע פרמטרים הקלטה נקבעים, להשתמש בו שוב את פקודת הרכישה "חי",ותסקור את הרקמה לבחור (x, y, z) שדה רצוי להיות במעקב בזמן אמת.
      הערה: בדרך כלל, בחרנו שדה כולל שני כלי דם ובאזורי parenchymal.
   2. הרשם השדה עם פקודת התוכנה "עמדה".
      הערה: פקודה זו משננת x, y, z קואורדינטות של שדות רחוקים שונים.
   3. בחר ולהירשם תחומים נוספים של ריבית (עד 3) באותו האופן.
   4. להגדיר Z- מחסנית 3D עם פקודת התוכנה "Z- המחסנית" על העמדה שיננה הראשונה בהתאם להיקף הנדרש עם הגדלה בחרה. לשנן עמדה עמוקה ראשונה, ולאחר מכן המיקום הגבוה ביותר. לנרמל כוח לייזר עם העומק.
      הערה: להדמית שדה הנלווה מרובה, אנו רוכשים 5 פרוסות מופרדות על ידי z-שלבי 3 מיקרומטר עבור כל שדה לרכישה בהיקף של 12 מיקרומטר עובי. הגדרות אלה עשויות להיות מותאמות לסוג של תא למד.
6. רכישת השקה
   1. בחר220; זמן סדרה "פקודת התוכנה ולבחור את משך הזמן של מרווח זמן ומספר המחזורים. בגין הזמן לשגות הדמיה לפי הזמן לשגות ומשך הזמן הנדרש על ידי בחירת "להתחיל ניסוי" פקודת התוכנה.
      הערה: במקרה שלנו, אנו רוכשים כרך אחד כל שנייה 30 במהלך 60 מחזורים מייצגים בזמן אמת 30 דקות. זמן לשגות קטן יותר ניתן לבצע כדי לעקוב אחר גלגול תא מהיר בכלי הדם. במקרה זה-ערימת z דקה יותר ולא יותר מ -2 תחומים שונים ניתן להקליט באותו הזמן.
   2. מעקב שוטף אחר להגדיר.
      1. תמיד לפקח על בעלי החיים כדי לוודא שהוא מחוסר הכרה.
         הערה: טלטול של שפם או רגליו של בעל החיים הן אינדיקטורים של תחייה. במקרה הנשימה של בעלי החיים היא קופצנית, כמות isoflurane יכולה להיות מופחתת במקצת. להיסחף רקמה חזקה במהלך הרכישה הוא אינדיקטור של תחיית עכבר.
      2. ודא המטרה הוא שקוע כראוי. לחדש 37 ° C betwee PBSn שתי רכישות (30 דקות).
         הערה: היעלמות מתקדמת של אות במהלך הרכישה היא אינדיקטור של דליפת PBS.
7. סיומו של הליך
   1. ברגע שקטעי הווידאו הנדרש נרשמים, להרדימו על ידי נקע בצוואר הרחם במהירות לפני ההחייאה.
      הערה: ריפוי פצעים מוביל להיווצרות של גלד ב -24 עד 48 שעות המגבילה את האפשרות לבצע הדמיה אורך.

ניתוח 3. נתונים

1. תיקון דריפט
   1. השתמש בתוכנת Imaris Bitplane למעקב אוטומטי 3D.
   2. פתח את התמונה ברצף 3D על Imaris. בחר "נקודה" הפקודה, וליצור מעקב ידני (לחיצת עכבר + shift) לכל נקודות הזמן למינימום של 4 נקודות עיגון שונות, במידת האפשר מופץ בצורה הומוגנית בתחום.
   3. החל התיקון להיסחף באמצעות הפקודה "להיסחף נכון" בכרטיסייה "מסלול עריכה".
   4. בדוק עבור tהוא האיכות של התיקון בx, y ובמיוחד בz כדי למנוע התלבטויות artefactual.
      הערה: אם התיקון אינו משביע רצון, לנסות נקודות עיגון אחרות או להוציא וידאו מהניתוח.
2. מעקב סלולארי
   1. השתמש "להוסיף כתמים חדשים" הפקודה ובחר "כתמי מסלול לאורך הזמן" הגדרת אלגוריתם. עבור לצעד הבא.
   2. החל הליך מעקב תא אוטומטי או על כל הערוץ של עניין באמצעות פקודת "ערוץ המקור". קוטר אובייקטי סט (כלומר, תאים) עד 10 מיקרומטר. עבור לצעד הבא.
      הערה: הבחירה תהיה תלויה בהבחנה בין אובייקטים וספציפיות של האות הנמדדת. בקיצור, מעקב אוטומטי על כל הערוץ אפשרי רק אם האות זוהתה היא ספציפית לאובייקט של עניין. מכיוון שגם SHG וECFP מזוהים על ידי NDD לאחר מסנן 485 לעבור קצר, מעקב יהיה יותר ספציפי ויעיל באמצעות אות ECFP נרשמה על ידי NDD לאחר 500/550 מסנני bandpass. אשכול או אובייקטים צפופים, ידרשו בחירה ידנית של אובייקטים בודדים דומים לצעד 3.1.2.
   3. בחר את סוג מסנן "איכות", לקבוע את הסף להוציא מעקב של אובייקטים נוקבים. עבור לצעד הבא.
   4. בחר "בראונית האלגוריתם Motion" עם פרמטרים מדויקים של "מרחק מקס" ו- "גודל פער" בין שתי נקודות. לאמת דור מסלול.
   5. ברגע שמסלולים מחושבים באופן אוטומטי, בחר סוג המסנן "משך מסלול", לקבוע את הסף לחסל מסלולים קצרים יותר מ -120 שניות (המייצגות את 4 נקודות זמן).
   6. חובה: אחרי מעקב אוטומטי, לבדוק את האיכות של השירים.
      1. לפרוש על סרגל הזמן כדי לבדוק שחפצי מעקב נתיבי המסלול. אם לא, השתמש באפשרויות של תיקון נקודת מסלול הזמינות בכרטיסייה "ערוך": מחיקת שירים כוזבים או לא תקינים עם "למחוק" הפקודה (למחוק את כל p מסלולoint בנפרד באמצעות פקודת "ניתוק"). אם נתיב מסלול הוא רציף, להוסיף נקודות חסרות זמן (לחיצת עכבר + shift), לבחור את כל הנקודות במסלול מסוים, ולהשתמש "להתחבר" הפקודה בכרטיסייה "מסלול עריכה".
3. פרמטרים כימות
   1. בחר בכרטיסייה "הסטטיסטיקה" בפקודה "העדפות", לבחור את הפרמטרים הדינמיים של עניין ברשימה. בחר "לייצא את כל הנתונים הסטטיסטיים לקובץ" הפקודה ולשמור את קובץ Excel שנוצר.
      הערה: פרמטרים דינמיים כמה ישירות מתקבלים מהתוכנה כגון אורכי מסלול, מהירות רגעית, מהירות ממוצעת, ולעקוב אחר יושר. מקדם תנועתיות ^{6, 20} ניתן לקבוע אך אינו מסופקים ישירות על ידי התוכנה.
   2. עבור כל תא, לחשב את הממוצע של ההתקות לכל תקופת זמן (אורך יממה) (לסרט הזמן לשגות 30 שניות, אורך היממה תהיה 30, 60, 90 שניות, וכו ').עלילה המרושעת של העקירה רבועה כפונקציה של מרווח הזמן. להשיג מקדם תנועתיות ידי חישוב השיפוע של חלק הליניארי של העקומה.

תוצאות

מבנה גולגולת עכבר מציע הזדמנות טובה ללמוד את הפיסיולוגיה מח עצם על ידי ההדמיה intravital. להיות רזה באזור הקדמי הקודקודית העצם, ניתן לקבל גישה לנישות medullar ללא שחיקה של העצם. איור 1 מייצג שדה 2D רחב של הגולגולת של עכבר מהונדס MacBlue. מטריצת העצם מורכבת בעיקר של קולגן אני בקלות לזיהוי על ידי SHG ^19. הזרקה של rhodamin-dextran מכתימה את רשת כלי הדם של מח העצם ומאפשרת לזיהוי נישות מח עצם parenchymal בין מטריצת העצם וכלי ^14. תאי ECFP מופצים בש...

דיון

נקודות הקריטיות של in vivo מתודולוגיה ההדמיה הן להבטיח את היציבות של המיקוד במטרה למקסם את משך הזמן של הדמיה וכדי למזער את סיכון לזיהום חיידקים ודלקות, אשר עשוי להשפיע על הדינמיקה של תאי הדלקת. הדמיה של מוח עצם גולגולת כדלקמן מטרות אלה כניתוח שבוצע כדי לקבל גישה למח העצם הוא מינימאלי. השימוש בחומר החיטוי וסטרילי הוא חיוני כדי להגביל את הסיכון לזיהום שעלול לגרום להפרעות בהומאוסטזיס תא.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קטמין	מריאל		100 מ"ג/מ"ל, חומר הרדמה
קסילזין	Bayer HealthCare		10 מ"ג/מ"ל, חומר הרדמה
איזופלורן	בקסטר		2.5%, חומר הרדמה
O2/NO2			70/30, חומר הרדמה
רודמין-דקסטרן	Invitrogen		2 MDa, 10 מ"ג/מ"ל, צביעת כלי דם
Ly6G-PE	Becton-Dickinson		1A8, מכתים נויטרופילים
מחזיק סטריאוטקטי ניתוח	ביתי
אתנול 70%			ניתוח
מספריים וציפורניים			טבעת
		גומי	בקוטר 18 מ"מ, ניתוח
Glubran 2	Queryo דבק כירורגי רפואי		, קיבוע טבעת גומי
מחטי מד קטן	ניתוח	טרומו
Zeiss LSM 710 NLO מיקרוסקופ מולטיפוטון	מיקרוסקופ	קרל זייס
Ti:לייזר קריסטל ספיר	קוהרנטי זיקית אולטרה		140 fsec פולסים של אור NIR
זן 2010	קרל זייס		תוכנת רכישה
Imaris Bitplane	מטוסי		סיביות, מעקב אוטומטי תלת מימדי
PBS 1X	D. ניתוח דוצ'ר
תא תרמוסט	הדמיה תוך-חיונית	של קרל זייס