הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה Array

8.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52601

⸱

27 במרץ 2015

 ,  ,  , 
1Neural Engineering Center, Department of Biomedical Engineering, Case Western Reserve University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פיתחנו היפוקמפוס פרש במבחנה השומר מערך CA1-CA3 של נוירונים. בשילוב עם מערך מיקרו-אלקטרודה החודרת, פעילות עצבית יכולה להיות במעקב בשתי אוריינטציות אורכי ורוחביות. שיטה זו מספקת יתרונות על פני הכנות פרוסה בהיפוקמפוס כמו ההתפשטות בכל היפוקמפוס ניתן להקליט בו זמנית.

תקציר

פרוטוקול זה מתאר שיטה להכנה חדשה בהיפוקמפוס ההכנה השטוח מבחנה בשילוב עם מערך מיקרו-במכונה כדי למפות פעילות עצבית בהיפוקמפוס. ההכנה הפרוסה בהיפוקמפוס רוחבית היא הכנת רקמה הנפוצה ביותר ללמוד אלקטרופיזיולוגיה היפוקמפוס. פרוסה בהיפוקמפוס אורך פותח גם כדי לחקור קשרים אורך בהיפוקמפוס. ניתן גם לשמור על ההיפוקמפוס העכבר שלם במבחנה בגלל עוביו מאפשר דיפוזיה חמצן נאותה. עם זאת, שלושת תכשירים אלה אינם מספקים גישה ישירה להתפשטות עצבית שכן חלק מהרקמה חסר או מקופל. ההיפוקמפוס שלם המקופל מספק הן רוחבי וקשרים ארוכי טווח בתצורה שטוחה לגישה ישירה לרקמות לנתח את מלוא היקף התפשטות אות בהיפוקמפוס במבחנה. על מנת לפקח על הפעילות העצבית מt ביעילותהוא שכבת תאים, מנהג עשה חודר מערך מיקרו-אלקטרודה (PMEA) היה מפוברק ופנה להיפוקמפוס פרש. PMEA עם 64 אלקטרודות של 200 מיקרומטר בגובה יכול להקליט פעילות עצבית עמוק בתוך ההיפוקמפוס העכבר. שילוב הייחודי של הכנה בהיפוקמפוס מקופלת וPMEA מספק כלי חוץ הגופייה חדש ללמוד את המהירות וכיוון של התפשטות של פעילות עצבית באזורי CA1-CA3 דו-ממדיים של ההיפוקמפוס עם אות גבוהה יחס רעש.

מבוא

הבנת ההולכה או התפשטות העצבית של אותות עצביים היא קריטית לקביעת המנגנון של תקשורת עצבית בשני התפקוד הנורמלי ומצבים פתולוגיים במוח 1-3. ההיפוקמפוס הוא אחד המבנים הנחקרים ביותר בהרחבה במוח מאז שהיא ממלאת תפקיד בסיסי בכמה תפקודי מוח כגון זיכרון, ומעקב במרחב ובמעורב במספר שינויים פתולוגיים באופן דרמטי את ההשפעה על התנהגות, כמו גם 1,6. אמנם, ההיפוקמפוס מציג ארגון מורכב, האלמנטים השונים של המבנה שלו ניתן לזהות בקלות והגישה בהכנת פרוסה 4-6. בכיוון הרוחבי של ההיפוקמפוס, פעילות עצבית ידועה להפיץ דרך המסלול תלת-סינפטי המרכיב את המשונן gyrus (DG), CA3, CA1 andsubiculum 4,5. הוא האמין כי שידור סינפטי והולכת axonal לשחק תפקיד מרכזי לcommunicatiבמעגל רוחבי זה 4,6. עם זאת, התפשטות של אות עצבית מתרחשת בשני כיוונים רוחביים ואורך 4,6. משמעות הדבר הוא כי ההיפוקמפוס לא יכול להיחקר באופן מלא על ידי שימוש בהכנות פרוסה המגבילות את התצפית לכיוון מסוים של התפשטות 4. פרוסה האורך פותחה כדי לחקור את מסלולי axonal לאורך ציר אורך 5. חוקרים הבחינו תנודות גמא ותטא התנהגות ספציפית בעיקר לאורך רוחבי וצירה אורך בהתאמה 6. התנהגויות אלו נחקרו בנפרד, אך גישה בו זמנית לשני הכיוונים היא חיונית כדי להבין התנהגויות אלו. אפילו עם הפיתוח של תכשיר ההיפוקמפוס שלם, שקשה לפקח על ההתפשטות בכל רחבי הרקמה בשל מקופל המבנה של ההיפוקמפוס 4. ההיפוקמפוס פרש מספק גישה לתאי העצב ארוזבצורה של 7,8 שכבת תאים דו-ממדי שטוחה.

על ידי התגלגלות gyrus המשונן (DG) (איור 1), ההיפוקמפוס מאמץ צורה שטוחה עם תצורה מלבנית שבשני רוחבי וחיבורי אורך להישאר שלמים עם שכבת תאי הפירמידה מסודרת בגיליון דו-ממדי המכיל את שני CA3 וCA1, משאיר פיסת הרקמה עצבית שיכול לשמש כדי לחקור התפשטות עצבית שטוחה (איור 2) 8. פעילות עצבית אז יכולה להיות במעקב עם טפטפות פרט זכוכית, מערכי microelectrode, אלקטרודות גירוי, כמו גם צבעי מתח רגישים (VSD) 3,7,8. בנוסף, מחוון מתח מקודד גנטי מעכברים הטרנסגניים ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר התפשטות הדפוס 9.

התצורה שטוחה של הרשת בהיפוקמפוס המקופלת היא גם מתאימה להקלטת שיטה אופטית אלא גם למערך microelectrode. Most של המערכים הזמינים המסחרית מיוצר עם אלקטרודות פרופיל שטוח או נמוך והוא יכול להקליט פעילות עצבית בשתי פרוסות רקמה ונוירונים בתרבית 10-12. עם זאת, יחס אות לרעש (SNR) יורד כאשר האותות המתקבלים מרקמה שלמה מאז סומה של תאי העצב ממוקמים עמוקה יותר לתוך הרקמה. מערכי אלקטרודה microelectrode עם יחס רוחב-גובה גבוה נדרשים כדי לשפר את יחס האות לרעש.

ברוח זו, מערך microelectrode חודר (PMEA) פותח במעבדה שלנו, ומספק את היכולת לחקור ישירות לתוך הרקמות על ידי הוספת 64 קוצים בקוטר של 20 מיקרומטר וגובה של 200 מיקרומטר להיפוקמפוס פרש 7,13 . יש מערך microelectrode זה SNR גבוה יותר בהשוואה להדמית הצבע רגישה המתח ויחס האות לרעש נותר יציבה במהלך ניסוי 7,13. השילוב של ההכנה בהיפוקמפוס המקופלת וPMEA מספק דרך חדשה להשקיעIgate ההתפשטות העצבית על מטוס דו-ממדי. ניסויים באמצעות טכניקה זו כבר הניבו תוצאות משמעותיות על המנגנונים של התפשטות אות עצבית בהיפוקמפוס לפי פעילות עצבית יכולה להפיץ באופן עצמאי של סינפסות הסינפטי או חשמלית 7.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: בעלי חיים פרוטוקולי ניסוי נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים באוניברסיטה. עכברי CD1 של שני מינים בגיל P10 P20 למשמשים במחקר זה.

1. פתרונות לכירורגיה והקלטה ניסויית

  1. הכן חיץ נורמלי מלאכותי נוזל השדרתי (aCSF) המכיל (מ"מ): 124 NaCl, KCl 3.75, 1.25 KH 2 PO 4, 4 MgSO 2, NaHCO 3 26, דקסטרוז 10, וCaCl 2 2. השתמש aCSF הנורמלי הזה לשחזור רקמות לאחר נתיחה, כמו גם עבור מערכת שטיפה בתחילת הניסוי.
  2. הכן aCSF סוכרוז המשמש במהלך נתיחת ההיפוקמפוס ומכיל (מ"מ): 220 סוכרוז, KCl 2.95, Nah 2 1.3 PO4, 4 MgSO 2, NaHCO 3 26, דקסטרוז 10, וCaCl 2 2. כדי לגרום לפעילות epileptiform בהכנת הרקמה בהיפוקמפוס בשלמות, להוסיף 4-aminopyridine (4-AP) לaCSF הנורמלי בהריכוז של 100 מיקרומטר.

2. נוהל כירורגי לHippocampus הכנת השלמים

  1. זרוק isoflurane (1 מיליליטר) לתוך התא בתחתית צנצנת זכוכית ייבוש (מס '1 בחומרים ספציפיים וציוד) ולהשתמש במגבת נייר רגילה כדי לכסות את פני השטח של השלב התחתון כל כך החיה לא מקבלת במגע עם הנוזל. לאחר מכן, הנח את עכבר CD1 לתוך הצנצנת ולסגור את המכסה. לשמור על בעלי החיים בצנצנת הסגורה לדקות על 1 עד 2 דקות. כאשר תדירות נשימה היא אחד לשנייה בערך, להסיר את העכבר מהצנצנת.
  2. מניחים את העכבר על הבמה הניתוח ולערוף עם מספריים מתאימים. מייד לאחר עריפת הראש, הנח את הראש ל( 3-4 מעלות צלזיוס) קר כקרח, aCSF סוכרוז מחומצן לכ -30 שניות.
  3. השתמש במספריים עדינים (מס '5 בחומרים וציוד ספציפיים) כדי להסיר את העור בחלקו העליון של הגולגולת ולחתוך את הגולגולת לאורך קו האמצע של הראש, כמו גם בשני קצוות ליד הטמפואונת RAL. מלקחיים שימוש (מס '6 בחומרים וציוד ספציפיים) לקלף את גולגולת החתך כלפי כל צד של הראש כדי לחשוף את המוח.
  4. הכנס מרית מעבדה מיקרו (מס '8 בחומרים ספציפיים וציוד) לפער בין האונות הקודקודית של המוח והגולגולת לקלף בזהירות את המוח מהחלק התחתון של הגולגולת ולאחר מכן שחרר אותו על גבי מוכן (קר כקרח 3 -4 ° C) שלב כירורגית מכוסים בנייר רטוב מסנן (מס '2 בחומרים ספציפיים וציוד). הסר את המוח הקטן עם להב קרח צונן ולהפריד בין שתי ההמיספרות על ידי חיתוך קו האמצע של המוח. ואז, במקום שתי ההמיספרות מופרדות לכוס מלאה aCSF סוכרוז קר כקרח מבעבע עם 95% O CO 2/5% 2.
  5. קח מחצית מחצי הכדור ומניחים על הבמה נייר סינון קר כקרח. מניחים מגבות נייר רגילות או נייר סינון סביב המוח למצוץ פתרון הנוסף. השתמש בשני כלים פיפטה זכוכית אש מלוטשת (מס '10 בחומרים וציוד) כדי להפריד את הקליפה משאר חלק במוח המרכזי.
  6. לאחר היפוקמפוס חשוף מהחלק הפנימי של קליפת המוח ולשים על הבמה קרה כקרח, מקום שתיים או שלוש טיפות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמה ולאחר מכן להסיר את פתרון נוסף סביב היפוקמפוס. חותך את הקשרים עם הקליפה בשני קצוות של ההיפוקמפוס. לאחר מכן, לנתח את ההיפוקמפוס מתוך המוח עם כלים מזכוכית מלוטש אש ולהסיר את החלק הנותר של המוח.
  7. הפרד את כל ההיפוקמפוס עם צד alveus פונה כלפי מעלה ומענית בהיפוקמפוס פונה כלפי מטה. מהירות שחרר שתיים או שלוש טיפות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמה שוב ולהסיר את הפתרון הנוסף סביב הרקמות באמצעות פיסת מגבת נייר. השתמש בכלי זכוכית מלוטש אש להתהפך כל ההיפוקמפוס כדי לחשוף את מענית (איור 1 ב, ג).
  8. תחת מיקרוסקופ אופטי רגיל, להכניס מחט מחוייט זכוכית (מס '11 בMateri ספציפיals וציוד) לקצה אחד של מענית ולחתוך את חיבורי סיבים, מgyrus המשונן (DG) לsubiculum או שדה CA1, לאורך הכיוון של מענית (איור 1 ג). החל להב קר כקרח לקצץ את הקצוות במחיצה ובזמן של ההיפוקמפוס במידת צורך. הכנס לולאה מותאמת אישית עשה חוט מתכת (מס '12 בחומרים ספציפיים וציוד) למענית הקיצוץ ולעצור בצד דרך DG מן הרקמה תוך החזקת סוף subiculum / CA1 של ההיפוקמפוס בכלי זכוכית מלוטשת אש (1D איור) .
  9. בהמשך להליך התגלגלות לעיל, להוסיף שתיים או שלוש טיפות נוספות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמות ולהסיר את הפתרון הנוסף סביב הרקמה. לאחר מכן, חתוך את ההיפוקמפוס פרש עם הלהב קר כקרח בקצוות (איור 1E) ולמקם את ההכנה על ידי מרית לתוך התא מתאושש מלא aCSF הנורמלי ומבעבע עם 95% O 2/5% CO 2 בRT (כ 25 ° C). השאררקמת ההיפוקמפוס פרש להתאושש על 1 שעות לפני הצבתו בתא ההקלטה.
  10. קח את חצי הכדור האחר במוח ולהשתמש בו כדי לעבור את שלבים 2.5-2.9. בדרך כלל, לוקח על 1 עד 2 דקות כדי לסיים את ההליך כולו להתגלות היפוקמפוס אחת ושחרר aCSF סוכרוז קר כקרח ברציפות כדי לשמור על הרקמה מחומצן והתייבשות.

הגדרת מערכת הניסויית 3.

  1. דבק PMEA מפוברק מותאם אישית על חבילת מערך רשת סיכה (PGA) ולהשתמש מליטה חוט מיקרו לחיבור כל משטח מmicroelectrode יחיד לכרית של סיכה על האריזה (איור 3). לאחר מכן, הכנס את החבילה לתוך השקע בלוח מעגלים מותאם אישית 13.
  2. בנפרד להתחבר כל microelectrode למסננים שלה עם תדרים חתוכים לעבור להקה מרץ 1 עד 4 קילוהרץ ומגברים עם רווח של 100 על המנהג עשה המעגלים 13. עבר דיגיטציה היציאה האנלוגית מהמעגלים על ידי / המרה Derting מערכת, ולרכוש ולאחסן את הנתונים במחשב.
  3. דבק תא הקלטת פלסטיק מחוייט סביב המערך עם כניסה וצינורות לשקע לזרימת הפתרון (איור 4 א). השתמש בלפחות שני בקבוקים כדי לשמור על פתרונות שונים במערכת, ולהצטרף ולשלוט בצינורות הפלט של הבקבוקים על ידי תלת-סתום. חבר את הפלט של תלת-השסתום למערכת צינורות עם תא עירוי המנחה את הפתרון לתא ההקלטה.
  4. בין שלושה שסתום והכניסה של חדר ההקלטה, להוסיף מחמם חשמלי כדי לחמם את הפתרון לטמפרטורה מבוקרת (35 ° C) לפני הפתרון מודרך לתא ההקלטה. צרף את היציאה של תא ההקלטה לצינור ואקום כדי לאסוף את הפתרון לתוך בקבוק מחובר צינור ואקום. לא ממחזר כל פתרון בכל ניסוי במחקר זה.

4. הצבת Hippocampus מצב הפרישה על PMEA כדי להקליט את הפעילות עצבית

  1. כדי להכין את ההתקנה הניסיונית, למלא בקבוק אחד עם aCSF הנורמלי ועוד בקבוק עם 4-AP aCSF. בשני הבקבוקים, בועה 95% O 2/5% CO 2 מתחילת כל ניסוי מאוד. השתמש במחבר תלת-סתום לשלוט בי הפתרון ייבחר במהלך ניסוי. חבר צינור ואקום ביציאה של החדר לשאוב הפתרון למכל אבק. מחממים את הצינור לפני מסירתו לחדר ההקלטה ולשמור על הפתרון ברמת טמפרטורה מבוקרת (35 מעלות צלזיוס).
  2. כאשר הכניסה והיציאה של הקלטת תא סגורות, להשתמש טפטפתי טפטפת זכוכית מותאמת אישית כדי להעביר ולמקם את ההיפוקמפוס המקופל לתוך תא ההקלטה. מתחת למיקרוסקופ, מקם את ההיפוקמפוס פרש בעזרת מברשת צבע קטנה רגילה תוך הרקמה צף בפתרון. הנח את ההיפוקמפוס פרש עם צד alveus פונה כלפי מטה, אזור CA3 מצביע משם, ושדה CA1 והצביע לעבר החוקר.
  3. למצוץ בזהירות הפתרון בתא באמצעות פיפטה ואקום מהקצה של חדר ההקלטה להוריד את רמת הפתרון עד הקאמרית הוא מיובש והרקמה היא הורידה על גבי המערך. ואז, בזהירות במקום עוגן רקמה מותאמת אישית (איור 4) (מס '14 בחומרים ספציפיים וציוד) על גבי הרקמה להחזיק היפוקמפוס פרש על גבי המערך. לשים כמה טיפות של תמיסה לתוך תא ההקלטה כדי למלא אותו, ובהדרגה לפתוח את הכניסה ויציאה להתאים קצב זרימה לכשתי טיפות לשנייה בתא טפטוף IV.
  4. דגירה הרקמה בחדר ההקלטה עם aCSF הנורמלי כ 1 דקות כדי להתאושש, ולאחר מכן לעבור את אספקת הפתרון ל4-AP aCSF המומס ולהתאים את קצב הזרימה כראוי. דגירה הרקמה ב 4-AP מומסת aCSF לכ -5 עד 10 דקות ולאחר מכן החוקר יכול להפעיל את התוכנה כדי להקליט את האות כאשר פעילות ספונטנית מופיעה.

5. הסרתרקמה מPMEA לאחר ניסוי

  1. לשלוט עוגן הרקמה על ידי micromanipulator ולהרים רקמות מתא ההקלטה בהדרגה. כבה את שניהם כניסה ויציאה להפסקת הזרימה בתא ההקלטה. חדר ההקלטה צריך להיות מלא עם פתרון או להוסיף כמה טיפות של פתרון ללמלא את התא אם תא ההקלטה אינו מלא.
  2. השתמש במברשת צבע קטנה כדי להרים כל פינה של הרקמה. אם הרקמה לא צף בפתרון, ואז להעסיק את השפופרת הריק לייבוש קאמרי בזהירות עם הרקמה עדיין יושבת על המערך. לאחר מכן, פתח בזהירות את הכניסה כדי למלא בהדרגה את החדר וסגר את הכניסה כדי לעצור את הזרם כאשר תא ההקלטה מלא. החל מברשת הצבע הקטנה כדי להרים כל פינה של הרקמה שוב.
  3. חזור על שלב 5.2 עד הרקמה מנותק מהמערך וצף בפתרון. אם הרקמה צף בפתרון, ולאחר מכן להשתמש צינור הוואקום למצוץ את הרקמה משם. t הפתוחהוא זורם בכניסה ולפתוח את הוואקום בשקע. לשטוף את המערכת עם מים מזוקקים ולייבש אותו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הנתונים המוצגים בדמויות כאן נרשמו בהכנת היפוקמפוס פרש עם 4-AP (100 מיקרומטר) aCSF הוסיף במהלך הדגירה של הרקמה בחדר ההקלטה ב RT (25 ° C). בדרך כלל פעילות מתחילה תוך 5 דקות, אבל בכמה רקמות בהיפוקמפוס מבעלי החיים המבוגרים זה עלול לקחת זמן רב יותר. הירי העצבי הנגרם על-4-AP נצפה עם PMEA הוא אותו כפי שדווח בעבר 14,15. מאז יש לי אלקטרודות לגובה של 200 מיקרומטר, הטיפים אלקטרודה נמצאים ממש מתחת לשכבת התאים (איור 3 ג) כי שכבת התאים היא בדרך כלל 250 עד 300 מיקרומט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפיתוח של תכשיר היפוקמפוס המקופל, שבו צירי האורך ורוחב של ההיפוקמפוס נשמרים בשילוב עם מערך microelectrode חודר, מספק כלי רב עוצמה כדי לחקור את קשרי האנטומיה או התפשטות עצבית בהיפוקמפוס 7. הליך התגלגלות גם לגבי ללימוד היפוקמפוס בעכברים בוגרים. מחקרים שנעשה לאחרונה עם הכנה זו הראו כי פעילות epileptiform המושרית-4-AP יכולה להפיץ בחזית גל אלכסונית על פני כל השטח של ההיפוקמפוס המקופל (איור 6) 7,8. מחקרים אלה הראו כי ההיפוקמפוס פרש שלם מספק יתרונות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי) מענק 1R01NS060757-01 ועל ידי הקתדרה שהוענקה על ידי E.L. Lindseth לדומיניק מ. דורנד. אנו מודים למעבדה של ד"ר אנדרו מ. רולינס על העזרה בהדמיית OCT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צנצנת ייבושLABRECYCLERS בע"מ5410יש להניח מגבות נייר רגילות בתחתית הצנצנת לשימוש בהרדמה של בעלי חיים.
להב ושלב כירורגי מתוצרת Custome לפתיחת ההיפוקמפוסN/AN/Aצלחת פטרי מונחת הפוכה (במרכז) בקרח עם נייר סינון רטוב מונח מעליו.
תא התאוששות רקמות בהתאמה אישיתN/AN/Aצינורות פלסטיק הודבקו עם רשת פלסטיק בתחתית ובעבעו עם 95% O2/5% CO2 ב-aCSF.
הפעלה ישרה  מספרייםפישר סיינטיפיקS17336B                                                                                      מדקו אינסטרומנטס מס': 81995 מספריים אלה משמשים ל     ערפו את ראשי העכברים.
אינטגרה מילטקס גולדמן-פוקס  מספרייםפישר סיינטיפיק12-460-517                                              מילטקס בע"מ                                                    מס ':5-SC-320מספריים אלה משמשים לחיתוך גולגולת העכברים. 
Miltex
מלקחיים לכריתת רחם		קלפלין ציוד רפואיCESS-722033-00001מלקחיים אלה משמשים לקילוף הגולגולת החתוכה כדי לחשוף את המוח
מיקרו מריתקרדינליתמיקרו מרית זו משמשת להעברת כל המוח של חצי כדור לתוך תא ה-recorering. 
Frey Scientific נירוסטה חצי מיקרו מריתקרדינל בריאותחצי מיקרו מיקרו מרית זו משמשת להעברת ההיפוקמפוס הנפרש לתוך הגלוקוז aCSF בתא ההתאוששות.
מברשת צבע קטנהשל Lowe'stem #:  105657                                  דגם #:  90219זה עם הגודל הקטן ביותר בחבילת מברשת צבע רגילה
כלי עזרה מזכוכית מלוטשת אשN / A N/ Aכלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר.
מחט זכוכית בהתאמה אישיתN / AN / Aכלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר.
כלי זכוכית בהתאמה אישית עם לולאת חוט מתכתN/AN/Aכלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר עם לולאת חוט מתכת מעוצבת מחדש.
טפטפת תמיסת זכוכית בהתאמה אישיתN/AN/Aכלי זה היה עשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר עם קצותיו חתוכים וראש גומי מחובר לקצה החתוך.
עוגן רקמות בהתאמה אישיתN / AN / Aרשת סיבי ניילון הודבקה על טבעת חוט נחושת מבודדת. עוגן הרקמה הוחזק על ידי מיקרומניפולטור.
מערך מיקרואלקטרודות בהתאמה אישיתN/AN/Aפרטים נוספים על המערך אנא עיין ב   Kibler, et al, 2011. 
מעגלי מסנן ומגברים בהתאמה אישית למערךN/AN/Aפרטים נוספים על המערך אנא עיין ב  Kibler, et al, 2011. 
מעבד רכישת נתונים 3400aMicrostar LaboratoriesN/Aזוהי מערכת רכישת נתונים מלאה עם ממיר A/D.
בריאות

מקורות

  1. Richardson, K. A., Schiff, S. J., Gluckman, B. J. Control of traveling waves in the Mammalian cortex. Phys Rev Lett. 94 (2), 028103-028112 (2005).
  2. Luhmann, H. J., Dzhala, V. I., Ben-Ari, Y. Generation and propagation of 4-AP-induced epileptiform activity in neonatal intact limbic structures in vitro. Eur J Neurosci. 12 (8), 2757-2768 (2000).
  3. Grinvald, A., Manker, A., Segal, M. Visualization of the spread of electrical activity in rat hippocampal slices by voltage-sensitive optical probes. J Physiol. 333, 269-291 (1982).
  4. Gloveli, T., et al. Orthogonal arrangement of rhythm-generating microcircuits in the hippocampus. Proc Natl Acad Sci USA. 102 (37), 13295-13300 (2005).
  5. Amaral, D. G., Witter, M. P. The three-dimensional organization of the hippocampal formation: a review of anatomical data. Neuroscience. 31 (3), 571-591 (1989).
  6. Albani, S. H., McHail, D. G., Dumas, T. C. Developmental studies of the hippocampus and hippocampal-dependent behaviors: insights from interdisciplinary studies and tips for new investigators. Neurosci Biobehav Rev. 43, 183-190 (2014).
  7. Zhang, M., et al. Propagation of Epileptiform Activity Can Be Independent of Synaptic Transmission, Gap Junctions, or Diffusion and Is Consistent with Electrical Field Transmission. J Neurosci. 34 (4), 1409-1419 (2014).
  8. Kibler, A. B., Durand, D. M. Orthogonal wave propagation of epileptiform activity in the planar mouse hippocampus in vitro. Epilepsia. 52 (9), 1590-1600 (2011).
  9. Wang, D., McMahon, S., Zhang, Z., Jackson, M. B. Hybrid voltage sensor imaging of electrical activity from neurons in hippocampal slices from transgenic mice. J Neurophysiol. 108 (11), 3147-3160 (2012).
  10. Wingenfeld, K., Wolf, O. T. Stress , memory, the hippocampus. Front Neurol Neurosci. 34, 109-121 (2014).
  11. Liu, J. S., et al. Spatiotemporal dynamics of high-K+-induced epileptiform discharges in hippocampal slice and the effects of valproate. Neurosci Bull. 29 (1), 28-36 (2013).
  12. Oka, H., Shimono, K., Ogawa, R., Sugihara, H., Taketani, M. A new planar multielectrode array for extracellular recording: application to hippocampal acute slice. J Neurosci Methods. 93, 61-68 (1999).
  13. Kibler, A. B., Jamieson, B. G., Durand, D. M. A high aspect ratio microelectrode array for mapping neural activity in vitro. J Neurosci Methods. 204 (2), 296-305 (2012).
  14. Schechter, L. E. The potassium channel blockers 4-aminopyridine and tetraethylammonium increase the spontaneous basal release of [3H]5-hydroxytryptamine in rat hippocampal slices. J Pharmacol Exp Ther. 282 (1), 262-270 (1997).
  15. Perreault, P., Avoli, M. 4-aminopyridine-induced epileptiform activity and a GABA-mediated long-lasting depolarization in the rat hippocampus. J Neurosci. 12 (1), 104-115 (1992).
  16. Chesnut, T. J., Swann, J. W. Epileptiform activity induced by 4-aminopyridine in immature hippocampus. Epilepsy Res. 2 (3), 187-195 (1988).
  17. Nam, Y., Wheeler, B. C. In Vitro Microelectrode Array Technology and Neural Recordings. Crit Rev Biomed Eng. 39 (1), 45-62 (2011).
  18. Gonzalez-Sulser, A., et al. Hippocampal neuron firing and local field potentials in the in vitro 4-aminopyridine epilepsy model. J Neurophysiol. 108 (9), 2568-2580 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

APlongitudinal
עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה Array
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.