הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הקמת מודל xenograft מיאלומה נפוצה אדם בעוף לחקר צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה

12.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 במאי 2015

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

תאים אנושיים מסוג מיאלומה נפוצה (MM) דורשים מייקרו-הסביבה התומכת של תאי mesenchymal ורכיבי מטריצה ​​תאיים להישרדות ושגשוג. הקמנו in vivo מודל עובר עוף עם תאי מיאלומה וmesenchymal אדם engrafted ללמוד השפעות של תרופות לסרטן על צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה.

תקציר

מיאלומה נפוצה (MM), מחלה ממארת של תאי פלזמה, נותרת חשוכות מרפא ותרופות חדשניות נדרשות כדי לשפר את הפרוגנוזה של חולים. בשל חוסר microenvironment העצם וגורמי גדילה אוטומטי / אוטוקריני תאי MM אנושיים קשים לטפח. לכן, יש צורך דחוף בהקמה נכונה במבחנה ובמערכות תרבות vivo ללמוד את הפעולה של תרופות חדשניות בתאי MM אנושיים. כאן אנו מציגים מודל לגדל תאי מיאלומה נפוצים אנושיים בסביבת 3D מורכבת במבחנת in vivo. שורות תאי MM OPM-2 וRPMI-8226 היו transfected להביע GFP transgene ועובדו בנוכחות של תאי mesenchymal אנושיים וקולגן סוג אני מטריקס כspheroids תלת-ממדי. בנוסף, spheroids היה מורכב על קרום chorioallantoic (רמ"א) של עוברי עופות וגידול היה פיקוח על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו. שני הדגמים מאפשרים המחקר של DRU הטיפולי החדשניGS בסביבת 3D מורכבת והכימות של מסת התאים הסרטניים לאחר הומוגניזציה של שתלים בGFP-ELISA transgene הספציפי. יתר על כן, תגובות angiogenic של המארח והפלישה של תאי גידול לרקמות מארח subjacent יכולות להיות במעקב יומי על ידי מיקרוסקופ סטריאו ונותחו על ידי מכתים immunohistochemical נגד תאי גידולים בבני אדם (קי-67, CD138, vimentin) או תאי ציור קיר מארח מכסים כלי דם (Desmin / ASMA).

לסיכום, מערכת onplant מאפשרת לימוד צמיחת תאי MM ואנגיוגנזה בסביבת 3D מורכבת ומאפשרת הקרנה לתרכובות טיפוליות חדשניות מיקוד הישרדות והתרבות של תאי MM.

מבוא

מיאלומה נפוצה (MM) מאופיינת בריבוי של תאי פלזמה ממאירים במח העצם, נגעי עצם וכשל חיסוני 1. למרות שקיימות אפשרויות טיפול חדשות כגון מעכבי פרוטאזום (בורטזומיב) ותרופות מווסתות חיסון (פומלידומיד ולנלידומיד), MM עדיין נותר ממאיר חשוך מרפא עם פרוגנוזה עגומה 2. ניתן להסביר את הפרוגנוזה הגרועה על ידי ההטרוגניות יוצאת הדופן של שיבוטי תאי MM התורמת לתגובות משתנות לטיפול, במיוחד תחת טיפול ממושך ולחץ בחירה של שיבוטי MM 3.

בדיקה פרה-קלינית של תרופות חדשות ושילובים שלהן in vitro ו-in vivo היא צעד קריטי וגוזל זמן לפיתוח תרופות עתידיות. לפיכך, נדרשים מודלים שימושיים של MM כדי להשיג הבנה טובה יותר של הביולוגיה של המחלה ולאפשר גילוי של תרופות חדשות. למעשה, המודלים הטובים ביותר להשתלות זרות עבור ממאירויות וטיפולים המטולוגיים הם עכברים חסרי חיסון, כגון עכברי חסר חיסוני משולב חמור (SCID) 4-7, עכברי סוכרת/SCID (NOD/SCID) שאינם שמנים 8,9 או עכברי NOD/SCID עם β מיקרוגלובולין נוקאאוט 10,11.

למרות שמודלים עכבריים של MM אנושי יכולים בהיבטים מסוימים להידמות לפנוטיפ של מחלות אנושיות, עכברים חסרי חיסון מולדים, ולכן מדמים רק תגובה בודדת אחת לתרופה והעלויות גבוהות מאוד. בשל דיכוי חיסוני בעלי חיים דורשים תנאי תחזוקה מיוחדים והשתלת MM אנושי בעכברים דורשת 6 שבועות עד חודשיים 9,12, אלא אם כן תאים מושתלים ישירות למח העצם באמצעות הליך תובעני מבחינה טכנית עם שיעורי הישרדות נמוכים יותר של בעלי חיים 7,13. לכן, הוקמו שיטות חדשות המשתמשות במודלים אורגנואידים מבוססי תאי גזע 14, הנדסת רקמות 15 או מודלים מתוחכמים של תרביות תאים תלת מימדיות 16. הם יתחרו בעתיד הקרוב בניסויים קלאסיים בבעלי חיים לניסויים פרה-קליניים בתרופות, אך אינם יכולים להחליף בדיקות רעילות מערכתיות באורגניזמים חיים.

עובר התרנגולת הוכח בעבר כאורגניזם מתאים להשתלת תאים ורקמות אנושיות עקב היעדר תגובה חיסונית נרכשת עד לבקיעת 17-19. יתר על כן, כל עובר תרנגולת משקף תגובה אינדיבידואלית לתרופות יישומיות או לתאי גידול עקב המגוון הגנטי באוכלוסיית התרנגולות. הממברנה הכוריואלנטואית (CAM) היא מערכת מבוססת היטב לחקר אנגיוגנזה תלוית גידול 20-22. כאשר גידולים מוצקים מושתלים ב-CAM, הם מציגים מאפיינים רבים של סרטן in vivo, כולל התפשטות, פלישה, אנגיוגנזה וגרורות 23-27.

בהתבסס על הניסיון הקודם של קבוצתנו עם מודלים של CAM xenograft20,26,27, הוקם מודל MM אנושי המשלב את היתרון של מערכת תרבית תלת מימדית אנושית עם מודל של עוברי תרנגולות המתפתחים ex ovo. מערכת מודל MM זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של התקדמות צמיחת MM, כימות מסת התא ובדיקות תרופות פרה-קליניות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

על פי החוק האוסטרי, והמשרד של בעלי חיים במעבדת רווחה של עוברי עופות שירות בריאות הציבור האמריקאים אינם נחשבים כבעלי חיים בעלי חוליות חיים עד משרד NIH hatching.The של בעלי חיים במעבדת רווחה סיפק הדרכה נכתבה בתחום זה (http: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm ופרסום NIH לא .: 06-4515).

1. תא התרבות וlentiviral Transfection

  1. שורות תאי MM תרבות OPM-2, RPMI-8226 ותאי גזע mesenchymal אדם ממח עצם במדיום RPMI1640, בתוספת 10% בסרום שור עוברי עגל ו -100 IU / פניצילין מיליליטר, 100 מיקרוגרם / מיליליטר סטרפטומיצין וגלוטמין 2 מ"מ בנוכחות 5% CO 2 על 37 מעלות צלזיוס.
  2. Transfect 5 x 10 6 תאי HEK 293FT עם תערובת נגיפית אריזת DNA (9 מיקרוגרם) ו -3 מיקרוגרם pLenti6 / V5 dest eGFP וקטור על ידי השימוש של מגיב transfection liposomal 30 μl ובינוני transfection (10 מיליליטר). הסר בינוני transfection לאחר 12 שעות ולהוסיף 10 מיליליטר DMEM בינוני עם 10% בסרום שור עגל וחומצות אמינו לא חיוני 1% (NEAA).
  3. לאחר 5 ימים, לאסוף supernatants של תאי HEK293FT לאחר צנטריפוגה של תאי שחייה (1000 XG, 5min). לקבוע כייל נגיף על ידי PCR בזמן אמת כפי שתואר במקום אחר 28.
  4. Transfect 1 x 10 6 תאי MM עם חלקיקי eGFP lentiviral (1 x 10 5 חלקיקים) בצלחת גם 24 במדיום גידול שלם. לאחר 3 ימים, להתחיל תהליך בחירה על ידי הוספת 2 מיקרוגרם / מיליליטר blasticidin עד בינוני התרבות. לlentivirus eGFP הזמינים המסחרית, השתמש 500 מיקרוגרם / מיליליטר נאומיצין.
  5. לאחר 2 שבועות של בחירה, אשכולות של eGFP להביע תאי MM יופיעו; לאסוף תאים על ידי צנטריפוגה (1000 XG, 5 דק ') ולהרחיב אותם כOPM-2 eGFP וRPMI-8226 sublines eGFP לניסויים (סעיף 2 ו -3).

דגם מיאלומה ספרואיד 2. 3D-מרובה

  1. סוג אני קולגן צ'יל פתרון ו -10 x o DMEMקרח n.
  2. מערבבים 1/10 נפח של 10 DMEM בינוני x למטריצת קולגן; להוסיף NaOH (0.2 N) לנטרל פתרון קולגן חומצי לערך ה- pH של 7.4; קולגן חנות / פתרון בינוני על קרח.
  3. מערבבים שורות תאים מהונדסים MM (OPM-2 eGFP או RPMI-8226 eGFP; 250,000 לאליפטית,) עם תאים אנושיים mesenchymal (50,000 תאים / אליפטית, כלומר, ירידה של 30 μl).
  4. תערובת תא צנטריפוגה ב 15 מיליליטר צינורות (1000 XG, 5min), להוסיף תערובת קרה מוכן קולגן (1mL) לתא גלולה ומערבבים היטב (עם 1,000 קצה μl).
  5. מייד פיפטה 30 μl של תערובת קולגן / תא (עם 100 טיפ μl) בצלחת גם 24 על סרט פרפין סטרילי ולאפשר תערובת התא / קולגן לפלמר במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס (ראה איור 1 א).
  6. spheroids MM שכבה עם מדיום תרבות 1mL המכיל 1, 10 ו 100 ננומטר בורטזומיב (ראה איור 1).
  7. לאחר 72 שעות של דגירה על 37 מעלות צלזיוס, spheroids מסמך על ידיstereomicroscopy הקרינה (ראה איור 1 ג ').
  8. העבר כל אליפטית על ידי השימוש במלקחיים עם לסתות שטוחות רחבות בצינור תגובה למדידה של ה- GFP (ראה איור 1D).

3. 3D מודל xenograft מיאלומה נפוצה ברפואה המשלימה והאלטרנטיבית

  1. דגירה ביצי עוף בחממה מיוחדת לביצים עופות על 37 מעלות צלזיוס ולחות 70% לשלושה ימים.
  2. לאחר מכן, ביצים פתוחות ועוברי העברה לעיקור עם סירות במשקל פלסטיק אתנול,, 10 סנטימטרים מרובעים עם מכסה צלחת תרבית תאי דגירה "לשעבר אובו" לעוד שישה ימים, כך שCAM הוא מסוגל לפתח (ראה איור 2 א).
  3. סוג אני קולגן צ'יל פתרון ו -10 DMEM x על קרח, לערבב 1/10 נפח של 10 x DMEM בינוני למטריצת קולגן, להוסיף NaOH (0.2 N) לנטרל פתרון קולגן חומצי לערך ה- pH של 7.4; קולגן חנות / פתרון בינוני על קרח.
  4. מערבבים קווי MM המהונדס תא (OPM-2 eGFP אוRPMI-8226 eGFP; 250,000 לאליפטית,) עם תאי mesenchymal אנושיים (50,000 תאים / אליפטית).
  5. תאי צנטריפוגה ב 15 מיליליטר צינורות (1000 XG, 5min; לכל מתחם בדיקת בקבוקון 1), להוסיף 1mL תערובת קולגן מוכן קרה עם תרופה (בריכוז רצוי עבודה) לתא גלולה ומערבבים היטב (עם 1,000 קצה μl).
  6. הנח טיפות קולגן (30 μl כל אחד) על parafilm ב6 גם פטה למשך 30 דקות כדי לאפשר פילמור של מטריקס על 37 מעלות צלזיוס.
  7. העברה "onplants" מצעד 3.6 עם השימוש במלקחיים על פני השטח לא מטופל של CAM (2 סנטימטרים מהעובר) של עוברי תרנגולת 9 יום בן (4 onplants לכל עובר עוף, ראה איור 2)
  8. לאחר 5 ימים של צמיחה בvivo בחממת ביצה על 37 מעלות צלזיוס ולחות 70%, xenografts מסמך על ידי stereomicroscopy הקרינה (ראה איור 2 ג). להרדים עוברי עוף בהיפותרמיה על 4 מעלות צלזיוס במקרר 5 שעות.
  9. הסר xenografts עם רקמת CAM subjacent ידי מספריים עיניים ומלקחיים עם לסתות שטוחות רחבות. השתמש בם למדידה של ה- GFP (סעיף 4, ראו איור 2 ד) או לצורך ניתוח immunohistochemical של כלי דם ו / או תאים פולשים גידול (סעיף 5).

4. כימות חלבון eGFP ידי ELISA

  1. העבר כל אליפטית MM או xenograft נכרת ל0.5 מיליליטר Ripa מאגר המכיל 200 מיקרוגרם / מיליליטר מעכבי פרוטאז.
  2. Homogenize אליפטית / xenograft עם homogenizer רקמות על קרח.
  3. בצע שלוש הקפאה / הפשרה מחזורים בחנקן נוזלי ו -37 ° C אמבט מים.
  4. homogenate צנטריפוגה על 4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות (12,000 ז) וsupernatants חנות.
  5. לדלל דגימות 01:20 במאגר assay (200 μl) של ערכת ELISA. למדוד GFP-ידי רמות ה- GFP מסחרי ELISA ערכה באמצעות נוגדנים אנטי-GFP biotinylated, על פי הפרוטוקול של היצרן.

5. Immunohiניתוח stochemical של כלי דם ותאי גידול פולשים

  1. תקן xenografts נכרת בשטח CAM ב -4% O paraformaldehyde / N ב 4 ° C.
  2. הנח xenografts הקבוע לקלטות הטבעה ולהעביר אותם לתחנת הטבעת רקמות עם סדרת הגדלת מדורגת אלכוהול (50%, 70%, 80%, 95% אתנול, xylol ופרפין; כל דקות שלב 60).
  3. xenografts סעיף (5 מיקרומטר) על ידי השימוש בmicrotome הסיבובי benchtop. אופה חלקי פרפין על O שקופיות זכוכית / N ב 56 מעלות צלזיוס.
  4. סעיפי Deparaffinize על ידי סדרת אלכוהול מדורגת יורדת למים מזוקקים כפולים (xylol, 95%, 80%, 70%, 50% אתנול, מים מזוקקים כפולים; כל שלב 10 דקות).
  5. לבצע אחזור אנטיגן באמבט מים (95 מעלות צלזיוס, 20 דקות) עם פתרון אחזור אנטיגן (חיץ citrate-; pH 7.0; נפח 100 μl).
  6. לחסום פעילות peroxidase אנדוגני עם H 100 μl 3% 2 O 2 / מתנול למשך 30 דקות.
  7. חלקי בלוק בPBS המכיל10% עוברי עגל בסרום במשך 45 דקות (נפח 100 μl).
  8. כתם במשך שעה 1 עם של נוגדן ראשוני (1μg / מיליליטר) מדולל PBS המכיל 1% בסרום עגל עוברי ב RT 100 μl.
  9. לאחר שטיפת 3 פעמים-ב PBS, דגירה של 1h עם נוגדן biotinylated המשני (0.1 מיקרוגרם / מיליליטר) בPBS המכיל 1% בסרום עגל עוברי ב RT.
  10. לאחר שטיפת 3 פעמים-בPBS לבצע תגובת צבע על ידי פתרון avidin מצע / יוטין-מורכב (ABC) וdiaminobenzidine (DAB) על פי הוראות יצרן.
  11. 5.11. עצור תגובה על ידי העברת חלקים למים מזוקקים כפולים, counterstain עם hematoxylin והר חלקים עם הרכבה בינונית סינטטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בניתוח מבחנה של תרכובות יעד במבחני אליפטית מיאלומה נפוצה 3D

בשל המגבלה של תאי culturing MM אנושיים ראשוניים במבחנה הקמנו מודלים תרבות במבחנה חדשים 3D עבור שורות תאים אנושיות MM עושים שימוש במטריקס צמיחה ותאי mesenchymal תומכים עיקריים אנושיים ממח עצם (איור 1 א ', ב'). שורות תאים המהונדס MM EGFP לאפשר הדמיה וכימות של מסת גידול MM לאחר צמיחת 3D בs...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפיתוח של תרופות חדשות לMM עקשן דורש פחות זמן רב ומערכות ב- vivo יקרים להעריך רגישות של תאי MM אנושיים לתרופות. עד כה, רק מעטים מערכות ב- vivo זמינות להערכה פרה-קלינית של טיפולים אנטי-מיאלומה חדשות. לכולם יש את המגבלות שלהם להקרנה בקנה מידה גדולה של ספריות מתחם 29.

הדגמים הנוכחיים הטובים ביותר עבור תאי MM אנושיים הם עכברי חיסון הלקוי ביותר 7,13,30 ועוברי טורקיה 29. שני העכבר SCID ומודלי xenograft עובר עופות יכולים לשמש כדי לחקור את הבי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש הסופרים לא אינטרסים כלכליים מתחרים

תודות

המחברים רוצים להודות לגב' קורנליה הייס על הסיוע הטכני המצוין שלה באימונוהיסטוכימיה והכנת עוברי תרנגולות. עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדע האוסטרית (מענק FWF מס' P19552) והאיחוד האירופי (פרויקט FP7 של האיחוד האירופי Optatio No: 278570).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תאי RPMI-8226 תאיDSMZACC 9STR פרופיל
OPM-2 תאי גזעDSMZACC 50STR פרופיל
תאי גזע מזנכימליים אנושיים PromoCellPC-C-12974
HEK293FT תאים InvitrogenR700-07
RPMI1640 בינוניסיגמא אולדריץ'R0883
סרום בקר עוברי  HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut- עט- תמיסת סטרפטוקוקוסSigmaG6784
DMEM בינוניGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Transfection Medium/Opti-MEM Gibco51985
eGFP חלקיקים נגיפייםGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105מוכן לשימוש חלקיקים נגיפיים
pLenti6/V5Dest6 eGFP וקטורInvitrogenPN 35-1271מהמחברים
ViralpowerTM תערובת אריזות InvitrogenP/N 35-1275
מגיב טרנספקציה/ ליפופקטמין 2000Invitrogen11668-027
BlasticidinInvitrogenR210-01
NeomycinBiochromA2912
קולגן-Type1  Rat Tail BDBiosciences354236
אבקת DMEMLife TechnologiesArt.Nr. 10338582
plitidepsinPharmamar
bortezomibLKT Lab., Inc.B5871
SPF-ביצי תרנגולת לבנותצ'ארלס ריברמופרות   לבנה Leghorn   ביצי עוף
סירות שקילה מפלסטיקneoLabArt.Nr. 1-1125לתרבית ex-ovo
ריבוע פטרידיש (מכסים)SimportD210-16לתרבית ex-ovo
RIPA Buffer (10x)איתות תאים9806
פרוטאז טבליות מעכבRoche11 836 170 001
שלם מיני נטול EDTA
GFP ELISACell Biolabs, Inc.AKR-121
Histocette IISimportM493-6
PFA  37%Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
אתנול אבסולוטנורמאפור20,821,321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
שקופיות מיקרוסקופ SuperFrostR. Langenbrinck סעיף-מס' 1
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Wash Buffer 10xDakoCytomationCode-Nr.
S 3006
פתרון אחזור יעד (10x)  pH 6,1DAKOCode-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu שיבוט ASMA 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 שיבוט MI15DAKOM7228
m-a-hu שיבוט Vimentin V9DAKOM0725
m-a-hu שיבוט Desmin D33DAKO  M0760
m-a-hu Ki67  שיבוט MIB-1   דאקו  M7240
עז ביוטינילית- אנטי עכבר IgGVector Laboratories Inc.BA-9200
Vectastain עלית ABC ערכתוקטור מעבדות בע"מPK-6100
FAST DAB.סיגמא ביוכימיקלים# D4293
מאייר s תמיסת hamalaunMerck1,092,490,500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
ספסל עליון מיקרוטום סיבוביThermo Electron, Shandon Finesse ME +
תחנת הטמעת רקמותLeica, TP1020
חממת ביציםGrumbach BSS160
מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו המצויד במצלמה דיגיטלית מחוברת (אולימפוס E410) ואור קר גמיש אולימפוס, SZX10
אולטרה טורקס הומוגנייזרIKA T10
מזנכימליים אנושיים ## סט טאבלטים

מקורות

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

GFPTransplantGFP ELISAI
הקמת מודל xenograft מיאלומה נפוצה אדם בעוף לחקר צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.