הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

37.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52749

⸱

29 באפריל 2015

 ,  , 
1Centre de recherche du Centre hospitalier de l'Université de Montréal, Institut du cancer de Montréal, 2Département de Médecine, Université de Montréal

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים כאן פרוטוקול פשוט לבידוד מקרופאגים צפקיים של עכברים. לאחר הליך זה מיצוי RNA לביצוע ניתוח ביטוי גנים על גירוי קולטנים דמויי טול.

תקציר

במהלך זיהום ודלקת, מונוציטים במחזור לעזוב את זרם הדם ונודדים לרקמות, שבו הם להתמיין מקרופאגים. המקרופאגים לבטא קולטנים משטח-כמו אגרה (TLRs), אשר מזהים דפוסים מולקולריים נשמרים באמצעות אבולוציה במגוון רחב של מיקרואורגניזמים. TLRs לשחק תפקיד מרכזי בהפעלת מקרופאג אשר בדרך כלל משויכת לשינוי ביטוי גנים. המקרופאגים הם קריטיים במחלות רבות וצמחו כיעדים אטרקטיביים לטיפול. בפרוטוקול הבא, אנו מתארים הליך לבודד מקרופאגים הצפק עכברי באמצעות מדיום thioglycollate של ברואר. האחרון יהיה להגביר את הגירת מונוציטים לצפק, בהתאם זה יעלה תשואת מקרופאג ידי פי 10. מספר מחקרים בוצעו באמצעות מח עצם, טחול או מקרופאגים הצפק נגזר. עם זאת, מקרופאגים הצפק הוצגו להיות בוגר יותר על בידוד ויציב יותר בהם תפקודיity ופנוטיפ. לפיכך, מקרופאגים מבודדים מחלל הצפק עכברי להציג אוכלוסיית תא חשובה שיכול לשמש במחקרים חיסוניים וחילוף חומרים שונים. ברגע בודד, מקרופאגים היו מגורה עם ligands TLR שונה וכתוצאה מכך ביטוי גנים הוערך.

מבוא

מערכת phagocytic הרטיקולואנדותליאלית מורכבת מתאים ברקמות שונות ואיברים כמו מוח עצם, דם, כבד וטחול. המקרופאגים מופצים באופן נרחב ברחבי הגוף, שבו הם בעיקר להשתתף במולד אדפטיבית תגובות חיסוניות לשלוט וזיהומים ברורים. בנוסף לתפקידם בהגנת מארחת, מקרופאגים גם לשחק תפקיד חשוב בריפוי פצעים ובשמירה על הומאוסטזיס רקמות 1,2. יתר על כן, מקרופאגים הם לא רק חשובים לתפקוד מערכת חיסון, אלא גם להשתתף באופן פעיל בברזל הומאוסטזיס 3. בגוף, כ -80% מברזל נמצאים בהמוגלובין בתוך אריתרוציטים, שכאשר הם מזדקנים phagocytosed ידי מקרופאגים 4. יומי, מקרופאגים אלה למחזר 25 מ"ג של ברזל המופק כדורית אדומה ולספק התחבורה שלה לפלזמה 5. יתר על כן, במהלך זיהום ודלקת, מקרופאגים פרו-דלקתיים לעקל ברזל בסרום להפחתת availabili הברזלטאי לפתוגנים, בשתי הרמות המערכתיות ומקומיות 6-8. כמו כן, מחקרים הראו כי מקרופאגים ובעיקר hepatocytes לייצר פפטיד מיקרוביאלית שם hepcidin שנחשב הרגולטור הראשי של ברזל חילוף חומרים 9, 10. Hepcidin הוא גדל בעיקר על ידי גירויים דלקתיים, והוא אחראי באופן חלקי לקיבוע ברזל במקרופאג על דלקת כרונית 11-13. כביטוי hepcidin במקרופאגים אינו מובן היטב, שחקרנו את התפקיד האפשרי של קולטני-כמו אגרה (TLRs) בתקנה זו. TLRs נמצא בעיקר במקרופאגים ולשחק תפקיד מרכזי בהפעלתם. בנוסף, ביטוי hepcidin המושרה LPS בכבד תלוי בTLR4 13. לכן, כדי לבצע המחקר שלנו, השתמשנו בשיטה המבוססת על הבידוד של מקרופאגים הצפק עכברי.

שורות תאי מקרופאג משמשות באופן נרחב בהרבעת מקרופאגies; בכל זאת תרבות המורחבת יכולה לעורר אובדן גן וירידה בתפקודים חיסוניים בשורות תאים אלה. לפיכך, בידוד של מקרופאגים מחלל הצפק הוא קריטי.

חלל הצפק העכבר מציג אתר אידיאלי למסוק מקרופאגים 13-15. מקרופאגים הצפק עכברי מבודדים נוחים לכמה מחקרים לגבי התפקוד החיסוני שלהם. עם זאת, מספר מקרופאגים בהצפק אינו מספיק למחקרים מקיפים והערכה הוא סביב 1 x 10 6 מקרופאגים לכל עכבר. לכן, כדי להעלות את תפוקת מקרופאג, סוכן לעורר סטרילי כגון thioglycollate הוזרק לתוך חלל הצפק שקדמו לבציר התא. לאחר הזרקת thioglycollate, התשואה של מקרופאגים לכל עכבר שעלתה בפי 10. למרות העלייה בתשואת מקרופאגים, המעשים בינוניים thioglycollate של ברואר כמטרד שגורם תגובה דלקתית, וכתוצאה מכך הגיוס של מקרופאגים, שmay אבל לא הכרחי משפיע על ביטוי גנים. לפיכך, קבוצת שליטה בהיקף של מקרופאגים שאינם מטופלים חייבת להיות כלולה בכל ניסוי. בידיים שלנו, ביטוי hepcidin שהמגורה מאוד על ידי דלקת לא זוהה בthioglycollate שאינו מטופלים שהושרו מקרופאגים הצפק. יתר על כן, מחקרים הראו כי thioglycollate של ברואר מגייס מקרופאגים רבים, אבל לא להפעיל אותם 16. מצד השני, thioglycollate של ברואר שהושרו מקרופאגים הראו עלייה באנזים lysosomal אבל ירידה בהרג מיקרואורגניזמים בלע 17. עם זאת, יכולת phagocytic לא הושפעה בהשוואה למקרופאגים-הושר לא 16.

ברגע תרבותי במנות, מקרופאגים הצפק להיות חסיד, ובכך מאפשרים הפרדתם מסוג אחר של תאים מבודדים מחלל הצפק. בהמשך לכך, מקרופאגים המבודדים היו תיגר עם אגוניסטים TLRs שונים.לבסוף, mRNA היה שחולץ מהתאים בתרבית וביטוי גנים נותח באמצעות תגובת שרשרת כמותי הפוכה transcriptase-פולימראז (qRT-PCR).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הנהלים בוצעו בהתאם המועצה הקנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים לאחר אישור הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים של מרכז דה משוכלל ונדיר du המרכז הרפואי de l'אוניברסיטת מונטריאול (CRCHUM).

1. בידוד, זיהוי, ותרבות של Murine הצפק המקרופאגים

  1. הכן בינוני thioglycollate של 3.8% ברואר. לשם כך, להשעות 38 גרם של thioglycollate בינוני ב1,000 מיליליטר של מים מזוקקים. להביא פתרון לרתיחה לפזר הבינוני לחלוטין. לעקר ידי מעוקר ב 121 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. לאחסן עד 3 חודשים בחושך, בRT 18.
    הערה: בטל אם עכירות מפתחת המצביעה על זיהום חיידקים. הפתרון יכול להיות כל הזמן לעד שנה בחושך אם שמר סטרילי.
  2. שימוש 1 מיליליטר מזרקים מצורפים 23 מחטי G, להזריק 1 מיליליטר של 3.8% ברואר thioglycollate בינוניים לתוך חלל הצפק של כל mouSE ולחכות 3 ימים. השתמש מזרק ומחט חדשים לכל עכבר.
  3. להרדים עכברים בזריקת intraperitoneal של נתרן pentobarbital (100 מ"ג / קילוגרם) ולהרדים עכברים על ידי נקע בצוואר הרחם. לאשר הרדמה תקינה על ידי בדיקת קצב הנשימה. בדרך כלל נשימות מהירות מצביעות על כך שהעכבר לא מורדם עמוק.
  4. שטוף את הבטן של כל עכבר עם 70% אתנול. באמצעות מספריים, לבצע חתך לרוחב לאורך קו האמצע התחתון של הצפק.
  5. בעזרת מלקחיים, למשוך בחזרה את עור הבטן כדי לחשוף את עור הצפק השקוף. שימוש במזרקים 5 מיליליטר מצורף 20 מחטי G, להזריק 5 מיליליטר של DPBS הקר לתוך חלל הצפק של כל עכבר.
  6. לבצע עיסוי עדין בחלל הצפק ולאחר מכן לשאוב את הנוזל בזהירות מבלי ניקוב כל איבר. הסר את המחט ולוותר נוזל הצפק לתוך צינורות צנטריפוגה חרוטי 50 מיליליטר.
  7. צנטריפוגה למשך 10 דקות ב 400 XG בצנטריפוגה בקירור.תאים חייבים להישאר קרים במהלך כל התהליך. בטל supernatant ו resuspend תא גלולה במדיום RPMI 1640.
  8. באמצעות hemocytometer, לספור תאים ולהסתגל לצפיפות תאים 1 x 10 6 תאים / מיליליטר.
  9. לאפיין את הפנוטיפ של תאים מבודדים על ידי cytometry זרימה באמצעות 1 x 10 6 תאים לכל עכבר וantibodie נגד F4 / 80 (אנטיגן שטח הביע במקרופאגים).

2. טיפולים סלולריים

  1. ישירות, לאחר בידוד, להוסיף 1 x 10 6 תאים לכל אחד. השאר את מקרופאגים הצפק עכברי לדבוק לתוך צלחות 6-היטב על ידי culturing אותם ל1-2 שעות על 37 מעלות צלזיוס. הסרת תאים שאינם חסיד בעדינות על ידי שטיפת 3 פעמים עם PBS החם.
  2. בהמשך לכך, תאי תרבות בסרום ללא DMEM 900 μl למשך 24 שעות בנוכחות ligands TLR הבא: (Pam3CSK4-TLR1 / 2 (מ"ג 0.5 / מיליליטר); פולי (אני: C) -TLR3 (10 מ"ג / מיליליטר) ; LPS-TLR4 (100 ng / ml); flagellin-TLR5 (100 ng / ml); FSL1-TLR6 / 2 (100 ng / ml); ssRNA40-TLR7 (1 מיקרוגרם / מיליליטר); ODN1826-TLR9 (1 מיקרומטר).
    הערה: הכן לכל יגנד פתרון 10x המניה. להוסיפם של אלה 100 μl היטב כל אחד, ובכך מבצע דילול של פי 10.

בידוד 3. RNA

  1. הסר את כל התאים בינוניים וlyse ישירות בצלחות שש היטב על ידי הוספת 1 מיליליטר TRIzol היטב כל אחד ועובר lysate התא מספר פעמים באמצעות פיפטה. דגירה דגימות homogenised במשך 5 עד 10 דקות ב RT, על מנת לאפשר לניתוק של מתחמי nucleoprotein המלא.
  2. העבר את lysate לתוך 1.5 מיליליטר RNase- וצינורות microcentrifuge ללא DNase. להוסיף 0.2 מיליליטר כלורופורם לTRIzol 1ml. Shake צינורות במרץ ביד במשך 15 שניות ודגירתם על RT במשך 5 עד 10 דקות. צנטריפוגה ב XG 12,000 במשך 15 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. שים לב לתערובת מפרידה לשלב אדום (פנול, כלורופורם) נמוך, הביניים ושלב מימיים עליון חסר צבע. RNA נשאר אך ורק בשלב המימי.
  3. טראןספיר בזהירות את השלב מימי העליון לצינור טרי מבלי להפריע הביניים. לזרז את הרנ"א מזה על ידי ערבוב עם 0.5 מיליליטר של אלכוהול איזופרופיל. דגירה דגימות ב RT במשך 10 דקות ו צנטריפוגות ב XG 12,000 במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. RNA משקעים יוצר גלולה לבנה בצד והחלק התחתון של הצינור.
  4. הסר supernatant. שטוף את כדור פעם אחת RNA עם 1 מיליליטר של אתנול 75%. מערבבים את הדגימות על ידי vortexing ו צנטריפוגות ב 7500 XG במשך 5 דקות על 4 מעלות צלזיוס. בקצרה לייבש את RNA (אוויר יבש במשך 10 דקות). לפזר RNA ב 0.1 מיליליטר DEPC (מים חופשיים RNAse) ודגירה של 10 דקות על 55 מעלות צלזיוס.
  5. לכמת RNA באמצעות ספקטרופוטומטר. כדי לעשות זאת, לדלל דגימות במי DEPC 100 פעמים ולקרוא באורכי גל של 260 ננומטר. אז ריכוז RNA יהיה: OD 260 x 40 ng ul x גורם לדילול /.
  6. להשוות ריכוזי RNA וסינתזה cDNA לפי הוראות יצרן באמצעות מערכת RT-PCR לערכת ראשון סטרנד cDNA סינתזה. כלפי הוראות יצרן, למדוד את רמות ה- mRNA של הגן על ידי בזמן אמת PCR (45 מחזורים) במערכת זיהוי DNA בזמן אמת. לנרמל את רמות ביטוי גנים עם גן שני משק למשל β-אקטין וGAPDH.
    הערה: נרמל ריכוז RNA 500 מיקרוגרם / מיליליטר ולהשתמש 0.5 מיקרוגרם לסינתזת cDNA.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

אנו מאופיינים ראשון מקרופאגים הצפק עכברי המבודדים על ידי cytometry זרימה. לשם כך, השתמשנו (F4 80 /) נוגדנים שבמיוחד להכיר סמנים לידי ביטוי רק על ידי מקרופאגים. אפיון זה נדרש כדי לקבוע את אחוז מקרופאג המבודד וכדי להבדיל ביניהם בין תאים המתקבלים בתהליך הבידוד. כפי שניתן לראות ב( איור 1), אחוז התאים המבטא את האנטיגן F4 / 80 נמצא באופן עקבי להיות מעל 95%. בשלב הבא, ללמוד ביטוי גנים במקרופאגים, טופלו התאים המבודדים עם כמה ligands TLR: Pam3CSK4 (TLR1 / 2), LPS (TLR4) וF...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המקרופאגים הם חיוניים להישרדות ולספק יעד מפתה כדי לתפעל את המארח למטרות חיסוניות. הגילוי של TLRs ומולקולות הכרה אחרות שנערך מקרופאגים למרכז דיון חיסוני. המקרופאגים להגיב למגוון של גירויים, כולל ציטוקינים, מולקולות הקשורים נזק מולקולרי דפוס (damps) 20 ומולקולות הקשורות לקבוצות של פתוגנים (PAMPs) 21. תגובות לגירויים שונות אלה מייצגים במהלך הפעלת מקרופאגים, והם בדרך כלל קשורים בשינויים פתאומיים בביטוי גנים 22.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענק ממדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה (NSERC, מענק לא 298,515-2011). AL הוא הנמען של דוקטורט מלגה ממדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה (NSERC), ו- MS נתמכה ממענק מהמכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR, להעניק אין. MOP123246).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
C57BL/6 עכבריםמעבדות צ'ארלס ריבר, בע"מ (ווילמינגטון, מסצ'וסטס, ארה"ב)475
תיוגליקולטסיגמא-אולדריץ', (סנט לואיס, מיזורי)19032-500G
70% אתנול
10% נתרן פנטוברביטל (משמש להרדמת עכברים (80 מ"ג/ק"ג, i.p.))
דולבקו s תמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS), מונחת על קרח ותשמש לקצירת מקרופאגיםWISENT INC Canada (QC)311-425-CL
RPMI medium 1640 (תוסף עם פניצילין, סטרפטומיצין, L-גלוטמין ו-10% סרום עגל עוברי).WISENT INC קנדה (QC)350-000-CL
מזרקים 1 ו-5 מ"לBD ארה"ב (ניו ג'רזי)
צלחות 6 בארותCorning Incorporated (ניו יורק, ארה"ב)MCT-150-C
ליפופרוטאין חיידקי Pam3CSK4 (0.5 מ"ג/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)TLRL-pm25
פולייונוסין– חומצה פוליציטידילית (Poly(I:C)) (10 מ"ג/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)TLRL-PIC
LPS מ-Escherichia coli 055:B5 (100 ננוגרם/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)L2880
פלאגלין מטוהר מסלמונלה טיפימוריום (100 ננוגרם/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)TLR-FLIC-10
ליפופרוטאין סינתטי FSL1 (100 ננוגרם/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)TLR-FSL
ssRNA שמקורו ב-HIV-1 ssRNA40 (1 μ גרם/מ"ל)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)TLR-LRNA-40
סוג B CpG ODN1826 אוליגונוקלאוטיד (1 μ M)InvivoGen (סן דייגו, ארה"ב)11B16-MM
TRIzolInvitrogen, (ברלינגטון, אונטריו, קנדה)15596-026
מחטים 20 גרם ו-23 גרםBD ארה"ב (ניו ג'רזי)
מלקחיים
מספריים
50 מ"ל צינורות חרוטיים המונחים על קרחSarstedt (ניוטון, MA, ארה"ב)62.547.205
מאגר ליזיס של תאי דם אדומיםסיגמא-אולדריץ', (סנט לואיס, מיזורי)R7757-100ML
צנטריפוגה
המוציטומטר
F4/80 נוגדןBIO-RAD (קליפורניה, ארה"ב)
נוגדנים CD16/CD32Pharmingen, {Mississauga, ON, CA)553141
ציטומטרזרימהCoulter Epics Elite counter, קולטר, (היאליה, פלורידה, ארה"ב)
1.5 מ"ל שפופרות אפנדורףAxygen Scietific (קליפורניה, ארה"ב)3516
כלורופורםפישר סיינטיפיק (ON, קנדה)UN1888
איזופרופיל אלכוהולJT Baker (PA, ארה"ב)70566
75% אתנול (במים שטופלו ב-DEPC)אלכוהולים מסחריים (QC, קנדה)17394
0.01% דיאתיל פירוקרבונט (DEPC) מים מטופלים (נותנים לעמוד לילה ואוטוקלאב)סיגמא-אולדריץ', (סנט לואיס, מיזורי)216.542.8
מערכת RT-PCR OmniscriptQiagen, (מיסיסוגה, אונטריו, קנדה)205113
רוטור גן 3000מונטריאול ביוטק, (קירקלנד, QC, קנדה)
ערכות QuantiTect SYBR Green I PCRQiagen, (מיסיסוגה, אונטריו, קנדה)204141
309659 305175 מקוררתMCA497APC

מקורות

  1. Pollard, J. W. Trophic macrophages in development and disease. Nat Rev Immunol. 9 (4), 259-270 (2009).
  2. Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat Rev Immunol. 3 (1), 23-35 (2003).
  3. Koury, M. J., Ponka, P. New insights into erythropoiesis: the roles of folate, vitamin B12, and iron. Annu Rev Nutr. 24, 105-131 (2004).
  4. Sheftel, A. D., Kim, S. F., Ponka, P. Non-heme induction of heme oxygenase-1 does not alter cellular iron metabolism. J Biol Chem. 282 (14), 10480-10486 (2007).
  5. Hershko, C. Storage iron regulation. Prog Hematol. 10, 105-148 (1977).
  6. Collins, H. L. Withholding iron as a cellular defence mechanism--friend or foe. Eur J Immunol. 38 (7), 1803-1806 (2008).
  7. Noyes, W. D., Bothwell, T. H., Finch, C. A. The role of the reticulo-endothelial cell in iron metabolism. Br J Haematol. 6, 43-55 (1960).
  8. Layoun, A., Huang, H., Calve, A., Santos, M. M. Toll-like receptor signal adaptor protein MyD88 is required for sustained endotoxin-induced acute hypoferremic response in mice. Am J Pathol. 180 (6), 2340-2350 (2012).
  9. Zumerle, S., et al. Targeted disruption of hepcidin in the liver recapitulates the hemochromatotic phenotype. Blood. 123 (23), 3646-3650 (2014).
  10. Nguyen, N. B., Callaghan, K. D., Ghio, A. J., Haile, D. J., Yang, F. Hepcidin expression and iron transport in alveolar macrophages. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291 (3), L417-L425 (2006).
  11. Nemeth, E., et al. Hepcidin, a putative mediator of anemia of inflammation, is a type II acute-phase protein. Blood. 101 (7), 2461-2463 (2003).
  12. Nemeth, E., et al. Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization. Science. 306 (5704), 2090-2093 (2004).
  13. Constante, M., et al. Distinct requirements for Hfe in basal and induced hepcidin levels in iron overload and inflammation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 291 (2), G229-G237 (2006).
  14. Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. The isolation and characterization of murine macrophages. Curr Protoc Immunol. Chapter 14 (Unit 14 11), (2008).
  15. Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. J Vis Exp. (35), (2010).
  16. Leijh, P. C., van Zwet, T. L., ter Kuile, M. N., van Furth, R. Effect of thioglycolate on phagocytic and microbicidal activities of peritoneal macrophages. Infect Immun. 46 (2), 448-452 (1984).
  17. Dy, M., Debray-Sachs, M., Kamoun, P., Hamburger, J. Effect of thioglycollate on macrophage lysosomal enzymes. Biomedicine. 29 (5), 167-170 (1978).
  18. Li, Y. M., Baviello, G., Vlassara, H., Mitsuhashi, T. Glycation products in aged thioglycollate medium enhance the elicitation of peritoneal macrophages. J Immunol Methods. 201 (2), 183-188 (1997).
  19. Layoun, A., Santos, M. M. Bacterial cell wall constituents induce hepcidin expression in macrophages through MyD88 signaling. Inflammation. 35 (4), 1500-1506 (2012).
  20. Oppenheim, J. J., Yang, D. Alarmins: chemotactic activators of immune responses. Curr Opin Immunol. 17 (4), 359-365 (2005).
  21. Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124 (4), 783-801 (2006).
  22. Lang, R., Patel, D., Morris, J. J., Rutschman, R. L., Murray, P. J. Shaping gene expression in activated and resting primary macrophages by IL-10. J Immunol. 169 (5), 2253-2263 (2002).
  23. Wang, C., et al. Characterization of murine macrophages from bone marrow, spleen and peritoneum. BMC Immunol. 14 (6), (2013).
  24. Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture. J Cell Physiol. 77 (2), 121-134 (1971).
  25. Cannon, G. J., Swanson, J. A. The macrophage capacity for phagocytosis. J Cell Sci. 101 (Pt 4), 907-913 (1992).
  26. Wang, Y., Harris, D. C. Macrophages in renal disease. J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).
  27. Edwards, J. P., Zhang, X., Frauwirth, K. A., Mosser, D. M. Biochemical and functional characterization of three activated macrophage populations. J Leukoc Biol. 80 (6), 1298-1307 (2006).
  28. Hoover, D. L., Nacy, C. A. Macrophage activation to kill Leishmania tropica: defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents. J Immunol. 132 (3), 1487-1493 (1984).
  29. Schleicher, U., Bogdan, C. Generation culture and flow-cytometric characterization of primary mouse macrophages. Methods Mol Biol. 531, 203-224 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

RNART PCRBrewer s ThioglycollateTLR
בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.