מאמר שיטה

Electrotaxis מחקרים של תאי סרטן ריאות באמצעות רב-ערוצי דו-חשמלי-שדה שבב microfluidic

DOI:

10.3791/53340

⸱

29 בדצמבר 2015

 ,  , 
1Research Center for Applied Sciences, Academia Sinica, 2Institute of Biophotonics, National Yang-Ming University, 3Biophotonics & Molecular Imaging Research Center (BMIRC), National Yang-Ming University, 4Department of Mechanical and Mechatronic Engineering, National Taiwan Ocean University, 5Ph.D. Program in Microbial Genomics, National Chung Hsing University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מכשירים מיקרופלואידיים רבים פותחו לשימוש בחקר אלקטרוטקסיס. עם זאת, אף אחד מהשבבים הללו אינו מאפשר מחקר יעיל של השפעות השדה הכימי והחשמלי בו-זמנית (EF) על התאים. פיתחנו מכשיר מבוסס פולימתיל-מתאקרילט המציע EF דו-קיום מבוקר טוב יותר וגירוי כימי לשימוש במחקר אלקטרוטקסיס.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההתנהגות של נדידת תאים כיוונית תחת שדה חשמלי הנוכחי ישיר (dcEF) נקראת electrotaxis. התפקיד המשמעותי של dcEF הפיזיולוגי במנחים תנועת תא במהלך התפתחות עובר, התמיינות תאים, וריפוי פצע הודגם במחקרים רבים. על ידי יישום שבבי מייקרו-נוזליים לassay electrotaxis, תהליך החקירה מתקצר ושגיאות ניסיוניות הן מזעריות. בשנים האחרונות, מכשירי microfluidic עשויים חומרים פולימריים (לדוגמא, polymethylmethacrylate, PMMA, או אקריליק) או polydimethylsiloxane (PDMS) היה בשימוש נרחב בלימוד התגובות של תאים לגירוי חשמלי. עם זאת, בניגוד לרב נדרשו כדי להמציא מכשיר PDMS צעדים, הבנייה הפשוטה ומהירה של מייקר אקריליק fl שבב uidic הופכת אותו מתאימה לשני אב טיפוס המכשיר וייצור. עם זאת, אף אחד מהמכשירים דיווחו להקל על המחקר יעיל של חומר כימי בו זמנית וDCEהשפעות F על תאים. בדו"ח זה, אנו מתארים העיצוב והייצור של שבב רב-ערוצי מבוססי אקריליק חשמלי-שדה-כפול (MDF) כדי לחקור את ההשפעה הזמנית של כימי וגירוי חשמלי על תאי סרטן הריאות שלנו. שבב MDF מספק שמונה שילובים של גירויים חשמליים / כימיים בבדיקה אחת. השבב לא רק מקצר מאוד את זמן הניסוי הנדרש, אלא גם מגביר את הדיוק בelectrotaxis לימודים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התנהגותם של תאים חסיד נעו לעבר אנודה או קתודה תחת שדה חשמלי הנוכחי ישיר (dcEF) נקראת electrotaxis. התנהגות electrotactic של תאים ממלאים תפקיד משמעותי בעובר, התחדשות של עצבים, וריפוי פצע. תאי גידול 1 כגון תאי ערמונית עכברוש סרטן, תאי סרטן שד 2, 3 וריאות תאי אדנוקרצינומה 4-8 הראו תנועת electrotactic תחת dcEF מיושם . EF הפיזיולוגי כבר נמדד ברקמות בלוטה. 9,10 Electrotaxis דווח גם בתאים סרטניים הקשורים בלוטה. 2,3 יחדיו, electrotaxis של תאי הסרטן נחשב לגורם גרורות. 11 שליטה ההדרכה החשמלית של תאים סרטניים תחת dcEF עשויים להיות גישה פוטנציאלית לטיפול העתידי בסרטן. עם זאת, היום, המנגנון המולקולרי מפורט של electrotaxis נותר שנוי במחלוקת. לכן, חקירה של INFluence של גירוי חשמלי על נדידת תאי הסרטן יכול להקל על פיתוח אסטרטגיות לטיפול בסרטן.

לאחרונה, מכשירי יו-microfluidic כבר מפוברקים ללימוד תגובות הסלולר לזרום כוח גזירה, 12 מילויים כימיים, 13 ו חשמל גירויים 4 במבחנה. הייצור של מכשירים ביו-microfluidic באמצעות polydimethylsiloxane (PDMS) או polymethylmethacrylate (PMMA, הידוע גם באקריליק) צמצם בהצלחה שיעור הכישלון של ניסויים כאלה. יתרה מזאת, שימוש בהתקני מייקרו-נוזליים מבוסס אקריליק כמו אב טיפוס לחקירת נושאים ביולוגיים הוא פשוט יותר מאשר באמצעות שבבי PDMS. תפקידים שונים במכשירים מבוססי אקריליק פותחו עבור electrotaxis מחקר. עם זאת, אף אחד מהעיצובים הקודמים יכול לבדוק בו זמנית ההשפעות של תנאים כימיים שונים ושדה החשמלי על תאים לelectrotaxis מחקר. לפיכך, פיתחנו מכשיר-mu microfluidicltichannel כפול חשמלי-שדה (MDF) ארבעה ערוצי תרבות עצמאיים ושמונה תנאי ניסוי שונים בשבב אחד המכיל שבב.

שבב MDF מבוסס אקריליק, דווח לראשונה על ידי הו et al., 8 משלב גירוי חשמלי וכמה ערוצים מבודדים כימי. ערוצים מבודדים כימי אלה יכולים לשמש לתרבות סוגים שונים של תאים בניסוי אחד. DcEF בערוצים מופק על ידי אספקת חשמל. שני שדות חשמליים עצמאיים, אחד עם כוח שימושי חשמלי-שדה (EFS) ועוד עם 0 EFS, נערכים בכל ערוץ כימי מבודד. בדרך זו, השבב מספק EF coexisting שליטה טובה יותר וגירוי כימי. יתר על כן, תוצאות מהסימולציה נומרית של דיפוזיה הכימית בתוך שבב MDF מצביעות על כך שאין זיהום לחצות אירע בין הערוצים לאחר תקופת ניסוי 24 שעות. 8

לעומת דוויCE דווח על ידי Li et al., 14 השבב MDF מספק אזור תרבות גדול יותר, המאפשר לאנליזה ביוכימית נוספת של תאי גירוי חשמלי. בנוסף, עם אזור התצפית הגדול יותר של שבב MDF, ניתן לצפות יותר תאים במבחן, כך הניתוח של מהירות הגירה או הכוונה של תאי מגורה חשמלי הוא מדויק יותר. עיצובי השבב בודדים הערוצים של מחקרים קודמים שדווחו על ידי הואנג et al. 4 וצאי et al. 15 מאפשרים רק סוג אחד של תא או כימי להיבדק. עם זאת, שבב MDF יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של כימיקלים שונים על electrotaxis, כמו גם את ההשפעות של גירוי חשמלי בסוגים שונים של תאים. במילים אחרות, שבב MDF מאפשר מחקר יעיל של תלות מינון כימית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. עיצוב וייצור של שבב MDF

  1. צייר דפוס שכבת אקריליק בודד באמצעות תוכנה מסחרית, כגון AutoCAD, ולשמור את התבנית.
    1. סקור את העיצוב של תבנית גיליון אקריליק ארבע-שכבה בתרשים 1 א ו לאשר את הקשרים הבין-שכבה.
  2. לפברק את כל גיליונות אקריליק ודבק דו צדדיות על ידי אבלציה לייזר באמצעות חרט CO 2 לייזר (1B דמויות, 2A, ו2B). 16
    1. הפעל את חרט הלייזר ולחבר את המכשיר למחשב נייד השליטה.
    2. הפעל את התוכנה המסחרית ולפתוח את התבנית נועדה בשלב 1.1 על ידי לחיצה על "קובץ תבנית נועדה."
    3. מניחים פיסת גיליון אקריליק הריק או הקלטת דו צדדית על הבמה XYZ של חרט הלייזר.
    4. הגדר את מוקד קרן הלייזר על פני השטח של גיליון אקריליק או קלטת דו צדדית עם-alignmen אוטומטילא מקל הניתן על ידי היצרן של חרט הלייזר.
    5. שלח את התבנית נועדה חרט הלייזר לעיבוד ישיר של גיליון אקריליק או סרט דו-צדדי.
  3. הסר את מגן הנייר מגיליונות אקריליק באמצעות מלקחיים ולפוצץ המשטח נקי עם גז חנקן.
  4. מחסנית גיליונות אקריליק והאג"ח יחד תחת לחץ של 2 קילוגרם / 2 סנטימטר בונדר תרמית במשך 45 דקות ב 110 ° C כדי ליצור את הזרימה / ההרכבה ערוץ גירוי חשמלית.
  5. הכן את מכסה זכוכית מיקרוסקופ כמצע תרבית תאים בשבב.
    1. שים את מכסה הזכוכית לתוך צנצנת מכתימה ולמלא את הצנצנת עם דילול פי עשרה של חומר הניקוי מופיע ברשימת החומרים.
    2. שים את מכסה הזכוכית וצנצנת מכתימה בSteri-שואב קולי ולנקות את מכסה הזכוכית במשך 15 דקות.
    3. יוצקים את סבון הכלים המדולל מתוך הצנצנת מכתימה, למלא את הצנצנת במים מזוקקים, וחזור על שלב 1.5.2 3 פעמים.
    4. לייבש את מכסה הזכוכית ניקתה ידי פיצוץ אותו עם גז חנקן לפני דבקותו לסרט דו-צדדי.
  6. לדבוק מכסה הזכוכית ניקתה לזרימה / ההרכבה ערוצי גירוי חשמלית עם הסרט דו-צדדי בדוגמת בשלב 1.2.
  7. לדבוק 13 חתיכות של מתאמי אקריליק לפתחים הבודדים בLayer 1 להרכבת שבבי MDF עם דבק סופר. ההרכבה שבבי MDF היא אז שלם (איור 2 ד).
  8. לעקר את ההרכבה שבב MDF המלאה עם 30 דקות של קרינת UV לפני השימוש.

2. התקנה של רשת גשר מלח של צ'יפ MDF

  1. לפני שימוש, לעקר את כל צינורות הפלסטיק, אגוזי אצבע הדוקה, וצינורות microcentrifuge מוצגים באיור 3 על ידי הגדרת זמן החזקה של 15 דקות ב 121 ° C בחיטוי.
  2. חבר את צינורות fluoroplastic (איור 3-i) להרכבת שבבי MDF באמצעות הכניסה בינוניתמתאמים לשקע מוצגים בתרשים 1 א.
  3. חבר להתחדד Luer של הכניסה ויציאה בינוני צינורות פלסטיק באיור 3-i לברזים למיניהם 3-הדרך.
  4. קח -2.5 מיליליטר של CO 2 מלוח -equilibrated פוספט שנאגרו (PBS) באמצעות מזרק 3 מ"ל ולחבר את המזרק לברזלי 3-הדרך של צינור פלסטיק כניסה. חבר מזרק 3 מיליליטר ריק לברזלי 3-הדרך של צינור הפלסטיק לשקע. שני המזרקים בכך מחוברים באמצעות שבב MDF.
    הערה: דגירה PBS ב37 מעלות צלזיוס 5% -CO O תרבות חממת 2 תא / N להשיג CO 2 -equilibrated PBS.
  5. לאטום את הפתחים של כחול והירוק מתאמים (איור 1A) בגיליון PMMA שכבת 1 עם אגוזי אצבע חזק מוצקים לבנים (איור 3-ג).
  6. מלא את ערוצי גשר מלח ותאי תרבות עם CO 2 -equilibrated PBS במזרק המתואר בהתקנת שלב 2.4. לְהִמָנַעהיווצרותן של בועות.
  7. בשלב הבא, לשים CO 2 -equilibrated PBS המכיל שבב MDF ב5% -CO תרבות חממת 2 תא 37 ° C / O דגירה N. זו מאפשרת לאוויר מומס בקלטת דו צדדית כדי ליצור בועות בתאים.
  8. רוקן משם הבועות בערוצים על ידי זרימת PBS מהירה בערוץ באמצעות שני המזרקים. לשאוב PBS הלוך ושוב במידת צורך.
  9. מסננים את PBS בערוצים באמצעות ברזלים 3 הכיוונים מחוברים לצינור לשקע הבינוני.
  10. באמצעות מזרק 3 מ"ל חדש, לקחת 2.5 מיליליטר של CO 2 -equilibrated הנשר השתנה Dulbecco בינוני (DMEM) (ראה שלב 3.5), ולהחליף המזרק מחובר לכניסה עם אחד החדש. למלא את הערוצים עם המדיום.
  11. הכנה של רשת גשר מלח.
    1. באופן זמני להוציא את האגוזים הסולידיים (3B-iii תרשים) במתאמים הירוקים (איור 1 א), ולהזריק% 3 חם (> 70 ° C) agarose לBRI מלחערוץ dge דרך הפתח במתאמים הירוקים (איור 1 א).
      הערה: הכנת החם agarose: ממיסים 1.5 גרם של אבקת agarose 50 מיליליטר של PBS. לעקר על ידי הגדרת זמן החזקה של 20 דקות ב 121 מעלות צלזיוס בחיטוי.
    2. להפסיק הזרקת agarose כאשר הנוזל ממלא שלושה רבעים מאורכו של ערוץ גשר מלח.
    3. לאטום את הנקבוביות במתאמים הירוקים (איור 1 א) על ידי הברגת אגוזים מוצקים (איור 3-ג) לאחר הזרקת agarose.
    4. החלף את האגוזים מוצקים על המתאמים הכחולים (איור 1 א) עם האגוזים השקופים צינורי אצבע חזק (איור 3).
    5. טען את 3% מחוממים מראש agarose לאגוזי צינורי (איור 3B-IV).
    6. להטביע את האלקטרודות Ag / AgCl (איור 3-V) לאגוזי צינורי (איור 3-IV) לפנימיצוק של agarose.
  12. לאחר שסיים את ההתקנה של רשת גשר מלח, להזריק את תאי סרטן ריאות CL1-5 לתאי התרבות, קאמרית אחד בכל פעם.

3. הכנה של תאי הסרטן ולהגדיר לניסוי Electrotactic

  1. תרבות רגילה של שורת תאי סרטן ריאות CL1-5.
    1. תרבות תאי CL1-5 סרטן ריאות, המתקבלים מפרופ 'פאן-Chyr יאנג, 17 במדיום השלם בבקבוק תרבות תא 75T ב 37 ° C באווירת 5% CO 2. הבינוני השלמה מורכב מDMEM ו -10% בסרום שור עוברי (FBS). תת-תרבות התאים כל 3-4 ימים. התאים המשמשים לביצוע ניסויי electrotaxis פחות מ -25 קטעים מהמקור המקורי.
  2. להוסיף 2 מיליליטר של 0.25% חיץ טריפסין לתאי CL1-5 גדלו באופן אקספוננציאלי ודגירה של 2 דקות ב37 חממת תרבות -CO -2 סלולארי מעלות צלזיוס -5% לdetachmen סלולארילא.
  3. לסיים את תהליך הניתוק עם 6 מיליליטר של 10% DMEM FBS וצנטריפוגה התאים ב 300 גרם במשך 5 דקות ב RT. אז להשליך את המדיום ולהשעות את התא גלולה עם 5 מיליליטר של PBS.
  4. לספור את מספר התאים בPBS. אז קח 1 x 10 6 תאים ו צנטריפוגות ב 300 גרם במשך 5 דקות בRT.
  5. מחק את PBS. להשעות את התאים עם CO 2 מראש חימם -equilibrated DMEM ולהתאים את צפיפות התאים להיות 1 × 10 6 תאים / מיליליטר.
    הערה: דגירה בינונית המלאה ב37 מעלות צלזיוס 5% -CO O 2 תאי תרבות החממה / N להשיג CO 2 -equilibrated DMEM.

4. הגדרה לניסוי Electrotactic

  1. משקע של שבב MDF, להזריק 0.3 מיליליטר, 1 × 10 6 / מיליליטר, של התאים לתוך השבב.
  2. דגירה שבב MDF תא-זרע בתרבית תאי החממה (שנקבע על 37 מעלות צלזיוס ו 5% CO 2) במשך 2-4 שעות.
  3. התקנה של מיקרו MDFמערכת fluidic.
    1. התקן את מערכת microfluidic MDF על דוד זכוכית תחמוצת אינדיום בדיל שקופה (איטו). מדוד את הטמפרטורה של שבב MDF עם צמד תרמי K-סוג המקוטע בין שבב MDF וזכוכית איטו. לשלוט על דוד איטו עם בקר פרופורציונאלי נפרד נגזרים (PID). הגדר את טמפרטורת הדגירה מערכת MDF microfluidic 37 ° C עם בקר PID.
      הערה: הייצור של דוד איטו וההתקנה של מערכת חימום תא התרבות מתוארות בדוחות קודמים 18,19.
    2. הר ההרכבה שבב MDF בטמפרטורה מבוקרת על הבמה הממונעת מבוקר מחשב XYZ על מיקרוסקופ הפוכה. השימוש בבמה הממונעת מתואר בשלב 5.1. לשאוב את המדיום המלא לתאי התרבות דרך פתחי הכניסה עם משאבת מזרק ארבעה ערוצים.
  4. לשאוב בינוני המלאה לשבב MDF זרימה בשיעור של 20 μl / שעה. פסולת מהתרבות החוצהמאפשר נאסף בצינורות microcentrifuge (כפי שמוצגים "בזבוז" באיור 3 א).
  5. דגירה תאים לעוד שעה 16-18 על 37 מעלות צלזיוס בשבב MDF.
  6. כדי להחליף את המדיום, לשאוב את המדיום המכיל 50, 25, 5, ו -0 מעכב קינאז מיקרומטר, בהתאמה, לכל חדר תרבות בקצב זרימה של μl 20 / דקה במשך 10 דקות.
    הערה: הכן פתרון מניות מ"מ 10 לY27632 מעכב החלבון kinase הקשורים-Rho על ידי הוספת 3 מיליליטר של מים סטריליים למעכבי קינאז 10.6 מ"ג. לדלל את פתרון מניות 10 מ"מ עד 50, 25, ו -5 מיקרומטר, בהתאמה, באמצעות 10% בינוניים FBS DMEM.
  7. דגירה התאים במעכבי קינאז לעוד 60 דקות על 37 מעלות צלזיוס. להגדיר את קצב הזרימה הבינוני עד 20 μl / שעה. השתמש באותה טמפרטורת התרבות וקצב זרימה שתואר לעיל בצעדים מאוחר יותר.
  8. השתמש בחוטי חשמל לחיבור אספקת חשמל DC לשבב MDF באמצעות אלקטרודות Ag / AgCl על השבב.
  9. סדרתי להתחבר אני מד זרםn המעגל החשמלי. השתמש במד הזרם כדי לפקח על הזרם החשמלי בשבב MDF.
  10. הפעל את אספקת חשמל DC ולהגדיר את מד הזרם הנוכחי ל86.94 מיקרו-אמפר על ידי התאמת מתח אספקת חשמל לבין 15 ל 19 V.
    הערה: בהתחשב חוק אוהם, E = I / (EFF σA), שבו אני הוא הזרם החשמלי זורם דרך החומר בתפזורת, כלומר, מדיום התרבות בתא electrotactic, σ (= 1.38 Ω -1 מ '- 1) הוא מוליכות של מדיום התרבות, EFF (= 0.21 מ"מ 2 לרוחב 3 מ"מ × 0.07 מ"מ גובה) היא האזור היעיל חתך של תא electrotactic, והזרם החשמלי (I) נדרש ליצור mV / מ"מ 300 EF בשבב MDF הוא 86.94 מיקרו-אמפר.

5. רכישה וניתוח של תמונות ניידים

  1. שולט בשלב הממונע באמצעות תכנית MATLAB GUI. עם מערכת microfluidic MDF רכובה על microscoPE, להעביר את השבב לאזורי תצפית שימוש בשלב הממונע.
  2. דימויי שיא סלולריים באמצעות מצלמת רפלקס דיגיטלי (SLR) רכובים על המיקרוסקופ.
  3. קח תמונות מיקרוסקופיות באמצעות עדשה אובייקטיבית 4X במרווחים של 15 דקות לשעה 2.
  4. ניתוח נדידת תאים.
    1. הפעל V. NIH ImageJ 1.47
    2. לנתח את המרחק מהראשוני לעמדות הסופיות של centroid של התא.
    3. עבור אל "קובץ" → → "יבוא" "תמונה ברצף," ולייבא תשע תמונות לניתוח נדידת תאים. את התמונה הראשונה היא התוצאה של אפס זמן, והתמונה האחרונה היא התוצאה של 120 דקות.
    4. עבור ל" לנתח "→" קבע מדידות "וסמן את התיבה שליד" מרכז הצורה "
    5. לחץ על הסמל "בחירות Freehand".
    6. מתאר את הקצה של התאים שנבחרו בדימוי הראשון.
    7. עבור ל" ערוך "→ "בחירה" → "הוסף למנהל"
    8. עבור לתמונה התשיעית ומציג את הקצה של אותם תאים שנבחרו בתמונה הראשונה. ניתן לייחס עמדות התא באמצעות השנייה לתמונות שמינית.
    9. עבור ל" ערוך "→" מבחר "→" הוסף למנהל "
    10. 5.4.5 חזור על שלבים ל5.4.9 לאסוף נתונים 90-100 בתאים.
    11. עבור ל" לנתח "" מדוד "→ להשיג התוצאה של העמדות הראשוניות וסופיות של התאים שנבחרו.
      הערה: מהירות ההגירה מוגדרת כאורך תנועת תא הממוצע לשעה. ההכוונה מוגדרת כקוסינוס, שבו הוא הזווית בין הווקטור של dcEF (מהאנודה לקתודה), ואת הווקטור מנקודת ההתחלה של תא לעמדתה הסופית. ההתכוונות היא -1 לתאים הנודדים לעבר האנודה ו+1 לתאים הנודדים לכיוון הקתודה. לקבוצה של באופן אקראי מילצורם בתאים, ההכוונה היא 0. -2

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ייצור והרכבה של מכשיר MDF

תרשים סכמטי של שבב MDF מבוסס אקריליק מוצג באיור 1 א. ארבעה גיליונות אקריליק, כוס אחת כיסוי, 13 מתאמי אקריליק, ונייר דבק דו-צדדי שמשו בהרכבה של שבב MDF השלים (איור 2 ד). יש רק ארבעה ערוצים עצמאי תרבות במכשיר MDF. עם זאת, רשת גשר מלח על השבב יוצרת שמונה תנאי ניסוי שונים במגז...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מצאנו את התהליך של הקפדה מתאמי אקריליק על שכבת 1 של שבב MDF להיות מסובך. היישום של רק 1 עד 2 μl של דבק סופר מספיק כדי לדבוק בנחישות את המתאם על שבב MDF. כמויות גדולות יותר של דבק הביאו פילמור שלם של הדבק ואי לדבוק סופר. ברגע שמתאמי אקריליק דבקו בחוזקה על שבב MDF, דליפת נוזל במערכת microfluidic התרחשה לעתים רחוקות. כמו כן, הדגירה O / N בתוך חדר הוואקום עזרה להוציא את מיזוג לכוד בין הקלטת דו צדדית / מכסה הזכוכית או ממשק גיליון הקלטת / אקריליק דו-צדדי. כתוצאה מכך, תהליך זה משפר את הי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכת כספית על ידי משרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן (חוזה מס. MOST 103-2113-M-001 -003 -MY2) ותוכנית המחקר על ננו-מדע וננוטכנולוגיה, אקדמיה סיניקה, טייוואן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>מגיב
DMEM בינוניGibco, Invitrogen, ארה"ב12800-017
סרום בקר עובריGibco,Invitrogen, ארה"ב16000-044
TrypsinGibco,Invitrogen, ארה"ב25200-072
PBSBasic LifeBL2651
Y-27632 (הידרוכלוריד)קיימן כימיקלים ושות' 10005583
agaroseLONZO, ארה"בSeaKem LE AGAROSE
מזרקTerumo3 מ"ל עם Luer taper
3 way stopcockNiproעם Luer taper
PMMA (אקריליק)HiShiRon Industries Co., Ltd, טייוואןעובי 1 מ"מ,
מתאם אקריליKuanMin Technology Co., Ltd, טאיצ'ונג, טייוואן1/4-28 יציאה, 10x10x6 מ"מאגוז מותאם אישית
Thermo Fisher Scientific Inc.UPCHURCH: P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x
זכוכית כיסוי מיקרוסקופDeckglä ser, גרמניה24x60 מ"מ
קלטת דו צדדית3MPET 8018
סופר דבק3Mסקוטש נוזל פלוס סופר דבק
TFD4 חומר ניקויFranklab, צרפתTFD4
מנקה סטרי קוליLEO ULTRASONIC CO., LTD., טייוואן
Thermo bonderKuanMin Technology Co., Ltd, טאיצ'ונג, טייוואן
קבוצת LTT, בקר טייוואןISL-II
פרופורציונלי-אינטגרלי-נגזרת (PID)JETEC Electronics Co., JapenTTM-J40-R-AB,
צמד תרמי מסוג KTECPELTPK-02A
משאבת מזרק 4 ערוציםKdScientific, ארה"בספק כוח 250P
DCGWInstek, טייוואן
שלב מנוע XYZTanLian, E-O Co. Ltd., טייוואןמותאם אישית
אולימפוס, יפןCKX41
מצלמת SLR דיגיטליתCanon, יפן60D
2 מ"מ כותב לייזר CO2 מותאם אישית מיקרוסקופ הפוך

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
  2. Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W. Directional movement of rat prostate cancer cells in direct-current electric field: involvement of voltagegated Na+ channel activity. J Cell Sci. 114, 2697-2705 (2001).
  3. Pu, J., et al. EGF receptor signaling is essential for electric-field-directed migration of breast cancer cells. J Cell Sci. 120, 3395-3403 (2007).
  4. Huang, C. W., Cheng, J. Y., Yen, M. H., Young, T. H. Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip. Biosens Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).
  5. Huang, C. W., et al. Gene expression of human lung cancer cell line CL1-5 in response to a direct current electric field. PLoS One. 6, e25928(2011).
  6. Sun, Y. S., Peng, S. W., Lin, K. H., Cheng, J. Y. Electrotaxis of lung cancer cells in ordered three-dimensional scaffolds. Biomicrofluidics. 6, 14102-1410214 (2012).
  7. Tsai, H. F., et al. Evaluation of EGFR and RTK signaling in the electrotaxis of lung adenocarcinoma cells under direct-current electric field stimulation. PLoS One. 8, e73418(2013).
  8. Hou, H. S., Tsai, H. F., Chiu, H. T., Cheng, J. Y. Simultaneous chemical and electrical stimulation on lung cancer cells using a multichannel-dual-electric-field chip. Biomicrofluidics. 8, (2014).
  9. Faupel, M., et al. Electropotential evaluation as a new technique for diagnosing breast lesions. Eur J Radiol. 24, 33-38 (1997).
  10. Szatkowski, M., Mycielska, M., Knowles, R., Kho, A. L., Djamgoz, M. B. Electrophysiological recordings from the rat prostate gland in vitro: identified single-cell and transepithelial (lumen) potentials. BJU Int. 86, 1068-1075 (2000).
  11. McCaig, C. D., Song, B., Rajnicek, A. M. Electrical dimensions in cell science. J Cell Sci. 122, 4267-4276 (2009).
  12. Das, T., Maiti, T. K., Chakraborty, S. Traction force microscopy on-chip: shear deformation of fibroblast cells. Lab Chip. 8, 1308-1318 (2008).
  13. Lin, F., Butcher, E. C. T cell chemotaxis in a simple microfluidic device. Lab Chip. 6, 1462-1469 (2006).
  14. Li, J., Zhu, L., Zhang, M., Lin, F. Microfluidic device for studying cell migration in single or co-existing chemical gradients and electric fields. Biomicrofluidics. 6, 24121-2412113 (2012).
  15. Tsai, H. F., Peng, S. W., Wu, C. Y., Chang, H. F., Cheng, J. Y. Electrotaxis of oral squamous cell carcinoma cells in a multiple-electric-field chip with uniform flow field. Biomicrofluidics. 6, 34116(2012).
  16. Cheng, J. Y., Wei, C. W., Hsu, K. H., Young, T. H. Direct-write laser micromachining and universal surface modification of PMMA for device development. Sensors and Actuators B: Chemical. 99, 186-196 (2004).
  17. Chu, Y. W., et al. Selection of invasive and metastatic subpopulations from a human lung adenocarcinoma cell line. Am J Respir Cell Mol Biol. 17, 353-360 (1997).
  18. Cheng, J. Y., Yen, M. H., Kuo, C. T., Young, T. H. A transparent cell-culture microchamber with a variably controlled concentration gradient generator and flow field rectifier. Biomicrofluidics. 2, 24105(2008).
  19. Cheng, J. -Y., Yen, M. -H., Hsu, W. -C., Jhang, J. -H., Young, T. -H. ITO patterning by a low power Q-switched green laser and its use in the fabrication of a transparent flow meter. Journal of Micromechanics and Microengineering. 17, 2316(2007).
  20. Pu, J., Zhao, M. Golgi polarization in a strong electric field. J Cell Sci. 118, 1117-1128 (2005).
  21. Zhao, M., Bai, H., Wang, E., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Electrical stimulation directly induces pre-angiogenic responses in vascular endothelial cells by signaling through VEGF receptors. J Cell Sci. 117, 397-405 (2004).
  22. Yao, L., Shanley, L., McCaig, C., Zhao, M. Small applied electric fields guide migration of hippocampal neurons. J Cell Physiol. 216, 527-535 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים