שיטה זו מעריכה פלישת תאי סרטן מספרואידים למטריצה תלת מימדית מסביב. ספרואידים נוצרים בשיטת תרבית טיפה תלויה ולאחר מכן מוטמעים במטריצה המורכבת מחומרי ממברנת הבסיס וקולגן מסוג I. פלישת הספרואידים מנוטרת לאחר מכן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
האופי הפולשני של קווי תאים סרטניים נחשב כמתאם עם הפוטנציאל הגרורתי שלהם. עם זאת, רוב הבדיקות המסורתיות אינן בוחנות את התכונות הפולשניות הללו בסביבה תלת מימדית והנתונים המתקבלים סובלים מיישום ביולוגי מופחת. כאן מוצגת גישה להמחשת היכולת הפולשנית של קווי תאים בסביבה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית. בדיקת פלישת הספרואידים של תאי הסרטן משתמשת תחילה בכוח הכבידה כדי ליצור ספרואידים בתוך טיפות מדיה התלויות מהמכסה של צלחת תרבית תאים. לאחר מכן, ספרואידים אלה משובצים במטריצה תלת מימדית המורכבת מתערובת של חומרי ממברנת מרתף וקולגן מסוג I. לאחר מכן מנוטרת הוצאת תאי סרטן מהספרואידים למטריצה שמסביב לאורך זמן. ניתן לשנות את השיטה המתוארת כאן כדי לבחון פלישה לאחר קוקולטורציה של סוגי תאים שונים, הכללת תרופות/מעכבים, או שינויים במרכיבי מטריצה חוץ-תאית (ECM).
מבוא
הוא קבע כי תנועתיות של תאים הסרטניים היא חזויה של פוטנציאל גרורתי, בהתחשב בעובדה שהתנהגות כזו מאפשרת פלישה דרך הקרום במרתף והכניסה למערכת דם 1. רוב המחקר על תנועתיות התמקד בדרך בה התאים מתנהגים בסביבה דו-ממדית (2D), אם כי זה הופך להיות מוכר באופן נרחב שהתנועה של תאים במטריצה תלת-ממדי (3D) הוא נציג נוסף של איך אותם תאים יהיו ממש להתנהג בvivo 2. מערכות תרבות 3D משמשות יותר ויותר ללמוד התנהגויות סלולריות הנעות בין מורפולוגיה תא, לקינטיקה צמיחה ורגישות לסמים 3. הרצון לפקח על פלישת תאים סרטנית בהקשר של סביבת 3D הוביל לסינתזה של טכניקות הוקמו בעבר מעורב הדור של אגרגטים 3D תא (spheroids) באמ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. דור של Spheroids
- הכן השעיה תא בודד לתליית תרבויות ירידה בניתוק תרביות תאי הסרטן חסיד של ~ מפגש 70% באמצעות PBS לשטוף אחרי חשיפה ל0.05% פתרון טריפסין- EDTA.
- לנטרל את פתרון טריפסין עם תקשורת ותרבות תא ולספור את התאים באמצעות aliquot של ההשעיה התא. הערה: תקשורת תרבות תא הספציפית יהיה תלויה בשורת התאים נבדקות. עקוב המלצות תקשורת ATCC, שבו התקשורת ותרבות תא היא בדרך כלל DMEM + 10% FBS. ניתן למצוא מידע נוסף בלוח חומרים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
באמצעות assay פלישת אליפטית (איור 1), בהרכב של שורות תאי סרטן נבדק ליכולת שלהם ליצור spheroids, כמו גם לסכום של יציאה תא הציג לאחר השתלה במטריצת 3D המורכב מחומרי מרתף קרום והסוג אני קולגן (טבלה 1). תוצאות אלו מראות כי לא שורת תאי סרטן בכל תיצור spheroids הבנוי היטב, שבו שורות תאים בעלי מורפולוגיה אפיתל במבחנה נטו לייצר אגרגטים רגילים וחלק. היכולת של שורות תאים שונות לפלוש בassay הייתה גם משתנה. שורות תאים שהוקמו כפולשנית כמו 4T1, E0771, ו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מחקר זה העריך את הביצועים של פנל של שורות תאי הסרטן בassay אליפטית פלישה (טבלה 1). בדרך כלל, אנו מוצאים כי היווצרות אליפטית מוגברת בשורות התאים יותר למראה אפיתל, שבו נוכחותו של צמתים תאי תאים מקדמת את הקמתה של ארכיטקטורה כמו-אליפטית. קווים ידועים תא שעברו מעבר אפיתל- mesenchymal, כמו מד"א MB-231 תאים לא יוצרים spheroids בתרבות הירידה התלויה ככל הנראה בשל הביטוי האלקטרוני, N-, ו- P-cadherin המופחת שלהם 16.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
נתמך על ידי CA051008 P30 מענקי NIH וT32 CA009686 (ATR).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| גורם גדילה Matrigel מופחת | קורנינג | CB-40234 | |
| קולגן סוג I, זנב חולדה, 100 מ"ג | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 בינוני | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25300-054 | |
| סרום בקר עוברי, | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 מ"מ כלים מטופלים | TC קורנינג משולב | 430167 | |
| 24 בארות צלחות מטופלות TC | NEST ביוטכניקה | 702001 | |
| אולימפוס IX-71 קווי תאים של מיקרוסקופ | |||
| נשמרו ב-DMEM + 10% FBS, עם ציפייה לתאי BT-474 ו-LNCaP, שהיו מוכנים ב-RPMI + 10% FBS. |
מקורות
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
