אנו מציגים הליך כירורגי לצנתור תא המטען של הלימפה במעי בחזירים יילודים כדי לאסוף כמויות גדולות של רכיבי חילוף חומרים של שומנים מלימפה זורמת.
מאמר שיטה
אנו מציגים הליך כירורגי לצנתור תא המטען של הלימפה במעי בחזירים יילודים כדי לאסוף כמויות גדולות של רכיבי חילוף חומרים של שומנים מלימפה זורמת.
צנתור של גזע הלימפה במעי בחזירים שזה עתה נולדו היא טכניקה המאפשרת איסוף ארוך טווח של כמויות גדולות של לימפה משפיעה במעי (מרכזית). חשוב לציין, איסוף הלימפה המרכזית מהמעי מאפשר לחוקרים לחקור הן את המנגנונים והן את מרכיבי השומנים הקשורים למטבוליזם של שומנים, דלקת מעיים וגרורות סרטניות, כמו גם תאים המעורבים בתפקוד החיסוני ובמעקב חיסוני. גישה כירורגית בקו האמצע הגחוני מאפשרת חשיפה כירורגית מצוינת לבטן הגולגולת וגישה קלה יחסית לכלי תא המטען של הלימפה במעי הנמצא ליד הלבלב ולמקטע הגחון הימני של וריד הפורטל מתחת להיבט הקרביים של אונת הכבד הימנית. הכלי מנותח בקפידה ומשוחרר מהפאשיה שמסביב ולאחר מכן מורחב עם תפרים המאפשרים החדרה וקיבוע לאחר מכן של הקטטר לתוך הכלי. הקטטר מחוצה וכ-1 ליטר ל-24 שעות של לימפה נאסף במשך תקופה של 7 ימים. בעוד שטכניקה זו מאפשרת איסוף כמויות גדולות של לימפה מרכזית לאורך תקופה ממושכת, ההצלחה תלויה בדיסקציה כירורגית זהירה, טיפול ברקמות ותשומת לב רבה לטכניקה כירורגית נכונה. זה חשוב במיוחד בניתוחים בבעלי חיים צעירים מכיוון שכלי הלימפה יכולים להיקרע בקלות, מה שעלול להוביל לכישלון כירורגי וניסיוני. הסרטון מדגים טכניקה כירורגית מצוינת לאיסוף לימפה במעי.
מערכת הלימפה היא שטח אלתר של פיזיולוגיה. במודלים פרה של צנתור הלימפה להתרחש מיני בעלי חיים שונה 1-8 ומשמשים והפרמצבטיקה ומכוני מחקר לחקור מנגנוני המעורבים שומנים 8-12 סמים מטבוליזם 13-15, גרורות סרטן 16 עם טיפול ניסיוני 17, ו -18 תפקוד מערכת החיסון -26. מחקר זה בוחן את שימוש צנתור מטען לימפה במעי במודל חזיר בית למדוד רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם. מטבוליזם Lipoprotein מעורב בייצור הפרשת chylomicrons, כמו גם משינויים בשיעורי שומנים הקשורים חלבון כולל. אלה הם שיקולים חשובים כמו שיש הבדלים גדולים במטבוליזם שומנים בין במודלים של מכרסמים נפוצים ובני אדם וככזה, במודלי חזירים לאסוף לימפה במעי יכולים לספק מידע דומה יותר ללימוד שומנים ליtabolism באנשים 27-31.
מספר טכניקות כירורגיות משמשות כדי לאסוף את לימפה במעי במינים של בעלי חיים גדולים: גישת כתף גולגולתי (כלומר, צנתור צינור חזה) 5, גישת אגף העליון לרוחב 32-34, וכן קו אמצע גחון או גישת paramedian 22,35. וידאו זה מתאר בפירוט את ההליך הניתוח חזירים בגישה כירורגית קו אמצע גחון עבור הצנתור של המטען לימפה במעי. היתרי טכניקה כירורגית זהירות שיטה זו של צנתור הלימפה לאסוף כמויות גדולות של הלימפה מרכיביו לאורך תקופות ממושכות של זמן.
טכניקה זו פותחת מספר עצום של יישומים לתחומים רבים לבחון פונקציות פיסיולוגיות שונות. יישומים יכולים לכלול, אך אינם מוגבלים, ליפופרוטאין גוף וחילוף חומרי שומנים, immunosurveillance, בראשית גידול וגרור, תפקוד מעיים, ואת developmאף אוזן גרון והתקדמות של מחלה דלקתית של המעי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הנהלים על חיות ניסוי המתוארות הוא סרטון ואת כתב היד אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש ועקב אחר ההנחיות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי החיים.
1. הרדמה כירורגית והכנת כירורגים של החזירים הילודים
2. ניתוח בטן צנתור של טרונק הלימפה המעיים
שחזור 3. פוסט-כירורגית אוסף לימפה
4. כימות ApoB48 ליפופרוטאין, טריגליצריד, כולסטרול וחלבון הסכום שנגבה מן לימפה
5. כימות של ליפופרוטאין ApoB48, שנאספו לימפה 38
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
צנתור הלימפה של המטען הלימפה מעיים של חזיר בילוד מאפשר איסוף של כ 1 L / 24 שעות של הלימפה מרכזית על תקופה של 7 ימים. הלימפה שנאסף בניסויים זה הכיל רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם, כלומר חלבון הלימפה הכולל, ליפופרוטאין ApoB48, טריגליצרידים, חלבון כולל, וכולסטרול. טבלת 1 מדגיש כמויות נציג והמרכיבים השומניים אלה מדגימים הלימפה משולבת של שלושה חזירים. יש לציין, זרימת הלימפה המרכיבים השומנים נמצאים-בקנה אחד עם הערכים של הלימפה המרכזי שדווח על ידי חוקרים א...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
איסוף לימפה במעי הוא שיטה מצוינת לחקור מנגנוני המעורבים שומנים 8-12 ו מטבוליזם התרופה 13-15, סרטן גרורות 16,17, סחר תא ותפקוד מערכת חיסון 18-26, במודלים של בעלי חיים שונים הניסיונות. ואכן, את היכולת לקצור כמויות גדולות של מי היקפי (מביא) ומרכז (efferent וכלי גזע גדולים) הלימפה פני תקופה ממושכת לא הייתה חשובה במיוחד להבנת שינויים זמניים המתרחשים אוכלוסיות תאים הבאים אתגרים עם סוכני ויסות חיסוניים 18-22 , 25,26. באופן דומה, אוסף...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
העבודה נתמכה בחלקה על ידי מימון של סוכנות בעלי החיים והבשר של אלברטה ומענק דיסקברי של מועצת מדעי הטבע והמחקר לס.ד. פרוקטור.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| להב לרינגוסקופ מילר | וולש אלין | 68044 | אורך 182 מ"מ |
| יועץ כירורגיה: מוניטור סימנים חיוניים | Surgivet | V9203 | |
| בדיקת טמפרטורת פי הטבעת | Surgivet | V3417 | |
| מחולל אלקטרוכירורגיה חד קוטבית | מעבדת עמק | ||
| מספריים מצנבאום | יפה | 14518-18 | |
| מפסק טופייר | סטיבנס | 162-11-676 | |
| מלקחיים יתושים | סטיבנס | 162-7-10 | |
| קלי מלקחיים מעוקלים (14 ס"מ) | סטיבנס | 162-7-38 | |
| מלקחיים לרקמות אליס | סטיבנס | 162-7-38 | |
| מלקחיים (10.2 ס"מ) | סטיבנס | 162-18-780 | |
| חבישת מלקחיים-אדיסון (12.1 ס"מ) | Stevens | 162-17-2510 | |
| נהגי מחט | Stevens | 162-V98-42 | |
| מספריים איריס | מדע עדין | 14058-11 | |
| משאבת מים במחזור | Jorvet | J-783X | |
| שמיכת Maxitherm-ויניל | Jorvet | J-784C | |
| אפליקטורים Q tip | פישר סיינטיפיק | 22-037-960 | |
| צנתור צינורות (4.06 OD X 2.31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | צינורות השתלת מיקרו-רנתן |
| 2-0 תפר משי | Ethicon | LA556 | |
| 2-0 תפר פוליגלקטין | Ethicon | J443H | 2-0 ויקריל |
| מעיל בעלי חיים גדול | Lomir Biomedical Inc. | בקבוקי כביסה מפוליפרופילן SSJ2YC | |
| פישר סיינטיפיק | 03-409-22C | 500 מ"ל | |
| פניצילין-סטרפטומיצין | סיגמא אולדריץ' | D4333 | |
| EDTA | סיגמא אולדריץ' | 60-00-4 | |
| אמפוטריצין B | סיגמא אולדריץ' | A2411 | |
| אזפרון | אלנקו סטרניל | ||
| Dexmedetomidine hydrochloride | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
| Isoflurane | Abbott Animal בריאות | 05260-5 | IsoFlo |
| קטמין הידרוכלוריד | Zoetis | 2626 | Ketaset |
| Bupenorphine hydrochloride | Champion Alstoe Animal Health | DIN:02347510 | |
| 6 מ"מ צינור אנדוטרכיאלי | Jorvet | J-165d | |
| 10% תרסיס לידוקאין | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
| 4% פילינג | כירורגי כלורהקסידיןPartnar Animal Health | PCH-011 | מדולל: תמיסה 2.0% |
| 3M וילון סטרי כירורגי | 3M Health Care | 1040 | |
| SDS עמוד ג'ל | Invitrogen | EA0375BOX 3-8% טריס אצטט | |
| ממברנת פלואוריד פוליווינילידן | Millipore | IPVH00010 | 0.45 μ m גודל נקבוביות |
| נוגדן ApoB | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 דילול |
| חמור נגד עזים IgG-HRP | סנטה קרוז ביוטכנולוגיה | Sc-2304 | |
| ECL פריים ווסטרן ספוג ריאגנט | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
| ערכת טריגליצרידים | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
| ערכת כולסטרול כוללת | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
| סה"כ חלבון | פירס | 23225 | בדיקת חומצה ביסינצ'ונינית |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה