מאמר שיטה

הכנת Thermoresponsive Nanostructured משטחי הנדסת רקמות

7.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53465

⸱

1 במרץ 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physics, Tokyo University of Science, 2Institute of Advanced Biomedical Engineering and Science, Tokyo Women's Medical University

במאמר זה

סיכום

משטחי אי ים ננומטריים המורכבים מקופולימרים בלוקים מגיבים תרמית יוצרו בשיטת Langmuir-Schaefer לבקרת הידבקות וניתוק ספונטניים של תאים. הודגמו הן הכנת המשטח והן הידבקות וניתוק התאים על פני השטח.

תקציר

משטחים משותקים פולי (N-isopropylacrylamide) (PIPAAm) מגיבים תרמית לבקרת הידבקות וניתוק תאים יוצרו בשיטת Langmuir-Schaefer. קופולימרים בלוק אמפיפיליים המורכבים מפוליסטירן ו-PIPAAm (St-IPAAms) סונתזו על ידי פילמור רדיקלי הפיך של העברת שרשרת פיצול (RAFT). תמיסת כלורופורם של מולקולות St-IPAAm הוטלה בעדינות לתוך מנגנון שוקת לנגמיור, ושני המחסומים של המנגנון הוזזו אופקית כדי לדחוס את הסרט כדי לווסת את צפיפותו. לאחר מכן, סרט St-IPAAm Langmuir הועבר אופקית על מצע זכוכית שעבר שינוי הידרופובי על ידי מכשיר קבוע על פני השטח. תמונות מיקרוסקופ כוח אטומי חשפו בבירור מבנים של איי ים בקנה מידה ננומטרי על פני השטח. החוזק, הקצב והאיכות של הידבקות וניתוק התאים על פני המשטח המוכן הוסדרו על ידי שינויים בטמפרטורה על פני טווח טמפרטורת התמיסה הקריטית התחתון של מולקולות PIPAAm. בנוסף, מבנה תא דו-ממדי (גיליון תאים) שוחזר בהצלחה על המשטחים המותאמים. משטחי PIPAAm ייחודיים אלה עשויים להיות שימושיים לשליטה בחוזק ההידבקות והניתוק של התאים.

מבוא

משטחי Nanostructured משכו תשומת לב רבה לאחרונה בשל היישומים הפוטנציאליים השונים שלהם, כוללים דפוסים, תרבית תאים, ניקוי, ומיתוג שטח. לדוגמא, משטחים הידרופובי בהשראת ננו-המבנה של עלה הלוטוס ומשטחי תגובה אחרים מסוגלים להגיב לגירויים חיצוניים 1-4.

הסרט לאנגמיור הוא אחד פולימר ציפויים למד נרחב ביותר. סרט לאנגמיור נוצר על ידי הטלת מולקולות amphiphilic על ממשק אוויר-מים 5-8. הסרט אז יכול להיות מועבר על גבי משטח מוצק על ידי ספיחה פיזית או כימי, ואת קונפורמציה המולקולרית על משטח מוצק ניתן לשלוט בשיטות העברה אנכיות ואופקיות 9-12. הצפיפות של הסרט לאנגמיור ניתן לווסת בדיוק על ידי דחיסת ממשק מים-אוויר. לאחרונה, שיטה זו גם הוכחה כיעילה עבור בודת structur ים-האי nanoscaledes ידי ניצול קופולימרים לחסום amphiphilic. ננו הם הניחו מורכב מליבה של מגזרים הידרופובי פגז של מגזרים הידרופילי 13-17. בנוסף, מספר ננו על משטח מוסדר על ידי שליטה על השטח לכל מולקולה (א מ ') של קופולימר הבלוק על הממשק.

התמקדנו מקורית, גישת הנדסת רקמות פיגום ללא ייחודית, הנדסת תא גיליון, באמצעות משטח תרבות טמפרטורה-תגובה. הטכנולוגיה שפותחה יושמה לטיפולים ומבריאים איברים שונים 18. משטח תרבות טמפרטורה המגיבה היה מפוברק על ידי השתלת פולי (-isopropylacrylamide N) (PIPAAm), מולקולת תגובה בטמפרטורה, על גבי משטח 19-27. PIPAAm ולהציג קופולימרים שלה טמפרטורת פתרון קריטית נמוך (LCST) בתקשורת מימית בטמפרטורות ליד 32 מעלות צלזיוס. משטח התרבות גם הציג משתנ טמפרטורה המגיבים על בין הידרופוביות hydrophilicity. בגיל 37 ° C, פני השטח המורכבים PIPAAm הפכו הידרופובי, ותאים המצורפת בקלות התרבו על פני השטח כמו גם על קלקר בתרבית רקמה קונבנציונלי. כאשר הטמפרטורה ירדה ל -20 מעלות צלזיוס, פני השטח הפכו הידרופילי, ותאי מנותקים ספונטניים מפני השטח. לכן, תאים ומחוברות תרבותיים על פני השטח יכולים להיות בצור כמו גיליון שלם על ידי שינוי הטמפרטורה. תכונות הידבקות ניתוק התא אלה הוצגו גם על ידי משטח מפוברק על ידי ציפוי הסרט לאנגמיור להפגנה מעבדה 26, 27. סרט לאנגמיור של קופולימרים לחסום מורכב פוליסטירן (P (St)) ו PIPAAm (St-IPAAm) היה מפוברק. הסרט לאנגמיור עם מ 'מסוים ניתן להעביר אופקית כדי מצע זכוכית שונה hydrophobically. בנוסף, הידבקות תא על וניתוק מפני השטח המוכן בתגובת הטמפרטורה הוערכו.

_content "> כאן אנו מתארים פרוטוקולים עבור הייצור של סרט לאנגמיור nanostructured מורכב קופולימרים לחסום amphiphilic התרמו-תגובה על מצע זכוכית. השיטה שלנו עשויה לספק טכניקת ייצור יעילה nanofilms האורגני בתחומים שונים של מדע משטח עשוי להקל יותר שליטה אפקטיבית של הידבקות תא על וניתוק ספונטני ממשטח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. סינתזה של -poly לחסום Polystyrene- (-isopropylacrylamide N) על ידי העברת שרשרת שני שלבים הפיך תוספת הפיצול (רפסודה) הרדיקלי פילמור

  1. ממיסים סטירן (153.6 mmol), 4-cyano-4- (ethylsulfanylthiocarbonyl) חומצה sulfanylpentanoic (ECT; 0.2 מילימול), ו 4,4'-Azobis (חומצה 4-cyanovaleric) (ACVA; 0.04 מילימול) ב 40 מ"ל של 1, 4-dioxane. להקפיא את הפתרון בחנקן נוזלי תחת ואקום במשך 15-20 דקות להסיר את המינים תגובתי להפשיר בהדרגה ב RT. ודא כי הפתרון הוא מופשר לחלוטין וחזרו זה מחזור degassing להקפיא משאבת הפשרה שלוש פעמים.
  2. השג את פוליסטירן (PST) (Mw: 13,500) כסוכן רפסודה מאקרו ידי פילמור ב 70 מעלות צלזיוס למשך 15 שעות באמבט שמן.
  3. סוכן רפסודה מאקרו המשקע PST עם 800 מ"ל של אתר ויבש vacuo.
  4. ממיסים מונומר IPAAm (4.32 מילימול), סוכן רפסודה מאקרו PST (0.022 mmol), ו ACVA (0.004 mmol) ב 4 מ"ל של 1,4-dioxane.
  5. לְהַסִירחמצן הפתרון על ידי מחזורי degassing להקפיא משאבת הפשרה כאמור בשלב 1.1.
  6. בצע פילמור ב 70 מעלות צלזיוס למשך 15 שעות באמבט שמן לאחר סילוק גזים. השג מולקולת St-IPAAm מסונתז (Mw: 32,800) באותו אופן כסוכן רפסודת מאקרו PST.

2. הכנת מצעי זכוכית השתנו silanized הידרופובי

  1. מצעי זכוכית Wash (24 מ"מ x 50 מ"מ) עם עודף של אצטון ואתנול sonicate במשך 5 דקות כדי להסיר מזהמים על פני השטח.
  2. ייבש את המצעים בתנור על 65 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר מכן השתמש פלזמה חמצן (400 W, 3 דקות) כדי להפעיל את פני השטח של מצעים ב RT.
  3. לטבול את מצעי טולואן המכיל 1% hexyltrimethoxysilane הלילה ב RT כדי silanize המצע.
  4. שטוף את מצעי silanized טולואן וטבלת אצטון במשך 30 דקות כדי להסיר סוכני unreacted.
  5. מצעים לחשל עבור שעה 2 ב 110 ° C כדי לשתק את הים ביסודיותurface.
  6. חותך את מצעי silanized ידי חתכי זכוכית 25 מ"מ x 24 מ"מ כדי להתאים את כלי תרבית תאים (גודל מנה: מ"מ φ35).

3. הכנה לאנגמיור סרטי Surface-הועבר סרטים

  1. מניחים את המכשיר הסרט לאנגמיור בארון כדי למנוע הצטברות של אבק.
  2. שטוף את השוקת לאנגמיור (גודל: 580 מ"מ x 145 מ"מ) ומחסומים עם מים ואתנול מזוקקים להסרת לכלוך.
  3. ייבש את השוקת ומחסומים ידי ניגוב במגבת lintless. ואז למלא את השוקת עם כ 110 מ"ל מים מזוקקים, ולהגדיר את המחסומים משני צידי השוקת. שים לב מים מזוקקים יש להוסיף מבלי לשפוך בשלבים הבאים 3.5 כדי 3.13.
  4. מחממי צלחת פלטינה Wilhelmy (היקף: 39.24 מ"מ) לניטור מתח הפנים עם מבער גז עד שההצלחה פונה אדומה ולאחר מכן לשטוף עם מים מזוקקים כדי להסיר מזהמים. להשעות את הצלחת Wilhelmy על חוט המחוברמכשיר משטח-מדידה בלחץ.
  5. אפס מכשיר משטח-מדידה בלחץ על פי הפרוטוקול של היצרן. דחיסת ממשק מים-אוויר על השוקת על ידי מחסומים על שני הצדדים של שוקת עד בממשק ומגיע לכ 50 ס"מ 2 ללא כל טיפות של פולימר.
  6. מזהמים קטנים לשאוב עד שלחץ השטח הוא כמעט 0 MN / m.
  7. מיקום מחדש את המחסומים משני הצדדים, ולהוסיף מים מזוקקים כדי לפצות על הירידה של מים מזוקקים משלב 3.6.
  8. ממיסים 5 מ"ג של המולקולה St-IPAAm מסונתז 5 מ"ל של פתרון פיתוח של כלורופורם.
    הערה: dichloromethane או טולואן יכול לשמש גם הממס.
  9. בעדינות טיפה 27 μl של סנט-IPAAm מומס כלורופורם על שוקת באמצעות microsyringe או micropipette.
  10. אחרי המתנה של 5 דקות, כדי לאפשר אידוי מוחלט של כלורופורם, להזיז את שני המחסומים אופקיים כדי לדחוס את molecu St-IPAAmle על הממשק. לשמור דחיסה קצב המחסומים ברמה של 0.5 מ"מ / sec ועד לאיזור היעד של 50 ס"מ 2 הוא הגיע.
    הערה: שיעור דחיסה מהיר גורם למומים בסרט לאנגמיור.
  11. מדדו את הלחץ לפני השטח (π) -A איזותרמות מ עם צלחת פלטינה Wilhelmy המצורפת למכשיר משטח-מדידה בלחץ במהלך הדחיסה על פי פרוטוקול של היצרן.
  12. לאחר שהגיע לגודל אזור היעד, לשמור על פני השטח במשך 5 דקות, כדי לאפשר מולקולות St-IPAAm להירגע; מולקולות לא להגיע לשיווי משקל מיד לאחר דחיסה.
  13. מעביר את הסרט לאנגמיור על מצע זכוכית שונה hydrophobically באמצעות מנגנון העברה למשך 5 דקות כדי לספוג את הסרט וחסון. תקן את מצע זכוכית הידרופובי במקביל במכשיר. חבר את ההתקן בשלב יישור ולעבור בניצב.
  14. הרם את המצע אופקי עם מנגנון ההעברה ויבש עבור 1 יום בתוך desiccator.

4. Culturing תאים וביצוע אופטימיזציה הידבקות תא וניתוק על פני השטח המועבר לאנגמיור סרטים

  1. כדי להכין השעיות תא, תאי האנדותל בעורק התרדמה שור תרבות (BAECs) כדי מפגש שליש ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 ו -95% אוויר על קלקר בתרבית רקמה (TCPS) עם בינוני הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) המכיל 10% עוברית בסרום שור (FBS) ו -100 U / פניצילין מ"ל.
  2. לאחר המפגש הוא הגיע, לטפל BAECs עם 3 מ"ל של 0.25% טריפסין- EDTA במשך 3 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 ו -95% אוויר.
  3. לבטל את טריפסין-EDTA על ידי הוספת 10 מ"ל של DMEM המכיל 10% FBS, לאסוף את ההשעיה לתא צינור חרוטי 50 מ"ל.
  4. צנטריפוגה ב 120 XG במשך 5 דקות, לשאוב supernatant. Re- להשעות את התאים עם 10 מ"ל של DMEM.
  5. מניחים את משטחי St-IPAAm באור אולטרה סגול על ספסל נקי ומטהרים למשך 5 דקות.
  6. זרעי לסה"נ התאוששהLLS על St-IPAAm משטחים בריכוז של 1.0 x 10 4 תאים / 2 סנטימטרים נספרו על ידי hemocytometer פנוי ולבחון את התאים על המשטחים ידי מיקרוסקופ המצויד באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 ו -95% אוויר.
    הערה: לעקר משטחי St-IPAAm ידי אור אולטרה סגול מצויד ספסל נקי.
  7. זמן לשגות תמונות שיא של BAECs החסיד כ 24.5 שעות ב 37 מעלות צלזיוס על ידי מיקרוסקופ שלב בניגוד עם הגדלה 10X. לאחר הידבקות BAEC, ניתוק שיא של BAECs מפני השטח St-IPAAm בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס למשך כ -3.5 שעות.

5. תא ייצור גיליון על משטחי קולנוע-הועבר לאנגמיור

  1. BAECs תרבות המשמש באותו אופן שתואר בסעיף 4.
  2. זרעים סך של 1.0 x 10 5 תאים / 2 ס"מ על משטחים St-IPAAm דגירה במשך 3 ימים ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2. ומחוברות BAECs מנותקת באופן ספונטני על 20 מעלות צלזיוס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

קופולימרים בלוק מורכב פוליסטירן ו poly (N -isopropylacrylamide) (St-IPAAms) עם משקל מולקולרי ספציפי היו מסונתז על ידי פילמור רדיקלי רפסודה. ECT הוכן כסוכן בשרשרת העברת כמתואר Moad et al. 28. שני סנט-IPAAm מולקולות באורכים שרשרת PIPAAm שונים היו מסונתז, ואת פולימרים לחסום השיג התאפיינו 1 תהודה מגנטית גרעינית H (NMR) כרומטוגרפיה ג'ל חלחול (GPC). המשקלים המולקולריים של סנט-IPAAms היו 32,800 ו 67,900, עם חלוק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

משטח טמפרטורה המגיבה היה מפוברק בשיטה לאנגמיור-שייפר, ואת מאפייני פני השטח עבור הידבקות תא / ניתוק גיליון תא התאוששות היו אופטימיזציה. בעת השימוש בשיטה זו עבור הייצור של משטחים, כמה צעדים חיוניים. את ההרכב המולקולרי של מולקולות St-IPAAm יש השפעה רבה על מבנה השטח ואת היציבות של פני השטח, ובמשתמע, על הידבקות תא וניתוק. בפרט, מולקולות St-IPAAm צריכות חלוקת משקל מולקולרית צרה. בשיטה שלנו, שתי מולקולות St-IPAAm עם אורכי שרשרת PIPAAm שונים היו מסונתזות על ידי פילמור רפסודה, המאפשרות שלי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

כל המחברים תרמו באופן שווה לכתיבת כתב היד ואישרו את הגרסה הסופית. המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

מחקר זה נתמך כספית על ידי פרויקט הקמת מרכזי חדשנות לפיתוח מערכות חדשנות "המרכז להנדסת רקמות גיליון תאים (CSTEC)" של משרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה (MEXT), יפן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
N-isopropylacrylamideKohjinללא מספר קטלוגי
Azobis (חומצה 4-ציאנובלרית)Wako Pure Chemicals016-19332
סטירןסיגמא-אולדריץ'S4972
1,3,5-טריוקסאןסיגמא-אולדריץ'T81108
1,4-דיאוקסאןWako Pure Chemicals045-24491
DMEMסיגמא D6429
PBSNakarai11482-15
StreptomycinGIBCO BRL15140-163
פניציליןGIBCO BRL15140-122
Trypsin-EDTASigmaT4174
FBSיפן BioserumJBS-11501
BAECsHealth Science Reservch Resources BankJCRB0099
משקפי כיסויתעשיית זכוכית מטסונאמיC024501
AFM NanoScope VVeeco
1H NMR INOVA 400Varian, פאלו אלטו
ATR/FT-IR NICOLET 6700תרמו מדעי
GPC HLC-8320GPCמדריך
TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000Tosoh
Langmuir-Blodgett KSV מכשיריםKN 2002KSV NIWA שוקת מידיום
ניקון ECLIPSE TE2000-Uניקון
למשתמש שוקות תצהיר

מקורות

  1. Bae, Y. H., Kwon, I. C., Pai, C. M., Kim, S. W. Controlled release of macromolecules from electrical and chemical stimuli-responsive hydrogels. Makromol. Chem., Macromol. Symp. 70-71 (1), 173-181 (1993).
  2. Fu, Q., et al. Reversible control of free energy and topography of nanostructured surfaces. J. Am. Chem. Soc. 126 (29), 8904-8905 (2004).
  3. Nykanen, A., et al. Phase behavior and temperature-responsive molecular filters based on self-assembly of polystyrene-block-poly(N-isopropylacrylamide)-block-polystyrene. Macromolecules. 40 (16), 5827-5834 (2007).
  4. Sun, T., et al. Reversible switching between superhydrophilicity and superhydrophobicity. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 43 (3), 357-360 (2004).
  5. Shuler, R. L., Zisman, W. A. A Study of the behavior of Polyoxyethylene at the air-water interface by wave damping and other methods. J. Phys. Chem. 74 (7), 1523-1534 (1970).
  6. Kawaguchi, M., Sauer, B. B., Yu, H. Polymeric monolayer dynamics at the air/water interface by surface light scattering. Macromolecules. 22 (4), 1735-1743 (1989).
  7. Saito, W., Kawaguchi, M., Kato, T., Imae, T. Spreading solvent and temperature effects on interfacial properties of Poly (N-isopropylacrylamide) films at the air-water interface. Langmuir. 7463 (11), 5947-5950 (1996).
  8. Jheng, K. T., Hsu, W. P. Molecular weight effect of PMMA on its miscibility with PS-b-PEO at the air/water interface. J. App. Polym. Sci. 125 (3), 1986-1992 (2012).
  9. Biesalski, M. A., Knaebel, A., Tu, R., Tirrell, M. Cell adhesion on a polymerized peptide-amphiphile monolayer. Biomaterials. 27 (8), 1259-1269 (2006).
  10. Da Silva, A. M. P. S. G., Lopes, S. I. C., Brogueira, P., Prazeres, T. J. V., Beija, M., Martinho, J. M. G. Thermo-responsiveness of poly(N,N-diethylacrylamide) polymers at the air-water interface: The effect of a hydrophobic block. Journal of colloid interface sci. 327 (1), 129-137 (2008).
  11. Wang, S. Q., Zhu, Y. X. Facile method to prepare smooth and homogeneous polymer brush surfaces of varied brush thickness and grafting density. Langmuir. 25 (23), 13448-13455 (2009).
  12. Estillore, N. C., Park, J. Y., Advincula, R. C. Langmuir−Schaefer (LS) macroinitiator film control on the grafting of a thermosensitive polymer brush via surface initiated-ATRP. Macromolecules. 43 (16), 6588-6598 (2010).
  13. Seo, Y. S., et al. Nanowire and mesh conformations of diblock copolymer blends at the air/water interface. Nano Lett. 4 (3), 483-486 (2004).
  14. Lu, Q., Bazuin, C. G. Solvent-assisted formation of nanostrand networks from supramolecular diblock copolymer/surfactant complexes at the air/water interface. Nano lett. 5 (7), 1309-1314 (2005).
  15. Nagano, S., Matsushita, Y., Ohnuma, Y., Shinma, S., Seki, T. Formation of a highly ordered dot array of surface micelles of a block copolymer via liquid crystal-hybridized self-assembly. Langmuir. 22 (12), 5233-5236 (2006).
  16. Perepichka, I. I., Borozenko, K., Badia, A., Bazuin, C. G. Pressure-induced order transition in nanodot-forming diblock. J. Am. Chem. Soc. 133 (493), 19702-19705 (2011).
  17. Wang, X. L., Ma, X. Y., Zang, D. Y. Aggregation behavior of polystyrene-b-poly(acrylicacid) at the air-water interface. Soft Matter. 9 (2), 443-453 (2013).
  18. Yamato, M., Okano, T. Cell sheet engineering. Mater. Today. 7 (5), 42-47 (2004).
  19. Rollason, G., Daviest, J. E., Sefton, M. V. Preliminary report on cell culture on a thermally reversible copolymer. Biomaterials. 14 (2), 153-155 (1993).
  20. Park, Y. S., Ito, Y., Imanishi, Y. Permeation control through porous membranes immobilized with thermosensitive polymer. Langmuir. 14 (4), 910-914 (1998).
  21. Kwon, O. H., Kikuchi, A., Yamato, M., Okano, T. Accelerated cell sheet recovery by co-grafting of PEG with PIPAAm onto porous cell culture membranes. Biomaterials. 24 (7), 1223-1232 (2003).
  22. Kikuchi, A., Okano, T. Nanostructured designs of biomedical materials: applications of cell sheet engineering to functional regenerative tissues and organs. J. Control. Release. 101 (1-3), 69-84 (2005).
  23. Fukumori, K., et al. Characterization of ultra-thin temperature-responsive polymer layer and its polymer thickness dependency on cell attachment/detachment properties. Macromol. biosci. 10 (10), 1117-1129 (2010).
  24. Takahashi, H., Nakayama, M., Yamato, M., Okano, T. Controlled chain length and graft density of thermoresponsive polymer brushes for optimizing cell sheet harvest. Biomacromolecules. 11 (8), 1991-1999 (2010).
  25. Nakayama, M., Yamada, N., Kumashiro, Y., Kanazawa, H., Yamato, M., Okano, T. Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide)-based block copolymer coating for optimizing cell sheet fabrication. Macromol. Biosci. 12 (6), 751-760 (2012).
  26. Sakuma, M., et al. Control of cell adhesion and detachment on Langmuir-Schaefer surface composed of dodecyl-terminated thermo-responsive polymers. J. Biomater. Sci., Polym. Ed. 25 (5), 431-443 (2014).
  27. Sakuma, M., et al. Thermoresponsive nanostructured surfaces generated by the Langmuir-Schaefer method are suitable for cell sheet fabrication. Biomacromolecules. 15 (11), 4160-4167 (2014).
  28. Moad, G., Chong, Y. K., Postma, A., Rizzardo, E., Thang, S. H. Advances in RAFT polymerization: the synthesis of polymers with defined end-groups. Polymer. 46 (19), 8458-8468 (2005).
  29. Nishida, K., et al. Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell Sheets Composed of Autologous Oral Mucosal Epithelium. N. Engl. J. Med. 351 (12), 1187-1196 (2004).
  30. Ohki, T., et al. Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets. Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).
  31. Sawa, Y., et al. Tissue engineered myoblast sheets improved cardiac function sufficiently to discontinue LVAS in a patient with DCM: report of a case. Surg. Today. 42 (2), 181-184 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Langmuir Schaefer

מאמרים קשורים