כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר
במאמר זה
סיכום
תקציר
מודל הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית המושרה על ידי לייזר (CNV) היה מודל עיקרי מכריע למחקר ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). על ידי מתן פגיעת לייזר ממוקדת ל-RPE ולקרום ברוך, ההליך גורם לאנגיוגנזה, ומדגמן את הפתולוגיה הבולטת שנצפתה ב-AMD ניאו-וסקולרי.
פותח לראשונה בפרימטים שאינם אנושיים, מודל ה-CNV המושרה על ידי לייזר יושם במינים רבים אחרים, האחרון שבהם הוא העכבר. ניסויים בעכברים הם חסכוניים יותר, ניתן לבצע ניסויים על ציר זמן מהיר בהרבה, והם מאפשרים שימוש במודלים טרנסגניים שונים. הגודל המיניאטורי של עין העכבר, לעומת זאת, מהווה אתגר מיוחד בעת ביצוע ההליך. מניפולציה של העין כדי לדמיין את הרשתית דורשת תרגול של מיומנויות מיומנות עדינות כמו גם תיאום יד-עין-רגל בו זמנית להפעלת הלייזר. עם זאת, לאחר שליטה, ניתן ליישם את המודל כדי לחקור היבטים רבים של AMD ניאו-וסקולרי כגון מנגנונים מולקולריים, השפעת מניפולציות גנטיות והשפעות טיפול תרופתי.
מודל ה-CNV המושרה על ידי לייזר, למרות שהוא שימושי, אינו מודל מושלם של המחלה. עין העכבר מסוג פרא היא בריאה אחרת, והסביבה הכוריו-רשתית אינה מחקה את השינויים הפתולוגיים ב-AMD אנושי. יתר על כן, אנגיוגנזה הנגרמת על ידי פציעה אינה משקפת את אותם מסלולים כמו אנגיוגנזה המתרחשת במצב של מחלה כרונית הקשורה לגיל כמו ב-AMD.
למרות חסרונותיו, מודל ה-CNV המושרה בלייזר הוא אחת השיטות הטובות ביותר הקיימות כיום לחקר הפתולוגיה המתישה של AMD ניאו-וסקולרי. יישומו הוביל להבנה מעמיקה יותר של הפתוגנזה של AMD, כמו גם תרם לפיתוח רבים מטיפולי AMD הזמינים כיום.
מבוא
ניוון מקולרי (AMD) הקשורות לגיל הוא אחד הגורמים המובילים לעיוורון באנשים מעל גיל 50 1-3. AMD יכול להיות מסווג לשתי צורות: מכולה ("יבש") AMD וneovascular ("רטוב") AMD. לשעבר מתאפיין בניוון גיאוגרפי של אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE), choriocapillaris, וקולטניים אור, ואילו האחרונים מאופיין בפלישה של כלי חריגים מדמה העין לתוך שכבות רשתית החיצוניות גורמים לדליפה, דימום, וסיסטיק, וסופו של דבר מוביל לעיוורון 1,2. של שתי צורות, AMD neovascular מהווה את רוב הפסד 1 חזון. למרבה המזל, יש טופס זה אפשרויות ניהול רבות יעילות תרופתיות, ואילו עמיתו מכולה שלה כרגע אין מוכח טיפולים רפואיים 3. יתר על כן, בגל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מטופלים כל בעלי החיים בהתאם למדריך של הטיפול והשימוש בחי מעבדה 2,013 Edition, האגודה למחקר בחזון ורפואת עיניים (ארוו) דוח לשימוש בבעלי חיים ברפואת עיניים ומחקר חזון, וכפי שאושר על ידי בעלי החיים המוסדיים טיפול ושימוש הוועדה לאוניברסיטת נורת'ווסטרן.
הערה: ההליך הבא יכול להיעשות לגמרי עם מפעיל אחד; עם זאת, הוא הרבה נערך בצורה יעילה יותר עם שני מפעילים עם המשימות לפצל בהתאם.
1. הכינו תחנת לייזר וטרום-לייזר
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כימות של נגעי CNV יכולה להתבצע באמצעות ניתוח של choroids רכוב השטוח באמצעות מכתים immunofluorescence לתייג כלי CNV. שתי שיטות הנפוצות ביותר המועסקות של הכנת רקמה הן תיוג FITC-dextran, נעשה באמצעות זלוף מייד לפני הקרבת בעלי חיים, או חיסוני מכתים שלאחר המוות עם סמן תא אנדותל. שתי שיטות אלה תוארו בעבר בפירוט 13,14,21; איורים 1 ו -2 דוגמאות מופע של כל אחד, בהתאמה. לאחר רכישת confocal תמונה מיקרוסקופית, או אזור (2-ממדים) או נפח (3-ממדים) יכו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ישנם גורמים רבים שיכולים להשפיע על אספקת לייזר והתפתחות נגע CNV תוצאה לאחר לייזר אינדוקציה מוצלחת. גורמים אלה צריכים להיות מבוקרים ולטופלו על מנת לקבל את התוצאות הכי אמינות. הרלוונטי ביותר של גורמים אלה הם בחירת עכבר (גנוטיפ, גיל, ומין), בחירת חומר הרדמה, והגדרות לייזר.
מודל העכבר הספציפי בשימוש יכול להיות השפעה משמעותית על מהלך התפתחות CNV. גנוטיפ ביותר בשימוש נרחב הוא עכבר C57BL / 6. הספק שממנו בעלי החיים מתקבל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
המחברים מבקשים להודות לג'ונתן צ'ו, MD על עזרתו בהכנה ועריכה של כתב היד הסופי ול-Wenzhong Liu על נתוני ה-OCT. ברצוננו גם להודות לתמיכה ממענק המחקר של אגודת המקולה (AAF), תמיכה ממענק בלתי מוגבל לאוניברסיטת נורת'ווסטרן ממחקר למניעת עיוורון, בע"מ, ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב, ותמיכה מ-NIH-EY019951.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| לייזר עיניים ארגון 532 ננומטר (ירוק) | IRIDEX | GLx | ניתן להשתמש בכל לייזר ארגון 532 ננומטר (ירוק) ניתן להשתמש במנורת |
| חריץ | Carl Zeiss | 30SL-M | ניתן להשתמש בכל מנורת חריץ כל עוד היא תואמת ללייזר |
| tribromoethanol | Sigma | T48402-25G | המשמש לייצור |
| אלכוהול טרט-אמיל | Sigma | 152463-1L | המשמש לייצור חומר הרדמה |
| בקבוקוני זכוכית ענבר + מחיצה | Wheaton | WH-223696 | רקמות אחסון tribromoethanol |
| VWR | 82003-820 | שונות | |
| 1% טרופיקמיד | Falcon Pharmaceuticals | RXD2974251 | הרחבת אישונים |
| 0.5% טטרקאין הידרוכלוריד | אלקון | 0065-0741-12 | הרדמה מקומית |
| דמעות מלאכותיות | אלקון | 58768-788-25 | משאבת טיפול בחום הידרציה |
| (להתחממות בעלי חיים) | קנט סיינטיפיק | HTP-1500 | משמשת לשמירה על כרית חימום טמפרטורת גוף בעלי חיים |
| קנט סיינטיפיק | TPZ-0510EA | שומרת על טמפרטורת גוף בעלי חיים | |
| 30 גרם מחטי אינסולין | BD | 328418 | IP הרדמה סולם הזרקת |
| משקל | אמריקאי משקל | AWS-1KG-BLK | שקילה |
| תלוש כיסוי (25 מ"מ x 25 מ"מ) | VWR | 48366089 | לשטח את הקרנית כדי להמחיש את רשתית העכבר |
| קסילזין | שהתקבל ממוסד | שהושג | מההרדמה |
| קטמין | שהושג ממוסד | הרדמה | |
| Volocity | PerkinElmer | המשמש לבנייה מחדש של נפח | |
| ImageJ | המכונים הלאומיים לבריאות | המשמשים לניתוח תמונות |
מקורות
- Bressler, N. M., Bressler, S. B., Fine, S. L. Age related macular degeneration. Surv Ophthalmol. 32, 375-413 (1988).
- Congdon, N., et al. Causes and Prevalence of Visual Impairment Among Adults in the United States. Arch Ophthalmol. 122, 477-485 (2004).
- Ja....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
