סרטון זה מציג את הליך הגולגולת המאפשר הדמיה כרונית של נוירונים בקליפת המוח הרטרו-טחולית של העכבר באמצעות מיקרוסקופ פוטונים שני פוטונים in vivo בקו טרנסגני Thy1-GFP. גישה זו משולבת עם הזרקת נגיף הקשור לאדנו המבטא mCherry לתוך ההיפוקמפוס הגבי. טכניקות אלו מאפשרות ניטור ארוך טווח של פלסטיות מבנית תלוית ניסיון ב-RSC.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שני פוטונים סימולטני
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
סרטון זה מציג את הליך הגולגולת המאפשר הדמיה כרונית של נוירונים בקליפת המוח הרטרו-טחולית של העכבר (RSC) באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית in vivo בקו העכבר הטרנסגני Thy1-GFP. גישה זו יוצרת אפשרות לחקור את המתאם בין מניפולציות התנהגותיות לשינויים במורפולוגיה העצבית in vivo.
הליך השתלת חלון הגולגולת נחשב מוגבל רק לאזורי קליפת המוח הנגישים בקלות כגון שדה החבית. הגישה שלנו מאפשרת הדמיה של נוירונים ב-RSC בעל כלי דם גבוהים. RSC הוא מרכיב חשוב במעגל המוח האחראי על זיכרון מרחבי, שנחשב בעבר לבעייתי עבור הדמיית שני פוטונים in vivo.
השתלת חלון הגולגולת מעל ה-RSC משולבת עם הזרקה של נגיף אדנו-רקומביננטי המבטא mCherry (rAAVmCherry) לתוך ההיפוקמפוס הגבי. ה-mCherry המתבטא מתפשט להקרנות אקסונליות מההיפוקמפוס ל-RSC, ומאפשר הדמיה של שינויים הן בבוטונים אקסונליים פרה-סינפטיים והן בקוצים דנדריטיים פוסט-סינפטיים בקליפת המוח.
טכניקה זו מאפשרת ניטור ארוך טווח של פלסטיות מבנית תלוית ניסיון ב-RSC.
מבוא
שני הפוטונים מיקרוסקופיה מהפכת התצפית של פעילות המוח הן חי ופועל חיות. מאז השקתו בשנת 1990 הוא במהירות לפופולריות והוא מיושם כיום כאחת הגישות המעניינות והחדשניות ביותר כלפי בחינת היבטים רבים של פעילות מוח in vivo 1,2. יישומים אלה כוללים מדידות זרימת דם, הפעלת נוירונים (למשל, באמצעות אינדיקטורים רמת סידן או ביטוי גנים מוקדם מיידיים) ואת המורפולוגיה של תאים עצביים. מספר גדל והולך של מעבדות להשתמש מיקרוסקופי שני פוטונים, יישום הטכניקה ברחבי העולם המדעי כסטנדרט חדש עבור הדמיה המוחית in vivo.
הגישה הסטנדרטית כוללת השתלה של החלון גולגולתי (חור עגול הגולגולת מכוסית זכוכית לכסות) מעל החבית או בקליפת המוח הראייתית של עכבר המוח 3. לאחר מכן, בהתאם לפרוטוקול הניסוי, mouse עובר סדרה של ויזואליזציה והדרכות התנהגותי, המאפשר לעקוב אחר השינויים בפעילות המוח והמורפולוגיה עצבית לאורך זמן 4,5. בשני המקרים craniotomy משפיע רק על עצם הקודקוד, מבלי לחצות את התפרים. הוא האמין בעיקר כי החיסרון העיקרי של השיטה הוא היישום שלה מוגבל cortexes ונגיש כגון חבית או בקליפת המוח הראייתית. השרשה של החלון גולגולתי על פני אזורים אחרים מציבה הרבה קשיים, עקב דימום יתר ו / או הפרעה מרחבית.
במאמר זה אנו מציעים את ההשתלה של החלון גולגולתי מעל הקורטקס retrosplenial (RSC) כעוד באזור ריבית אפשרי עבור שני פוטונים in vivo מיקרוסקופיה 6. RSC היא מרכיב חשוב של המעגל במוח האחראי על היווצרות הזיכרון המרחבי. אנטומית, RSC היא חלק מהרשת עצבית חיבור קליפת מוח, בהיפוקמפוס, ואזורים התלמוס 7. זהבכבדות מעורב במגוון של התנהגויות, כגון לימוד ושינון הכחדה המרחבית וכן ניווט מרחבית 6.
על מנת להמחיש את השינויים המורפולוגיים של נוירונים אנו משתמשים קו עכבר מהונדס מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) תחת אמרגן Thy1. בעכברים אלו, GFP מתבטא כ 10% של הנוירונים במוח המאפשרים להדמיה ברורה של אקסונים קליפת המוח דנדריטים באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים 8. חידוש נוסף שאנו מציעים הוא הזרקה של סרוטיפ וירוס adeno הקשורים רקומביננטי 2/1 (מרמת rAAV2 / 1) קידוד חלבון פלואורסצנטי אדום (mCherry) תחת האמרגן camkii ספציפי נוירון 9 לתוך המבנים העמוקים יותר של המוח מקרין RSC , כגון ההיפוקמפוס. הביטוי של מרמת rAAV2 / 1 mCherry בהיפוקמפוס של העכבר Thy1-GFP מאפשר להדמיה סימולטני של אלמנטים טרום postsynaptic של hippocampo-cortical הסינפסות 10. הביטוי rAAV מונחה של mCherry דורש שבועיים עד שלושה שבועות לחלבון להגיע לרמה מספקת במסופים אקסונלית. תקופה זו עולה בקנה אחד עם הזמן הרגיל הנדרש להתאוששות מן craniotomy.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפרוצדורות המתוארות להלן אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית במכון Nencki לביולוגיה ניסויית, פולנית האקדמיה הלאומית למדעים.
הערה: החלק מן הקלעים של הווידאו הקשור מואץ. גורם מהירות מותווה בסצנות אלה.
1. ניתוח הכנה
- לעקר את כל הכלים, מיכלי זכוכית עבור נוזלים צמר גפן ב החיטוי. יש להשתמש בכפפות אפשר לוותר עליהן. נקו את שולחן הניתוחים, מסגרת stereotaxic וכל האזור שמסביב עם אתנול 70%. השתמש כרית כירורגית סטרילית ליצור מרחב סטרילי עבור כל הציוד המעוקר. חותכים gelfoam לחתיכות קטנות להשרות אותם מלח סטרילית.
הערה: על פי המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה, אתנול אינו מהווה sterilant ולא חיטוי ברמה גבוהה. זה אמור לשמש רק כסוכן ניקוי / defatting על משטחים מעוקרים בעבר. - שים את החיה הדואר בתא האינדוקציה ולהגדיר את רמת isoflurane עד 5% ו זרימת חמצן 2 ליטר / דקה. הליך זה צריך לקחת כ -3 דקות.
- קח את החיה מתוך חדר האינדוקציה. השתמש צובט זנב או הבוהן על מנת להבטיח כי בעל החיים הוא מסומם לגמרי.
- שימוש גוזם מדויק לגלח את השיער מהחלק האחורי של הראש (בין האוזניים) עד העיניים.
- מניח את החיה בתוך מסגרת stereotaxic ולייצב את הראש עם ברי אוזניים.
- כיוון דרגת הרדמה isoflurane 1.5-2% ו -0.3 ליטר / דקה חמצן.
- החל את משחת עיניים.
- להזריק את תת עורי חיה עם Tolfedine (4 מ"ג / ק"ג), Butomidor (2 מ"ג / ק"ג) ו Baytril (5 מ"ג / ק"ג) כדי למנוע דלקת, כאב וזיהום, בהתאמה.
- להזריק את לשריר חיה עם Dexamethasone (0.2 מ"ג / ק"ג) כדי למנוע נפיחות במוח.
הערה: אפשר להזריק תת עורי Dexamethasone או intraperitoneally למנוע נזק לשרירים. - נקו את העור באמצעות sצמר גפן terile בבטאדין ואחריו אתנול 70%.
- שנה את הכפפות ולרסס אותם עם אתנול 70%.
הערה: בעת שימוש בכפפות חד פעמיות אין לגעת שדה סטרילי. גע החיה היחידה בקצות מכשירי ניתוח סטרילי ספוגיות סטרילי.
כירורגיה 2. חלון גולגולתי
- הרם את העור עם מלקחיים באמצעות מספרי מייקרו לחתוך את העור בצורה אופקית לאורך בבסיס הראש ולאחר מכן באלכסון עד לנקודת החזית בין העיניים. הסר את דש העור.
- החל משחה לידוקאין עם ספוגית סטרילית על קרום העצם כדי למנוע דימום וכאב מוגזם.
- השתמש צמר גפן סטרילי או אזמל כדי להסיר את קרום העצם. לייבש את הגולגולת עם צמר סטרילי.
- באמצעות מחט סטרילית להחיל דבק cyanoacrylate צפוף על קצות העור לשתק אותם ולמנוע ממגע במלט שיניים. חכו הדבק להתייבש.
- נח coverglass 3 מ"מ סטרילית על tהוא גולגולת קדמית אל תפר lambdoid. מרכז את coverslip ב RSC קואורדינטות: AP, גבחת -2.8; ML, גבחת 0. סמן את הקצוות coverslip ידי מגרד את פני הגולגולת עם מחט סטרילית. שים את coverglass בחזרה לתוך המיכל סטרילית עם 70% אתנול.
- השתמש מקדח שיניים במהירות גבוהה עם בר קוטר קטן לשרטט מעגל בקוטר 3 מ"מ. נקה את הקידוח מעפר העצם עם מטליות טבולות תמיסת מלח סטרילית. השתמש gelfoam ו מטליות כדי לעצור את הדימום מדי פעם ולנקות את העצם.
- בין לבין הקידוח לבדוק את עובי העצם עם מלקחיים בסדר על ידי נגיעת מעגל העצם בעדינות ובדיקת הניידות שלה. זכור כי העצם עבה על האזור של התפר. עצור את הקידוח כאשר מעגל העצם הוא נייד ורק בשכבה אחידה, דקה של עצם נשארת על ההיקף. נקה את השדה התפעולי של כל אבק העצם הנותרים עם מטליות טבלו מלוחות.
- זרוק את תמיסת מלח סטרילית על אזור הקידוח, המכסה את CIR קדחCLE. בזהירות לחטט מעגל העצם עם מלקחיים בסדר ואז בעדינות אך בתקיפות להסיר את העצם על ידי הרמתו כלפי מעלה. היזהר שלא להטות את מעגל העצם כשאני מרים אותה כדי למנוע נזק אפשרי הדורה.
- בעדינות להחיל את gelfoam ספוגה תמיסת מלח סטרילית על הדורה כדי לעזור לעצור את הדימום. חכו עד שכל הדימום נעצר לחלוטין. מוציאים בזהירות את gelfoam לא להפריע בתהליך הקרישה.
הערה: אזור התפר הוא vascularized מאוד, כך את הדימום בנקודה זו עלולה להתברר עמוק. זה חיוני כדי לחכות מספיק זמן הדימום להפסיק לחלוטין. זה עוזר לשמור על gelfoam המלוח ספוג מקורר על ידי הצבתו על קרח.
3. הזרקת וירוס
- צרף משאבת עירוי למגדל stereotactic ולחבר את הבקר.
- הכנס את מחט 35G לתוך המזרק. שטוף את המזרק 10 פעמים עם אתנול לעקר אותו 10 פעמים עם תמיסת מלח סטרילית כדי להסיר עקבות של דוארthanol. הסר בועות אוויר מן המזרק. הכנס את המזרק לתוך המשאבה.
הערה: יש לשקול שימוש בחומרי חיטוי אחר. - להפשיר מנה בודדת של הכנה מרמת rAAV2 / 1 mCherry (10 12 pfu מומלץ) ולשמור אותו על קרח. מלאו את המזרק עם פתרון וירוס.
- מרכז את המחט על גבחת ואז בעדינות להכניס לתוך ההיפוקמפוס באמצעות הקואורדינטות הבאות: AP -2, ML +/- 1.0, DV -1. נקודות ציון אלה יהיו ממוקמים ליד קץ craniotomy. מתן 5 דקות עבור הרקמות לייצב.
- להזריק 0.7 μl של פתרון mCherry מרמת rAAV2 / 1 בשיעור של 50 nl / min. חכה 10 דקות עבור הווירוס לספוג באופן מלא. הוצא בעדינות את המחט. כתם עם gelfoam אם הדימום מתרחש. חזור עם האתר הנגדי.
4. גולגולתי חלון השרשה
- הנח את coverglass סטרילי, מיובשים על גבי הדורה בפריים מעגל קדח. החזק את coverglass עם forceps לשטח ההדור בעדינות ולהביא coverglass 'קצוות קרובים לפני שטח הגולגולת.
הערה: יתכן כי coverglass משבש את הקריש ואת קורות חיים הדימום. אם זה המקרה, להרים את coverglass, למקם אותו באלכוהול, יבש ולחזור לשלב 2.9. - באמצעות מחט סטרילית להחיל את דבק cyanoacrylate צפוף בשולי coverglass לצרף אותם אל הגולגולת. חכו הדבק להתייבש.
- מניחים בר קיבעון (אגוז M2 או עיצוב בהתאמה אישית) בחלק הקדמי של הגולגולת. החל את דבק cyanoacrylate על הקצוות של הבר. חכו הדבק להתייבש.
- מניחים את בר קיבעון בעמדה שתאפשר מיקום האופקי של החלון גולגולתי במהלך ההדמיה הפגישה. מניח אותו כמו רחוק ככל האפשר מן החלון. אם היא ממוקמת קרוב מדי אל החלון, הבר ואת הבורג חיבורו עם בעל מחוייט עלול להוות מכשול עבור המטרה במהלך תהליך ההדמיה.
- הכן את אקריליק שיניים ולהחיל אותו על פני הגולגולת מסביב לכוס. זה מועיל כדי ליצור צורת מכתש דמוי סביב החלון. זה ייצור חלל עבור מים מיושמים מאוחר הדמיה במטרת המים.
- צור כובע עם אקריליק השיניים, המכסה את שאר השטח המבצעי, קצות עור, בר קיבעון, חיזוק המכתש סביב החלון גולגולתי. חכה מלט השיניים להתקשות.
- הסר את החיה מן המסגרת stereotaxic והכניס אותו לחדר התאוששות.
- חכו החיה להתאושש מהניתוח תוך שמירה על תפקודים פיזיולוגיים.
- החל שיכוך כאבים שלאחר הניתוח (carprofen, 10 מ"ג / ק"ג) וטיפול אנטיביוטי (Baytril, 5 מ"ג / ק"ג) במשך 48 שעות.
הדמיה 5.
- הפעל את טי: ספיר לייזר, כוח את המיקרוסקופ. המערכת השתמשה בניסוי זה מצוידת ליזר שני פוטונים, מערכת OPO ו PMT Gaasp הכפול.
- שים את החיה inducתא tion ולגרום הרדמה.
- הסר את החיה מן חדר האינדוקציה ומכניס את מסכת גז ההרדמה מתחת למיקרוסקופ. להקטין את זרימת החמצן 0.3 L / min ואת ריכוז isoflurane ל 1.5-2%.
- תקן החיה למסגרת מיקרוסקופ המותאם אישית עם בורג M2 (או אחר מערכת מותאמת אישית). אזנו את החלון גולגולתי.
הערה: אפשר להשתמש במערכת קיבוע הראש של מיקרוסקופ היצרן, למרות המסגרת המותאמת אישית המסוימת נותנת תוצאות טובות יותר (יציבות ראש משופרת, מיצוב קבוע בפגישות מרובות במהלך ניסוי כרוני). - שימוש בהגדרות מיקרוסקופ widefield ומרכז המטרה בהגדלה נמוכה הנוף על אחד הצדדים של קליפת retrosplenial ולהתמקד אותו על פני השטח coverslip.
- החל טיפה של מים לתוך הבאר אקריליק דמוי מכתש. Switch to טבילה אובייקטיבי מים למרחקים ארוכים. הזז את המטרה לעבר החלון גולגולתי עד con המניסקוס מיםnects הדגימה ואובייקטיבית.
- עבור להגדרות שני הפוטונים ולהתחיל סריקה העליון הדגימה למטה באמצעות זום הנמוך ביותר. המעבר של דורה מאטר יהיה גלוי כמו בוהק של אות גבוהה שאינו ספציפית.
- התאם את הגדרות הרכישה מיקרוסקופ בשני הערוצים (GFP ו mCherry) על פי עוצמת האות מתאי ניאון כדי לכסות את הטווח הדינמי.
- לאחר מציאת נוירון מתאים (עם העץ הדנדריטי להפריד תאים אחרים) לבצע סריקה ראשונית רק באמצעות GFP filterset עם זום z למרחקים הנמוך של 5 מיקרון.
- השג השלכה מרבית של ערימת סרוקים ולהדפיס אותו על הערות (באמצעות צבעים הפוכים).
- גדר זום לערך שיאפשר לתדמית פרטי מורפולוגיים הרצויים. תמונת העץ הדנדריטי כולו בערוצי GFP ו mCherry באמצעות הקרנה מרבית כמדריך.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הביטוי של ה- GFP משנה של נוירונים עכבר כתב Thy1-GFP מאפשר in vivo ההדמיה של דנדריטים קליפת המוח ותחזיות axonal המקומיות RSC. איור 1 א מציג הקרנה מקסימלי של ערימה של תמונות עם דנדריטים GFP חיובים מרובים גלויים. גוף התא הוא מוסתר על ידי עורק. 1B האיור מראה תמונה אחת מטוס תקריב (זום דיגיטלי 3x) של סניף הדנדריטים המצוין 1A. פרטים של מורפולוגיה הדנדריטים (קוצים, filopodia) נראים בבירור. ערוץ GFP נרכש באמצ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במאמר הנוכחי אנו מציגים פרוטוקול עבור שני הפוטונים סימולטני in vivo הדמיה של תשומות הסינפטי מטרות postsynaptic ב RSC דרך חלון גולגולתי. הליך ההשתלה להשתרע על פני כמה שלבים עיקריים. ראשית, החיה בהרדמה עמוקה וקבוע בפריים stereotactic, אז הגולגולת מעל RSC היא דלילה עם מקדחה בנוסח החוזר המסומן ואת העצם העגול מוסר. לאחר דימום פסק, mCherry מרמת rAAV2 / 1 מוזרקת לתוך ההיפוקמפוס, וכן מכסה זכוכית מקובע הגולגולת מעל אזור הקדח. לבסוף לבר הקיבעון מאובטח על ראש החיה מושמת ב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים (KL, MR, KR) יש זכויות פטנט (PL410001) עבור מסגרת מחזיק בסעיף זה.
תודות
המחברים מבקשים להודות מ Steczkowski להקלטות קול, מ Borczyk עבור ציורים, א Trąbczyńska לייצור וירוס, מ Ziókowska עבור genotyping וא Mirgos לסיוע בעבודת המצלמה. KR מכיר מתנה סוג של וירוס adeno הקשורים רקומביננטי (rAAV) המבטאים חלבון פלואורסצנטי mCherry בשליטת היזם CaMK מ ק דייזרות. פרויקט זה בוצע במתקני הגרעין של מעבדה של מודלים בבעלי חיים המעבדה של מבנה רקמות ותפקוד, מרכז לנוירוביולוגיה, Nencki המכון לביולוגיה ניסויית, עם השימוש בתשתית CEPT במימון האיחוד האירופי - קרן האירופית לפיתוח אזורי בתוך התכנית התפעולית "כלכלה חדשנית" עבור 2007-2013. עבודה זו נתמכה על ידי תרומות של הלאומית למדע מרכז: סונטה Bis 2012/05 / E / NZ4 / 02,996, Harmonia 2013/08 / M / NZ3 / 00,861, Symfonia 2013/08 / W / NZ24 / 00,691 ל KR וסונטה Bis 2014 / 14 / E / NZ4 / 00172 RC
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>תרופה | |||
| איזופלורן | בקסטר | AErrane 8DG9623 | 5-2% טרום ניתוח |
| איזופלורן | בקסטר | AErrane 8DG9623 | 1.5-2% במהלך הניתוח |
| דקסמטזון | סריקת וטרינר | דקסאון 2 מ"ג/מ"ל | 0.2 מ"ג/ק"ג תוך שרירי |
| Baytril Bayer | 2.50% | 5 מ"ג/ק"ג תת עורי | |
| טולפדין | וטוקינול | 4% | 4 מ"ג/ק"ג תת עורי |
| בוטומידור | ריכטר פארמה | 10 מ"ג/מ" | ל 2 מ"ג/ק"ג תת עורי |
| קרפרופן | KRKA-Polska | Rycarfa 50 מ"ג/מ"ל | 10 מ"ג/ק"ג תת עורי |
| לידוקאין | ג'לפה | ליגנוקאינום | מקומי |
| לידוקאין | ג'לפה | 20 מ"ג/גרם | באופן מקומי |
| <ניתוח>חזק | |||
| קצף קצף | אתיקון | ספונגוסטן; REF MS0005 | |
| משחת עיניים | Dedra | Lubrithal | באופן מקומי |
| CA דבק | Pelikan Daniel | 20G Huste | |
| אקריליק שיניים | SpofaDental | Duracryl Plus | |
| מסגרת סטריאוטקסית | Stoelting | 51500D | |
| <חזק>כלי | |||
| Coverglass | הרווארד מכשיר | HSE-64-0720 | קוטר 3 מ"מ |
| מקדחה דנטלית | Sigmed | Keystone KVet | |
| מוט קיבוע | ניתן להשתמש באגוזי בורג N/A M2 או M3 בהתאמה אישית ניתן להשתמש | ||
| במלקחיים | Renex | PN-7B-SA | |
| מספריים מיקרו | Falcon | BM.183.180 | |
| מיקרוסקופ דיסקציה | KOZO | XTL6445T | |
| מסגרת <חזקה>הדמיה | |||
| מחזיקה בהתאמה | אישית | N/A | |
| מיקרוסקופ דו-פוטוני | Zeiss | Upright Axio Examiner Z1 | יחידת לייזר: זיקית קוהרנטית 690-1040 ננומטר עם מתנד פרמטרי אופטי 1050-1300 ננומטר. מטרות: EC-PLAN-NEUFLUAR 10x/0.1 ו-LD Plan-APOCHROMAT 20x/1.0. זיהוי: מסנני פס פס של Zeiss BP 500-550 (GFP) ו-BP 570-610 (mCherry) מופרדים על ידי מפצל אלומה ב-560 ננומטר ומחוברים לשני גלאי פוטו GaAsP. |
| Reagent | |||
| Virus | מתנה מ-K. Deisseroth | Recombinant adeno-associated virus (rAAV) המבטא חלבון פלואורסצנטי mCherry בשליטת מקדם CaMK |
מקורות
- Grutzendler, J., Gan, W. B. Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain. NeuroRx. 3, 489-496 (2006).
- Svoboda, K., Yasuda, R. Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience. Neuron. 50, 823-839 (2006).
- Trachtenberg, J. T., et al. Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex. Nature. 420, 788-794 (2002).
- Holtmaat, A., et al. Imaging neocortical neurons through a chronic cranial window. Cold Spring Harb Protoc. 2012, 694-701 (2012).
- Chow, D. K., et al. Laminar and compartmental regulation of dendritic growth in mature cortex. Nat Neurosci. 12, 116-118 (2009).
- Czajkowski, R., et al. Encoding and storage of spatial information in the retrosplenial cortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 8661-8666 (2014).
- Czajkowski, R., et al. Superficially projecting principal neurons in layer V of medial entorhinal cortex in the rat receive excitatory retrosplenial input. J Neurosci. 33, 15779-15792 (2013).
- Feng, G., et al. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
- Couey, J. J., et al. Recurrent inhibitory circuitry as a mechanism for grid formation. Nat Neurosci. 16, 318-324 (2013).
- Miyashita, T., Rockland, K. S. GABAergic projections from the hippocampus to the retrosplenial cortex in the rat. European Journal of Neuroscience. 26, 1193-1204 (2007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
