כימות של מוחין ארכיטקטורת כלי דם באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים במודל עכבר של neuroinflammation המושרה HIV

Summary

מאמר זה מתאר שיטה שבאמצעותה ניתן לכמת את ארכיטקטורת כלי הדם במוח באמצעות מיקרוסקופ דו-פוטוני in vivo ו-ex vivo.

Abstract

זיהום בנגיף הכשל החיסוני האנושי 1 (HIV-1) גורם לעתים קרובות להפרעות נוירו-קוגניטיביות הקשורות ל-HIV-1 (HAND), ומאופיין במצב נוירו-דלקתי כרוני בתוך מערכת העצבים המרכזית (CNS), שנחשב מונע בעיקר על ידי הפעלה מתווכת ויראלית של מיקרוגליה ומקרופאגים תושבי המוח. זיהום ב-HIV-1 מלווה גם בשינויים בזרימת הדם במוח (CBF), מה שמעלה את האפשרות שדלקת עצבית כרונית הקשורה ל-HIV עלולה להוביל לשינויים ב-CBF ו/או בארכיטקטורת כלי הדם במוח. כדי לענות על שאלה זו, השתמשנו במודל עכברי לדלקת עצבית הנגרמת על ידי HIV, ובדקנו אם חשיפה ארוכת טווח לסביבה דלקתית זו עלולה לפגוע בכלי הדם במוח ולגרום לנדירות של רשתות נימיות. במאמר זה אנו מתארים שיטה לכימות שינויים בצפיפות הנימים בקליפת המוח במודל עכבר של מחלה נוירו-דלקתית (עכברים טרנסגניים HIV-1 Tt). גישה ניתנת להכללה זו משתמשת בהדמיה דו-פוטונית in vivo של נימים בקליפת המוח דרך חלון קליפת המוח של גולגולת דקה, כמו גם הדמיה דו-פוטונית ex vivo של נימים בקליפת המוח של עכבר. הליכים אלה מייצרים תמונות וקבצי z-stack של רשתות נימיות, בהתאמה, אשר לאחר מכן ניתן לעבור ניתוח כמותי על מנת להעריך שינויים בארכיטקטורת כלי הדם במוח.

Introduction

וירוס כשל חיסוני אנושי 1 (HIV-1) פולש למוח בשלב האקוטי של זיהום בנגיף, ופרודוקטיבית מדביק שני מיקרוגלים ומקרופאגים תושב המוח, שמוביל להפעלתם - ואת שחרורם של שני מתווכים דלקתיים המופק מהמארח וHIV-1 המסיס virotoxins כגון טאט וgp120 (שנסקר ^ב1,2). כתוצאה מכך, מדינת neuroinflammatory כרונית הופכת הוקמה במערכת העצבים המרכזית, שחשב לתרום לפתוגנזה של HIV-1 הפרעות Associated נוירוקוגניטיבי (יד) ^3-5.

ביטוי יתר כרוני של HIV-1 תאת או אינטרלוקין -17A (IL) בתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הוכח לגרום לואקום כלי דם ^6,7. זה מעלה את האפשרות שneuroinflammation הכרוני עשוי לתרום לפתוגנזה של יד בהשפעות על מערכת כלי הדם במוח. כדי לבחון שאלה זו נוספת, פיתחנו שיטות לכמת struc כלי דם המוחיטורס.

מאמר זה מתאר שיטה לכימות מספר צמתים נימים, מגזרי נימים, אומר אורך קטע, סך אורך קטע, אומר קוטר נימים, ונימים כוללת באמצעות in vivo ההדמיה של רשתות נימים דרך חלון קליפת המוח דק גולגולת נפח (שונה ממתואר בעבר פרוטוקולים) ^8,9, כמו גם הדמיה vivo לשעבר של חלקים במוח, באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים. גישה משולבת זו מספקת לכימות הוליסטית של פרמטרים כלי דם מוחי, מאז חלון קליפת המוח דק-גולגולת in vivo מאפשר לשימור הסביבה במוח, בעוד ההדמיה vivo לשעבר של רשתות נימים בפרוסות מוח מאפשרת שחזור מלא, תלת ממדים רשתות נימים - אשר לאחר מכן ניתן לכמת באמצעות תוכנה זמינה באופן מסחרי.

Protocol

אוניברסיטת ועדת האוניברסיטה של ​​רוצ'סטר בבעלי חי משאבים אישרה את כל הפרוצדורות שבוצעו בנייר זה.

1. הכנה טרום-ניתוחית (ועכברים)

1. הכן את אזור הניתוח עם כל הציוד הנדרש. לעקר את כל הכלים המשמשים במהלך ההליך מראש באמצעות אתנול 70%. לחלופין, להשתמש מעקר חרוזי זכוכית או החיטוי לעקר את הכלים.
2. מניחים את העכבר בתא אינדוקציה isoflurane מחובר למכשיר אדי isoflurane. הגדר את רמות isoflurane עד 4% בשיעור של 1 ליטר / דקה.
   הערה: לניסויים שדווחו כאן, עכברים עם דוקסיציקלין transgene HIV-1 תאת מושרה (DOX) מונע על ידי חלבון גליה fibrillary astrocyte ספציפי אמרגן (עכברי HIV טאט-TG) (GFAP) ¹⁰ שמשו כדי לבחון את ההשפעה של איידס -1 מושרה neuroinflammation במבנה כלי דם מוחי, כפי שתואר בעבר ^7,10.
3. בעדינות להטות את תא האינדוקציה להתבונן העכבר ורפלקס ליישר של; # 39. ברגע שרפלקס ליישר דוכא, להגדיר את רמת isoflurane עד 2% ולהפנות את זרימת האוויר מתא האינדוקציה לחרטום בספסל כירורגית.
4. במהירות להזיז את העכבר מתא האינדוקציה לכרית חימום המים רווי. תמשיך לחול isoflurane (1.5-2%) באמצעות חרטומו. התאם הרדמה פי סובלנות עכבר בודדת הוערכה באמצעות ניטור קצב נשימה (RR).
   הערה: הדיכאון של RR יכול להפריע פרמטרים גז פיסיולוגיים שינוי זרימת דם במוח והערכת קוטר כלי. תנסה לשמור RR בין 55-65 נשימות לדקה. גם קצב לב (HR) יכול לשמש להעריך עומק ההרדמה; לשמור על משאבי אנוש בין 300-450 פעימות לדקה כדי למנוע שינויים פיסיולוגיים לקוטר כלי. בדרך כלל, הרדמה תהיה נאותה בין isoflurane 1.5-2.0% בL 1 / דקה לעכבר נתון.
5. בצע קמצוץ הבוהן כדי לבדוק את עומק הרדמה נוסף. אם העכבר לא מגיב, commence הניתוחים.

2. הכנת דקה גולגולת גולגולת החלון

1. החל ג'ל דמעה מלאכותי לעיניים של העכבר. להסיר לחלוטין את השיער מהקרקפת של העכבר באמצעות מספריים או סכין גילוח חשמלי.
2. לעקר את הקרקפת על ידי יישום פתרון povidone- יוד; לאפשר לו להתייבש. לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ אור, להסיר את העור מהקרקפת של העכבר, וחושף את העצמות הקודקודית, עצמות חזיתיות הזנב, וגבחת סימון לחלוטין.
3. החל כמות קטנה של 10% פתרון כלוריד Ferric לגולגולת כדי לייבש את הקרום להסרת קלה. הסר את הקרומים המיובשים עם # 5/45 מלקחיים בעדינות על ידי גירוד הגולגולת.
4. למרוח שכבה דקה של דבק סביב חלון headplate. לחץ בעדינות על headplate נגד הגולגולת של העכבר, שמירה על השטח של עניין במרכז החלון. החל ירידה של מלט שיניים לheadplate לפלמר הדבק.
5. למרוח שכבה דקהשל דבק לאורך הקצה של חלון headplate ליצור מאגר שבלהחזיק מלוח. לאחר הדבק התייבש, בורג headplate לרתם headplate העכבר.
   הערה: רתמת headplate העכבר המשמש בהליך זה הוא מבנה עם בסיס מתכת ושתי עמודות מתכת. בכל עמודה יש ​​אביב אחד ואגוז כנף אחת. Headplate ממוקם בחלק העליון של האביב, ואגוז האגף מתהדק עד הראש הוא רמה ולא זז.
6. הסר את כל דבק מחלון headplate באמצעות מקדח מצורף לתרגיל Microtorque נקבע על 6,000 סל"ד. עצור כל שניות 10-15 כדי למנוע התחממות יתר של גולגולת עכבר שיכול לגרום לניזק מבני לכלי.
   1. באמצעות מקדח חדש, למקם מ"מ תרגיל 1.5 Microtorque רוחבית מקו האמצע (שליש מהקוטר של חלון headplate). מתחיל דק הגולגולת סביב מיקום זה ב 4000 סל"ד. הזז את התרגיל בעדינות על פני הגולגולת ללא לחץ כלפי מטה ישיר.
   2. dril הפסקתלינג כל שניות 10-15 כדי למנוע התחממות יתר גולגולת העכבר. במהלך תקופה זו, להסיר את האבק שהצטבר בגולגולת באמצעות מיכל אוויר דחוס.
   3. השתמש טיפות של תמיסת מלח RT להתקרר גולגולת למשך 5-10 שניות. בעדינות להסיר את כל הנוזל עם רקמות רכות להמשיך דליל גולגולת.
7. לדילול הסופי של הגולגולת, למקם את נפח קטן של מלח במאגר headplate וקל לטאטא microblade שיניים על פני השטח של ריבית עד כלי דם קטנים נראים בבירור.

3. ניטור פרמטרים פיסיולוגיים

1. ברגע שהגולגולת היא דלילה לחלוטין, לנתק את העכבר מהבעל ולמקם אותו על הגב שלה. בעדינות קלטת את שני רגליו האחוריות כדי לחשוף את הירכיים המדיאלי ברור.
2. להסיר את השיער על שני ירכיים המדיאלי עם מספריים או מכונת גילוח חשמלי. לחטא את האתר כירורגית על ידי כיסוי הירכיים עם povidone- יוד.
3. לצבוט את העור על ירך ימין המדיאלי מעל וריד הירךועורק באמצעות # 5 מלקחיים. משוך בעדינות את העור כלפי מעלה ולהשתמש במספריים לחתוך ולהסיר את העור.
   הערה: ירך השמאל שמור במקרה של סיבוכים ניתוחיים (מומים לב וכלי דם, כלי קרע).
4. החל כ 3-5 טיפות של תמיסת מלח 0.9% לאתר כירורגית. זה מאפשר להגדלה גדולה יותר של כלים, כמו גם שמירה על אתר לחות ומניעת ייבוש של הכלים. הפרד את וריד הירך מעורק על ידי בוטות לנתח לתוך צרור עצבים וכלי דם הירך באמצעות שני # 5/45 מלקחיים.
5. מניחים שתי, 3 חתיכות סנטימטר של תפר כירורגים מתחת לעורק הירך בנפרד כ 1 סנטימטר. לסובב את כיוון השעון תפר העליון כדי ליצור חוסם עורק וכלי דם שיעזור למנוע איבוד דם מוגזם במהלך צנתור.
6. לעשות חתך קטן בעורק הירך באמצעות המספריים האביב. מניחים את הצנתר בעורק דרך החתך ומראש עד הצנתר הוא מאובטח בתוך העורק.
7. להתיר את התפר העליון (חוסם עורקים) כדי להעריך דליפות ומיקום קטטר נכון. אבטח את הצנתר בעורק הירך על ידי קשירת שני קשרים סביב הקטטר בתוך הכלי באמצעות התפרים.
8. הזרק 10 μl של הפרין (100 IU / ml) באמצעות קטטר כדי למנוע קרישת דם. לאחר מכן, בניתוח לסגור את ירך ימין על ידי תפירת העור יחד עם תפר 4-0 בתבנית קטע פשוט.
9. הזרק 50 μl של urethane (1.2 מ"ג / g) intraperitoneally לרבע הימני תחתון. חמש דקות לאחר מכן לחזור עם עוד זריקת 50 μl לרבע השמאלי התחתון עבור הסכום כולל של של urethane intraperitoneal 100 μl. לאט לאט להפחית את רמות isoflurane לכ 0.25% ואילו rechecking במקביל עכבר לעומק ההרדמה.
   הערה: שמור את המחט שטחית בחלל הצפק לאורך קיר הבטן האחורי, כך שזה לא לנקב את המעי. זה יכול להיות מושלם על ידי צובט את mu rectus הבטןscles מהקרביים ולאחר מכן הזרקה.
10. באמצעות צינור נימים, לאסוף דגימת 40 μl של דם עורקים מקטטר. צרף את הצנתר למצויד בשסתום ארבע-דרך מלוחה מלאות ומזרק מלא הפרין מתמר לחץ דם.
11. הדבק את מתמר לחץ דם למנגנון כירורגית כדי למנוע ההסרה מכוונת של קטטר. בגין ניטור של לחץ דם ממוצע.
12. הכנס את צינור נימי דם מלא ליציאת כניסת מנתח גז דם. ברגע שכל הדם כבר חולץ, להסיר את צינור נימים מנמל הכניסה. רמות גז ₂ דם O ₂ ו- CO יופיעו על נייר המודפס ממנתח גז דם.

4. הזרקה של הצבע פלואורסצנטי

1. לצבוט את העור על ירך השמאל המדיאלי באמצעות # 5 מלקחיים. משוך בעדינות את העור כלפי מעלה ולהשתמש במספריים לחתוך ולהסיר את העור. הכן צבע dextran מצומדות אדום פולט rhodamine(70 KDA) (10 מ"ג / קילוגרם המומס בתמיסת מלח).
2. אתר את הירך vein.Using מזרק 1 מיליליטר עם מחט G 30 המצורפות, לצייר פתרון הכין בעבר של צבע ניאון מתאים להדמיה לקו 130 μl של המזרק. הסר את כל בועות האוויר על ידי ציור את הצבע לחלוטין לתוך המזרק ותקיפות מצליפים את קיר המזרק.
   1. כופף את מחט G 30 בכ 30 מעלות זווית על ידי לחיצה עליו מפני צד פוע את משטח קשה. מלא את המחט עם הצבע וזורקים את נוזלי עודפים, עוזב מדגם 100 μl.
3. להזריק מדגם 100 μl של צבע לאט לתוך וריד הירך. לאחר הסרת המחט, להפעיל לחץ קבוע, בעדינות לאתר של הזרקה לעצור כל דימום. לאפשר לצבוע לזרום במשך 5 דקות.
   הערה: לחלופין, וריד הירך ימין ניתן להשתמש במקום להזרקת צבע הניאון כדי למנוע אובדן דם נוסף באמצעות יצירת אחרת באתר ניתוח. בנוסף, אםבעלי החיים הוא דימום בלתי נשלט מהאתר כירורגית, זה עשוי להיות סימן לכך שיותר מדי הפרין ניתן לרוקן את הקטטר. אם אין קרישה בתוך 10-15 דקות והעכבר עדיין מדמם, לשקול מחדש את הניסוי עם עכבר חדש.
4. סגור את ירך שמאל על ידי תפירת העור יחד עם תפר 4-0, אז להעיף בזהירות את העכבר על הבטן שלה, ולמקם אותו לתוך רתמת headplate העכבר.

5. בVivo שני פוטוני ההדמיה

1. הזז את המנגנון כירורגית למיקרוסקופ שני הפוטונים, והקפד לשמור על רמות הרדמה רציפות. מניחים כמות קטנה של תמיסת מלח 0.9% למאגר headplate ולהפחית את מטרת מיקרוסקופ, כך שהוא בא במגע עם מי מלח. אתר את האזור של עניין באמצעות אובייקטיבי צפייה-brightfield
2. הגדר את עירור לייזר שני פוטונים לאורכי גל מתאימים לצבע הניאון. בגין שני פוטונים הדמיה באמצעות o 25xbjective.
   שים לב כי בניסויים אלה השתמשנו dextran מצומדת לצבע rhodamine פולטות אדום שהיה נרגש באורך גל של 780 ננומטר. 607/36 bandpass מסנן פליטה כדי לזהות את הקרינה מהצבע, וbandpass 480/20 מסנן פליטה היה משמש לאיתור autofluorescence עורקים
3. אתר נימים למיטה על מסך התצוגה, ולהגדיל אזור זה באמצעות זום 2. תמונות רוכשים אופטיות של הנימים באמצעות תוכנת ההדמיה שני פוטונים.
4. לאחר ההדמיה תושלם, להקריב את העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם ואחריו עריפת ראש.

הדמיה 6. Ex Vivo שני פוטונים

1. שימוש במספריים עדינים נוספים, עושה חתך בקרקפת מהעצמות interparietal לעצמות הקדמיות של העכבר. אבטח את העור לצדדים של הגולגולת עם האצבע ואגודל המצביע.
2. מניחים את המספריים עדינים נוספים מתחת לעצם interparietal המדיאלי ולחתוך את הגולגולת לאורך תפר sagittal. עצור חיתוך הגולגולת כ 3 מ"מ לאחר גבחת סימון.
   הערה: החל לחץ כלפי מעלה בעת חיתוך הגולגולת כדי למנוע חיתוך המוח.
3. באמצעות 5 המלקחיים #, להפריד את הגולגולת מהמוח ובזהירות להסיר כל קרומי המוח מפני שטח של המוח. קרומי המוח שנותר בטעות יכול לקרוע את המוח; יש לנקוט זהירות רבה כדי למנוע את זה. חלק בעדינות # 5 מלקחיים תחת מוח קידום קדימה באיטיות עד המוח הוא חופשי מגולגולת.
   הערה: שלחץ כלפי מטה צריך להיות בשימוש כדי למנוע ניקוב המוח.
4. מניחים את המוח בכלי מוח חתך ספציפי לעכברים. שטוף את המוח על ידי יישום טיפות של נוזל השדרתי מלאכותי על המוח.
5. הסר סעיף העטרה 2 מ"מ של המוח מגבחת 0 עד גבחת -2. מניחים את סעיף העטרה על גבי זכוכית קעורה המכילה נוזל השדרתי מלאכותי עם גבחת 0 (רוב הגולגולת של הסעיף) פונה כלפי מעלה. בעדינות לכסות את sl המוחקרח עם להחליק את מכסה זכוכית.
   הערה: הימנע לחיצה על הזכוכית להציב פעם אחת על סעיף המוח כמו זה עלול לעוות את ארכיטקטורת כלי הדם.
6. העבר את השקופית לבמה מיקרוסקופ ומניח כמות קטנה של תמיסת מלח 0.9% על להחליק את המכסה. מנמיכים את המטרה מיקרוסקופ עד שבא במגע עם מי מלח. אתר את קו האמצע של המוח באמצעות אובייקטיבי brightfield.
7. תתחיל הדמיה שני פוטונים ולאתר את קו האמצע שוב באמצעות אובייקטיבי 25x. להשיג את זה על ידי מחפש סדק אורכי על פני השטח של קליפת המוח של סעיף העטרה. הנח את הקצה הימני של מסך ההדמיה על קו האמצע ולהעביר את המסך הצופה פני רוחבי שלוש מסגרות שלמות (כ -1.5 מ"מ מקו האמצע).
   שים לב כי בניסויים אלה, הפרמטרים ההדמיה היו זהים לאלה שהוזכרו בהערה בשלב 5.2.
8. אתר את העומק שבו נימים הן בקושי נראים על מסך התצוגה. מנמיכים את המטוס של מוקד 20 נוספיםמיקרומטר כדי לקבוע את החלק העליון של Z- המחסנית.
9. הגדר את עובי התמונה ל1 מיקרומטר. מנמיכים את מסך התצוגה של 100 מיקרומטר ולהתאים כוח הלייזר לאורך כך שפחות מ -1% של הפיקסלים הם oversaturated.
   הערה: Z- מחסנית התמונות מופקים מסדרה של תמונות מיקרומטר 100 500x500x1 רצוף. Z- מחסנית החישובים שלאחר העיבוד מדויקים יותר יהיו גדול יותר. בדרך כלל, מנסה לאסוף Z- מחסנית של 100 מיקרומטר או גדולים יותר.
10. לחץ על הסמל חזור על XY ואחריו סמל XY הסמוך. ברגע שZ- המחסנית שלמה, לחץ על סמל סדרת Done ולשמור את הקובץ.

7. עיבוד נתונים

1. פתח בvivo תמונת נימים בתוכנת ImageJ. הגדרה ידנית של פיקסל ליחס מרחק מבוסס על ערכים שהתקבלו מהתוכנה שני פוטונים.
   1. בחר את הסמל * ישר * מתפריט הכלים. צייר קו המשתרע מקיר נימים אחד לOPPOקיר נימי אתר, ולהקליט את האורך הניתן על ידי ImageJ.
      שים לב שזה עשוי להיות נחוץ כדי להגדיל את התמונה כדי להמחיש את הקצוות של קירות הנימים ברורות.
   2. חזור על שלב 7.1.1 במקומות שונים לאורך הנימים, כמו גם לנימים מרובות בתמונה.
2. פתח את קובץ Z- המחסנית לתוך התוכנה אנליטיים כגון עמירה. בחר את סמל נימת העורך מסרגל הכלים תת-היישום
   1. הגדר את עובי הצופה כ 20. העבירו את הצופה לחלק העליון או התחתון של Z- המחסנית.
   2. בחר את סמל Trace ולהזיז את הסמן מעל התמונה הטעונה. בלוטות מקום על הנימים במקומות מתוארים באיור 2 ג; מגזרים יופיעו באופן אוטומטי בין צמתים סמוכים. עקוב אחר נימים לאורך Z- המחסנית שלמה.
      הערה: יהיה צורך להציב צמתים בין נקודות קצה ונקודות סניף כדי לאתר את נימי throughout Z- המחסנית.
   3. כדי להסיר צמתים אלה, לחץ על סמל הסרת ביניים.
      הערה: זה יכול ליצור מגזרים שגויים לולאה שיש להסיר באופן ידני על ידי בחירת הלולאה באמצעות הסמל יחיד בחר, ולאחר מכן בחירה בסמל 'הסר נבחרת. אם לולאות ממשיכות להופיע באותו האזור במהלך מעקב, סביר להניח כי בלוטות הונחו על נימים שונות.
   4. ברגע שהמעקב הוא שלם, בחר את סמל גרף מידע כדי לפתוח גיליון אלקטרוני המכיל את הפרמטרים של כלי דם המופקים באופן אוטומטי. מספר צמתים והקטעים זמינים על מסך התצוגה הראשי.

Results

חלון קליפת המוח הדק-הגולגולת מאפשר בשני פוטונים הדמיה vivo של נימים בקליפת המוח (איור 1). אזור מתאים לתמונה מראה נימים רבות, שונות (איור 1 א). באותו שדה הראייה, אין קיר תא autofluorescence עורקים, וייתכן שיש אותות אחרים ניאון, כגון הקרינה קולגן, הנגרמים על ידי דור השני הרמוני ¹¹ (איור 1).

Discussion

השיטה המתוארת כאן יכולה להיות מיושמת לנתח מבני כלי דם במוח במגוון רחב של דגמים / הגדרות ניסיוניות. להצלחה של שיטה זו, שלושה שלבים קריטיים חייבים להיות משתלטים. ראשית, החלון הדק-הגולגולת אסור לפגוע בגולגולת או במוח בסיסי. זה קל לנקב את הגולגולת בדילול, או לגרום לדליפה של כלי דם חום מושרה. זה יכול להפריע הדמיה כצבע הניאון ידלוף למטוס של מוקד ולטשטש את הנימים. אם הגולגולת לעתים קרובות שוברת במהלך תקופת ההכנה דקה-גולגולת, הוא סביר ביותר הנגרם על ידי לחץ כלפי מטה גדול מדי. מחזיק תרגיל ...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
מיקרוסקופ Leica	Leica בע"מ	MZ8
תאורה בעוצמה גבוהה	דולן-ג'נר	180
כרית חימום	Stryker	TP3E
T / PUMP	Gaymar Industries, Inc.	TP-500
TEC-4 וופורייזר איזופלורן	Datex Ohmeda	447
ג'ל דמעות מלאכותי	באטלר AHS	7312
תמיסת פובידון-יוד	Aplicare	52380-1855-9
מספריים בון משובחים במיוחד	כלי מדע עדינים	14084-08
Dumot #5 מלקחיים	כלי מדע עדינים	11295-10
Dumont #5/45 מלקחיים	כלים מדעיים עדינים	11251-35
תמיסת כלוריד ברזל	Ricca Chemical Company	3120-16
Loctite 454 ג'ל דבק מיידי פריזמה	Henkel	45404
Dental Cement	Stoelting	51459
Microtoruqe II ערכת ידית	Pearson Dental	R14-0002
005 Burr for Micro Drill	Fine Science Tools	19007-05
Norland Blade (Dental Microblade)	Salvin Dental	6900
Urethane	Sigma-Aldrich	U2500	מסרטן קבוצה 2B
תפר קלוע	Ethicon	735G
Vannas מספריים אביב	כלים מדעיים עדינים	15000-03
צנתר עורקי	SAI Infusion Technologies	MAC-01	קצה הצנתר נמתח ידנית על מנת להקטין את קוטרו.
לחץ דם מוניטר	עולמי דיוק חדירות	SYS-BP1
מתמר לחץ דם וכבלים	עולם דיוק חודרות	BLPR2
RAPIDLab מנתח גזי דם	סימנס	248
40 μ l צינור נימי	VWR	15401-413
טקסס אדום-דקסטרן (70,000 מגה-וואט, 10 מ"ג/ק"ג מומס במי מלח)	Invitrogen	D-1830
Adult Brain Slicer Matrix	Zivic Instruments	BSMAS001-1
Olympus Fluoview 1000 AOM-MPM Multiphoton Microscope	Olypmus	FV-1000 MPE
MaiTai HP DeepSee Ti:Sa לייזר	ספקטרה-פיזיקה
ImageJ Software	המכונים הלאומיים לבריאות (NIH)		זמין ב-http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html
Amira Software	Visage Imaging