הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תלת ממד תרבות אלגינט חרוז של תאי אדנומה יותרת המוח האנושי

10.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53637

⸱

18 בפברואר 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology, Biophysics and Neurosciences, Center for Research and Advanced Studies (CINVESTAV-IPN), 2Department of Experimental Pathology, Nacional Institute of Neurology and Neurosurgery

במאמר זה

סיכום

תרבית תלת מימדית בחרוזי אלגינט, בשל פשטותה ויכולת השחזור שלה, נבחרה כדי לשמור על תאי אדנומה של יותרת המוח. ההליכים כללו עיכול אנזימטי ראשוני ודיסוציאציה מכנית של רקמת הגידול, והשעיית התאים שלאחר מכן נעטפה בחרוזי אלגינט.

תקציר

שיטת תרבות תלת ממדים מתוארים שבו תאי אדנומה בבלוטת יותרת מוח העיקרי מגודלי חרוזי אלגינט. אלגינט הוא פולימר נגזר אצות ים חומות. בקצרה, רקמת הגידול נחתכה לחתיכות קטנות שהוגשה לבית עיכול אנזימטי עם collagenase טריפסין. לאחר מכן, השעית תא מתקבלת. השעית התאים הסרטנית היא מעורבב עם אלגינט נתרן 1.2% וצנחה פתרון 2 CaCl, ואת השעיית אלגינט / תא בג'ל על קשר עם CaCl 2 כדי ליצור חרוזים כדוריים. התאים מוטבעים החרוזים אלגינט מסופקים עם חומרים מזינים שמספקים התקשורת והתרבות הועשר 20% FBS. תלת ממד התרבות בחרוזי אלגינט שומרת על יכולת הקיום של תאי אדנומה לתקופות זמן ארוכים, עד ארבעה חודשים. יתר על כן, התאים יכולים להיות משוחררים מן אלגינט על ידי שטיפת החרוזים עם ציטראט נתרן זרעו על coverslips זכוכית עבור ניתוחי immunocytochemical נוספת. שימוש cell מודל התרבות מאפשר קיבוע וויזואליזציה של שלד התא אקטין עם חוסר ארגון מינימלי. לסיכום, חרוזי אלגינט לספק מערכת תרבות אמינה לשמירה על תאי אדנומה בבלוטת יותרת המוח.

מבוא

פיגומים תלת ממדי נעשה שימוש נרחב ב culturing תא כי הם מספקים תמיכה מבנית תלת ממדי עבור תאים בתרבית לבין שמירה על התא אל התא תקשורת 1. באופן טבעי חומרים פולימריים נגזר שימשו לעשות תלת מימדי פיגומים כולל סוג אני קולגן, chitosan ו אלגינט. אלגינט הוא פולימר טבעי נגזר Macrocystispyrifera אצות הים החום (קלפ). פולימר זה מורכב מיחידות חוזרות של חומצה β-D-mannuronic (M) ו α-L-guluronic חומצה (G) 2 וצורות ג'לים יציבים בנוכחות קטיונים divalent מסוימים, כגון סידן בריום. פתרונות סידן כלוריד (2 CaCl) משמשים גם מגיב crosslinking ליצירת חרוזי אלגינט. פתרונות אלגינט ירדו לתוך CaCl 2 להיוצר מייד ג'לים כדורי תלת ממדי. כאשר הפתרון אלגינט הוא מעורבב עם תאים, התאים במארז לתוך b אלגינטEADS 3.

יש אלגינט נכסים אשר אפשרו לו לשמש כמטריצה ​​אנקפסולציה של מגוון תאים, כולל chondrocytes 4, myoblasts השלד 5 ותאי גזע עצביים 6. זהו חומר אינרטי ומתיר דיפוזיה של חומרים מזינים, חמצן ומוצרי מטבולית המקיימות תא הישרדות ותפקוד; יתר על כן, בניגוד למערכות תרבות אחר מבוסס ג'ל, תאים בתרבית בתוך חרוזי אלגינט יכול גם להיות משוחררת מן הפיגום באמצעות chelators סידן, כגון נתרן ציטרט, והתאים ניתן לקצור אז עבור חקירות נוספות 7.

אדנומות יותרת המוח הם בדרך כלל גידולים שפירים עם שיעורי התפשטות נמוך. שורות תאי יותרת המוח אדנומה עכברוש היו בתרבית בהצלחת מערכת דו-ממדית 8. עם זאת, התרבות זו של גידולי תא יותרת המוח אנושיים פרשה אינה פיתוח יעיל; תאי בלוטת יותרת המוח הגידול התפזרו לגדול גרועבתרבות, תאים להפגין מצורף מוגבלת והפצה, והתאים בדרך כלל בצורת אגרגטים צפה בצלחת התרבות 9,10.

מספר ניסיונות נעשו כדי לקבל השעיה תא יותרת המוח הגידול, כולל גישה האנזימטית פיזור מכני 11, גישה פיזור מכני אך ורק 12 ואת culturing של explants הגידול 10. עם גישות אלה, מחברים שונים שהשיגו תרבויות חסידות מעשיות עבור טווחים זמן שונים. הקיבולות של תאי פרשת גידול לשרוד במערכות דו ממדים אלה תלויים בסוג הגידול ושיעורי שגשוגם 9. עם זאת, בתרבויות לטווח ארוך, תאים עם פנוטיפים פיברובלסטים שולטים 11,13. המאמר זה מתאר שיטה לקבלת תרבות עיקרית מתא אדנומה בבלוטת יותרת המוח גלום חרוז אלגינט שמשחרר אותם עוד יותר מן הפיגום אלגינט המאפשר ניתוחים מפורטים שלהיבטים של הביולוגיה של התא שלהם, למשל, הסדרי cytoskeletal שלהם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה אושר לשימוש חומר אנושי ידי הוועדות מקומיות האתיות של המוסד הרפואי ואת המרכז למחקר המתקדם המחקרים של המכון הפוליטכני הלאומי.

1. רכישה במדגם גידול

  1. השג את הביופסיה רקמות יותרת המוח אדנומה מחולה באמצעות הליך כירורגי טרנס-sphenoidal 14.
  2. אסוף המדגם יותרת המוח אדנומה ולמקם אותו לתוך בקבוק זכוכית סטרילית המכילה 50 מ"ל של מדיום תרבות 199 טריים (M199) מועשר 10% בסרום שור העובר (FBS), 0.6 מ"ג / סודיום ביקרבונט מ"ל, 2.4 מ"ג / מ"ל ​​HEPES ו -1% אנטיביוטיקה (פניצילין / סטרפטומיצין) ב- pH 7.4. לשמור על המדגם בבקבוק זכוכית על קרח.
    הערה: רקמת הגידול ניתן לעבד מספר שעות לאחר הניתוח.
  3. הובלה במדגם הגידול למעבדה בבקבוק הזכוכית על קרח.

2. הכנת פתרונות דיסוציאציה רקמות אנזימתי, אתפתרון מעכב טריפסין ואת הפתרונות אלגינט

הערה: לפני תחילת ההליך תרבית תאים להכין את הפתרונות הבאים. לסנן את כל הפתרונות באמצעות מסנן הממברנה 0.22 מיקרומטר, לפני השימוש.

  1. כן פתרון collagenase 1% על ידי המסת 5 מ"ג collagenase (סוג I) ב 5 מיליליטר של חינם M199-סרום.
  2. הכן טריפסין פתרון 0.01% על ידי המסת 0.01 גרם של טריפסין ב 10 מ"ל של 0.3% PBS-EDTA.
  3. כן פתרון מעכב 0.1% טריפסין על ידי המסת 2 מ"ג של מעכבי טריפסין סויה ב 20 מיליליטר של חינם M199-סרום.
  4. הכן פתרון DNAse ידי המסת 20 μl של DNAse אני 134 U / מ"ל ​​ב 4 מ"ל של הפתרון מעכב טריפסין.
  5. הכן פתרון EGTA (1.2 M) על ידי המסת 22.8 מ"ג של EGTA ב 40 מ"ל של 155 מ"מ NaCl. התאם את ה- pH ל -7.4. המשך לנפח סופי של 50 מ"ל.
  6. הכן פתרון HEPES (20 מ"מ) על ידי המסת 238 HEPES מ"ג ב 50 מ"ל של 155 מ"מ NaCl.
  7. כן פתרון אלגינט 1.2% על ידי המסת 1.2אלגינט נתרן גרם ב 100 מ"ל של פתרון HEPES. חיטוי הפתרון אלגינט.
  8. כן פתרון סידן (102 מ"מ) על ידי המסת 750 מ"ג של CaCl 2 ב 50 מ"ל פתרון HEPES, כדי להתאים את pH 7.4

Encapsulation תרבות אלגינט 3. תא ראשוני

  1. בתוך בארון זרימה למינרית, למקם את רקמת הגידול בצלחת פטרי 35 מ"מ המכיל כ 20 מ"ל של PBS Ca 2 + ו Mg 2+ חינם, pH 7.4 (PBS *).
  2. קח את הרקמה עם פינצטה כירורגית ולמקם אותו עוד צלחת פטרי המכיל * PBS טרי, לשטוף בעדינות את הרקמה. חזרו על שלב זה עד כדוריות הדם האדומות ופסולת יוסרו.
  3. באמצעות פינצטה כירורגית, להחזיק את רקמת אדנומה בבלוטת יותרת המוח, ועם מספרי כירורגיות קטנים, לחתוך אותו לחתיכות קטנות. עם פיפטה פסטר עם קצוות מעוגלים, להעביר את שברי הרקמה ואת PBS * לתוך צינור 15 מ"ל, צנטריפוגה ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT.
    הערה: כדי לעגל את הקצוות של פסטרפיפטה, להבה קצה במקצת של פיפטה עם מבער בונזן.
  4. הסר את PBS * בעזרת פיפטה פסטר להוסיף 3-5 מ"ל של תמיסת collagenase (כ 5 מ"ל במשך 65 מ"מ 3 של רקמות), לערבב פעמיים עד שלוש פעמים על ידי היפוך. דגירת רקמות collagenase למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס רוטציה קבועה.
  5. צנטריפוגה הצינור ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT ולהסיר את collagenase עם פיפטה פסטר.
  6. הוסף 5 מ"ל של DNAse ומערבבים פעמיים עד שלוש פעמים על ידי היפוך, ואז צנטריפוגות את הצינור ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT.
    הערה: אם הרקמה לא ניתק לחלוטין, לבצע עיכול אנזימטי השני עם טריפסין במשך 3 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. עצור את מערכת העיכול על ידי תוספת של 2 כרכים של פתרון מעכב טריפסין.
  7. לשאוב supernatant עם פיפטה פסטר וזורקים. Re- להשעות גלולה ב 1 עוצמת הקול של פתרון EGTA ומערבבים עם 2 כרכים של פתרון אלגינט.
  8. בעדינות מערבבים את ההשעיה תא אלגינטעל ידי pipetting עם פיפטה פסטר. קח מזרק סטרילי עם מחט 21 G, להסיר את הבוכנה; להשתמש פיפטה לטעון את המזרק עם הפתרון אלגינט ותא.
  9. הכנס בעדינות את הבוכנה לתוך המזרק בזהירות לוותר פתרון תאי אלגינט טיפה אחר טיפה לתוך כוס זכוכית המכיל כ 30 מיליליטר של הפתרון העשיר בסידן.
  10. מניחים את המחט של המזרק כ 5 ס"מ עד הפתרון 2 CaCl. הג'לים ההשעיה אלגינט תאים על קשר עם CaCl 2 כדי ליצור חרוזים כדוריים. שמור את החרוזים אלגינט בפתרון סידן במשך 5 דקות.
    הערה: מערבב את כוס הזכוכית שבו החרוזים מושמטים. הזז את זה לאט עם היד בתנועות מעגליות, כדי למנוע מהם להידבק זה לזה.
  11. מוציאים בזהירות את הפתרון סידן עם פיפטה פסטר, ולשטוף את החרוזים פעמיים עם 3-5 מ"ל של M199 מועשר 20% FBS.
  12. מעביר את חרוזי אלגינט לתוך בתרבית רקמה T25 רגילהבקבוקון בעזרת מרית סטרילי, להוסיף 4-5 מ"ל של M199 מועשר FBS 20% וטופחו על 37 מעלות צלזיוס חממה humidified עם 5% CO 2. שנה את המדיום תרבות מדי יום שלישי.

4. לשחרר תאים מן אלגינט

הערה: לפני שחרור תאים מן החרוזים אלגינט, coverslips מ"מ קוטר מעיל 13 עם פולי- D- ליזין.

זהירות: גופרתי חומצה הוא מאכל מאוד חומצה, APTS יכול לגרום EYE ועור גירוי. יש להשתמש בכפפות גומי כדי בהודעות האלה חומרים כימיים.

  1. במנדף, עם פינצטה נקודת לטבול את coverslips בצלחת פטרי זכוכית המכילים חומצה גופרתית מימית 20% במשך שעה 1 ב RT.
  2. למזוג חומצה גופרתית, ולשטוף את coverslips חמש פעמים עם מים מזוקקים במשך 5 דקות כל אחד. באמצעות מקום פינצטה נקודת את coverslips נקי בצלחת פטרי המכילה 0.1 M NaOH במשך 5 דקות ב RT 15.
  3. למזוג NaOH ולשטוף פעם אחת עם לזקקמים הוביל, לשאוב את המים ולייבש את coverslips.
  4. השתמש micropipette כדי לצפות את coverslips עם APTS (aminopropyl-triethoxysilane) למשך 4 דקות (השתמש 500 μl עבור 6 coverslips) להציף את צלחת פטרי עם מים מזוקקים. במהירות לשאוב מים ולהמשיך לשטוף עם מים מזוקקים, הזזת coverslips עם פינצטה נקודת לאפשר למים לחדור מתחת.
  5. לשאוב מים ולייבש את coverslips, באמצעות מקום פינצטה נקודת את coverslips לתוך צלחת פטרי נקי לעקר אותם בתוך מיקרוגל במהלך 3 פעמים, 45 שניות כל אחד. להוסיף 1,000 μl של מים סטריליים עד 100 מיקרוגרם של פולי- D- ליזין (0.1 מ"ג / מ"ל).
  6. דגירה coverslips עם כ 50 μl של D- ליזין פולי במשך 5 דקות ב RT. לשאוב D- ליזין פולי לחלוטין.
    הערה: זה חשוב כי מסיסי פולי- D- ליזין במדיום תרבות יכול לעכב התפשטות תאים.
  7. שוטפים את coverslips חמש פעמים עם מים סטריליים עבור 5 דקות כל אחד. לשאוב stמי erile ולאפשר coverslips להתייבש בתוך בארון זרימה למינרית.
  8. כדי לנתח את cytoskeleton אקטין, לשחרר את תאי בלוטת יותרת המוח מן אלגינט. קח כמה חרוזים אלגינט מהבקבוק התרבות באמצעות קצה פיפטה 1 מ"ל ולהכניס אותם לתוך צינור 15 מ"ל.
  9. הוסף 5 מ"ל של נתרן ציטרט 55 מ"מ (לפזר 323.6 מ"ג של Na 3 C 6 H 5 O 7, 2 H 2 O ב 20 מ"ל HEPES פתרון) צנטריפוגות ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT. לשאוב supernatant וזורקים.
  10. Re- להשעות גלולה ב 1 מ"ל של חם M199 מועשר 20% FSB; מערבבים את ההשעיה תא בעדינות עם פיפטה פסטר.
    זהירות: phalloidin ו DAPI רעיל. יש להשתמש בכפפות לטפל אלה חומרים כימיים.
  11. כדי לספור את התאים, להעביר 125 μl של פתרון כחול 0.4% Trypan לצינור 1.5 מ"ל. הוסף 75 μl של M199 ו -50 μl של השעיה התא המתקבל בשלב האחרון (גורם לדילול = 5). מערבבים היטב.
  12. השתמש קצה micropipette כדי Placדואר כ 10 μl של השעיה כחולות תאי Trypan בתא hemocytometer.
  13. ספירת תאים שכנגד hemocytometer באמצעות מיקרוסקופ הפוכה עם תאורת שלב ניגודיות. לספור את כל התאים בכיכר במרכז 1 מ"מ וארבעה 1 מ"מ ריבועים בפינה. השג את צפיפות התאים למיליליטר ידי הכפלת ספירת הממוצע לכל מ"ר על ידי גורם לדילול -. 10 4 לדוגמה אם ספירת הממוצע לכל מ"ר הוא 45 תאים x 5 x 104 = 2.25 x 106 תאים / מ"ל.
    הערה: ספירת תאים בעשרה ריבועים של חדר hemocytometer. אל תסמוך תאי נגיעה בקו אמצעי בתחתית ובצד ימין.
  14. זרע 35,000 תאים על 13 מ"מ קוטר זכוכית coverslips מכוסה פולי- D- ליזין.

הסדר 5. יקטינו נוגדנים

  1. לאחר 48 שעות בתרבות, להסיר את המדיום תרבות עם פיפטה פסטר ובמהירות להוסיף 500 μl לכל coverslip של PBS, להסיר באופן מיידי את PBS.
  2. תיקון ו permeabilize tהוא התאים עם 500 μl לכל coverslip של חיץ קיבעון (0.1 M צינורות, pH 6.75, 4% PEG-6000, 1 מ"מ EGTA, 1 מ"מ MgSO 4, 0.5% Triton X-100 ו -2% פורמלדהיד) במשך 10 דקות ב 37 מעלות C
  3. הסר את חוצץ קיבעון ולהוסיף 500 μl לכל coverslip של paraformaldehyde 3.5% ב PBS במשך 30 דקות ב RT. הסר את הפתרון paraformaldehyde.
  4. שטפו את coverslips שלוש פעמים על ידי הוספת 500 μl לכל coverslip של PBS במשך 5 דקות כל אחד. שוטפים את coverslips ב RT, ב תסיסה מתמדת.
  5. דגירה התאים עם אמוניום כלוריד 50 מ"מ במשך 10 דקות, לשאוב את הפתרון אמוניום כלוריד וחזור על שלב 5.4.
  6. דגירת התאים עם 1% BSA (IgG-חינם, פרוטאזות-חינם) ב PBS למשך 30 דקות, להסיר את פתרון BSA וחזור על שלב 5.4.
  7. דגירה התאים עם 50 מיקרומטר של phalloidin rhodamine מצומדות עבור 7 דקות ב RT, חזור על שלב 5.4.
  8. דגירה התאים עם 255 מיקרומטר של DAPI מדולל PBS במשך 5 דקות ב RT, חזור על שלב 5.4. לבסוף הר tהוא coverslips עם הרכבה בינונית ולאטום אותם עם לק.
  9. לרכוש תמונות של הסדרים cytoskeletal אקטין באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר confocal עם מטרה 63X, באורך גל עירור 541 ננומטר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פרוטוקול זה יושם בהצלחה בתרבות ותחזוקה של תאי בלוטת יותרת המוח אדנומה בחרוזים אלגינט לתקופות זמן שונות איור 1 מציג תאים מוטבע חרוזים אלגינט לאחר שלושה חודשים.; תאים אלה להציג דו-שבירת צורות מעוגלות תחת מיקרוסקופ אור הפוך (איור 1). תרשים 2 מציגים את הלוקליזציה של N-cadherin בתאים אדנומה בבלוטת יותרת מוח עכברוש המוטבע אלגינט. N-cadherin הוא מקומי על קשר תאי תאים (איור 2 א ו 2...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה יש כמה שלבים קריטיים. הראשונה היא ההומוגניות גודל חרוז, אשר נדרש כדי לשמור על אותם תנאים של דיפוזיה של חומרים מזינים וגזים בכל תרבית תאים. מניסיוננו, שימוש במחט G 21 לעשות את החרוזים אלגינט מאפשר לרכישת תרבות יעילה של גודל חרוז אחיד. הגורם החשוב השני הוא המרחק בין המחט; המרחק זה חייב להיות לא יותר מ 5 סנטימטרים מהפתרון סידן להימנע פנינים מעוותות תאים מתים בשל ההתנגשות של הנחל של פתרון אלגינט / תא עם פני שטח של פתרון סידן. שלב קריטי שלישי הוא ערבוב הזכוכית שבו החרוזים מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

אנו מודים למר א. ריוס על עזרתו הטכנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>ריאגנט 
199 מדיום תרבות Invitrogen 31100-027לתרבות, לחמם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש 
סרום בקר עוברי PAAA15-751
נתרן ביקרבונט (NaHCO<תת>3)Merck106329
N-(2-הידרוקסיאתיל) פיפרזין-N´-2אתנסולפונית חומצה (HEPES)סיגמא H-4034
פניצילין/סטרפטומיציןPAAP11-010
PBS (מי מלח חוצץ פוספט של Dulbecco)Invitrogen 21600-044
קולגנאז סוג Iוורת'ינגטון4176
טריפסין Invitrogen 27250-018
אתילנדיאמין-טטראצטי חומצה (EDTA)Research Organics3002E
מעכב טריפסין סורבי Invitrogen 17075-029
DNAseWorthington2139
חומצה אלגינית, מ- Macrocystis pyrifera (קלפ)סיגמא A-2158
סידן כלורי (CaCl2)J.T. Baker1332
נתרן ציטראט (Na3C6H5O7)J.T. Baker3646
Piperazine-N,N′-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES)Research Organics9624P
פוליאתילן גליקול 6000 (PEG 6000)Calbiochem528877
אתילן גליקול חומצה טטראצטית (EGTA)Research Organics9574E
מגנזיום סולפט (MgSO4)J.T. Baker2500
Triton-X 100SigmaX100
פורמלדהידJ.T. Baker2106
ParaformaldehydeSigmaP6148
אמוניום כלוריד (NH<תת>4Cl)J.T. Baker660
BSA בקר סרום אלבומין ללא IgGJackson Immuno Research001-000-161
Phalloidin– טטרמתילרודמין B איזותיוציאנטסיגמאP1951רעיל. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה 
4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד (DAPI)אינוויטרוגן D1306רעיל. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה 
חומצה גופרתית (H2SO4)J.T. Baker9681קורוזיבית מאוד. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה 
נתרן הידרוקסיד (NAOH)Merck1.06498עלול לגרום לגירוי בעיניים ובעור. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה 
(3-אמינופרופיל)טריאתוקסילן (APTS)סיגמאA-3648
פולי-די-ליזין הידרוברומידסיגמאP7280
תמיסה כחולהטריפאן סיגמאT8154 
<שם>חזק    <חזק>חברה  <חזק>מק"ט  תגובות
ציוד  רעיל: עלול לגרום לסרטן. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה 
מסובב Boekel Scientificדגם 230300
צנטריפוגהDuPont Corporation דגם שייקר סורוול TC6
 מכשירי קו מעבדהדגם 314-820 

מקורות

  1. Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. Hydrogels as Extracellular Matrix Mimics for 3D Cell Culture. Biotechnol. Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).
  2. Amsden, B., Turner, N. Diffusion characteristics of calcium alginate gels. Biotechnol. Bioeng. 65 (5), 605-610 (1999).
  3. Andersen, T., Strand, B., Formo, K., Alsberg, E., Christensen, B. Alginates as biomaterials in tissue engineering. Carbohydrate chemistry. Rauter, A. P., Lindhorst, T. K. Vol. 37, Royal Society of Chemistry. 227-258 (2012).
  4. Jonitz, A., et al. Differentiation capacity of human chondrocytes embedded in alginate matrix. Connect. Tissue. Res. 52 (6), 503-551 (2011).
  5. Hill, E., Boontheekul, T., Mooney, D. J. Designing scaffolds to enhance transplanted myoblast survival and migration. Tissue. Eng. 12 (5), 1295-1304 (2006).
  6. Purcell, E. K., Singh, A., Kipke, D. R. Alginate composition effects on a neural stem cell-seeded scaffold. Tissue. Eng. Part. C. Methods. 15 (4), 541-550 (2009).
  7. Wee, S., Gombotz, W. R. Protein release from alginate matrices. Adv. Drug. Deliv. Rev. 31 (4), 267-285 (1998).
  8. Tashjian, A. H. Jr Clonal strains of hormone-producing pituitary cells. Methods. Enzymol. 58, 527-535 (1979).
  9. Fasekas, I., et al. Characterization of human pituitary adenomas in cell cultures by light and electron microscopic morphology and immunolabeling. Folia. Histochem. Cytobiol. 43 (2), 81-90 (2005).
  10. Kohler, P. O., Bridson, W. E., Rayford, P. L., Kohler, S. E. Hormone Production by Human Pituitary Adenomas in Culture. Metabolism. 18 (9), 782-788 (1969).
  11. Kletzkky, O. A., Marrs, R. P., Rundall, T. T., Weiss, M. H., Beierle, J. W. Monolayer and suspension culture of human prolactin-secreting pituitary adenoma. Am. J. Obstet. Gynecol. 138 (6), 660-664 (1980).
  12. Melmed, S., Odenheimer, D., Carlson, H. E., Hershman, J. M. Establishment of functional human pituitary tumor cell cultures. In Vitro. 18 (1), 35-42 (1982).
  13. Thompson, K. W., Vincent, M. M., Jensen, F. C., Price, R. T., Schapiro, E. Production of hormones by human anterior pituitary cells in serial culture. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 102 (2), 403-408 (1959).
  14. Cappabianca, P., Cavallo, L. M., Solari, D., Stagno, V., Esposito, F., de Angelis, M. Endoscopic endonasal surgery for pituitary adenomas. World neurosurg. 82 (6 Suppl), S3-S11 (2014).
  15. Aplin, J. Model Matrices for Studing Cell Adhesion. Measuring cell adhesion. Curtis, A. S. G., Lackie, J. M. , John Wiley & Sons. 110-111 (1991).
  16. Guiraud, J. M., et al. Human prolactin-producing pituitary adenomas in three-dimensional culture. In. Vitro. Cell. Dev. Biol. 27 (3), 188-190 (1991).
  17. Ma, H. L., Hung, S. C., Lin, S. Y., Chen, Y. L., Lo, W. H. Chondrogenesis of human mesenchymal stem cells encapsulated in alginate beads. J. Biomed. Mater. Res. A. 64 (2), 273-281 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תלת ממד תרבות אלגינט חרוז של תאי אדנומה יותרת המוח האנושי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.