הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

רצף של הצמח קיר Heteroxylans שימוש enzymic, כימית (מתילציה) הפיזיקליים (ספקטרומטריית מסה, תהודה מגנטית גרעינית) טכניקות

7.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53748

⸱

24 במרץ 2016

 ,  , 
1ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences, University of Melbourne

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר את הטכניקות הספציפיות המשמשות לאפיון מבני של רצפי גליקוזיל מפחיתים (RE) ואזור פנימי של הטרוקסילנים על ידי תיוג ה-RE עם 2 אמינובנזמיד לפני הידרוליזה אנזימטית (אנדוקסילאנאז) ולאחר מכן ניתוח של האוליגוסכרידים המתקבלים באמצעות ספקטרומטריית מסה (MS) ותהודה מגנטית גרעינית (NMR).

תקציר

פרוטוקול זה מתאר את הטכניקות הספציפיות משמשות לאפיו של צמצום הסוף (RE) ורצף glycosyl באיזור הפנימי (ים) של heteroxylans. קירות התא חיטה האנדוספרם-מעומלנים דה בודדו כמו שאריות אלכוהול מסיס (AIR) 1 ברצף חילוץ עם מים (W-סול ו') ו 1 M KOH המכיל 1% 4 NaBH (Koh-סול ו') כפי שתואר על ידי ראת'נייקה et al. (2014) 2. שתי גישות שונות (ראו סיכום באיור 1) יאומצו. בחלק הראשון, ללא פגע W-סול AXS מטופלים עם 2AB לתייג את שאריות סוכר שרשרת עמוד שדרת RE המקוריות ולאחר מכן שטופל endoxylanase כדי ליצור תערובת של RE 2AB שכותרתו באיזור הפנימי הפחתת אוליגוסכרידים, בהתאמה. בגישה השנייה, Koh-סול ו'הוא הידרוליזה עם endoxylanase לייצר הראשון תערובת של אוליגוסכרידים אשר מסומנים ובהמשך עם 2AB. שוחרר enzymically ((un) מתויג) אוליגוסכרידים משניפ-ו FRS-סול KOH אז הם מפוגל בניתוח מבני מפורט של שני אוליגוסכרידים יליד מפוגל מתבצע באמצעות שילוב של MALDI-TOF-MS, RP-HPLC-ESI-QTOF-MS ו- ESI-MS n. Endoxylanase מתעכל KOH-סול AXS מאופיינים גם על ידי תהודה מגנטית גרעינית (NMR) כי גם מספק מידע על תצורת anomeric. ניתן ליישם טכניקות אלה לשיעורים אחרים של סוכרים באמצעות אנדו-hydrolases המתאים.

מבוא

Heteroxylans הם משפחה של סוכרים כי הם סוכרים שאינם מתאית השולט של הקירות העיקרי של עשבים הקירות משני של כל מכוסי הזרע 3-6. על גבותיהם xylan נבדלים סוגים שלהם ואת דפוסי התחלופה עם glycosyl (חומצה גלוקורונית (GlcA), arabinose (עראף)) והלא-glycosyl (O-אצטיל, חומצה ferulic) שאריות בהתאם לסוג הרקמה, השלב ההתפתחותי ומינים 7.

חומות מחיטה האנדוספרם (Triticum aestivum L.) מורכבים בעיקר של arabinoxylans (AXS) (70%) ו- (1 → 3) (1 → 4) -β-D-glucans (20%) עם כמויות קטנות של תאית heteromannans (2% כל אחת) 8. עמוד השדרה xylan עשוי להיות שונות בלתי להחליף ו בעיקר מונו מחליפים (בעיקר O-2 עמדה ובמידה פחותה O-3 עמדה) ו di-להחליף (O-2 ו- O-3 עמדות) עם α-L-ערה f שאריות 9. סוף הצמצום (RE) של הטרוxylans מ dicots (למשל, thaliana ארבידופסיס) 10 ו חשופי הזרע (למשל, אשוחית (אַשׁוּחַ Picea)) 11 מכיל רצף glycosyl tetrasaccharide מאפיין; -β-D-Xyl p - (1 → 3) -α-L-RHA p - (1 → 2) -α-D-גל p A- (1 → 4) -D-Xyl p. כדי להבין heteroxylan ביוסינתזה ותפקוד (ביולוגי ותעשייתיים), חשוב שממפה את עמוד השדרה xylan מלא להבין את סוגי ואת דפוסי החלפות וכן רצף של סוף צמצום (RE).

טכניקות ספציפיות משמשות לאפיו המבניים של צמצום הסוף (RE) ורצף glycosyl באיזור הפנימי (ים) של heteroxylans מתוארות בכתב היד הזה. הטכניקות להסתמך על fluorophore תיוג (עם 2 aminobenzamide (2AB)) את צמצום סוף (RE) של שרשרת heteroxylan לפני הידרוליזה אנזימטית (endoxylanase). גישה זו, במיוחד עבור רצף RE, היהדיווח לראשונה על ידי מעבדת יורק 10,12-13 אך מוארך בשלב זה לכלול את הרצף באזור הפנימי הוא שילוב של טכניקות נקבעו כי ניתן להתאמה לכל במידה שווה heteroxylans העצמאית של מקור בידודם. גישה זו יכולה לחול גם על סוגים אחרים של סוכרים אלקטרוניים (בהתאם היצע) את אנדו-hydrolases המתאים.

במחקר הנוכחי, קירות התא האנדוספרם חיטה מעומלנים דה בודדו כמו שאריות אלכוהול מסיס (AIR) ברצף חילוץ עם מים (W-סול ו') ו 1M KOH המכיל 1% 4 NaBH (Koh-סול ו') כמתואר ב ראת'נייקה et al. (2014) 2. אוליגוסכרידים שוחררו משני פ-ו FRS-סול KOH אז הם מפוגלים בניתוח המבנים המפורט של שני אוליגוסכרידים היליד המפוגלים מתבצע באמצעות שילוב של MALDI-TOF-MS, ESI-QTOF-MS מצמיד עם HPLC עם הפרדת chromatographic באינטרנט באמצעות טור RP C-18ו ESI-MS n. Endoxylanase מתעכל KOH-סול AXS אופיינה גם תהודה מגנטית גרעינית (NMR).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. תוויות של סוף צמצום (RE) שאריות סוכר של AXS W-סול עם 2-aminobenzamide (2AB)

  1. דגירה W-סול AXS עם 2AB (0.2 M) בנוכחות של 1 M NaBH 3 CN (נתרן cyanoborohydride) (pH 5.5) עבור שעה 2 ב 65 מעלות צלזיוס כדי להמיר את הקצוות צמצום של הרשתות עמוד השדרה פוליסכריד לנגזרות הניאון שלהם.
    זהירות: הצעד הבא צריך להתבצע במנדף כמו NaBH 3 CN משחרר גז ציאניד רעיל כאשר הוא בא במגע עם מים.
    1. תשקלי NaBH 3 CN (62.8 מ"ג) ו להתמוסס במים (1 מ"ל) בצינור microcentrifuge (1.5 מ"ל) כדי להכין פתרון 1 M NaBH 3 CN. ממיסים מגיב 2AB (27.2 מ"ג) ב 1 M NaBH 3 פתרון CN (1 מ"ל) על ידי חימום על 65   מעלות צלזיוס ולהתאים את ה- pH של תערובת התגובה (0.2 M 2AB, 1 M NaBH 3 CN) ל -5.5 pH עם 10% חומצה אצטית.
    2. הוסף 200 μl של תערובת התגובה (0.2 M 2AB, 1 M NaBH 3 CN) ל W-כךAXS l (1 מ"ג) בתוך שפופרת זכוכית עם מכסה ומערבבים בעזרת מערבל מערבולת. דגירה עבור שעה 2 ב 65   ° C במנדף. מצננים את ההשעיה RT ולהוסיף 4 כרכים. של אתנול אבסולוטי.
    3. מניחים את ההשעיה בתוך בקירור (4 מעלות צלזיוס) O / N כדי לזרז סוכרים.
    4. צנטריפוגה (1,500 XG, 10 דקות, RT) כדי להסיר supernatant. שטפו את הכדור בהרחבה עם אתנול אבסולוטי (4x), אצטון (1x) מתנול (1x), צנטריפוגה בין כל שטיפה. יבש אבק ב 40 ° CO / N.
      הערה: כביסה נרחבת גם מסירה 2AB שיורית.

דור 2. Xylo-אוליגוסכרידים מ 2 AB Labelled W-סול AXS

  1. ממיסים 2AB שכותרתו W-סול AXS (1 מ"ג) ב 500 μl של חיץ נתרן אצטט (100 מ"מ, pH 5) בצינור microcentrifuge (1.5 מ"ל). להוסיף 4 יחידות של endoxylanase (11 GH, [M1]) ו לדגור על 37   ° C במשך 16 שעות.
  2. להשמיד פעילות האנזים על ידי חימום mixt התגובהיור במשך 10 דקות באמבט מים רותחים. מצננים את ההשעיה RT ולהעביר שפופרת זכוכית עם מכסה. הוסף 4 כרכים. של אתנול אבסולוטי ומניחים ההשעיה בתוך בקירור (4 מעלות צלזיוס) O / N כדי לזרז כל סוכרים מעוכלים.
  3. צנטריפוגה (1,500 XG, 10 דקות, RT) להפריד סוכרים מעוכלים (גלולה) ואת endoxylanase שנוצר-אוליגוסכרידים Xylo (supernatant). למזוג supernatant לתוך צינור זכוכית נקי ומניחים אותו לתוך אמבט מים חמים (40 מעלות צלזיוס).
  4. לאדות את אתנול תחת זרם של גז חנקן נפח נקודת הסיום (~ 500 μl). להקפיא את supernatant ב -80 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות ולייבש את supernatant קפוא בתוך מייבש הקפאת להתאושש-אוליגוסכרידים Xylo.

דור 3.-אוליגוסכרידים Xylo מ- Koh-סול AXS ו תוויות 2AB

  1. פנקו KOH-סול AXS עם endoxylanase (11 GH, [M1]) כדי ליצור-אוליגוסכרידים Xylo כמתואר לעיל (סעיפים 2.1-2.4).
  2. פנקו endoxylanase שנוצר-אוליגוסכרידים Xylo מ- Koh-סול AXS עם תערובת התגובה 2AB (0.2 M 2AB, 1 M NaBH 3 CN) כמתואר לעיל (סעיפים 1.1.1-1.1.2).
  3. למזוג supernatant לתוך צינור זכוכית נקי ומניחים אותו לתוך אמבט מים חמים (40 מעלות צלזיוס). לאדות את אתנול תחת זרם של גז חנקן נפח נקודת הסיום (~ 500 μl). להקפיא את supernatant ב -80 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות ולייבש את supernatant קפוא בתוך מייבש הקפאת להתאושש-אוליגוסכרידים Xylo.

4. MALDI-TOF-MS

  1. הכנת פתרון MALDI-מטריקס
    1. הוספת סקופ קטן של 2, חומצה 5-dihydroxbenzoic (DHB) 50 אצטוניטריל% (500 מ"ל) המכיל חומצה פורמית 0.1% בתוך שפופרת (פתרון MALDI-מטריקס). מערבבים בעזרת מערבולת, אם זה מתמוסס מהר, להוסיף עוד סקופ קטן של DHB. הערה: ריכוז אידיאלי של פתרון MALDI-מטריקס הוא 10 מיקרוגרם / μl -1.
  2. הכנת פלייט MALDI-היעד
    1. להפקיד את aqueoלנו oligosaccharide (מקורי) דגימות (5-10 מיקרוגרם) (W-סול ו / או Koh-סול) לצלחת MALDI-היעד. להוסיף 0.3 μl פתרון MALDI-מטריקס באמצעות קצה נפרד ומערבבים ידי pipetting למעלה ולמטה. אפשר לתערובת להתייבש ב RT.
      הערה: דגימות מיובשות כראוי צריכות להיות מורכבות של גבישי מחט בצורה ארוכים מצביעים לכיוון המרכז של המקום. אם הפיקדון הוא דביק ו / או מרווח המדגם יכול להיות מרוכז מדי או מורכב של מלחים, פיקדונות כאלה צפויים לייצר ספקטרה טובה המדגם צריך להיות מטוהרים נוספים.
    2. הצג את צלחת היעד למקור MS ולהפעיל במצב יון חיובי (+ ive). התאם את המתח המאיץ 19.0 ק ו ב יון מקור 1 ו 16.3 ק במקור יון 2. התאם את כוח הליזר כדי יותר מ -70%. בחר את המקום מדגם על הצלחת MALDI-היעד ולחץ על התחל כדי להתחיל יריות לייזר.
      הערה: כל תחומי היעד לא יניבו אותות. בנקודה מסוימת יהיה רק ​​לתת איתות במשך כמה יריות לייזר או בשלדלדול של תערובת מדגם / מטריקס או מאפיינים של הגביש.
      1. הזז את הליזר לאזורים שונים של היעד במהלך הרכישה ממוצעת כ 200 ספקטרה אקראי לקבל אות לרעש משביעת רצון.

5. ESI-QTOF-MS

  1. לנתח אוליגוסכרידים שנוצר endoxylanase (מקורי) באמצעות-HPLC ננו בשילוב עם יינון electrospray (ESI) זמן quadrupole של מחווני טיסה (QTOF) MS עם הפרדה chromatographic באינטרנט באמצעות RP C-18 טור (75 מיקרומטר x 150 מ"מ; 3.5 מיקרומטר חרוז גודל).
    1. מעביר את תערובת אוליגוסכרידים מימיים שנוצר endoxylanase לתוך בקבוקון ולמקם לתוך סמפלר האוטומטי HPLC. לתכנת את שיפוע elution של 5-80% עם שלבים ניידים 0.1% (v / v) חומצה פורמית במים ו -0.1% (v / v) חומצה פורמית ב אצטוניטריל, בהתאמה, מעל 60 דקות.
    2. התאם את קצב הזרימה 0.2 μl / min. כיוון המצב החיובי היון בטווח הסריקהשל 300-1,600 מ '/ z ו-קצב סריקה של 0.5 סריקות / שני באמצעות תנאי מקור ESI כדלקמן: גז וילון 10, 4 GS1, מקור טמפרטורת 100 מעלות צלזיוס, מתח ספריי יון 2,300 V, ודה-clustering פוטנציאל 50 V. הפעל את תוכנית chromatographic LC ו אוליגוסכרידים elute. הכרומתוגרמה יון הכולל כתוצאה (TIC) נשמר באופן אוטומטי על ידי התוכנה.
    3. פתח את TIC הציל ובחר הכרומתוגרמה לחלץ. הקלד את ההמונים הצפויים (למשל, 271, 403, 535, 667, 799 ו 931 מ '/ z) על שורת הפקודה. הכרומתוגרמה סריקה על ידי לחיצה על Enter. לעבד את סריקות יון הנבחרים הנתונים הכרומתוגרמה ESI-QTOF MS באמצעות תוכנה על פי הוראות היצרן 14.

6. ESI-MS n

  1. הכנס 1 עד 2 μl של oligosaccharide שידורי O-מפוגל (מפוגל כפי שתואר על ידי Pettolino et al. 1) מדגם ב אצטוניטריל 50% לתוך טיפ nanospray באמצעות מזרק. מְטוּפָּחקצה ננו-ספריי באמצעות חתכי זכוכית להשתלב בעל ננו-ספריי הדיסקרטיים מצורף MS.
  2. הגדר את המונית על פי הטווח המוני הצפוי (200-1,500 מ '/ z) וילון הגז ל -10, מתח ionspray ב 1,900 V ו- הקוטבי לחיובי.
  3. לחץ על לחצן לרכוש לפתוח חלון רלוונטי, זן שם קובץ נתונים להשיג סריקת יון כוללת (ESI-MS 1). ואז ללחוץ על כפתור STOP.
  4. שנה את סוג הסריקה מתוך יון המוצר לפצל לשיא של עניין. הזן את המסה של עניין (למשל, 885 מ '/ z) להתפרק לרסיסים להתאים את טווח המוני (200-900 מ' / z). לחץ על לחצן לרכוש ולהתאים את אנרגית ההתנגשות (מעלה / או למטה בכרטיסייה דריבית) כדי להשיג פיצול שלם של יון הורה (885 מ '/ z) ולרכוש סריקת יון שבר (2 ESI-MS).
  5. הזן את מסתו של יון שבר של עניין (למשל, 711 מ '/ z) ולהתאים את טווח המוני (200-720 מ' / z). לחץ על כפתור הרכישהd להתאים את אנרגית ההתנגשות להשיג פיצול שלם של יון מבשר (711 מ '/ z) ולרכוש סריקת יון שבר (ESI-MS 3).

ספקטרוסקופיה 7. H 1 NMR

  1. ממיסים תערובת שנוצר endoxylanase של אוליגוסכרידים (Koh-סול, טופס מקורי) (~ 500 מיקרוגרם) ב D 2 O (1.0 מ"ל, 99.9%) בצינור פלסטיק הבדיקה (15 מ"ל). להקפיא את ההשעיה ב -80 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות ולייבש את ההשעיה הקפואה בתוך מייבש הקפאה להתאושש-אוליגוסכרידים Xylo.
  2. חזרו על 7.1 פעמים כדי במלואה להחליף את H 2 O עם D 2 O.
  3. ממיסים אוליגוסכרידים מיובש D 2 O (0.6 מ"ל, 99.9%) ולהוסיף 0.5 μl של אצטון (5% ב O D 2) כסטנדרט פנימי. מעביר את אוליגוסכרידים deuterated לתוך צינור מדגם NMR.
  4. החזק את המדגם המכיל צינור NMR ידי העליון והכנס את צינור המדגם טווה פלסטיק. מניחים את טווה את מד עומק המדגם. מוּגלָהh או למשוך את הצינור המדגם כדי לכוונן את העומק של המדגם כדי להבטיח את קו האמצע של העליון המדגם ומדידי עומק תחתונים שווה.
  5. הסר את מד העומק והכנס את המדגם לתוך סמפלר האוטומטי המצורפת ספקטרומטר תמ"ג 600 MHz מצויד חללית-קריו.
  6. התחברות תוכנות שליטת ספקטרומטר פתוחה. הזן את שם הקובץ לדוגמה. פתח במערך קיים ולאחר מכן להשתמש בפקודה "EDC" כדי לשמור אותו תחת שם חדש. הקלד את העמדה מספרת את הדוגמא סמפלר האוטומטי ולחץ "ENTER".
    הערה: לחיצה על כפתור ה "ENTER" ירד הצינור מדגם בעדינות כדי השחלת המגנט איפה זה יהיה ממוקם בחלק העליון של החללית.
  7. הגדר את הטמפרטורה מדגם הרצוי על ידי הקלדת "edte" בשורת הפקודה. חכה הטמפרטורה מדגם להגיע לערך הרצוי לפני שתמשיך לשלב הבא. זן "לנעול" בשורת הפקודה ובחר ממס מתאים (D 2 O). חכה & #34; לנעול הודעה מוגמרת "להופיע בתחתית החלון.
  8. הקלד "atmm" בשורת הפקודה ולחץ על "מטב" בחלק העליון של סרגל התפריטים atmm. בחר להתחיל כוונון והתאמה של החללית עבור הערוץ הנבחר (1 H במקרה זה).
  9. הקלד "topshim" בשורת הפקודה לתהליך shimming שבו שינויים קלים נעשים השדה המגנטי עד שדה מגנטי אחיד מושגת סביב sample.Acquire האות על ידי הקלדת "ZG" בשורת הפקודה והזן.
  10. לנתח ספקטרום באמצעות תוכנה 15 על פי הוראות היצרן עם המשמרת כימית 1 H פנייה אל תקן פנימי של אצטון ב 2.225 ppm.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עיכול Endoxylanase של 2AB שכותרתו W-סול AXS מייצר תערובת של אוליגוסכרידים RE שכותרתו 2AB וסדרה שכותרתו האו"ם (ללא תווית 2AB) אוליגוסכרידים נגזרו האזורים הפנימיים של שרשרת xylan (איור 1; מ ראת'נייקה et al. 2). סדרת גישות chromatographic מועסקת ואז fractionate מהתערובת המורכבת של איזומרים. לבסוף, טכניקות MS מנוצלים כדי לזהות את המבנים isomeric כי הם רצף אז על ידי MS n טכניקות. כאן אנו מציגים נצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

רוב שלב מטריקס סוכרי דופן התא החליפו לכאורה באקראי עמוד שדרה (בשני glycosyl ושאריות שאינם glycosyl) כי הם מאוד משתנים בהתאם מיני צמחים, שלב ההתפתחותי ורקמות סוג 3. מאז סוכרים הם מוצרים משניים גן הרצף שלהם אינו תבנית נגזר ולכן אין גישה אנליטית יחידה, כגון קיימת עבור חומצות גרעין וחלבונים, עבור הסידור שלהם. הזמינות של אנזימים hydrolytic הצמדה ספציפי מטוהרים סיפקה כלי רב עוצמה כדי לבזות סוכרים כדי אוליגוסכרידים, כי אז יכול להיות chromatographically מופרדים, וכאשר נעשה שימו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין לנו מה לחשוף.

תודות

פרויקט זה נתמך על ידי כספים מתוכנית הדגל למחקר שיתופי של ארגון המדע והמחקר של חבר העמים הבריטי, שסופקה לאשכול הדגנים עתירי הסיבים באמצעות ספינת הדגל של Food Futures. AB גם מודה על תמיכתו במענק של מועצת המחקר האוסטרלית (ARC) למרכז המצוינות של ARC בדפנות תאי צמחים (CE110001007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2 אמינובנזמיד (2AB)סיגמא-אולדריץ' (www.sigmaaldrich.com)A89804
נתרן בורוהידריד (NaBH<תת>4)סיגמא-אולדריץ' (www.sigmaaldrich.com)247677מסוכן, יש לטפל בזהירות
בנתרן ציאנובורוהידריד (NaBH<תת>3CN)סיגמא-אולדריץ' (www.sigmaaldrich.com)156159מסוכן, לטפל בזהירות
אנדו-1,4-ובטא;-קסילנאז M1 (מופק מ-Trichoderma viride) (120101a)מגה-זים (www.megazyme.com)E-XYTR1
תחמוצת דאוטריום (D2O)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)151882
מייבש בהקפאה (CHRIST-ALPHA 1-4 LD plus)
RP C18 Zorbax eclipse plus column אג'ילנט (2.1 ופעמים; 100 מ"מ; 1.8 ומיקרו; גודל חרוז M) 
מיקרופלקס MALDI-TOF MS    (דגם - MicroFlex LR)(Bruker Daltonics, גרמניה)
(ESI) -(QTOF) MS    (דגם # 6520)(אג'ילנט, פאלו אלטו, קליפורניה )
ESI-MSn  - מלכודת יונים  (דגם # 1100 HCT)(אג'ילנט, פאלו אלטו, קליפורניה).
Bruker Avance III 600 מגה-הרץ -NMRBruker Daltonics, גרמניה
Topspin (גרסה 3.0)-Biospin- תוכנה ברוקר 
GC-MS (דגם # 7890B)Agilent 

מקורות

  1. Pettolino, F. A., Walsh, C., Fincher, G. B., Bacic, A. Determining the polysaccharide composition of plant cell walls. Nature Protocols. 7, 1590-1607 (2012).
  2. Ratnayake, S., Beahan, C. T., Callahan, D. L., Bacic, A. The reducing end sequence of wheat endosperm cell wall arabinoxylans. Carbohydr. Res. 386, 23-32 (2014).
  3. Bacic, A., Harris, P. J., Stone, B. A. The Biochemistry of Plants, Vol. 14, Carbohydrates. Preiss, J. 14, Academic Press. San Diego. 297-371 (1988).
  4. York, W. S., O'Neill, M. A. Biochemical control of xylan biosynthesis - which end is up? Plant Biol. 11, 258-265 (2008).
  5. Fincher, G. B. Revolutionary times in our understanding of cell wall biosynthesis and remodeling in the grasses. Plant Physiol. 149, 27-37 (2009).
  6. Faik, A. Xylan Biosynthesis: News from the Grass. Plant Physiol. 153, 396-402 (2010).
  7. Scheller, H. V., Ulskov, P. Hemicelluloses. Annu. Rev. Plant Biol. 61, 263-289 (2010).
  8. Bacic, A., Stone, B. A (1→3)- and (1→4)-linked β-D-glucan in the endosperm cell-wall of wheat. Carbohydr. Res. 82 (13), 372-377 (1980).
  9. Comino, P., Collins, H., Lahnstein, J., Beahan, C., Gidley, M. J. Characterisation of soluble and insoluble cell wall fractions from rye, wheat and hull-less barley endosperm flours. Food Hydrocolloids. 41, 219-226 (2014).
  10. Pena, M. J., et al. Arabidopsis irregular xylem8 and irregular xylem9: Implicationsfor the Complexity of Glucuronoxylan Biosynthesis. Plant Cell. 19, 549-563 (2007).
  11. Andersson, S. I., Samuelson, O., Ishihara, M., Shimizu, K. Structure of the reducing end-groups in Spruce xylan. Carbohydr. Res. 111, 283-288 (1983).
  12. Mazumder, K., York, W. S. Structural analysis of arabinoxylans isolated from ball-milled switchgrass biomass. Carbohydr. Res. 345, 2183-2193 (2010).
  13. Kulkarni, A. R., et al. The ability of land plants to synthesize glucuronoxylans predates the evolution of tracheophytes. Glycobiol. 22 (2012), 439-451 (2012).
  14. Agilent MassHunter Workstation Software - Quantitative Analysis Familiarization Guide. , Agilent Technologies. Available from: http://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3335_90061_Quant_Familiarization-EN.pdf (2010).
  15. Topspin User Manual. , Bruker. Available from: http://www.nmr.ucdavis.edu/docs/user_manual_topspin_ts30.pdf (2010).
  16. Domon, B., Costello, C. E. A systematic nomenclature for carbohydrate fragmentation in FAB-MS/MS spectra of glycoconjugates. Glycoconjugate. J. 5, 397-409 (1988).
  17. Hoffmann, R. A., Leeflang, B. R., De Barse, M. M. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H-n.m.r. spectroscopy of oligosaccharides, derived from arabinoxylans of white endosperm of wheat, that contain the elements ----4)[alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1---- or ----4)[alpha- L-Araf-(1----2)][alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1----. Carbohydr. Res. 221, 63-81 (1991).
  18. Gruppen, H., Hoffmann, R. A., Kormelink, F. J. M., Voragen, A. G. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H NMR spectroscopy of enzymically derived oligosaccharides from alkali-extractable wheat-flour arabinoxylan. Carbohydr. Res. 233, 45-64 (1992).
  19. Kosik, O., Bromley, J. R., Busse-Wicher, M., Zhang, Z., Dupree, P. Studies of enzymatic cleavage of cellulose using polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis (PACE). Methods Enzymol. 510, 51-67 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ריצוף הטרוקסילאןטיפול באנדוקסילנאזסימון 2ABאנליזת MALDI-TOF-MSRP-HPLC-ESI-QTOF-MSאנליזת ESI-MSnספקטרוסקופיית NMRמתילציה של אוליגוסכרידיםאפיון פוליסכרידיםריצוף גליקנים
רצף של הצמח קיר Heteroxylans שימוש enzymic, כימית (מתילציה) הפיזיקליים (ספקטרומטריית מסה, תהודה מגנטית גרעינית) טכניקות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.