מאמר שיטה

מרת אפיגנטיים כאמצעי בטוח ופשוט להשיג תאי מפרישי אינסולין פיברובלסטים עור בוגרים

DOI:

10.3791/53880

⸱

18 במרץ 2016

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Biomedical Embryology, Unistem, Centre for Stem Cell Research, Università degli Studi di Milano

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן מוצגת שיטה חדשה המאפשרת המרה של פיברובלסטים בעור בוגרים לתאים המפרישי אינסולין. טכניקה זו מבוססת על המרה אפיגנטית, אינה כרוכה בשימוש בווקטורים רטרו-ויראליים או ברכישת מצב פלוריפוטנטי יציב. לכן זה מבטיח מאוד עבור יישומי רפואה תרגומית.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רפואה רגנרטיבית דורשת תאים חדשים ומתפקדים לחלוטין המועברים לחולים על מנת לתקן רקמות מנוונות או פגומות. כאשר תאים כאלה אינם זמינים, ניתן להשיג אותם באמצעות גישות שונות הכוללות, בין הרבות, תכנות מחדש וטרנס-דיפרנציאציה, עם יתרונות ומגבלות ספציפיים לטכניקות השונות. כאן מתוארת אסטרטגיה חדשה להמרה של פיברובלסטים בוגרים לתא מפריש אינסולין, המוגדר באופן שרירותי כתאים מומרים אפיגנטיים (EpiCC). השיטה פותחה על בסיס ההבנה הגוברת של המנגנונים השולטים בוויסות אפיגנטי של גורל התא והתמיינותו. בפרט, הצעד הראשון משתמש במשנה אפיגנטי, כלומר 5-aza-cytidine, כדי להניע תאים בוגרים למצב "מתירני מאוד". לאחר מכן הוא מנצל את החלון הקצר וההפיך הזה של פלסטיות אפיגנטית, כדי לפנות מחדש לתאים לעבר שושלת אחרת. הגישה מכונה "המרת תאים אפיגנטיים". זוהי דרך פשוטה וחזקה להשיג מתג בין-שושלת סלולרי יעיל, מבוקר ויציב. מכיוון שהפרוטוקול אינו כרוך בשימוש בטרנספקציה של גנים כלשהם, הוא נקי מווקטורים ויראליים ואינו כרוך במצב פלוריפוטנטי יציב, הוא מבטיח מאוד עבור יישומי רפואה תרגומית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מטרה בסיסית של רפואה רגנרטיבית הוא הדור של תאים חדשים, פונקציונלי, שניתן להשתמש בהם כדי לתקן או להחליף פגום, הידרדר רקמות. Remaking תאי בוגרים זמינים בקלות לתוך חדש, על ידי המרה אותם סוג תא אחד למשנו, היא גישה במיוחד מושכת, במיוחד כאשר אוכלוסיית התא הנדרשת אינה שופעת או קשה לגישה. עם זאת, תאים בוגרים הם יציב להפליא. הם רוכשים מדינת הבדיל שלהם באמצעות הגבלה הדרגתית האפשרויות שלהם, ברגע שהם מגיעים התמחות המסוף הבוגרת, הם ביציבות לשמור אותו 1.

בשנים האחרונות במספר הפרוטוקולים פותחו, המאפשרות תכנות מחדש מגוונת" של תא סומטי (שב"ס) מושג באמצעות הביטוי הכפוי של סט של שעתוק גורמי 2,3. לחלופין, מרת תא ניתן להשיג על ידי transdifferentiation שושלת הישיר, מציגה אחת 4 p> או שילוב של שעתוק גורמי 5-7. אסטרטגיה זו אינה כרוכה במעבר דרך מדינת בדיל-דה אבל דורשת ביטוי גבוה של השעתוק הספציפי גורמי 8.

פתחנו לאחרונה פרוטוקול המרה המבוסס על החשיפה הקצרה של תאי בוגרי מאפייני demethylating של-azacytidine 5 cytidine האנלוגי (5-עז-CR), מעכב methyltransferase DNA היטב מאופיין. הצעד demethylation ומיד אחריו פרוטוקול התמיינות ספציפית 9-11 המאפשר להשיג את הפנוטיפ מסוף נדרש. שיטה זו היא מסוגלת להמיר תאים בוגרים, בדיל לתוך תאים של באים ממשפחות שונות ויש לו את היתרון המשמעותי כדי למנוע הוא את שימוש וקטורים ויראליים ואת transfection של כל גורמי שעתוק אקסוגניים. הרכישה של מדינת pluripotent יציבה, ואת הרגישות המוגברת הקשורים לתא חוסר יציבות הוא נמנע גם.

"Jove_content"> הפרוטוקול המפורט מאפשר המרה של פיברובלסטים עור אנושיים בוגרים לתאי אינסולין מפריש מתפקדים במלואה מוצג כאן. עם זאת, ראוי לציין כי הטכניקה יושמה תאים מסוגים שונים יצרה תוצאות חיוביות, כאשר הם פונים תאים כלפי מסלולי בידול שונים. יתר על כן, מרת אפיגנטיים נוצלה בעבר בהצלחת המין האנושי חזירי 9-13 וכן את הכלב (כתב יד) שנמסר המצביע על יעילות וחוסנם רחבות של הגישה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערה: כל הנהלים המתוארים להלן חייב להתבצע מתחת למכסה המנוע זרימה למינרית בתנאים סטריליים. ודא כי כל הליכי התרבות מבוצעים על במות נשלטו תרמוסטטית ותאים נשמרים על 37 מעלות צלזיוס לאורך כל הטיפול שלהם.

1. עור בידוד פיברובלסטים

  1. כן פתרון ציפוי בצלחת תרבות
    1. ממיסים 0.1 גרם ג'לטין חזירי 100 מ"ל מים (הריכוז הסופי 0.1%). לעקר פתרון עם חיטוי.
    2. הוסף 1.5 מ"ל של ג'לטין חזירי 0.1% סטרילי עד 35 מ"מ צלחות פטרי. חכה 2 hr המעיל, שמירה אותם בטמפרטורת החדר.
      הערה: ביופסיות עור האדם נאספים על ידי כריתה בהרדמה מקומית מאזור avascular של ההיבט הקדמי של האמה ומאוחסנים בופר פוספט של Dulbecco (PBS) בתוספת 2% פתרון antimycotic אנטיביוטי ב +4 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
  2. ביופסיות לשטוף עם PBS החדש בתוספת 2% antibiפתרון antimycotic otic.
  3. ביופסיות מקום בצלחת פטרי 100 מ"מ וחותכים כ 2 מ"מ 3 שברים עם אזמלים סטרילית.
  4. להסיר את עודפי פתרון הציפוי מייד לפני הציפוי שבר.
  5. מניחים 5-6 שברי העור לתוך צלחת פטרי מראש מצופה 35 מ"מ.
  6. הכן בינוני תרבות פיברובלסטים: 77% בינוני הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) גלוקוז גבוהה, 20% בסרום שור העובר (FBS), 1% פתרון L-גלוטמין ו -2% פתרון antimycotic אנטיביוטי.
  7. להוסיף טיפה של המדיום פיברובלסטים על כל שבר (בדרך כלל 100 μl לכל שבר) ותרבות אותם על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2.
  8. לאחר 24 שעות, להוסיף 500 μl של מדיום התרבות פיברובלסטים על שברי לשמור אותם רטובים על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2.
  9. שינוי המדיום עם טפטפת לפחות פעם בכל 48 שעות.
  10. לאחר 6 ימים של דגירה, להסיר שברי רקמה בזהירות וזורק אותן.
    הערה: לאחר 6 ימים, פיברובלסטיםתתחיל לצמוח מתוך שברי הרקמה ולהתחיל לגבש בשכבת תא.
  11. רענן בינונית, מוסיפים 2 מ"ל של מדיום תרבות פיברובלסטים ולהמשיך תרבות monolayer תא ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 באינקובטור.

2. פיברובלסטים תרבות

  1. פיברובלסטים תרבות על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 עד מפגש 80%
  2. לקבלת passaging, מדיום התרבות פיברובלסטים לשאוב מן המנות בתרבית רקמה. שטפו תאים שלוש פעמים עם 4 מ"ל של PBS השלימו עם פתרון antimycotic אנטיביוטי 1%.
  3. הוספת שכבה דקה (10% של נפח בינוני תרבות) של פתרון טריפסין-EDTA (טריפסין 0.5 גר '/ ל חזירי ו -0.2 גרם / EDTA L) ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס עד monolayer התא מתחיל להתנתק התחתון של הרקמה צלחת ותאי תרבות לנתק.
  4. לדלל השעית תא עם 9 חלקים של מדיום התרבות פיברובלסטים לנטרל פעולת טריפסין. צנטריפוגה אין צורך.
  5. פלייט תאים במנות תרבות חדשה (עםמתוך ג'לטין) ותרבות ב 37 מעלות צלזיוס CO 2 באינקובטור 5%. שמור את היחס המעבר בין 1: 2 ו -1: 4, תלוי בקצב הצמיחה.
  6. כאשר התאים מגיעים סביב 80% המפגש, מעבר להם (בדרך כלל פעמיים בשבוע).

3. ציפוי פיברובלסטים לגיור אפיגנטיים

  1. להוסיף 0.26 מ"ל / 2 ס"מ של 0.1% ג'לטין חזירי (להכין כמתואר 1.1) מנות תרבית תאים. חכה 2 hr כדי המעיל.
  2. הסר את הדקות עודפות 10-30 פתרון ציפוי לפני הציפוי פיברובלסטים.
  3. הסר בינוני תרבות פיברובלסטים מן הכלים תרבות. שטפו תאים שלוש פעמים עם PBS בתוספת פתרון antimycotic אנטיביוטי 1%.
  4. הוספת שכבה דקה (10% של נפח בינוני תרבות) של פתרון טריפסין-EDTA (טריפסין 0.5 גר '/ ל חזירי ו -0.2 גרם / EDTA L) ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס עד monolayer התא מתחיל להתנתק התחתון של הרקמה צלחת ותאי תרבות לנתק.
  5. לדלל השעית תא עם 9 חלקים של fibroblמדיום תרבות אס לנטרל פעולת טריפסין.
  6. ספירת תאים באמצעות תא ספירה תחת מיקרוסקופ בטמפרטורת החדר. חשב את נפח הנדרש בינוני תרבות פיברובלסטים כדי resuspend תאים, כדי להשיג ריכוז התא של 7.8 x 10 4 פיברובלסטים / 2 ס"מ. זה יהיה תלוי בסוג מסוים של תא בשימוש.
    תאים / μl = מספר ממוצע של תא לכל רשת קטנה x 90 (מקדם הכפלה) דילול x
  7. צנטריפוגה ההשעיה התא ב 150 גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. הסרת תאי supernatant ו resuspend עם הנפח מחושב בעבר של מדיום התרבות פיברובלסטים.
  8. פלייט תאים על מנות מצופות מראש ג'לטין 0.1% ותרבות אותם למשך 24 שעות על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 באינקובטור.

4. פלסטי תא גדל שימוש הסוכן דה-methylating 5-העז-CR

  1. יום 0
    1. כן פתרון מניות של 5 עזה-CR ידי המסת 2.44 מ"ג של 5-עז-CR ב 10 מיליליטר של Medi גלוקוז DMEM הגבוהאממ. לעקר על ידי סינון. כן מניית 5-העז-CR מייד לפני השימוש.
    2. לדלל 1 μl של 5-עזה-CR פתרון המניות ב 1 מ"ל של מדיום תרבות פיברובלסטים (מיקרומטר 1 הריכוז הסופי).
    3. כדי להגדיל פלסטיות התא, 24 שעות לאחר ציפוי התא (משנה 3.8), להסיר בינוני תרבות מן פיברובלסטים זורעים ולהוסיף 1 מיקרומטר 5-עזה-CR פתרון המניות ותרבות במשך 18 שעות ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 באינקובטור.
  2. יום 1
    1. כן פלוריפוטנטיים אדם טרי (HP) בינוני כמתואר בטבלה 1.
    2. לאחר דגירה עם 1 מיקרומטר 5-עז-CR, להסיר בינוניים לשטוף תאים שלוש פעמים עם PBS על מנת להבטיח כי 5-עז-CR הוא שטף משם.
    3. דגירת fibroblasts מטופלים 5-עז-CR עם מדיום HP עבור 3 שעות (תקופת החלמה) על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2.
    4. לאחר תקופת ההחלמה, להסיר בינוני, לשטוף שלוש פעמים עם PBS.
    5. כדי לפקח על היעילות של טיפול 5-עזה-CR, לבדוק ב f שלב זהאו נוכחות של שינויים מורפולוגיים (כמפורט בסעיף תוצאות). תאים מאבדים את המורפולוגיה המוארכת הטיפוסית של פיברובלסטים ולרכוש עגול או צורת אליפסה, הופכים קטן יותר, עם גרעינים מוגדלים.
    6. המשך עם בידול הלבלב.

5. פרוטוקול בידול הלבלב

  1. ימים 1-6
    1. כן לבלב בסל בינוני כמתואר בטבלה 2.
    2. הכן Activin פתרון המניות: להמיס 5 מיקרוגרם של Activin חלבון אנושי רקומביננטי 166.6 μl של מים סטריליים.
    3. תרבות 5-עזה-CR מטופלים הפיברובלסטים 0.26 מ"ל / 2 ס"מ של הלבלב בסל בינוני, בתוספת 1 ​​μl / מ"ל Activin פתרון המניות (ראה 5.1.2) במשך 6 ימים ב 37 מעלות צלזיוס חממה 5% CO 2. שינוי יומי בינוני.
  2. ימים 7-8
    1. הכן פתרון המניות החומצה הרטינואית ידי הוספת 16.6 מ"ל של sulfoxide דימתיל (DMSO) עד 50 מ"ג של ACI רטינואיתד.
    2. התרבות תאים ב 0.26 מ"ל / 2 ס"מ של הלבלב בסל בינוני בתוספת 1 ​​μl / מ"ל Activin פתרון המניות (ראה 5.1.2) ו 1 μl / פתרון מניות החומצה הרטינואית מ"ל (ראה 5.2.1) עבור 2 ימים ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2. שינוי יומי בינוני.
  3. ימים 9-36
    1. התרבות תאים ב 0.26 מ"ל / 2 ס"מ של הלבלב בסל בינוני בתוספת 1% (v / v) אינסולין-transferrin-סלניום (ITS), 2% (v / v) B27 ו -0.1% (v / v) רקומביננטי אנושי FGF בסיסיים (bFGF) פתרון המניות (ראו טבלה 1) על 37 מעלות צלזיוס באינקובטור 5% CO 2. שינוי המדיום יומי במשך 15 הימים הראשונים.
    2. מהיום 16 ואילך, לרענן בינוני בכל יום אחר, תחת מיקרוסקופ, מאז ביצירת כדוריות המצרפי יכול לנתק מתחתית מנת התרבות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הקמת התרבות העיקרית ביופסיות עור
ביופסיות עור נחתכו שברים קטנים והניחו במנות ג'לטין מצופים מראש. לאחר 6 ימים, פיברובלסטים התחילו לצמוח מתוך שברי הרקמה ויצרו monolayer תא (איור 1 א). תאים הראו צורה מאורכת טיפוסית, כצפוי, הפגינו חיסונית-חיוביות אחידה vimentin הסמן הספציפי פיברובלסטים (Vim, איור 1B).

שינויים מורפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב היד הנוכחי מתארת ​​שיטה מאפשרת המרה של פיברובלסטים עור אנושיים לתוך תאים מייצרי אינסולין, באמצעות חשיפה חולפת וקצרה עד 5-עז-CR, ואחריו פרוטוקול אינדוקצית רקמות ספציפי. גישה זו מאפשרת מעבר מ mesoderm לתאים הקשורים endoderm, ללא ביטוי בכפייה של גורמי שעתוק או מיקרו-רנ"א ולא רכישת מדינה pluripotent יציבה, כי גורם לתאים יותר יציבים ונוטים טעויות 14.

בשלב הראשון, פלסטיות תא הוא גדלו בזכות צירוף סינ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי קרן Carraresi והאירופי קרן לחקר הסוכרת (EFSD). GP הוא נתמך על ידי מענק פוסט-דוקטורט מאוניברסיטת מילאנו. הכותבים הם חברי פעולת COST FA1201 Epiconcept: סביבת אפיגנטיקה Periconception ואת פעולת COST BM1308 שיתוף מקדם על מודלים של בעלי חיים גדולים (סלאם). טאלב הוא חבר ביולוגית עלות פעולת CM1406 אפיגנטיים הכימי (EPICHEM).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
SigmaD5652PBS של Dulbecco; לשטיפת תאים והכנת תמיסה
אנטיביוטית תמיסה אנטי-מיקוטיתSigmaA5955רכיב של פיברובלסטים, HP ומדיה לבלב
100 מ"מ צלחת פטריSarstedt83.3902לבידוד פיברובלסטים
ג'לטין חזירSigmaG1890לציפוי כלים
WaterSigmaW3500להכנת תמיסה
35 מ"מ צלחות פטריSarstedt83.39לבידוד פיברובלסטים
DMEM, גלוקוז גבוה, פירובטLife Technologies41966052למדיום תרבית פיברובלסטים
Fetal BovineSerum Life Technologies10500064FBS; רכיב של תמיסת L-גלוטמין של פיברובלסטים ומדיה של HP
SigmaG7513רכיב של פיברובלסטים, HP וחומרי לבלב
תמיסת טריפסין-EDTASigmaT3924לדיסוציאציה של פיברובלסטים
KOVA GLASSTIC SLIDE 10 עם רשתותHycor Biomedical87144ספירת תאים
5-AzacytidineSigmaA23855-aza-CR, עבור תא increrase פלסטיות בפיברובלסטים
F-10 Nutrient MixLife Technologies31550031של Ham עבור
טכנולוגיות חיים של HP בינוני, גלוקוז נמוך, פירובטLife Technologies31885023 עבור HP
בינוני KnockOut SerumReplacement Life Technologies10828028רכיב של HP
medium MEM Non-Essential Amino Acids SolutionLife Technologies11140035רכיב של HP וחומרי הדפסה בזאליים של הלבלב
2-מרקפטואתנולSigmaM7522רכיב של HP וחומרי הדפסה בזאליים של הלבלב
GuanosineSigmaG6264רכיב מלאי תערובת נוקלאוזיד של HP
medium AdenosineSigmaA4036רכיב מלאי תערובת נוקלאוזידים של HP medium
CytidineSigmaC4654Nucleoside mix component של HP medium
UridineSigmaU3003רכיב מלאי תערובת נוקלאוזידים של HP
בינוני ThymidineSigmaT1895רכיב מלאי תערובת נוקלאוזיד של HP
בינוני Millex-GS 0,22 ומיקרו; mMilliporeSLGS033SBלעיקור תמיסה
FGF-Basic (AA 1-155) Recombinant Human ProteinLife TechnologiesPHG0261bFGF; רכיב של HP ומדיום בסיסי
אלבומיןסיגמאA3311BSA; רכיב של מדיום בסיסי
לבלב DMEM/F-12Life Technologies11320074עבור מדיום בסיסי לבלב
תוסף B-27 מינוס ויטמין ALife Technologies12587010רכיב של מדיום הלבלב
N-2 תוסףLife Technologies17502048רכיב של מדיום בסיסי לבלב
Activin A רקומביננטי חלבוןאנושי Life TechnologiesPHG9014עבור מדיום הלבלב
חומצה רטינואיתSigmaR2625עבור מדיום הלבלב
דימתיל סולפוקסידSigmaD2650DMSO; להכנת מלאי חומצה רטינואית
Insulin-transferrin-SeleniumLife Technologies41400045ITS; עבור נוגדן אנטי-וימנטין בינוני סופי בלבלב
 Abcamab8069לאנליזה אימונוציטוכימית. דילול עבודה 1:100
4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochlorideSigma32670DAPI. לניתוח אימונוציטוכימי. דילול עבודה  1 ומיקרו; גרם/מ"ל
5-מתילציטידיןEurogentecMMS-900P-Bלאנליזה אימונוציטוכימית. דילול עבודה 1:500
נוגדן פפטיד Anti-C Abcamab14181לאנליזה אימונוציטוכימית. דילול עבודה 1:100
נוגדן נגד PDX1 Abcamab47267לאנליזה אימונוציטוכימית. דילול עבודה 1:500
אינסולין Mercodia ELISAMercodia10-1113-10לזיהוי שחרור אינסולין
פוספט חוצץ מלח בקר

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhou, Q., Brown, J., Kanarek, A., Rajagopal, J., Melton, D. A. In vivo reprogramming of adult pancreatic exocrine cells to beta-cells. Nature. 455 (7213), 627-632 (2008).
  2. Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126 (4), 663-676 (2006).
  3. Takahashi, K., et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 131, 861-872 (2007).
  4. Davis, R. L., Weintraub, H., Lassar, A. B. Expression of a single transfected cDNA converts fibroblasts to myoblasts. Cell. 51 (6), 987-1000 (1987).
  5. Vierbuchen, T., et al. Direct conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors. Nature. 463 (7284), 1035-1041 (2010).
  6. Caiazzo, M., et al. Direct generation of functional dopaminergic neurons from mouse and human fibroblasts. Nature. 476, 224-227 (2011).
  7. Huang, P., et al. Induction of functional hepatocyte-like cells from mouse fibroblasts by defined factors. Nature. 475, 386-389 (2011).
  8. Marro, S., et al. Direct Lineage Conversion of Terminally Differentiated Hepatocytes to Functional Neurons. Cell Stem Cell. 9 (4), 374-382 (2011).
  9. Pennarossa, G., et al. Brief demethylation step allows the conversion of adult human skin fibroblasts into insulin-secreting cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (22), 8948-8953 (2013).
  10. Pennarossa, G., et al. Reprogramming of Pig Dermal Fibroblast into Insulin Secreting Cells by a Brief Exposure to 5-aza-cytidine. Stem Cell Rev. 10 (1), 31-43 (2014).
  11. Brevini, T. A., et al. Morphological and Molecular Changes of Human Granulosa Cells Exposed to 5-Azacytidine and Addressed Toward Muscular Differentiation. Stem Cell Rev. 10 (5), 633-642 (2014).
  12. Thoma, E. C., et al. Chemical conversion of human fibroblasts into functional Schwann cells. Stem Cell Reports. 3 (4), 539-547 (2014).
  13. Mirakhori, F., Zeynali, B., Kiani, S., Baharvand, H. Brief azacytidine step allows the conversion of suspension human fibroblasts into neural progenitor-like cells. Cell J. 17 (1), 153-158 (2015).
  14. Plath, K., Lowry, W. E. Progress in understanding reprogramming to the induced pluripotent state. Nat Rev Genet. 12 (4), 253-265 (2011).
  15. Taylor, S. M., Jones, P. A. Multiple new phenotypes induced in 10T1/2 and 3T3 cells treated with 5-azacytidine. Cell. 17 (4), 771-779 (1979).
  16. Glover, T. W., Coyle-Morris, J., Pearce-Birge, L., Berger, C., Gemmill, R. M. DNA demethylation induced by 5-azacytidine does not affect fragile X expression. Am J Hum Genet. 38 (3), 309-318 (1986).
  17. Do, J. T., Scholer, H. R. Nuclei of embryonic stem cells reprogram somatic cells. Stem Cells. 22 (6), 941-949 (2004).
  18. Niwa, H. How is pluripotency determined and maintained? Development. 134 (4), 635-646 (2007).
  19. Kahan, B. W., et al. Pancreatic precursors and differentiated islet cell types from murine embryonic stem cells: an in vitro model to study islet differentiation. Diabetes. 52 (8), 2016-2024 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

5 aza cytidineActivin AITS B27 BFGSPDX1 CPEP

מאמרים קשורים