מאמר שיטה

בידוד נייד phenotyping של בתאי גזע mesenchymal נגזר הסינוביאלי נוזל מח עצם של Minipigs

DOI:

10.3791/54077

⸱

2 ביולי 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Veterinary Medicine, Gyeongsang National University, 2PWG Genetics Pte Ltd.

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוצג פרוטוקול המבסס תאי גזע מזנכימליים (MSCs) המבודדים מהנוזל הסינוביאלי וממח העצם של מיני-חזירים ונאספים באופן לא פולשני באמצעות שאיבת מזרק. פנוטיפ תאי בוצע באמצעות זרימה ציטומטרית לאחר בידוד תאים וגידול במבחנה של מח עצם ונוזלים סינוביאלים שמקורם ב-MSCs.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תאי גזע מזנכימליים (MSCs) הוקמו לאחר בידוד ממקורות רקמה שונים, כולל מח עצם ונוזל סינוביאלי. לאחרונה דווח על MSCs שמקורם בנוזל סינוביאלי כבעלי פוטנציאל התמיינות רב-שושלת ותכונות אימונומודולטוריות, מה שמצביע על כך שניתן להשתמש בתאים אלה להנדסת רקמות וטיפולים מערכתיים. מחקר זה מציג פרוטוקול לבידוד פשוט ולא פולשני של MSCs שמקורם במח העצם ובנוזל הסינוביאלי של מיני-חזירים לניתוח סמני פני התא לפנוטיפ תאים ותרבות חוץ גופית. באמצעות מיני-חזירים בוגרים מינית בני שישה חודשים, מח עצם חולץ מעצם פסגת הכסל באמצעות מחלץ מח עצם, והנוזל הסינוביאלי נשאב ממפרק הירך. נהלי איסוף הדגימות משני המקורות לא היו פולשניים. ניתנים הפרוטוקולים לבידוד יעיל של MSCs ממקורות תאים שנקטפו וליצירת תנאי תרבית במבחנה להרחבת MSCs יציבים ממיני-חזירים ויישום טיפולים אוטולוגיים מערכתיים. עבור פנוטיפ תאים, סמני פני התא של שני התאים נותחו באמצעות ציטומטריית זרימה. בתוצאות, ה-MSCs בודדו מהנוזל הסינוביאלי של המיני-חזירים והראו כי ל-MSCs שמקורם בנוזל סינוביאלי יש מורפולוגיה ופנוטיפ תאים דומים ל-MSCs שמקורם במח העצם. לכן, נוזל סינוביאלי שהושג באופן לא פולשני הוא מקור יקר ערך ל-MSCs.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניתן לסווג תאי גזע מזנכימליים רב-פוטנטיים (MSCs) לשושלות תאים מזנכימליים, ו-MSCs הוקמו ובודדו ממקורות רקמה שונים, כגון ממח עצם, חבל הטבור, שליה, רקמת שומן, עור עור, שרירי שלד, זקיקי שיער, ממברנות סינוביאליות ושיניים1-5. נכון לעכשיו, תשומת לב ניתנה ל-MSCs שמקורם בסינוביאלים מכיוון שתאים אלה עשויים לסייע בטיפול במחלות מפרקים, כגון שבר עצם, דלקת מפרקים ניוונית ודלקת מפרקים שגרונית (RA), ובשל פוטנציאל ההתחדשות של MSCs בסחוס או בעצם פגומים, הם עשויים לסייע גם בטיפול במודולציה חיסונית או במחלות אוטואימוניות6-8. רוב המחקר של MSCs שמקורם במקורות סינוביאלים השתמש ב-MSCs מהממברנה הסינוביאלית ולא מהנוזל הסינוביאלי2,9; לפיכך, ההבנה הביולוגית של MSCs שמקורם בנוזל סינוביאלי מוגבלת.

נוזל סינוביאלי הוא מקור נגיש ל-MSCs, אותו ניתן לשאוב במהלך אבחונים או טיפולים בחולים ובמהלך אישורי אבחון של מצבי דלקת מפרקים שונים שאינם דורשים הליכים פולשניים, כגון דלקת מפרקים ניוונית או דלקת מפרקים שגרונית. אוכלוסיית MSCs שמקורם בנוזל סינוביאלי בחלל הסינוביאלי גדלה באופן משמעותי בחולים עם דלקת מפרקים בהשוואה לחולים שאינם חולי מפרקיםבגילאי 10-12. לכן, נוזל סינוביאלי הוא מועמד מצוין ל-MSCs, במיוחד לטיפול בתאי גזע אוטולוגיים בחולים עם מפרקים דלקתיים או פצועים. בנוסף, ל-MSCs שמקורם בנוזל סינוביאלי יש יכולת כונדרוגנית, יכולות אימונומודולציה וקצב התפשטות גבוה. מחקר זה קבע פרוטוקולים למיצוי מח עצם ושאיבת נוזל סינוביאלי ממיני-חזירים בשיטות לא פולשניות ולהרחבה חוץ גופית של תאים מבודדים וניתוח פנוטיפים של תאים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי מרכז בעלי חיים לניסויים ביו באוניברסיטה הלאומית גיאונגסאנג.

1. תכשירים לניקוי נוהל בעלי החיים

  1. כן המבוגר minipigs נקבה לאיסוף בלתי פולשני של MSCs ממח עצם נוזל הסינוביאלי. בצע הבדיקה הקלינית של minipigs יום אחד לפני הרדמה ותרופות אוסף מדגם.
    1. ספק חיות קליניות נורמליות עבור בדיקות גופניות, הכוללות טמפרטורת גוף, קצב נשימה, קצב לב, ועל התצפית של סטטוסי ההתנהגות המטולוגיות 'החזירים, תוך שימוש בבדיקות ספירת דם מלאות.
      הערה: במרווחי פרמטר עבור minipigs הבריא קליני 11 - 29 / min עבור קצב הנשימה, 68 - 98 / min עבור קצב הלב, ו -37 - 38 ° C עבור טמפרטורת הגוף.
  2. הסר את כל המצעים אכילים מהכלוב בתקופת הצום לפני הניתוח של 6 - PRIO 12 שעותr לממשל של הרדמה עבור minipigs צעיר ובוגר, 3 שעות של צום יש לשים לב עבור הילודים. לספק מי שתייה עד למועד הרדמה.

2. הכנת בעלי החיים עבור הרדמה

  1. תרופות minipigs לפני מתן הרדמה עם acepromazine (0.1 מ"ג / ק"ג), medetomidine (0.03 מ"ג / ק"ג), ו אטרופין (0.04 מ"ג / ק"ג).
    1. להזריק כל התרופות בהזרקה לשריר (IM) באמצעות מחט 21 G עם אורך של 30 מ"מ לפחות עבור minipigs מבוגר. בצע את זריקת IM 1-3 סנטימטר מאחורי האוזן לתוך שריר צוואר רחם לרוחב או לתוך שריר הירך.
      הערה: בצע את כל ההליכים בלי לעורר פחד או מתח החיות או הדורשים טיפול אגרסיבי להזריק את premedication בבטחה.
  2. מניחים את minipigs בעמדה הגבי-שכיבה.
  3. רבע שעה לאחר מתן של premedication, ליזום הרדמה באמצעות מנהל isoflurane 1.5%istered באמצעות אינהלציה.
    1. המשך שאיפה של isoflurane (1.5%) דרך הטובוס, ואחריו מעלייה בריכוז 2.5%, עם חמצן (1.5 ליטר / דקה) כגז המוביל.
  4. ברציפות לפקח על קצב הלב, טמפרטורת הגוף, ועל רוויון החמצן בדם מלעורית (SpO 2) של minipigs במהלך ההרדמה. השתמש שמיכה במחזור מים בטמפרטורה של 38 - 39 מעלות צלזיוס כדי לשמור על טמפרטורת גוף. החל משחה ophthalmologic כדי להגן על העיניים מפני התייבשות במהלך ההרדמה.
  5. עקוב הסיווג של guedel להעריך את עומק ההרדמה 13.

3. תכשירי בידוד תא וטיפוח

  1. כדי לטפח את MSCs נגזר ממח העצם נוזל סינוביאלי, להכין 500 מ"ל של מדיום הנשר שונה של מתקדמים Dulbecco (ADMEM) בתוספת 10% בסרום שור עוברית (FBS), 1% Glutamax, 10 ng / ml של צמיחה פיברובלסטים בסיסי פקטוr (bFGF), ו -1.0% פניצילין, סטרפטומיצין (10,000 IU ו -10,000 מיקרוגרם / מ"ל, בהתאמה, עט סטרפטוקוקוס).
    1. דגירה ADMEM על 38.5 מעלות צלזיוס באווירה humidified של 5% CO 2 בתוך CO 2 באינקובטור.
  2. כן 500 מיליליטר של תמיסת מלח פוספט החיץ של Dulbecco (DPBS) על פי הוראות היצרן עבור בידוד תא ושטיפה.

4. איסוף מח עצם מן Minipigs

  1. בחר שטח של כ 15 x 15 ס"מ גודל על פסגת הכסל (איור 1), ולהסיר את השיער מאזור זה באמצעות סכיני גילוח בטיחות מעוקר או קוצץ חשמלי. לאחר Minipig ממוצבת, לסירוגין לשפשף באתר ההליך שלוש פעמים עם סוכני העיקור הבאים: יוד povidone ו -70% אתנול. אחרי השטח הוא יבש למרוח בסדינים מעוקרים.
  2. טרום מעיל המזרק 10 מ"ל עם 100 U / ml של הפרין ידי שטיפה זה עם 3 - 4 מ"ל של הפרין לפני ejecטינג הסוכן-מקריש אנטי.
    הערה: בצע פעולה זו כדי למנוע קרישה בתוך המזרק במהלך שאיבת מוח עצם.
  3. חלץ מינימום של 5 מ"ל של מח העצם של עצם הכסל ציצה של Minipig בהרדמה, באמצעות חולץ מח עצם (3.0 × 100 מ"מ) מחוברת בחוזקה אל מזרק 10 מ"ל מצופה מראש הפרין.

בידוד 5. של תאים שחולצו ממח העצם ו בטיפוח Vitro

  1. לבודד את התאים ממח עצם החילוץ.
    1. לדלל את מח העצם חילוץ עם נפח שווה של DPBS צינור חרוטי 15 מ"ל בטמפרטורת החדר.
    2. הוסף 3 מ"ל של התקשורת צנטריפוגה צפיפות (Ficoll-Paque) אל צינור חרוטי 15 מ"ל.
    3. לדלל שכבה 4 מ"ל של מח העצם עם DPBS, אשר ממוקם על התקשורת צנטריפוגה צפיפות ללא ערבוב, צנטריפוגות אותו גרם 400 × 40 דקות בטמפרטורת החדר.
    4. קציר את שכבת התאים mononuclear(MNC) מן המעיל באפי בין שתי שכבות המכיל את הפלזמה (השכבה העליונה) והתקשורת צנטריפוגה צפיפות (השכבה התחתונה), ולהעביר את MNCs לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל.
    5. לדלל את MNCs הועבר עם 7 - 8 מ"ל של DPBS ו צנטריפוגות אותם גרם 500 × במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. בטל supernatant לשטוף את התאים פעמיים עם DPBS.
    6. להשעות את התא גלולה ב 2 מ"ל של ADMEM ולהעביר אותו בצלחת בתרבית רקמה 35 מ"מ. דגירה תרבות צלחת על 38.5 מעלות צלזיוס באווירה humidified של 5% CO 2.
  2. בטיפוח במבחנה של תאים מבודדים ממח העצם.
    1. לאחר 48 שעות, לשאוב את המדיום עם התאים שלא מצורף הצלחת, ולהחליף 2 מיליליטר של ADMEM דגירה זה על 38.5 מעלות צלזיוס באווירת humidified של 5% CO 2. שנה את בינונית כל יום שלישי.
    2. בגיל 70 - 80% confluency, לשטוף את התאים עם DPBS, לנתק אותם עם 1 מ"ל של 0.25%טריפסין / EDTA, דגירה אותם ב 37 מעלות צלזיוס במשך 3 - 5 דקות עד שהתאים לנתק.
    3. קציר התאים באמצעות 10 מ"ל של ADMEM, ולהעביר אותם לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל, ו צנטריפוגות אותם ב 300 × גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. בטל supernatant.
    4. להשעות את התאים שנקטפו 1 מ"ל של ADMEM טריים לספור אותם באמצעות hemocytometer.
    5. מניחים את התאים 5 - בקבוק 7.5 x 10 5 / 25T המכיל 4 מ"ל של ADMEM דגירה אותם על 38.5 מעלות צלזיוס באווירה humidified של 5% CO 2. שנה את בינונית כל יום שלישי.

אוסף 6. הסינוביאלי נוזלים מן Minipigs

  1. בדומה לנוהל שאיבת מוח עצם, בחר באזור רצוי של כ 15 x 10 סנטימטרים (אורך / רוחב) על מפרק הירך, ולהסיר את השיער באמצעות סכיני גילוח בטיחות מעוקרים או קוצץ חשמלי, פעל לפי נהלי חיטוי (שלב 4.1).
  2. הכנס מזרק 3 מ"ל עם 23 Gמחט לתוך המפרק לאחר הציונים דרך המישוש (פיקת ברך ואת ציצת ​​שוקה).
    1. החל שאיבה עדינה אל המזרקים עבור השאיפה של נוזל סינוביאלי במפרק. ההיקף המשוער של נוזל סינוביאלי שנאסף משותף הוא 0.5 - 1 מיליליטר, אבל זה משתנה בהתאם לגודל של Minipig או המפרק. שטוף באמצעות DPBS בחלל הסינוביאלי אם נפח שנאספו של הנוזל הסינוביאלי הוא קטן מדי.
    2. מיד למשוך את המזרק כדי למנוע זיהום בדם.

בידוד תא 7. מן Collected הסינוביאלי נוזלים בטיפוח Vitro

  1. לבודד את התאים מן הנוזל הסינוביאלי לריאות.
    1. לדלל את הנוזל הסינוביאלי aspirated עם נפח שווה של DPBS צינור חרוטי 15 מ"ל בטמפרטורת החדר.
    2. כדי להסיר שאריות, לסנן את הנוזל הסינוביאלי מדולל באמצעות מסננת תא ניילון 40 מיקרומטר.
    3. הוסף 10 מיליליטר של DPBS אל הצינור המכיל את סינוביאלי המסונןנוזל צנטריפוגות אותו גרם 400 × במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. בטל supernatant לשטוף את התאים פעמיים עם DPBS.
    4. להשעות את התא גלולה ב 2 מ"ל של ADMEM, למקם את התאים על 2 - צלחת בתרבית רקמה 3 x 10 5 תאים / 35 מ"מ עם 2 מ"ל של ADMEM, דגירה אותם על 38.5 מעלות צלזיוס באווירה humidified של 5% CO 2 .
  2. חזור על שלב 5.2 עבור הטיפוח במבחנה של MSCs נגזרות נוזל הסינוביאלי המבודדת.

טיפול פוסט-הליך 8. של Minipigs

  1. במידת הצורך, לסגור את העור במקום ההזרקה חולץ מח עצם עם תפר יחיד באמצעות מהדק העור, לאחר איסוף מח העצם.
  2. לאחר שהסתיים ההליך יושלם, לנהל זריקה תוך שרירית של Enrofloxacin (5 מ"ג / ק"ג) ו meloxicam (0.2 מ"ג / ק"ג) אל minipigs פעם ביום למשך 3 ימים.
  3. לאחר שהסתיים ההליך יושלם, לחטא את מח עצם אתר איסוף נוזל סינוביאליעם יוד povidone 0.1% פעם אחת ביום למשך 3 ימים. אנא קראו בעיון מדי יום כדי לעקוב אחר סימנים של סיבוכים (למשל, נפיחות, מוגלה, או אודם).

9. נייד phenotyping שימוש cytometry זרימה

  1. כאשר MSCs הם 70 - 80% ומחוברות על קטעים 3 - 5, לשטוף את התאים עם DPBS ולהתייחס אליהם עם 1 מ"ל של 0.25% (v / v) טריפסין / EDTA. לאחר מכן, דגירה אותם ב 37 מעלות צלזיוס במשך 3 - 5 דקות עד התאים מנותקים.
  2. קציר התאים באמצעות 10 מ"ל של DPBS, ולהעביר אותם לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל, ו צנטריפוגות אותם ב 300 × גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. מחק את הפתרון supernatant.
  3. כדי לתקן את התאים, להשעות את התא גלולה ב 10 מ"ל של פתרון פורמלדהיד 3.7% ולשמור אותם ב 4 מעלות צלזיוס למשך יום אחד לפני הניתוח.
    1. יום אחד לאחר התיקון, לשטוף את התאים עם DPBS פעמים באמצעות צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 5 דקות בכל פעם. מחק את הפתרון supernatant.
    2. להשעות את התא גלולה ב 4 מ"לשל DPBS, אשר השלים עם 1% (w / v) אלבומין בסרום שור (BSA), ו דגירה הגלולה עבור שעה 1 ב 4 ° C לחסום אינטראקציות בתיווך Fc הלא ספציפיות.
    3. הפץ 500 aliquots μl של השעיה התא לתוך צינורות 1.5 מ"ל.
    4. עבור נוגדנים שאינם מצומדות (CD29 ו vimentin), לשטוף את התאים על ידי צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 3 דקות. מחק את הפתרון supernatant.
    5. להשעות את התא גלולה ב 500 μl של דילול 1: 100 של נוגדן ראשוני דגירה אותו במשך שעה 1 ב 4 ° C.
    6. שוטפים את התאים פעמיים עם אלבומין 1% שור על ידי צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 5 דקות בכל פעם. מחק את הפתרון supernatant.
    7. להשעות את התא גלולה ב 500 μl של דילול 1: 100 של isothiocyanate והעמסת (FITC), מצומדות נוגדנים משני דגירה אותו במשך שעה 1 בחושך על 4 מעלות צלזיוס.
  4. עבור נוגדנים FITC מצומדות (אלוטיפ, CD34, CD44 ו CD45), לשטוף את התאים על ידי centrifugation ב 300 × גרם במשך 3 דקות. מחק את הפתרון supernatant.
    1. להשעות את התא גלולה ב 500 μl של 1: 100 נוגדן FITC- מצומדות ו דגירה אותו במשך שעה 1 בחושך ב 4 ° C..
    2. עבור שני התנאים המכתימים, לשטוף את התאים פעמים עם DPBS על ידי צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 5 דקות בכל פעם. מחק את הפתרון supernatant.
    3. להשעות את התאים ב 500 μl של DPBS, ולהעביר אותם לתוך 5 מ"ל צינור מסביב לתחתית, ולנתח את התוצאות באמצעות cytometer זרימה 8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הקמת MSCs נגזר מח עצם ו הנוזל הסינוביאלי של Minipigs

MSCs בודד בהצלחה ממח עצם מפרק סינוביאלי במפרק של minipigs והרחיב במבחנה (איור 2). שאיפת מזרק של נוזל הסינוביאלי היא פשוטה, ולא מן הנמנע להשיג תאים חסידים מספיק במהלך טיפוח במבחנה של התאים הראשוניים. המורפולוגיה של סינוביאלי-נוזל נגזרות MSCs דומה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Minipigs שימשו להקמת בידוד MSCs ממח העצם הנוזל הסינוביאלי. כדי לחסל בתנאים פיסיולוגיים שונים, כגון גיל, מין, מחלות, minipigs מתורמים רקע isogenic נבחר להעריך את האפיון התלוי מקור תא במדויק. חזירים ידועים להיות אנטומית, פיזיולוגית, וגנטית דומים לבני אדם, ובמיוחד, minipigs יכול לייצר איברים גודל בהתאמה; ולכן, הם יכולים לשמש כמין תורם תחליף ההשתלה שלא מבן-מינית 14,15. לגבי הנכס אימונו הציע לאחרונה של MSCs, indoleamine 2, 3-dioxygenase (IDO) ו synthase תחמוצת החנקן (NOS) שי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם ניגוד אינטרסים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים על התמיכה הכספית הניתנת על ידי תוכנית הדור הבא של BioGreen 21 (No. PJ007969), המינהל לפיתוח כפרי וקרן המחקר הלאומית (מענק מס. NRF-2015R1D1A1A01056639) של הרפובליקה של קוריאה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
דולבקו מתקדם s מדיום נשר שונה (ADMEM)Gibco12491-023מדיום תרבית MSC
Dulbecco' s תמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS)Gibco14190-144מדיום כביסה לתאים, ללא Ca2+/Mg2+
סרום בקר עוברי (FBS)Gibco16000-044רכיב של MSCs בינוני
GlutamaxGibco35050-061רכיב של MSCs בינוני
פניצילין/סטרפטומיציןGibco10378-016רכיב של MSCs בינוני
גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי (bFGF)SimgaF0291רכיב של MSCs
אלבומין בינוני בסרום בקר (BSA)SigmaA6003רכיב של MSCs בינוני
טריפסין-EDTAGibco25200-072מגיב דיסוציאציה של תאים 
β-mercaptoethanolSigmaM7522רכיב של MSCs נוגדן איזוטיפ בינוני
BD PharmingenBD 550616בקרת איזוטיפ
CD29 נוגדןBD PharmingenBD 552369Integrin beta-1 MSCs סמן
CD44 נוגדןBD PharmingenBD 553133סמן MSCs גליקופרוטאין על פני התא
CD45 נוגדןBD PharmingenBD 340664סמן תאי גזע המטופויאטיים
CD34 נוגדןBD PharmingenBD 555821סמן תאי גזע המטופויאטיים
CD90 נוגדןBD PharmingenBD 555595Thy-1 גליקופרוטאין ממברנה MSCs סמן
נוגדן MHC Class II סנטהקרוזSC-32247אנטיגן מציג תאים סמן
נוגדן וימנטיןSigmaSigma-S6389סמן MSCs נימה ביניים מסוג III
פוספטאז אלקלייןPromegaS3841תערובת של 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate (BCIP) ו-nitro blue tetrazolium (NBT)
Ficoll-PaqueGE Healthcare17-1440-02צנטריפוגה שיפוע
צפיפות מסננת תאיםBD Falcon35234040 µ m מסננת תאי ניילון
15 מ"ל צינור חרוטי פוליסטירןBD Falcon351095איסוף דגימות ובידוד תאים
35 מ"מ כליםNunc153066צלחת תרבית תאים
מחלץ מח עצםGmbH Medizintechnologie, גרמניה1145-1W010TrokaBone, 3.0 x 100 מ"מ
תאמרינפלד640130תא
אטרופיןג'יל פרמצבטיקה ושות', דרום קוריאהאטרופין סולפט הידרט
אצפרומזיןסמו חציון, דרום קוריאהתרופה טרום הרדמה ואנטי הקאה
MedetomidinePfizerתרופה להרדמה ומשכך כאבים
EnrofloxacinBayer Healthcare, גרמניהאנטיביוטיקה
מלוקסיקםעל פני רפואה וטרינרית, תרופה אנטי דלקתית ומשככת כאבים
איזופלורןהאנה פארם, דרום קוריאההרדמה אינהלציונית
פובידון, יוד קוריאה פארמה, דרום קוריאהחומר עיקור
אתנולסיגמאE7023חומר עיקור
הפריןסיגמאH3393חומר נוגד קרישה
פורמלדהידסיגמאF8775חומר קיבוע תאים
משחה אופטלמולוגית פייזרOxytetracycline HCl עם פולימיקסין B סולפט
שמיכת מים במחזורGaymar Industriesמערכת התחממות במהלך ואחרי הרדמה
מהדק עורCovidien, ארה"בתפר סגירת עור
CO2 חממהתרמו פורמה3111ציוד תרבית תאים
זרימה ציטומטרBD Biosciencesמנתח תאים
MinipigPWG Genetics Korea, Ltd.חזיר מיניאטורימסוג T
ספירת תאים ספירת תאים ארגנטינה ,

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Woodbury, D., Schwarz, E. J., Prockop, D. J., Black, I. B. Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons. J Neurosci Res. 61 (4), 364-370 (2000).
  2. Sakaguchi, Y., Sekiya, I., Yagishita, K., Muneta, T. Comparison of human stem cells derived from various mesenchymal tissues: Superiority of synovium as a cell source. Arthritis Rheum. 52 (8), 2521-2529 (2005).
  3. De Coppi, P., et al. Amniotic fluid and bone marrow derived mesenchymal stem cells can be converted to smooth muscle cells in the cryo-injured rat bladder and prevent compensatory hypertrophy of surviving smooth muscle cells. J Urol. 177 (1), 369-376 (2007).
  4. Arufe, M. C., De la Fuente, A., Fuentes, I., de Toro, F. J., Blanco, F. J. Chondrogenic potential of subpopulations of cells expressing mesenchymal stem cell markers derived from human synovial membranes. J Cell Biochem. 111 (4), 834-845 (2010).
  5. Patil, R., et al. Multilineage potential and proteomic profiling of human dental stem cells derived from a single donor. Exp Cell Res. 320 (1), 92-107 (2013).
  6. Hatsushika, D., et al. Intra articular injection of synovial stem cells promotes meniscal regeneration in a rabbit massive meniscal defect model. J Orthop Res. 31 (9), 1354-1359 (2013).
  7. Hagmann, S., et al. The influence of bone marrow- and synovium-derived mesenchymal stromal cells from osteoarthritis patients on regulatory T cells in co-culture. ClinExpImmunol. 73 (3), 454-462 (2013).
  8. Lee, W. J., et al. Cell source-dependent in vivo immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells derived from the bone marrow and synovial fluid of minipigs. Exp Cell Res. 333 (2), 273-288 (2015).
  9. Su, J., et al. Phylogenetic distinction of iNOS and IDO function in mesenchymal stem cell-mediated immunosuppression in mammalian species. Cell Death Differ. 21 (3), 388-396 (2014).
  10. Jones, E. A., et al. Synovial fluid mesenchymal stem cells in health and early osteoarthritis: Detection and functional evaluation at the single-cell level. Arthritis Rheum. 58 (6), 1731-1740 (2008).
  11. Morito, T., et al. Synovial fluid-derived mesenchymal stem cells increase after intra-articular ligament injury in humans. Rheumatology (Oxford). 47 (8), 1137-1143 (2008).
  12. Sekiya, I., et al. Human mesenchymal stem cells in synovial fluid increase in the knee with degenerated cartilage and osteoarthritis. J Orthop Res. 30 (6), 943-949 (2011).
  13. John, T., Lerche, P. Anesthesia and analgesia for veterinary technicians. , Mosby Elsevier press. St. Louis, Missouri. (2011).
  14. Cooper, D. K., Gollackner, B., Sachs, D. H. Will the pig solve the transplantation backlog. Annu Rev Med. 53, 133-147 (2002).
  15. Millard, A. L., Mueller, N. J. Critical issues related to porcine xenograft exposure to human viruses: Lessons from allotransplantation. CurrOpin Organ Transplant. 15 (2), 230-235 (2010).
  16. Ringe, J., et al. Porcine mesenchymal stem cells. Induction of distinct mesenchymal cell lineages. Cell Tissue Res. 307 (3), 321-327 (2002).
  17. Petersen, B., Carnwath, J. W., Niemann, H. The perspectives for porcine-to-human xenografts. Comp Immunol Micro biol Infect Dis. 32 (2), 91-105 (2009).
  18. Zeng, L., et al. Multipotent adult progenitor cells from swine bone marrow. Stem Cells. 24 (11), 2355-2366 (2006).
  19. Zeng, L., et al. Bioenergetic and functional consequences of bone marrow-derived multipotent progenitor cell transplantation in hearts with postinfarction left ventricular remodeling. Circulation. 115 (14), 1866-1875 (2007).
  20. Sekiya, I., et al. Human mesenchymal stem cells in synovial fluid increase in the knee with degenerated cartilage and osteoarthritis. J Orthop Res. 30 (6), 943-949 (2012).
  21. Mochizuki, T., et al. Higher chondrogenic potential of fibrous synovium- and adipose synovium-derived cells compared with subcutaneous fat-derived cells: Distinguishing properties of mesenchymal stem cells in humans. Arthritis Rheum. 54 (3), 843-853 (2006).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Synovial Fluid MSCsBone Marrow MSCsMinipig MSC IsolationCell Surface MarkersFlow CytometryDensity CentrifugationIn Vitro CultureAutologous TherapyJoint Disease Models

מאמרים קשורים