רוטיפרים הם זואופלנקטון מיקרוסקופיים המשמשים כמודלים במחקרים אקוטוקסיקולוגיים והזדקנות. כאן אנו מספקים פרוטוקול למדידה עוצמתית וניתנת לשחזור של זמן ההישרדות ברוטיפרים של ברכיונוס. סנכרון תנאי התרבות לאורך מספר דורות הוא בעל חשיבות מיוחדת מכיוון שמצב האם משפיע על היסטוריית החיים של הצאצאים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
הרוטיפרים הם זואופלנקטון קוסמופוליטיים מיקרוסקופיים המשמשים כמודלים במחקרים אקוטוקסיקולוגיים והזדקנות בשל יתרונותיהם הרבים כגון תוחלת חיים קצרה, קלות תרבית ופרתנוגנזה המאפשרת תרבית משובטת. עם זאת, נדרשת זהירות בעת מדידת זמן ההישרדות שלהם מכיוון שהוא מושפע מגיל האם ומתנאי האכלה של האם. כאן אנו מספקים פרוטוקול למדידה רבת עוצמה וניתנת לשחזור של זמן ההישרדות ברוטיפרים של ברכיונוס לאחר סנכרון קפדני של תנאי התרבית לאורך מספר דורות. מבחינה אמפירית, סנכרון לקוי מביא לתמותה מוקדמת ולירידה הדרגתית בשיעור ההישרדות, וכתוצאה מכך כוח סטטיסטי חלש. ואכן, בתנאים כאלה, הגבלת קלוריות (CR) לא הצליחה להאריך משמעותית את תוחלת החיים של B. plicatilis, אם כי אריכות ימים הנגרמת על ידי CR הוכחה עם דגימות רוטיפר מסונכרנות היטב במחקרים בעבר ובהווה. פרוטוקול זה כנראה שימושי עבור מודלים אחרים של חסרי חוליות, כולל זבוב הפירות Drosophila melanogaster והנמטודה Caenorhabditis elegans, מכיוון שדווחו גם השפעות גיל אימהיות במינים אלה.
מבוא
Rotifers הוא זואופלנקטון מיקרוסקופי קוסמופוליטית (<1 מ"מ) המהווה את המערכה Rotifera 1. יש להם תוכנית פשוטה הגוף מורכב כ -1,000 תאים סומטיים כמו גם מנגנון ריסי גלגל דמוי מאפיין שנקרא קורונה, אשר משמש לתנועה והאכלה. רוב rotifers שייכים כיתות Monogononta או Bdelloidea, המכילים כ -1,600 ו -500 מינים, בהתאמה 2. Rotifers Monogonont יש בדרך כלל שני שלבי רבייה מיניים מינית (בשכפול הגנטי מחזורי), בעוד rotifers bdelloid לשכפל בשכפול גנטי 3 חובה. בסך הכול אפשר להשיג אנשי rotifer זהים גנטי, אשר מבטיח שחזור גבוה בניסויים. בנוסף, יש להם כמה יתרונות אחרים כמו אורגניזמים מודל, כגון תוחלת חיים קצרה, קלות תרבות, ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת Media
הערה: השתמש חצי מדולל Brujewicz מי ים מלאכותי של ppt המליחה 16.5 (PSU). Seawaters המלאכותית אחרת גם משמשת לעתים קרובות כדי rotifers תרבות Brachionus 25,26.
- להוסיף 454 מ"מ NaCl, 26 מ"מ MgCl 2, 27 mM MgSO 4, 10 מ"מ KCl, ו -10 מ"מ CaCl 2 כדי 4.5 ליטר של מים מזוקקים (נפח סופי יהיה 5 L). לחלופין, להשתמש במי דילול יונים במקום מים מזוקקים. להוסיף CaCl 2 לאחר המסת כל המלחים האחר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1 מציג עקומות הישרדות נציג של אוכלוסיות מסונכרנות היטב (מתוך שני משכפל). בניסוי זה, rotifers היו או היומיום הפד [כרצונך (AL) הקבוצה] או בכל יום אחר (IF קבוצה). חציון ההישרדות עמד על 13 ו -18 ימים באזור אל ואם קבוצות, בהתאמה. למרות זאת ידוע היטב שאם מרחיב את תוחלת החיים של rotifer, הניסוי הזה נכשל לזהות הבדל מובהק סטטיסטית בין תוחלת החיים של AL ואם קבוצות. מבחינה אמפירית, תוצאות סנכרון מספיק תמותה מוקדמת וירידות .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה למדידת זמן ההישרדות rotifers Brachionus. השלב הקריטי הוא סנכרון תנאי rotifer במשך כמה דורות. כאשר rotifers ניסיוני מסונכרנים היטב, עקומת ההישרדות לי סוג טיפוסי הוא ציין עם תמותה מוקדמת מעט מאוד כפי שדווח בכמה מחקרים קודמים 18,24,37,38. סטיות התקן של זמן ההישרדות שלהם ולכן נעשים קטנות יותר לעומת rotifers המסונכרן היטב, וכתוצאה מכך הכח סטטיסטי גבוה. סנכרון צפוי גם להגדיל שחזור של מדידות זמן הישרדות - כי אמהות מתורבתות בתנאים אופטימליים,.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים ג'ורג ג'רוויס, מרתה בוק, ובט היקוקס-לאה, במעבדה לביולוגיה ימית, על עזרתם הצילומים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נתרן כלורי | Wako | 190-13921 | |
| מגנזיום כלוריד | Wako | 136-03995 | |
| מגנזיום גופרתי | Wako | 131-00427 | |
| אשלגן כלורי | Wako | 168-22111 | |
| סידן כלורי | Wako | 035-00455 | |
| נתרן ביקרבונט | Wako | 199-05985 | |
| נתרן ברומיד | Wako | 190-01515 | |
| מסנן ממברנה (0.45 ומיקרו; m גודל נקבוביות) | HAWP04700 | Millipore | |
| , 6 בארות, לא מטופלת | תומס סיינטיפיק | 6902D01 | תחתונה |
| שטוחה, 48 בארות, לא מטופלת | תומאס סיינטיפיק | 6902D07 | תחתית שטוחה |
| Tetraselmis, חברת | אספקה ביולוגית של קרוליינה | 152610 | |
| PRISM 6 | תוכנת GraphPad | גרסה 6.0d |
מקורות
- Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).
- Segers, H. Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution. , Magnoli....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
