הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

במבחנה חלחול של FITC טעון Ferritins מעבר מכשול עכברוש דם-מוח: מודל לחקר משלוח מולקולות Nanoformulated

7.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54279

⸱

22 באוגוסט 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Dipartimento di Scienze Biomediche e Cliniche Luigi Sacco, Università di Milano, 2Dipartimento di Biotecnologie e Bioscienze, Università di Milano-Bicocca

במאמר זה

סיכום

מתוארת ומאומתת שיטה להקמת מודל מבחנה של מחסום דם-מוח המבוסס על תרבית משותפת של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח חולדות ואסטרוציטים. מערכת זו הוכיחה את עצמה ככלי תקף לחקר השפעת הננו-פורמולה על חדירת מחסום הטרנס-מחסום של מולקולות פלואורסצנטיות.

תקציר

תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח, הנתמכים על ידי פריציטים ואסטרוציטים, אחראים לחדירה נמוכה של תרופות מסיסות הידרו-מסיסות גדולות דרך מחסום הדם-מוח (BBB), מה שגורם לקשיים בטיפולים תרופתיים יעילים. בשנים האחרונות, אסטרטגיות שונות לקידום מיקוד מוחי נועדו לשפר את העברת התרופות ואת הפעילות באתר זה, כולל ננו-מערכות חדשניות להעברת תרופות ברחבי BBB. בהקשר זה, גישה חוץ גופית המבוססת על מודל תאי פשוט של ה-BBB מספקת כלי שימושי לחקירת ההשפעה של ננו-פורמולציות על חדירת טרנס-BBB של מולקולות. מחקר זה מתאר את הפיתוח של BBB דו-שכבתי, המורכב מתאי אנדותל מיקרו-וסקולריים ראשוניים של חולדות בתרבית משותפת ואסטרוציטים. מתוארת גם גישה רב-פרמטרית לאימות המודל, המבוססת על מדידת ההתנגדות החשמלית הטרנסאנדותל והחדירות לכאורה של דקסטרן במשקל מולקולרי גבוה. כהוכחת היתכנות לשימוש במודל BBB זה כדי לחקור את ההשפעה של ננו-פורמולציות שונות על טרנסלוקציה של מולקולות פלואורסצנטיות על פני המחסום, אנו מתארים את השימוש בפלואורסצאין איזותיוציאנט (FITC), הטעון בננו-חלקיקי פריטין. היכולת של פריטינים לשפר את חדירת הטרנס-BBB של FITC הודגמה על ידי מדידות שטף וניתוחי מיקרוסקופיה קונפוקלית. התוצאות מצביעות על כך שזו מערכת שימושית לאימות ננו-מערכות להעברת תרופות על פני BBB.

מבוא

ההתנגדות של מערכת העצבים המרכזית (CNS) מחלות (כלומר. סרטן, אפילפסיה, דיכאון, סכיזופרניה והפרעה נוירולוגית הקשורים HIV) לטיפולים תרופתיים נובע מנגנונים שונים, כולל חלחול התרופה מפרך דרך מחסום הדם-מוח (BBB) . של BBB הוא הגבול מבודד רקמות מוח מפני החומרים במחזור הדם. בתוך המחסום הזה, שכבה של תאי אנדותל כלי דם במוח (BMECs), נתמכים על ידי pericytes האסטרוציטים endfeet, אחראית סלקטיביות הגבוהה של BBB לאלו תרופות hydrosoluble עם משקל מולקולרי גבוהה מ -400 Da 1. עוד מנגנון עמידות הקשורות לסמים קשורים לנוכחות על BMECs של מובילים בזרימת התרופה (P-glycoprotein והתנגדות multidrug חלבונים), אשר שיתוף פעולה כדי לצמצם את חדירת התרופה לתוך מערכת העצבים המרכזית ואת להקל שהחול שלהם מהמוח 2.

בעשור האחרון, מספר רב של גישות nanotechnological פותח כדי לעמוד באתגר הקליני וביולוגי של אספקת סמים ברחבי BBB 3-6. בהקשר זה, nanospheres פריטין (FNN) מייצג פתרון חדשני ומבטיח לחלוטין. FNN הם 12 תחומים ננומטר של 24 פריטין הרכבה עצמית (Fn) מונומרים, אשר מסודרים במבנה כדורי חלול של 8 קוטר פנימי ננומטר. יחידות משנת פריטין יכולה להיות מפורקת ב- pH חומצי מחדש באופן צורה-זיכרון על ידי הביא את ה- pH ניטראלי, המאפשר מולקולות אורגניות שונות להיות במארז. לכן, FNN מייצג מודל מעניין לפיתוח 7,8 למערכות אספקת תרופות רבות תכליתי. יתר על כן, FNN עלול ליצור אינטראקציה עם הודות BMECs אל הכרה ספציפית של transferrin קולטן (TFR) 1, אשר באה לידי ביטוי על הממברנה luminal של תאים אלה 9.

עד כה, שונה במודלים חוץ גופייה של BBB פותח יורדr להבהיר חדירות טראנס-BBB לסמים שונים, רעיל לכיוון BBB, או האינטראקציה של מולקולות עם מובילים בזרימה. אכן, מודלים אלה נחשבים תקפים במבחנת גישות להקרנה מהירה של מולקולות פעילות לפני שתמשיך עם מחקרי in vivo. מודלים אלה כוללים שכבת האנדותל יחידה של BMECs או BMECs שיתוף תרבותי האסטרוציטים (לעתים רחוקות יותר pericytes), המתקבלת מן החי (חולדה, עכבר, חזיר שור) או שורות תאים אנושיות 10,11,12. את ההתנגדות החשמלית Transendothelial (TEER) ואת החדירות לכאורה (אפליקצית P) של קליעים נותבים עם משקל מולקולרי מוגדר מייצגי שני פרמטרים קריטיים המשמשים כדי לקבוע את איכות המודל חוץ גופייה. כאן אנו מתארים את העסקת מודל BBB במבחנה, מבוסס על שיתוף התרבות של עכברוש BMECs (RBMECs) וחולדה האסטרוציטים קליפת המוח (RCAs) ללמוד את חלחול טרנס-BBB של nanocages פריטין encapsulating isothi והעמסתocyanate (FITC).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הקמת מודל BBB

הערה: הקמת מודל BBB אנו ממליצים להשתמש RBMECs העיקרי זמין מסחרי RCAs. כל הצעדים חייבים להתבצע עם ריאגנטים מתכלים סטרילי, טיפל במנדף זרימה למינרית.

  1. תרבית תאים
    1. תא מעיל צלוחיות תרבות עם מ"ל פולי- L- ליזין 100 מיקרוגרם / (שעה 1 ב RT) או פיברונקטין 50 מיקרוגרם / מ"ל ​​(שעה 1 ב 37 ° C) כדי לקדם את הקובץ המצורף של RCAs או RBMECs, בהתאמה. ואז, להפשיר 1 x 10 6 RCAs ו -5 x 10 5 RBMECs ב בינוני תא האנדותל, בתוספת 5% בסרום שור עוברי, 1% תוספת צמיחת תא האנדותל ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין (sECM). RCAs זרע בבקבוק T175 ב sECM 20 מ"ל ו RBMECs בבקבוק T75 ב 10 מ"ל sECM.
      הערה: ההפשרה ומעברי זריעה של RCAs ו RBMECs חייבים להיות מותאמים, מבחינת צפיפות תאים וזמן בתרבות, בהתאם למספר של תנאי ניסוי להיבדק עם מודל BBB. הסטארטing עם 1 בקבוקון של 1 x 10 6 RCAs ו 1 בקבוקון של 5 x 10 5 RBMECs, אפשר לקבל עד 20 BBB נושאות מוסיף.
    2. לשמור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באווירה humidified למשך כ- 6 ימים, עד בערך המפגש 80% עבור RCAs ולמעלה מ -90% מפגש עבור RBMECs. ניתוק התאים באמצעות פתרון טריפסין-EDTA (טריפסין 1: 250) במשך 5 דקות (1 מ"ל טריפסין עבור צלוחיות T75 ו -2 מ"ל עבור צלוחיות T175). תפסיק פעילות טריפסין עם sECM (2: 1), השעיות תא צנטריפוגות ב g 750 × 5 דקות ו resuspend את הכדורים ב 60 מיליליטר sECM.
    3. פיצול RBMECs לתוך 3 צלוחיות T175 ותרבות sECM במשך 3 ימים אחרים לפני הזריעה על מוסיף. לספור את המספר הכולל של החיים RCAs, על ידי התבוננות ההשעיה תא מדולל 1: 1 עם trypan כחול תחת מיקרוסקופ אופטי בתא "שודד גופות.
  2. זריעת תאים על הוספה
    1. פנקו את צד אחד של terephthalate פוליאתילן (PET) קרום של 6 רב גם transparמוסיף אף אוזן גרון עם L- ליזין פולי 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​ואת הצד השני עם מ"ל / מיקרוגרם 50 פיברונקטין, כדי לאפשר התקשרות של RCAs ו BMECs. טפל מחדיר עם פינצטה על מנת להימנע ממגע עם קרום PET.
      1. מניחים את מוסיף לתוך צלחת 6 היטב ולהוסיף פתרון פיברונקטין (מינימום 500 μl) לתוך החדר העליון. אחרי שעה 1 של דגירה על 37 ° C, להסיר את הפתרון פיברונקטין, לקחת מחדיר את צלחת רב היטב ולשים אותם במהופך על החלק התחתון של צלחת 150 ס"מ 2 פטרי, אשר משמש כאן כתמיכה סטרילי עבור כבר מצופה מוסיף.
      2. בעדינות להוסיף 800 μl של L- ליזין פולי על הצד התחתון של הכנס (כפי שמוצג באיור 1 א; המכונה זריעת RCAs), ולשמור את פתרון מוסיף עבור שעה 1 ב RT.
      3. לשאוב את הפתרון ולתת המחדיר לייבש ב RT במשך 15-30 דקות. המחדיר מוכן כעת זריעת תאים, אבל יכול גם להיות מאוחסן בצלחת רבה גם עבור מספרימים על 4 מעלות צלזיוס, לפני שתמשיך עם בניית BBB.
        הערה: זכור לשמור לפחות 3 מצופה מוסיף חינם מתאי, כדי לשמש שולט לאמת הקמת BBB על ידי FD40 מדידות שטף.
    2. RCAs Seed (35,000 / 2 ס"מ) על הצד התחתון של מוסיף פולי- L- מצופה ליזין, על ידי הטלת 800 μl של ההשעיה התא על במהופך להוסיף (איור 1 א). השאירו את ההשעיה RCA על הכנסות עבור 4 שעות ב RT, על מנת לאפשר התקשרות יעילה של תאים הממברנה.
    3. לשאוב את הפתרון שיורית, למקם מחדיר לתוך בארות המכילות 2 מיליליטר של sECM ולשמור על הצלחת רבה גם על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באווירה humidified, שינוי sECM כל 2 ימים.
    4. לאחר 3 ימים, כאשר RCAs יש מצופה בחלק התחתון של הפנים של הכנס, זרע RBMECs על הצד העליון של הכנס, ביצוע השלבים הבאים:
      1. ניתוק RBMECs צלוחיות T175 ולספור אתתאים חיים הכולל, כפי שדווח צעדים 1.1.2 ו 1.1.3.
      2. RBMECs Seed (60,000 / 2 ס"מ) על פני השטח העליונים של הכנס ב sECM (1,000 μl) (איור 1 ב), עוזב 3 מוסיף עם האסטרוציטים בלבד, כדי לשמש כרקע TEER. מניח את הצלחת רבה היטב בתנאי תרבות סטנדרטיים. לשמור על המערכת לתרבות במשך 3 ימים לפחות, שינוי sECM בחדר הפנימי ותחתון כל 2 ימים.

2. אימות BBB

  1. מדידת TEER
    1. ביום 3 rd של התרבות המשותפת, בדוק את TEER ידי החדרת מחדיר BBB נושא לתוך תא מתאים (שהינה בעלת כובע והיכן הוא קאמרי כובע להכיל זוג-חישת מתח ואלקטרודות נוכחי), מלא 4 מ"ל של sECM. חבר מד התנגדות / וולט רקמת האפיתל.
    2. יחד עם מדידות TEER של BBB-מערכות תא, להקליט הערכים TEER של 3 מוסיף הנושאת את RCAs הב ינוכה הערכים שהתקבלו עם BBBS. הכפל את הערכים TEER שהתקבל על ידי פני השטח של הכנס (4.2 ס"מ 2) על מנת להביע את התוצאות כפי x Ω 2 ס"מ.
    3. מהיום 3 rd של תרבות משותפת, למדוד את TEER מדי יום. הערה: לאחר תקופה ראשונית שבה TEER מגביר, ערכי רשמתה צריכים להישאר יציבים במשך ימים רצופים לפחות (בדרך כלל בין ה 5 ואת יום ה -7 של שיתוף תרבות). בשלב זה BBB הוא מוכן לשלב השני של אימות (סעיף 2.2) ו / או עבור הניסויים טרנס-BBB.
      הערה: ההליך המתואר בסעיף 2.1 יכול להתבצע על BBB-המערכות באותו מוקדש הניסויים החדירים הבא (סעיף 3). Operate בתנאים סטריליים.
  2. חוצה BBB שטף של FITC-dextran 40 (FD40)
    1. מדוד את שטף FD40 מהמפלס העליון אל בתא התחתון של מודלי BBB בהשוואה לזו פני 3 מוסיפה ריק(ראה הערה בסעיף 1.2.1) על פי השלבים הבאים:
      1. הוסף 1 מ"ג / מ"ל FD40 (מדולל sECM) לתא העליון של BBBS, ואחרי 1, 2 ו -3 שעות למשוך עד 200 sECM μl מהאולם התחתון למדוד את עוצמת הקרינה על ידי spectrofluorimeter (לשעבר λ 488 ננומטר, λ em 515 ננומטר, ושיסף 5).
      2. השג את הערכים עבור רקע sECM fluorescenceby מדיד 500 μl של מדיום בתולה באמצעות אותם הפרמטרים אנליטיים. הפחת את קרינת רקע sECM מכל ערכי קרינת FD40.
      3. לקבוע את כמות חלחלה FD40 ידי השוואה של ערכי הקרינה נצפתה עם עקומת כיול מיוצר עם ריכוזים ידועים (כלומר. 0.312, 0.625, 1.25, 2.5 מיקרוגרם / מ"ל) של נותב ניאון מומס 500 μl של sECM.
      4. חשבתי את המקדם חדירות לכאורה (אפליקצית P) מן ערכי שטף הממוצעים לפי:
        אפליקצית P = J / AC
        כאשר J הוא השטף של המולקולה (שומות / sec), הוא שטח חלחול (2 ס"מ) ו- C הוא הריכוז של מולקולה בתא העליון (שומות / ס"מ 3).
        הערה: שלוש או יותר BBB-מערכות שהגיעו ערכי TEER מתאימים, חייבות להיות מוקדשות אך ורק הליך אימות זה, ולא צריך להיות מועסק על הניסויים החדירים הבאים (סעיף 3). עקרות אינה חובה.

3. חוצה BBB חלחול של FITC טעון Ferritins (FNN)

הערה: גרסה רקומביננטי של פריטין האדם (Fn), המיוצר Escherichia coli והורכבו nanocages (FNN) אנקפסולציה של מולקולות ניאון שונים, זמין אצל NanoBioLab של פרופ פרוספרי (אוניברסיטת מילאנו-Bicocca, איטליה). FNN נטען עם FITC, על פי פרוטוקול שתואר לעיל 13 ועל הריכוזי הוא Fn ואת המולקולות הטעונות הם במדויק determined.

  1. חוצה BBB שטף של FITC ו FITC-FNN
    1. מדוד את שטף FITC-FNN מהמפלס העליון אל בתא התחתון של מודלי BBB תוקף (בדרך כלל 5 th - יום ה -7 של שיתוף תרבות), בהשוואה לזו של צבע חינם לאחר 7 ו -24 שעות של דגירה, על פי את הפעולות הבאות:
      1. הוסף FITC-FNN (50 מיקרוגרם / מ"ל ​​FNN, 1.1 מיקרומטר FITC) או כמות שווה של FITC חופשי לתוך החדר העליון של מערכות BBB 6 לפחות לכל ניסוח, כדי למשוך 2 מ"ל של תמיסת sECM מהאולם התחתון של לפחות 3 מוסיף לאחר 7 שעות, וממנה בתא התחתון של 3 מוסיף אחרים לאחר 24 שעות.
      2. למדוד את עוצמת הקרינה של 500 μl של דגימות שנאספו על ידי spectrofluorimeter (לשעבר λ 488 ננומטר, λ em 515 ננומטר, ושיסף 5).
      3. השג את קרינת רקע sECM ידי מדידת 500 μl של מדיום באמצעות אותם הפרמטרים אנליטיים. הפחת את קרינת רקע sECMמכל ערכי הקרינה FITC או FITC-FNN.
      4. קבע את הריכוז של חלחלה FITC או FITC-FNN ידי השוואת ערכי הקרינה שהושג עם שתי עקומות כיול שונים המיוצרים עם ריכוזים ידועים (כלומר. 6.87, 13.75, 27.5, 55 ננומטר) של צבע בחינם או nanoformulated מומס 500 sECM μl.
  2. FITC-FNN לוקליזציה RBMECs
    1. הסר sECM מהאולם העליון של מערכות BBB, לשטוף את מוסיף עם PBS ולתקן את RBMECs על שני מוסיף לפחות לכל קבוצת הניסוי על ידי הוספת 500 paraformaldehyde μl (4% חיץ פוספט מלוחים-PBS) בתא העליון עבור 10 דקות ב RT.
    2. שטפו את מוסיף שלוש פעמים עם PBS להסיר paraformaldehyde שיורית.
      הערה: מנקודה זו ואילך, עקרות אינן הכרחיות.
    3. חותך חתיכות מתאימות של קרום PET, ולהמשיך עם immunodecoration של התאים על פי השלבים הבאים:
      1. PermeabiLize RBMECs עם 0.1% Triton X-100 ב PBS במשך 10 דקות. בצע צעד חסימה עבור שעה 1 ב RT עם תמיסה המכילה אלבומין 2% השור (BSA), 2% נסיוב עז ב PBS. דגירה דגימות עם אנטי-פון Willebrand Factor (VWF) בשעה 1:20 דילול עבור שעה 2 ב RT.
      2. לאחר שטיפת שלוש פעמים עם PBS, לחשוף את התאים במשך שעה 2 ב RT על BSA 2%, פתרון סרום עיזים 2% המכיל נוגדנים משני מתאים ביחס של 1: דילול 300 כדי לחשוף את-VWR אנטי, ו DAPI בכל 1: 1,500 דילול לגילוי גרעינים.
    4. הר החתיכות להוסיף על גבי שקופיות מיקרוסקופ באמצעות פתרון הרכבת antifade (טיפה אחת לכל קטע כנס), ולאחר מכן סגור את המדגם עם תלוש כיסוי. לנתח ידי מיקרוסקופ confocal שימוש בעדשת טבילת שמן בהגדלה 40X, 1.5 זום 1,024 x 1,024 פיקסלים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

במהלך הקמת מודל BBB, מצורף התא והצמיחה על המחדיר ניתן לנטר באמצעות מיקרוסקופ אור הודות לאופי השקוף של ממברנות PET. RCAs, זורעים בצפיפות של 35,000 תאים / 2 ס"מ, לצרף ביעילות את הצד התחתון של הכנס לאחר 4 שעות של דגירה על RT (איור 2 א) ולגדול כדי לכסות את פני השטח קרום ב 3 ימים, לוקח מורפולוגיה כישוריות (תרשים 2B). RBMECs, זורעים בצפיפות של 60,000 תאים / 2 ס"מ, מחוברים בעליל על הפנים הע...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שיטת מחקר in vitro המתוארת כאן מייצגת גישה תוקף שימושית כדי לחקור מתן טרנס-BBB של מולקולות ניאון על nanoformulation עם חלקיקים. כאן אנו משתמשים FNN, מייצגת מועמד טוב כדי ללמוד את טרנסלוקציה של מולקולות מטען ברחבי BBB. FNN נחשבת nanovector הזהב למסירה טרנס-BBB של סמים / סוכנים שכן הוא מוכר במיוחד ידי הקולטן TfR1, אשר באה לידי ביטוי על הממברנה luminal של BMECs ומתווך את ספיגת ננו-חלקיקים באמצעות מסלול הפנמה קולטן בתיווך. יתר על כן, FNN הוא ננו-חלקיק טבעי ויש לו ולכן פרופיל ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

המחברים מודים ל-Assessorato alla Sanità, Regione Lombardia ובית החולים Sacco (פרויקט NanoMeDia) על מימון המחקר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים של מוח חולדות InnoprotP10308בודד מרקמת מוח של חולדה Sprague Dawley, נשמר בהקפאה במעבר הראשון והעביר
אסטרוציטים קליפת המוח קפואים InnoprotP10202בודד מרקמת מוח של חולדה במשך יומיים, נשמר בהקפאה במעבר הראשון ונמסר קפוא.
ערכת תאי אנדותל בינוניתInnoprotP60104ECM (500 מ"ל) וסרום בווין עוברי (25 מ"ל), תוסף צמיחת תאי אנדותל (5 מ"ל) ופניצילין/סטרפטומיצין (5 מ"ל). חם ב-37 מעלות; יש אמבט מים C לפני השימוש ולהגן מפני
אור טריפסין-EDTA ללא פנול אדוםEuroCloneECM0920Dלחמם ב-37 מעלות ו-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש
פלואורסצאין איזותיוציאנט-דקסטרן 40,000SigmaFD40Sמגן מפני
פרפורמלדהיד קל סיגמא158127דילול במכסה המנוע הכימי
חוצץ הפוספט של Dulbecco ללא Ca ו-MgEuroCloneECB4004L
Triton  X-100SigmaT8787
אלבומין סרום בקר סרום עיזים SigmaA7906
 EuroCloneECS0200D
עכבר חד שבטי אנטי-פון ווילברנד פקטורDakoM0616
AlexaFluor 546-נוגדן מצומד נגד עכבר IgGsThermoFischer ScientificA-11003להגן מפני
אור DAPI (4', 6-diamidino-2-phenylindole) ThermoFischer ScientificD1306להגן מפני אור
ProLong Gold Antifade MountantThermoFischer ScientificP36934
Poly-L-lysine HydrobromideSigmaP1274ניתן להשתמש באותה תמיסה מספר פעמים
פיברונקטין מפלזמת בקר להשתמש באותה תמיסהSigmaF1141
פוליאתילן טרפתלט (PET) מוסיף ממברנותFalconF3090שטח פנים: 4.2 ס"מ2; גודל נקבוביות 0.4 & מיקרו; m/שטח פנים
T75 Primo TC בקבוקEuroCloneET7076
T175 בקבוק Primo TCEuroCloneET7181
EVOM2 רקמת אפיתל וולט/אוומטר     World Precision Instruments גרמניהEVOM2
Endohm- 24SNAP cupWorld Precision Instruments גרמניהENDOHM-24SNAP
מיקרוסקופ אור/פלואורסצנטי עם מצלמהLeica MicrosystemsDM IL LED Fluo/ ICC50 W מודול מצלמה  מיקרוסקופ הפוך לתאים חיים עם מצלמה 
מיקרוסקופ קונפוקליLeica MicrosystemsTCS SPE
ספקטרופלואוריומטרJascoFP-8000
מלח ניתן מספר פעמים פוליאתילן טרפתלט שקופות (PET) ;

מקורות

  1. Banks, W. A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier. BMC Neurol. 9 (1), 3(2009).
  2. Löscher, W., Potschka, H. Drug resistance in brain disease and the role of efflux transporters. Nat Rev Neurosci. 6, 591-602 (2005).
  3. Xu, G., Mahajan, S., Roy, I., Yong, K. -T. Theranostic quantum dots for crossing blood-brain barrier in vitro and providing therapy of HIV-associated encephalopathy. Front Pharmacol. 15 (4), 140(2013).
  4. Masserini, M. Nanoparticles for Brain Drug Delivery. ISRN Biochem. , (2013).
  5. Sagar, V., Pilakka-Kanthikeel, S., Pottathil, R., Saxena, S. K., Nair, M. Towards nanomedicines for neuroAIDS. Rev. Med. Virol. 24 (2), 103-124 (2014).
  6. Kreuter, J. Drug delivery to the central nervous system by polymeric nanoparticles: What do we know. Adv. Drug Deliver. Rev. 71, 2-14 (2014).
  7. Arosio, P., Ingrassia, R., Cavadini, P. Ferritins: a family of molecules for iron storage, antioxidation and more. Biochim. Biophys. Acta. 1790 (7), 589-599 (2009).
  8. Jääskeläinen, A., Soukka, T., Lamminmäki, U., Korpimäki, T., Virta, M. Development of a denaturation/renaturation-based production process for ferritin nanoparticles. Biotechnol. Bioeng. 102 (4), 1012-1024 (2009).
  9. Jefferies, W. A., Brandon, M. R., Hunt, S. V., Williams, A. F., Gatter, K. C., Mason, D. Y. Transferrin receptor on endothelium of brain capillaries. Nature. 312, 162-163 (1984).
  10. Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology. Cell. Mol. Neurobiol. 25 (1), 59-127 (2005).
  11. Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier. Acta Neurobiol. Exp. (Wars). 71, 113-128 (2011).
  12. Wilhelm, I., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain. Mol Pharm. 11 (7), 1949-1963 (2014).
  13. Bellini, M., et al. Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in Cancer Cells. J. Control. Release. 196, 184-196 (2014).
  14. Fiandra, L., et al. Nanoformulation of antiretroviral drugs enhances their penetration across the blood brain barrier in mice. Nanomedicine. 11 (6), 1387-1397 (2015).
  15. Molino, Y., Jabès, F., Lacassagne, E., Gaudin, N., Khrestchatisky, M. Setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (BBB): a focus on BBB impermeability and receptor-mediated transport. J. Vis. Exp. , e51278(2014).
  16. Perrière, N., et al. A functional in vitro model of rat blood-brain barrier for molecular analysis of efflux transporters. Brain Res. 1150, 1-13 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

ננו-חלקיקי פריטיןחדירות FITCהתנגדות חשמלית טרנס-אנדותליאליתמיקרוסקופיה קונפוקליתתרביות תאים משולבותהובלת ננו-פורמולציהתרבית משולבת של אסטרוציטים ואנדותלניתוח בספקטרופלואורומטרציפוי Poly L Lysine
במבחנה חלחול של FITC טעון Ferritins מעבר מכשול עכברוש דם-מוח: מודל לחקר משלוח מולקולות Nanoformulated
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.