מאמר שיטה

פיתוח של מערכת כנס עמית התרבות שני סוגים סלולריים בהעדר לתקשר Cell-Cell

DOI:

10.3791/54356

⸱

17 ביולי 2016

 , 
1Dept. of Medical Biology, University of Québec

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באורגניזמים רב-תאיים, גורמים מסיסים המופרשים מעוררים תגובות מסוגי תאים שונים כתוצאה מאיתות פרקריני. מערכות תרבית משותפת מציעות דרך פשוטה להעריך את השינויים המתווכים על ידי גורמים מסיסים המופרשים בהיעדר מגע תא-תא.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תפקידם של גורמים מסיסים המופרשים בשינוי התגובות התאיות הוא נושא חוזר בחקר כל הרקמות והמערכות. בניסיון להבהיר את היחסים המורכבים מאוד בין מספר תת-הסוגים התאיים המרכיבים אורגניזמים רב-תאיים, פותחו טכניקות במבחנה כדי לסייע לחוקרים לרכוש הבנה מפורטת של אוכלוסיות תאים בודדים. אחת הטכניקות הללו משתמשת בתוספות עם קרום חדיר המאפשר לגורמים מסיסים המופרשים להתפזר. לפיכך, אוכלוסיית תאים הגדלה בתוספות יכולה להיות מתורבת בבאר או בצלחת המכילה סוג תא אחר להערכת שינויים תאיים בעקבות איתות פרקריני בהיעדר מגע תא-תא. מערכות תרבית משותפת כאלה מציעות יתרונות שונים על פני טכניקות אחרות של תרבית משותפת, כלומר איתות דו-כיווני, קוטביות תאים שמורה וזיהוי ספציפי לאוכלוסייה של שינויים תאיים. בנוסף לשימוש בתחום הדלקת, הסרטן, אנגיוגנזה והתמיינות, מערכות קו-תרבית אלה הן בעלות חשיבות עליונה בחקר הקשרים המורכבים הקיימים בין תת-הסוגים התאיים השונים הקיימים במערכת העצבים המרכזית, במיוחד בהקשר של דלקת עצבית. מאמר זה מציע קווים מנחים מתודולוגיים כלליים על מנת להקים ניסוי על מנת להעריך שינויים תאיים המתווכים על ידי גורמים מסיסים המופרשים באמצעות מערכת תרבית משותפת. יתר על כן, יפורט פרוטוקול ספציפי למדידת ההשפעות הנוירו-דלקתיות של ציטוקינים המופרשים על ידי מיקרוגליה N9 המופעלת על ידי ליפופוליסכריד על תאי PC12 עצביים, המציע הבנה קונקרטית של מתודולוגיית תרבית משותפת.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר של רקמות, איברים או מערכות במבחנה הוא ניסיון לפשט את היחסים המורכבים מאוד הקיים בין תת הסלולר מספר המרכיבות יצורים רב-תאיים. ואכן, מחקרים במבחנה מאפשרים לרכוש הבנה מפורטת של אוכלוסיות תא בודדות. ישנם שני יתרונות גדולים של עורכת ניסויים במבחנה: 1) מופחתים אינטראקציות הסלולר, ו -2) את היכולת לתפעל את הסביבה התאית בקלות. לפיכך, שני יתרונות אלה מדענים מותר לחזות את ההתנהגות של סוגי תאים מסוימים in vivo, שמוביל את היכולת לווסת תוצאות של השפעות חיצוניות באורגניזמים כולו. במובן זה, תרבית תאים במבחנה בדרך כלל עובדת כגשר מחבר מדעי חיים בסיסיים ויישומים. עם זאת, ישנם גם כמה חסרו....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

נ.ב: כל אחד מן השלבים הבאים צריך להתבצע בתנאים סטריליים במנדף זרימה למינרית כנדרש על תרבית תאים יונקת. בנוסף, ההנחיות הכלליות לגידול תאים סטריליים אופטימליים להחיל, למשל., השלכת טיפים בכל עת שהם עלולים לגרום זיהום צולב, הפחתת כמות תאי הזמן נחשפים לאוויר בעת ביצוע שינויים התקשורת כולו, כמו שצריך, אבל בעדינות כדי ערבוב את כל המתלים תא כדי להבטיח pipetting הומוגנית שלהם, ועוד יותר מכך, מוסיף הם סוג של plasticware הדורשים טיפול מיוחד. ראשית, בכל פעם מוסיפה הם מניפולציה, אל תיגע קרום השביר, הקורעת בקלות ולכן עלול לסכן את הניסוי. כמו כן, אין זה נכון להציג ואקום שאיפה של מדיום תרבית תאים, כפי קיים סיכון של ניקוב הקרום או מתנע....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השימוש במערכות שיתוף תרבות כנס רלוונטי במיוחד בחקר של תהליכי neuroinflammatory שופכי אור יחסי paracrine בין שחקנים סלולריים השונים של מערכת העצבים המרכזית. חסינות של מערכת העצבים המרכזי מושגת בעיקר על ידי תאי תושב קרואי מיקרוגליאה מנטר סביבתם במצב מסועף הנח שלהם (איור 2 א) ומסוגלים הפרעות חישה שיכול להטריד את הומאוסטזיס יקרה מאוד הכרחית לתפקוד עצבי ראוי 76-78. הפעלת microglial, המאופיינת אימוץ צורה אמבואידית (תרש.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השלב הקריטי ביותר של כל ניסוי מערכת שיתוף תרבות כנס למעשה שוכן בבחירת הכנס הראוי לשימוש. גודל נקבובי וחומר קרום חייבים להילקח בחשבון יסודי, מבלי לשכוח לקחת בחשבון את הסוג של תא יהיה זורע ואת מטרת הניסוי. לדוגמה, מבחני chemotaxic עשויים להשתמש באותו סוג של קרום מ שיתוף תרבויות התא לנתח מודולציות התנהגות התא הנגרמת על ידי גורמים מסיסים מופרש בהעדר מגע תאים תאים. עם זאת, שני סוגי ניסויים דורשים גדלים נקבוביים שונים: בגדולים עבור לשעבר, כדי לאפשר נדידת תאים, ואת קטנים באפשרות השנייה, .......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי מענק של מועצת המחקר למדעי הטבע וההנדסה (NSERC) בקנדה ל-MGM. ג'יי.אר הוא עמית סטודנטים ב-NSERC-Vanier.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
RPMI-1640 בינוניסיגמאR8755חם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש
Dulbecco' s Modified Eagle' s תערובת בינונית/תזונתית F-12 חזירSigmaD6421חם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש, יש להוסיף 0.365 גרם/ליטר סרום L-גלוטמין
לסוסיםATCC30-2040חם ב-37 מעלות; C אמבט מים לפני השימוש
סרום בקר עובריMultiCell80350חם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש
Nerve Growth Factor-7S מבלוטה תת-לסתית של עכבריםSigmaN0513להרכיב מחדש את האבקה הליופילית בתמיסה של תמיסת מלח חוצצת או מדיום תרבית רקמה המכיל 0.1– 1.0% אלבומין בסרום בקר או 1-10% סרום
תמיסת טריפסין-EDTASigmaT3924חם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש
ליפופוליסכרידים מ  Escherichia coli  055:B5SigmaL2880
מוסיף תרבית תאים רעילים לשימוש עם צלחות 24 בארותBD Falcon353095 0.4 μ m נקבוביות
צלחות 24 בארותציפוי TrueLineTR5002עם קולגן לפני השימוש
מדיוםשגרתי מדיום תרבית תאי N9 שגרתי
-            85% RPMI בינוני-            90% DMEM-F12 בינוני
-            10% סרום סוסים מומת בחום           10% סרום סוסים מומת בחום
-            5% סרום
PC12 מדיוםהתמיינות N9 מדיום טיפול
-              99% RPMI בינוני-            99% DMEM-F12 בינוני
-              1% סרום בקר עוברי מומת בחום           1% סרום בקר עוברי מומת בחום
-              50 ננוגרם/מ"ל גורם
PC12 מדיום
-              99% RPMI בינוני
-              1% סרום
תרבית תאי PC12 - בקר עוברי מומת בחום- גדילה עצבי טיפול בקר עוברי מומת בחום

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Grobstein, C. Morphogenetic interaction between embryonic mouse tissues separated by a membrane filter. Nature. 172 (4384), 869-870 (1953).
  2. Hoffman, R. A. Intraepithelial lymphocytes coinduce nitric oxide synthase in....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Insert Co culture SystemParacrine SignalingCell Cell ContactN9 MicrogliaPC12 CellsLipopolysaccharide ActivationCytokine SecretionCytotoxicity AssayTissue Culture PlatePermeable Membrane Inserts

מאמרים קשורים