הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis

8.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54626

⸱

14 בינואר 2017

 , 
1Department of Biochemistry and Cell Biology, Center for Developmental Genetics, Stony Brook University

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מדגימים כיצד לגרום ולנטר התחדשות בשושנת ים הכוכב Nematostella vectensis, מודל אנתוזואן קנידרי. אנו מדגימים כיצד לקטוע ולסווג התחדשות באמצעות מערכת בימוי מורפולוגית, ואנו משתמשים במערכת זו כדי לחשוף דרישה לאוטופגיה בהתחדשות מבני פוליפ.

תקציר

צורבים, ובאופן ספציפי הידרה, היו הבעלים החיים הראשונים הראו להתחדש מבנים שניזוקו או נקטעים, ואכן מחקרים כאלה לטעון השיקו חקירה ביולוגית מודרנית דרך העבודה של Trembley לפני יותר 250 שנה. נכון להיום המחקר של התחדשות חלה התעוררות מחודשת הן באמצעות "קלאסיים" אורגניזמים רגנרטיבית, כגון הידרה, planaria ו Urodeles, כמו גם קשת הרחבת מינים פורש טווח של metazoa, מן ספוגים באמצעות יונקים. מלבד העניין המהותי שלה כתופעה ביולוגית, הבנה כיצד התחדשות עובדת במגוון מינים תרצינה להודיע ​​לנו על האם תהליכי התחדשות לשתף תכונות משותפות ו / או מינים או בהקשר ספציפי מנגנונים תאיים ומולקולריים. כלנית הים כוכבנית, vectensis Nematostella, הוא אורגניזם מודל המתעוררים להתחדשות. כמו ההידרה, Nematostella הוא חבר של המערכה העתיקה, הצורבים, אבל בתוך tהוא בכיתה anthozoa, clade אחותו אל הידרתים כי הוא אבולוציונית יותר הבסיס. לכן היבטים של התחדשות Nematostella יהיו מעניינים להשוות לעומת עם אלה של ההידרה צורב אחרים. במאמר זה, אנו מציגים שיטה לחצות, להתבונן ולסווג התחדשות של סוף aboral של המבוגר Nematostella, אשר נקרא physa. Physa עובר ביקוע טבעי כאמצעי רבייה מינית, ואו ביקוע טבעי או קטיעה ידנית של physa מפעילה מחדש צמיחה הרפורמציה של מורפולוגיות מורכבות. כאן יש לנו קודיפיקציה שינויים מורפולוגיים פשוטים אלה בתוך מערכת Staging התחדשות Nematostella (להלן NRSS). אנו משתמשים NRSS כדי לבחון את ההשפעה של chloroquine, מעכב פונקציה ליזוזומלית שחוסמת autophagy. התוצאות מראות כי התחדשות של מבנים פוליפ, ובמיוחד mesenteries, הוא לא נורמלי כאשר autophagy מעוכבת.

מבוא

התצפית של התחדשות ב הידרה יחיד הייתה האירוע המכונן כניסתו של ביולוגיה כמו 1,2 מדע ניסויי. ההתחדשות נשארת תופעה של משיכה רחבה באופן יוצא דופן כדי ביולוג ולהניח אדם כאחד. פוטנציאל ביולוגים התפתחותיים, קלינאים, מדענים ביו מהנדסים רקמות להבין ולהתגבר על המגבלות על התחדשות אדם עושה ביולוגית התחדשות יותר מעניין מהותי.

עכשיו, עם השימוש של טכנולוגיות מתפתחות כגון הגנום רצף רווח והפסד של כלי פונקציה, השדה צפוי ניסה להפריד מנגנון שיקום וכדי בסופו של דבר להבין כיצד שונה מינים יכול להתחדש בעוד שאחרים לא יכולים. מידת האחידות בתגובות מולקולריות, תאית מורפולוגיים נותרה הובהרה, אך עד כה נראה כי התגובות הבסיסיות בקרב בעלי חיים שיכולים להתחדש דומות יותר מאשר יצטרך Imagi היהנד רק לפני עשור 3.

צורב בפרט הם קלילים על התחדשות כמעט כל חלקי גופם בתוך קשת רחבה של גיוון מורפולוגיים. מתוך פוליפ מים הבודד הטרי, הדרתי יחד עם הפוליפים הימיים הזעירים לבנות שוניות אלמוגים עצומות, אל בסיפונופורים הקולוניאלי המורכב, כגון Man-O-המלחמה הפורטוגזית, התחדשות היא לעתים קרובות במצב של רבייה, בנוסף מנגנון תיקון או רפורמה חלקי גוף פגומים או אבד כתוצאה מפגיעה וטריפה. אם המינים השונים של צורבים להשתמש מנגנונים דומים או שונים להתחדשות היא שאלה מעניינת ביסודו 4-6.

אנחנו, ואחרים כבר בפיתוח anthozoan, Nematostella vectensis כמודל התחדשות 7-17. אנחנו לאחרונה פתחנו מערכת אחסון זמנית לתיאור התחדשות של גוף כולו מחתיכה אחידה מורפולוגית של רקמות נחצתה מן aboraסוף l של הפוליפ 10. בעוד פוליף Nematostella יכולים להתחדש כאשר נחצו ברמה כזו או אחרת, בחרנו לחתוך מבוגרים לעבר עמדת aboral באזור הפשוט ביותר מורפולוגית, את physa, בין שאר כי זה קרוב המטוס הרגיל של ביקוע מיני טבעי 18, וגם בגלל זה תצפית היתרים בניתוחים מולקולריים לאופן שבו גוף כולו מחדש מן הרכיבים מורפולוגיים הפשוטים.

מערכת staging התחדשות Nematostella (NRSS) מספקת מערכת פשוטה יחסי של מבחני ביצועים מורפולוגיים שיכול לשמש להבקיע את ההתקדמות של כל היבט של התחדשות ידי physa קטוע, בתנאי תרבות נורמלים או ניסיוני מוטרד מצבים כגון טיפולי מולקולה קטנים, מניפולציה גנטית , או שינוי סביבתי. כצפוי, NRSS הופכת אמצה כמו פיגום מורפולוגיים שעליו האירועים התאיים ומולקולריים של התחדשות יכולים להיות הופנה10.

לבסוף השיטה של חיתוך שלנו מייצרת הזמנות כמה חור שנפערו גודל גדול יותר לנקב סיכת נקודה בשימוש במחקר שנערך לאחרונה 17, עדיין הוא לרפא את הפצעים סביב 6 שעות. תיעוד השלב חזותי מעצר והמובחן של סגירת פצע צריכה להציע גישות ניסיוניות להסביר את העצמאות לכאורה של הגודל של פצע ואת הזמן שנדרש כדי לסגור. לפיכך, הבנה ויזואלית עמוקה יותר של תהליך קטיעת aboral, המסופקת על ידי פרוטוקול זה, תסייע חקירות נוספות לתוך מערכת התחדשות המודל הזה ולהרחיב את היישום של מערכת קביעת שלב זו באמצעות Nematostella vectensis.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מיזוג 1. של בעלי חיים עבור טמפרטורה, תזונה מחזור אור / חושך

  1. השג מבוגרי vectensis Nematostella מאחד מעבדות Nematostella הרבות ברחבי העולם, או ספק ללא כוונת רווח (לוח 1)
  2. לשמור Nematostella בטמפרטורה קבועה (בדרך כלל בין 18 ו -21 מעלות צלזיוס) בחושך, ב "1 / 3x" מים לים מלאכותיים (ASW) במליחות של 12 חלקים לאלף (ppt). לשמור על תרבויות במנות תרבות זכוכית פשוטה סודה-סיד, בדרך כלל 250 מ"ל או 1.5 ליטר קיבולת 11.
    הערה: תנאי התרבות פשוטים אלה משמשים בדרך כלל בין מעבדות ללמוד Nematostella, אך טיפול תרבות יכול גם להיות אוטומטי 19.
  3. Feed הארטמיה Nematostella טרי בקעו Nauplii 2 - 4x בשבוע. ציסטות הארטמיה האץ במלוא העוצמה (36 ppt) או 1 / 3x ASW על 30 מעלות צלזיוס, בצלחת זכוכית מלבני רדוד 20 או בכל מספר של בקנה מידה קטנה, מדגרות ארטמיה מסחריות או תוצרת בית. אם באינקובטור אינו זמין, שרימפס יבקעו ב RT אבל לעשות זאת לאט יותר.
    הערה: זה בדרך כלל דורש יותר מ -24 שעות להשלמה.
  4. חלף מי תרבות כלנית לפחות פעם בשבוע. לבריאות המבוגרת הטובה ביותר, נקי (ללא סבון) תרבות קערות פעם בשבוע של פרשות ריר מצטברות, אשר מעיילת הקערה יכולים מלכודת מזון שלא נאכל ופסולת, לסבך את החיות.

בחירה 2. והרפיה של בעלי חי אוויר התזונתי

  1. גודל בהתאמה בחר פוליפים של באותו אורך כ (3 - 5 ס"מ, כאשר באופן טבעי רגוע) ומניחים אותם בקערה מופרד המושבה במשך שלושה ימים לפני קטיעה.
    הערה: מספר בעלי החיים שנבחרו לחיתוך ייקבע על ידי הניסוי מתנהל, כמובן, אבל באופן כללי אנו ממליצים לפחות חמישה בעלי חיים לכל נקודות לדוגמא עם שש משוכפלים. כָּך,בניסוי טיפוסי מינימום של 30 חיות יהיה שנבחר מראש. באופן כללי, זה חכם כדי לבחור יותר מהמספר המזערי (30) מאז קטיעות כי הם לא סדירים (ראו להלן) יכול מאוחר יותר להשפיע ניקוד.
  2. מוציאים את המאפה של חיות שנבחרו מהחממה אל האור בחדר לפחות שעה אחת לפני קטיעה.
    הערה: זמן חשיפה לחדר אור תנודות של טיפול צפוי לגרום החיות להתכווץ, ולכן הם צריכים להיות מותאמים או "רגועים" על ידי דגירה על ספסל המעבדה. בעלי חיים יהפכו עקשן לגעת וחשיפה לאור ובשלב כי ניתן להעביר על ידי pipetting עדין.
  3. אופציונלי: להרדים את החיות על ידי הוספת 7.5% MgCl 2 (ב 1 / 3x ASW). בעדינות להוסיף את הפתרון MgCl 2 לקערה עם טפטפת פלסטיק 5 מ"ל סטנדרטי.
    הערה: למרות חיות תהפוך בסופו של דבר מורגל אל האור מניפולציה פיזית, זה יכול להיות יתרון להרדים בעלי חיים על מנת לקיים או "לתקן" tהוא נרגע מדינה אחרי שהם הפכו 16,21,22 מוארכים.
  4. השתמש משעמם רחב פיפטה פלסטיק (> 0.5 ס"מ) להעביר (ב 1 / 3x ASW) חמישה בעלי חיים מבריכת צורך לקטוע, לתוך החלק התחתון של צלחת חיתוך זכוכית סטרילית של בקוטר 100 מ"מ המכיל 12 ASW ppt. מניחים את צלחת על הבמה של סטראו עם הגדלה משתנה בין 10 - 40X.
    הערה: אם בעלי החיים לא הורדמו ורגוע לחיתוך, הם עדיין יכולים להגיב למגע ואת התאורה סטריאוסקופ ובכך עשוי להזדקק כמה דקות להיות רגוע שוב.

3. קטיעה

  1. באמצעות אזמל סטרילי, לקטוע את physa aboral מכל פוליפ, במטרה להשיג קטע physa כי הוא כ כל עוד זה הוא רחב המכיל לא לפדר.
    הערה: האתר לחתוך האידיאלי הוא פשוט aboral אל הסיום לפדר. על המטוס של חיתוך ישנו מעבר מ לפדר ראוי l הדקאינס מתאים לכל אחד החדרת mesenterial (ראה איור 1, חיצים). עדר לפדר הוא קריטי משום שהיא מייצרת ריר שעשוי להקל 'חיבור' החור 17,30.
    1. מניחים את להב סכין המנתחים במגע עם החיה באתר הרצוי של קטיעה. בצע פעולה זו על העצמאית (חופשי), או על ידי בעדינות לתפוס את הגוף של החיה עם # 5 מלקחיים (בסגנון דומון או דומה).
    2. חותכים דרך הרקמה על ידי מינוף הלהב המעוקל של אזמל בתנועה 'נדנדה' על פני הגוף.
      הערה: רקמת צריך לנתק בצורה נקייה כמו סכין המנתחים הוא התנדנד ולשחרר את החלק הרצוי physa מן התורם. עם זאת, אם חתיכה קטנה של רקמה עדיין מתחברת לגוף physa, לחתוך אותו עם סכין המנתחים. אל תנסה להפריד בין החלקים מחוברים על ידי משיכת, מכיוון שהדבר עלול לגרום נזק physa.
  2. הסר כל פוליפ 'תורם' נקטע מהצלחת ולהחזיר אותו SEPAקערה שיעור שכותרתו "קטועי גפיים ונקווה '; לתארך את הקערה ולהחזיר אותו לתרבות מניות.
    הערה: פוליפים קטומים ירפא את הפצע aboral תוך יום ואז יכול להיות מוזן באופן נורמלי. הם להתחדש physa נורמלי מחפש בתוך שבועות ובנקודה את physa ניתן נקטעו שוב אם ירצה בכך.
  3. שוטפים את physa נכרת שנותרו בצלחת חיתוך ב ASW 12 ppt, ולאחר מכן להעביר כל physa אל באר סטרילי נפרד בצלחת תרבית תאים רב גם כי יש כבר 10 מ"ל של ASW 12 ppt בכל טוב.
    הערה: בדוגמא זו נעשתה שימוש צלחת שש היטב, עם כל מחזיק גם 10 מיליליטר של מי ים וחמש נכרת physa. במי ים בכלל צריך לכסות את physa מספיק כדי למנוע חשיפה לאוויר בשל תנועת טיפול אידוי פוטנציאלי. הצלחת או הבארות צריכה מכסה.
  4. חזור על שלבים 3.1 - 3.3 לאסוף לפחות 5 physa בכל טוב מאופק עבור כל טיפול ניסיוני.
  5. דגירה physa בטמפרטורה אשר provIDE קצב ההתחדשות הטוב ביותר לקראת חקירתם ניסיוני המתוכננת. מניח את הצלחת המכילה את physa לתוך חממה מוסדרת טמפרטורה, בטמפרטורה קבועה נקבעה על ידי השיעור של התחדשות הרצויה.
    ההערה: physa יהיה לחדש רקמות חסרות ויוצרי פוליפ מלא כאשר מודגרות בטמפרטורות שבין 15 ו -27 מעלות צלזיוס. שיעור ההתחדשות תלוי בטמפרטורה למעט שני השלבים הראשונים. היום הממוצע להגעת שלב 4 עבור כל בטמפרטורות הוא 7 ד לאחר גזירה זו גם עולה בקנה אחד עם התחדשות ב 21 מעלות צלזיוס. בשעה 27 ° C, שלב 4 הוא הגיע כ -3 ימים קודם לכן ב -15 ° C, שלב 4 מתעכב בכ -3 D לעומת התחדשות ב 21 ° C (ראה גם הפניה 10).

4. הערכת התחדשות עם מערכת האחסון הזמני התחדשות Nematostella (NRSS)

  1. ציון את physa באמצעות מיקרוסקופ סטריאו-מתחם עם magnific משתנהation (10 - 80x). ציון את physa טרי חתוך Nematostella כמו שלב 0 ולהמשיך הבקיע באותו זמן כל קטיעה פוסט יום (DPA) באמצעות NRSS 10.
    הערה: קריטריוני staging מפתח ופרטים להפנות הפנית 10.
    1. ציון physa כמו שלב 0 (פצע פתוח) אם physa טרי חתוך מופיע כגוש cup- בצורת דמוי בלון רפוי, עם אתר פצע פתוח צפוי גלוי.
      הערה: שולי הפצע עלולים גם להישאר ביחד מלכתחילה, אבל הרקמה עדיין תכווץ וחוסר נוקשות. שולי הפצע הפתוח אפשר לראות עוברים התכווצות רדיאלי כמו מרפא הפצע.
    2. ציון physa כמו שלב 1 (פצע נסגר) אם פצע הקטיעה מופיע סגור.
      הערה: מיקום הפצע יתאים הקוטב אוראלי בעתיד. המשטח החיצוני סביב הקוטב האוראלי בעתיד עשוי להתחיל להציג קשתות מובהקות מתאימות הוספות mesenterial שבבסיס רדיאלית הסימטרי endodermal.
    3. ph ציוןYSA כמו שלב 2 (קשתות רדיאלי) אם פני השטח של המוט האוראלי מופיע מנופחים, חושף שמונה קשתות עלה מסודרות בתוך תבנית סימטרית רדיאלית והופרדו חריצים. שימו לב קטן, blebs hemispherical בשיא של הקשתות. הם יהיו על גבוה כמו רחב, חולף סביר, ובתחילה מורכבים על ידי שכבת תאי ectodermal יחידה.
      הערה: במקרים מסוימים blebs דו שכבתי עשוי לייצב. הערה: בשלב זה או אחר טיולי שכבת ריר עשויה להופיע כדי לתמצת את physa (איור 2) ב 'נדן' קרומי. חומר encapsulating זה צריך להסיר כדי להקל ניקוד.
    4. ציון physa כמו השלב 3 (Tentacle) אם הניצנים של הזרועות המכילות שכבות רקמת endodermal ו ectodermal נוצרים ביציבות בסוף הפה של לפחות קשתות רדיאלי כמה.
      הערה: הזרועות ארוכות יותר מאשר הם רחבים הם מינימאלי ניע. Physa מציגה את הגדילה, אך אינפלציה משתנית כך יסודות לפדר עלולים להפוך מולible המשתרעת החדרת mesenterial לתוך חלל הגוף (coelenteron).
    5. ציון physa כמו שלב 4 (לינארית Mesenteries) אם physa מכיל שמונה mesenteries ברורים, גלויים שמרחיבים לתוך coelenteron מ הוספות בקיר הגוף, עם אורכים אוראליים aboral כי הם יותר מפי שתיים הרוחב רדיאלי שלהם נמדד ממקום שבו הם מופיעים להתחבר אל הלוע בקצה aboral שלה (enterostome).
      הערה: ארבעה או פחות יש mesenteries "קפלים" קצוות חינם פנימיים. הלוע גלוי. למעלה משמונה זרועות גלויות, ניע ולפעמים הם מתכווצים לתוך הגוף.
    6. ציון physa כמו שלב 5 (Mesenteries קפלים בעיקר) אם physa יש יותר מארבע mesenteries עם קפול, ואת קפול הוא יותר מלא ומתפתל מאשר בשלב 4. חיה יש כמעט "רגיל" המראה מבוגר, אבל אין גלוי תאי אשכים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ההתקדמות של אירועים מורפולוגיים במהלך רגנרציה ב physa הכרות מוצג באיור 1 א ', הכולל נופים נציג physa בכל שלב NRSS. האתר לחתוך physa הטיפוסי מותווה על המבוגר (ראשי החץ). הצילומים איור 1A להראות התחדשות מתקדמת של מבנים אוראלי הגוף מפני physa טרי ביקע פוליפ נוצר באופן מלא. איור 1B, C להראות את הסדר של המחיצה הפנימית, mesenteries, בשלב 4 ושלב 5, בהתאמה. שימו לב כמה mesenteries בשלב 4 יחסר "קפול", אבל כ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שימוש Nematostella כמודל של ריפוי פצעים והתחדשות אהיה יותר ויותר פופולרי. לכן, חשוב להיות מסוגל לדמיין את דפוסי מורפולוגיים של פרוטוקול מסוים לפני ניתוחים תאיים ומולקולריים יעילים ניתן להקצות והשווה. Nematostella יש רמה גבוהה של "גמישות" משובים, יכולת לבצע רפורמה כמעט כל מבנה חסר נקטע בכל מקום, בשלבים שלאחר planula חיים. לפיכך, חוקרים שונים בחנו התחדשות נובעי קטיעה או פציעה באזורים שונים של פוליפים, בגילים שונים וגדלים 7-18.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי תאי גזע ניו יורק למדע (NYSTEM C028107) מענק GHT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Nematostella vectensis, מבוגריםמעבדה ביולוגית ימית (MBL)ספק ללא מטרות רווח
צלחת תרבית זכוכית, 250 מ"לאספקה ביולוגית של קרוליינה741004250 מ"ל
צלחת תרבית זכוכית, 1,500 מ"לאספקה ביולוגית של קרוליינה7410061,500 מ"ל
פיפטת העברת פוליאתילן, 5  מ"לארה"ב מדעי 1022-2500קדח צר, בוגר
צינור העברת פוליאתילן, מחודדSamco202-205חתך 1 אינץ' של קצה כדי ליצור קדח רחב
פעמי אזמלנוצות בטיחות סכין גילוח בע"ממס' 10להב מס' 10 צריך להיות מעוקל
# 5 Dumont פינצטה עדינהRobozRS5045ספקים חלופיים זמינים
צלחת פטרי פיירקס, קורנינג בקוטר 100 מ"מ3160יכול להחליף לוחות פטרי זכוכית אחרים
צלחת סטרילית 6 בארותקורנינג פלקון 353046או דומה מיצרן אחר
צלחת סטרילית 12 בארותNunc 150628או דומה מיצרן אחר
צלחת סטרילית 24 בארותCelltar, Greiner bio-one662-160או דומה מיצרן אחר
ערכת שנאת שרימפס מלחמפרץ סן פרנסיסקו; drsfostersmith.comCD-154005אפשרות לגידול תבנית אפייה פיירקס שרימפס מלח
הנפוצה בחנויותאפשרות לגידול שרימפס מלח
תערובת מי ים מלאכותיים 50 גל ומעלה אוקיינוס מיידי; drsfoster-smith.comCD-116528מותגים אחרים עשויים להספיק
אמבט פלסטיק להכנת ASWפח אשפה פלסטיק נפוץ
פוליפרופילןקרבוי קרולינה אספקה ביולוגית716391למלאי עבודה של ASW @ 12 ppt
, בוגר, 4,000 מ"למעבדות PhytoTechnologyB199לדילול של 36 ppt ASW ל 12 ppt
סטריאומיקרוסקופ ומקור אורשונים עם הגדלה רציפה של 1 - 40X
חד מכולת שונים 25 ליטר בסדר

מקורות

  1. Lenhoff, S. G., Lenhoff, H. M. Hydra and the Birth of Experimental Biology: Abraham Trembley's Memoirs Concerning the Natural History of a Type of Freshwater Polyp with Arms Shaped like Horns. , The Boxwood Press. (1986).
  2. Trembley, A. Mémoires pour servir à l'histoire d'un genre de polypes d'eau douce, à bras en forme de cornes. , Jean & Herman Verbeek. (1744).
  3. Poss, K. D. Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals. Nat Rev Genet. 11 (10), 710-722 (2010).
  4. Galliot, B. Hydra, a fruitful model system for 270 years. Int J Dev Biol. 56 (6-8), 411-423 (2012).
  5. Gold, D. A., Jacobs, D. K. Stem cell dynamics in Cnidaria: are there unifying principles? Dev Genes Evol. 233 (1-2), 53-66 (2013).
  6. Holstein, T. W., Hobmayer, E., Technau, U. Cnidarians: an evolutionarily conserved model system for regeneration? Dev Dyn. 226 (2), 257-267 (2003).
  7. Amiel, A. R., et al. Characterization of Morphological and Cellular Events Underlying Oral Regeneration in the Sea Anemone, Nematostella vectensis. Int J Mol Sci. 16 (12), 28449-28471 (2015).
  8. Warren, C. R., et al. Evolution of the perlecan/HSPG2 gene and its activation in regenerating Nematostella vectensis. PLoS One. 10 (4), e0124578(2015).
  9. Gong, Q., et al. Integrins of the starlet sea anemone Nematostella vectensis. Biol Bull. 227 (3), 211-220 (2014).
  10. Bossert, P. E., Dunn, M. P., Thomsen, G. H. A staging system for the regeneration of a polyp from the aboral physa of the anthozoan Cnidarian Nematostella vectensis. Dev Dyn. 242 (11), 1320-1331 (2013).
  11. Stefanik, D. J., Friedman, L. E., Finnerty, J. R. Collecting, rearing, spawning and inducing regeneration of the starlet sea anemone, Nematostella vectensis. Nat Protoc. 8 (5), 916-923 (2013).
  12. Tucker, R. P., et al. A thrombospondin in the anthozoan Nematostella vectensis is associated with the nervous system and upregulated during regeneration. Biol Open. 2 (2), 217-226 (2013).
  13. Passamaneck, Y. J., Martindale, M. Q. Cell proliferation is necessary for the regeneration of oral structures in the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis. BMC Dev Biol. 12, (2012).
  14. Trevino, M., Stefanik, D. J., Rodriguez, R., Harmon, S., Burton, P. M. Induction of canonical Wnt signaling by alsterpaullone is sufficient for oral tissue fate during regeneration and embryogenesis in Nematostella vectensis. Dev Dyn. 240 (12), 2673-2679 (2011).
  15. Renfer, E., Amon-Hassenzahl, A., Steinmetz, P. R., Technau, U. A muscle-specific transgenic reporter line of the sea anemone, Nematostella vectensis. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (1), 104-108 (2010).
  16. Burton, P. M., Finnerty, J. R. Conserved and novel gene expression between regeneration and asexual fission in Nematostella vectensis. Dev Genes Evol. 219 (2), 79-87 (2009).
  17. DuBuc, T. Q., Traylor-Knowles, N., Martindale, M. Q. Initiating a regenerative response; cellular and molecular features of wound healing in the cnidarian Nematostella vectensis. BMC Biol. 12, (2014).
  18. Hand, C., Uhlinger, K. R. Asexual reproduction by transverse fission and some anomalies in the sea anemone Nematostella vectensis. Invert Biol. 114, 9-18 (1995).
  19. Fritzenwanker, J. H., Technau, U. Induction of gametogenesis in the basal cnidarian Nematostella vectensis(Anthozoa). Dev Genes Evol. 212 (2), 99-103 (2002).
  20. Magie, C., Bossert, P., Aramli, L., Thomsen, G. Science's super star: The starlet sea anemone is an ideal tool for student inquiry. The Science Teacher. 83 (3), 33-40 (2016).
  21. Genikhovich, G., Technau, U. In situ hybridization of starlet sea anemone (Nematostella vectensis) embryos, larvae, and polyps. Cold Spring Harb Protoc. (9), (2009).
  22. Magie, C. R., Pang, K., Martindale, M. Q. Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis. Dev Genes Evol. 215 (12), 618-630 (2005).
  23. Chera, S., Kaloulis, K., Galliot, B. The cAMP response element binding protein (CREB) as an integrative HUB selector in metazoans: clues from the hydra model system. Biosystems. 87 (2-3), 191-203 (2007).
  24. Reitzel, A. M., Burton, P. M., Krone, C., Finnerty, J. R. Comparison of developmental trajectories in the starlet sea anemone Nematostella vectensis: embryogenesis, regeneration, and two forms of asexual fission. Invertebr Biol. 126, 99-112 (2007).
  25. Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis. Nat Commun. 5, 5486(2014).
  26. Jahnel, S. M., Walzl, M., Technau, U. Development and epithelial organisation of muscle cells in the sea anemone Nematostella vectensis. Front Zool. 11, 44(2014).
  27. Kelava, I., Rentzsch, F., Technau, U. Evolution of eumetazoan nervous systems: insights from cnidarians. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1684), (2015).
  28. Nakanishi, N., Renfer, E., Technau, U., Rentzsch, F. Nervous systems of the sea anemone Nematostella vectensis are generated by ectoderm and endoderm and shaped by distinct mechanisms. Development. 139 (2), 347-357 (2012).
  29. Richards, G. S., Rentzsch, F. Transgenic analysis of a SoxB gene reveals neural progenitor cells in the cnidarian Nematostella vectensis. Development. 141 (24), 4681-4689 (2014).
  30. DuBuc, T. Q., et al. In vivo imaging of Nematostella vectensis embryogenesis and late development using fluorescent probes. BMC Cell Biol. 15, (2014).
  31. Kaur, J., Debnath, J. Autophagy at the crossroads of catabolism and anabolism. Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 461-472 (2015).
  32. Carroll, B., Korolchuk, V. I., Sarkar, S. Amino acids and autophagy: cross-talk and co-operation to control cellular homeostasis. Amino Acids. 47 (10), 2065-2088 (2015).
  33. Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. Autophagy: cellular and molecular mechanisms. J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).
  34. Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. Autophagy in stem and progenitor cells. Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).
  35. Guan, J. L., et al. Autophagy in stem cells. Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).
  36. Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging. Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).
  37. Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. Autophagy in zebrafish. Methods. 75, 172-180 (2015).
  38. Varga, M., et al. Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration. Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).
  39. Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. Autophagy and apoptosis in planarians. Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).
  40. Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra. Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).
  41. Tettamanti, G., et al. Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling. Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.