מאמר שיטה

שימוש בערוצי Agarose לינארית ללמוד תסיסנית התנהגות זחל זחילה

DOI:

10.3791/54892

⸱

26 בנובמבר 2016

 , 
1Committee on Development, Regeneration, and Stem Cell Biology, University of Chicago, 2Department of Molecular Genetics and Cell Biology, University of Chicago

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הזחל תסיסנית היא מערכת מודל רב עוצמה כדי לחקור את השליטה העצבית של התנהגות. פרסום זה מתאר את השימוש של ערוצי agarose ליניארי לעורר התקפים מתמשכים של זחילה ושיטות ליניארי לכמת את הדינמיקה של מבנים הזחל במהלך התנהגות זחילה חוזרת.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זחילה הזחל תסיסנית מתגלה כמודל רב עוצמה כדי לחקור את השליטה העצבית של התנהגות הסנסורית. עם זאת, התנהגות סריקה זחל על משטחים שטוחים פתוחים היא מורכבת, כולל: נעצר, מסתובב, ואת המתפתל. מורכבות זו ברפרטואר של התנועה מעכבת ניתוח מפורט של האירועים המתרחשים במהלך מחזור צעד לזחול יחיד. כדי להתגבר על מכשול זה, ערוצי agarose ליניארי נעשו מגבילי התנהגות זחל ישר, מתמשך, זחילה קצבית. באופן עקרוני, כי ערוצי agarose ואת גוף זחל תסיסנית הם ברורים אופטי, התנועה של מבנים הזחל שכותרתו ידי בדיקות ניאון-מקודדים גנטיים ניתן לנטר ללא פגע, זחלים-לנוע בחופשיות. בעבר, הזחלים הונחו ערוצים ליניאריים וזחילה ברמת האורגניזם השלם, לפלח שריר נותחו 1. בעתיד, זחלי זחילה בתעלות יכולים לשמש הדמית סידן לפקח נוירופעילות סופית. יתר על כן, שיטות אלה יכולים לשמש עם זחלים של כל גנוטיפ ועם כל ערוץ מעוצב חוקר. כך הפרוטוקול המובא להלן הוא ישים נרחבת ללימודים באמצעות זחל תסיסנית כמודל להבין שליטה מוטורית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המטרה הכללית של שיטה זו היא ללמוד זחילת זחל תסיסנית בפירוט. ניסויים על תנועה שחקו תפקיד חשוב בפיתוח ובדיקת תאוריות על שליטה מוטורית 2. באופן מסורתי תנועת נחקרת בעלי חיים ימיים (למשל, עלוקה, צמד, ראשן) 3. האופי החוזר והנשנה של תנועה אצל בעלי חיים אלה אפשר לחקר rhythmogenesis, לניתוח של אירועי biophysical נהיגת תנועה, ולצורך מעקב את דפוסי הירי העצביים שמלווים תנועה.

שימוש זחלים תסיסנית ללימודים של תנועה מציג שילוב ייחודי של יתרונות על פני מערכות מודל אחרות: גנטיקה קלילה, פיתוח היטב מאופיין, גוף ברור אופטי ב instars הראשון והשני, וכן שחזור מיקרוסקופי אלקטרוני שידור מתמשכים של כל מערכת העצבים 4-6. עם זאת, זחל תסיסנית לוקותנועה על משטחים שטוחים פתוחים מעט מורכבת כולל הפסקות, מסתובבת, המתפתל זוחל 7. פרסום זה מציג שיטה להשתמש בערוצי agarose ליניארי להנחות התנהגות של תנועת זחל תסיסנית כך זחלים מבצעים מתמשכים, ישר, התנהגות סריקה קצבית.

לימוד התנהגות זחל תסיסנית בערוצי agarose, במקום התנהגות על משטחים פתוחים שטוחים, יש מספר יתרונות. ראשית, הוא מאפשר לחוקרים לבחור זוחל התנהגות במיוחד מתנועות רבות שהן חלק מהרפרטואר ההתנהגותי הזחל. שנית, על ידי התאמת הרוחב של הערוץ אל מול גודל גוף הזחל, מהירות זחילה יכולה להיות מותאמת. שלישית, ערוצי לאפשר הזחל כדי שיוצג מן הגב, הגחון, או צד לרוחב תלוי איך הזחל טעון אוריינטציה בתוך הערוץ. רבגוניות זו באורינטצית זחל מאפשרת לכל מבנה העניין להיות גלוי ללא הרף במהלך סריקה. רביעי,ערוצים ניתנים לשימוש עם מגוון רחב של מיקרוסקופים ויעדים. לדוגמא, ניתן להשתמש בערוצים ליניארית הדמיה ברזולוציה נמוכה על stereoscopes שדה בהיר ו / או הדמיה ברזולוציה גבוהה על מיקרוסקופי confocal-דיסק מסתובב 1. החמישית, בשיטה זו ניתן להשתמש בשילוב עם optogenetic / מניפולציות עצביות thermogenetic בכל רקע גנטי. לבסוף, כי הן גוף הזחל (ב instars הראשון והשני) וערוצי agarose ברורים אופטי, ערוצים ניתן להשתמש כאשר לומדים את התנועות הדינמיות, או שינויים בעוצמת פלורסנט מבנים הזחל שכותרתו ידי בדיקות ניאון גנטית בקידוד.

השיטה המתוארת היא מתאימה ללימודי קינמטיקה מפורטים של instar הראשון ושני התנהגות תסיסנית זחל. פרסום זה מנתח את השינויים הדינמיים עוצמת פלורסנט של מערכת העצבים המרכזית במהלך זחילה הזחל קדימה כדי להדגים את השימוש של ערוצים כמבשר neuהדמית סידן רונאל.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת הזחלים

  1. שבוע לפני הקלטת התנהגות, להגדיר צלב (מינימום של 25 בתולות ו -5 גברים). לשמור על כל הצלבים הצאצאים של 25 מעלות צלזיוס.
    הערה: הטמפרטורה של תנאי תרבות ניתן לשנות, אבל קו הזמן המתואר להלן היה צריך להיות מותאם חשבון לשינויים במהירות התפתחותית.
  2. 5 ימים לפני ההקלטה, דבר ראשון בבוקר, להציב הצלב לכלוב אוסף עם כובע אגר / מיץ טיפה (0.5-1 מ"ל) של רסק שמרים במרכז הכובע אגר / מיץ.
    1. כדי להפוך כלוב אוסף, חורים לתוך עוז 6. פוליאתילן מרובע בקבוק תסיסנית.
    2. כדי להפוך אגר / כמוסות מיץ, לערבב 18 גרם של אגר עם מיליליטר מי 600 בבקבוק חרוטים. בתוך סוכרוז הבקבוק לערבב 20 גרם נפרד עם מיץ תפוחים 200 מ"ל. מיקרוגל עד מוצקים הם מומסים. מערבבים ומערבבים, המאפשרים לתערובת להתקרר עד 60 ° C. הוסף 20 מ"ל 10% מתיל-p-hydroxybenzoate באתנול 95%, ומערבבים. הוסף ~ 7מ"ל החצי התחתון של צלחת פטרי עגול 10 מ"מ 35 x. אפשר / מיץ אגר לגבש עבור שעה 1 ב RT. חנות ב 4 מעלות צלזיוס.
    3. כדי להפוך להדביק שמרים, מוסיף בחלקים שווים על ידי שמרים ומים יבשים נפח. חנות ב 4 מעלות צלזיוס.
  3. לבדוק את בריאותם של אוספי זחל.
    1. בבוקר, 4 ו -3 ימים לפני ההקלטה, להסיר את הכובע למקם כובע טרי על הכלוב. שנה את הכמוסות באותו הזמן בכל יום כדי להגיע אוסף 24 שעות של ביצי זחל שזה עתה בקע.
    2. לאחר כל כובע המוסר, לבחון את זה כדי לראות כמה ביצי הצלב היא נחת. צפו בין 500-2,000 ביצים. התאם את מספר המבוגרים, אם יש צורך בכך.
      הערה: כמה ביצים צריכות בוקעים רימות, ואת הזחלים שזה עתה בקעו יימצאו הרחק להדביק השמרים.
    3. גיל כל כובע למשך 24 שעות. לבחון מחדש את הכובע כדי לקבוע אם הזחלים הם בריאים.
      הערה: ביצים רוב צריך בקעו רימות, ואת הזחלים צריכים זחל לתוך ye הדבק אס '. סימנים של בריאות לקויה כוללים מספר רב של ביצים שלא נולדו, גופי זחל מתו הרחק להדביק שמרים, וזחלים עם כתמים כהים משמעותיים בבטן, מה שמעיד על תגובה חיסונית. אם הזחלים אינם בריאים, לשנות את הכלוב, להפוך כמוסים טריים / שמרי רסק, ולבדוק את הגנוטיפ.
    4. מחק את הכובעים הישנים.
  4. אסוף זחלים להקלטות התנהגותי.
    1. בשני היום 2 ו 1 לפני ההקלטה, להסיר את הכובע ולהחליף עם כובע טרי.
    2. לייבל כל כובע סיר ולשמור על 25 מעלות צלזיוס. זה יהיה לייצר סדרה מבוימת של זחלים להקלטות התנהגותי. הזחלים מן-שזה עתה בקעו (posthatch hr 0-4) באמצעות instar השני (24-48 שעות posthatch) ניתן להשתמש בערוצים. שמור כמוסים להקלטות בימים עוקבים.
    3. מחק את כל הכמוסות לאחר 48 שעות.
    4. במידת הצורך, חזור על שלבי 1.4.1-1.4.3 עד 5 ד נוספים. אחרי זה פחות ביציות מופרות מיוצרים.

= "Jove_title"> 2. הכנת ערוצים

  1. הכן את PDMS ערוץ ליניארי (polydimethylsiloxane, אלסטומר סיליקון) הליהוק עובש (איור 1 א). PDMS תבניות יציקה זמין ממעבדת Heckscher לפי בקשה.
    1. נקו את עובש הליהוק עם אלכוהול איזופרופיל. אוויר יבש, טיפה יבשה עם מגבוני מעבדה, או להשתמש ואוויר דחוס.
    2. מניחים את התבנית הליהוק לתוך מכסה צלחת 10 ס"מ פטרי או מיכל אחר.
  2. כן ויוצק פתרון agarose.
    1. בצע פתרון agarose 3% במים (3 גרם ב 100 מ"ל) על ידי במיקרוגל עד להמסה מלאה.
    2. מצננים 55 ° C, המאפשר בועות לעלות אל פני השטח.
    3. יוצקים את התערובת agarose לתוך צלחת פטרי שמכילה את עובש הליהוק כך העובש פשוט מכוסה. תן סט agarose עד הקרושה.
  3. הסר את ערוצי agarose מתבנית הליהוק. חתוך את הקצוות של הדיסק agarose עם סכין גילוח.
    1. שים את הערוץים בצלחת 10 ס"מ פטרי שקוע במים. הם יכולים להיות כל הזמן על 4 מעלות צלזיוס למשך 7 ימים.

3. העמסת זחל לתוך ערוץ להתנהגות שיא

הערה: אם אחסון ערוצים ב 4 ° C, לאפשר ערוצים לבוא RT לפני השימוש להקלטה התנהגותי.

  1. השתמש סכין גילוח נקי לחתוך ערוץ אחד מאלה מוכנים בשלב 2 (איור 2 א).
  2. השתמש זוג מלקחיים להציב את מחורץ-בצד למעלה ערוץ על coverslip זכוכית (איור 2 ב). הגודל והעובי של coverslip תלוי בהיקף הספציפי המשמש הדמיה.
  3. שימוש במלקחיים בסדר לבחור זחל מן הכובע אגר / המיץ מוכן בשלב 1 ומקום לתוך תעלת החתך (איור 2 ג).
    1. אל תלחצו הזחל. תרימי אותו בעדינות עם קצה של שן מלקחיים. כמו כן ניתן לתפעל זחל עם מכחול עם נקודה בסדר.
      הערה: זה חשוב כמו זחלים הם מאוד sensitive לגעת. אם הם לא מטופלים בזהירות, תגובות nociceptive עלולות להשתלט התנהגותם במהלך השניות הראשונות של הניסוי.
    2. שטפו את הזחלים על ידי השריית אותם בקצרה במים.
    3. לאחר שהניח את הזחל על הערוץ לחתוך, השתמש קצה חוד המלקחיים כדי להקניט את הזחל בעדינות לתוך חורשת הערוץ.
      הערה: עבור מרבית יישומי הרוחב של הזחל ואת הרוחב של הערוץ צריך להתאים. רוחבו הממוצע של הזחלים בשלבים שונים של פיתוח כדלקמן: 0 hr posthatch - 140 מיקרומטר, 24 שעות posthatch - 180 מיקרומטר, 48 שעות posthatch - 320 מיקרומטר, 72 שעות posthatch - 500 מיקרומטר, 96 שעות posthatch - 750 מיקרומטר 8. ערוצים לבוא הרוחביים הבא: 100, 150, 200, 250, ו -300 מיקרומטר, וכל הערוצים 150 מיקרומטר עמוקים.
    4. השתמשו בקצה שן מלקחיים או מכחול כדי להתאים את המיקום של הזחל בתוך הערוץ. זה יכול להיות מכוון בכל כיוון: גחוןעד, גחון למטה, גחון לצד אחד, בהתאם למבנה מה הוא להיות צלם.
  4. בעזרת מלקחיים, להעיף את הערוץ בעדינות על כך הזחל הוא עכשיו על הזכוכית המכסה. מקום אחד או שתי טיפות מים בקצות הערוץ כך שהוא מתמלא מים (2D איור).
    1. הרם בעדינות את צידי התעלה כדי להסיר בועות אוויר.
    2. לשנות את הכיוון של הזחל. לשם כך, בעדינות דחיפה בערוץ אבל לא כוס הכיסוי לגלגל את הזחל. אם זה לא משנה את הכיוון, להסיר את מכסה הזכוכית ולשנות את מיקום זחל. הזחל הוא מוכן להיות צלם.
    3. תמונת הערוץ / coverslip על מיקרוסקופ הפוכה. אם הדמיה על מיקרוסקופ זקוף, פשוט להפוך את הערוץ / coverslip.

4. מאפיין מדוד ענייני הקלטת התנהגות

  1. עבור מבנה של עניין (למשל, זנב, CNS), למדוד תכונה של עניין (למשל, עוצמת הקרינה, מיקום) לאורך זמן.
    הערה: מבנים כגון הראש והזנב ניתן להוסיף הערות באופן ידני. לדוגמא, הראש ניתן לזהות כמכיל פי ווים כהים בצורת H, ואת הזנב ניתן לזהות כמכיל spiricles קנה נשימה האחורית. מאמר זה מתמקד חוט העצב. השתמש elav-GAL4 קו GAL4 העצבית לנהוג transgene כטב"מ-MYR-GFP (elav> GFP) 9,10 כדי fluorescently לתייג את מערכת העצבים המרכזית (CNS). מערכת העצבים המרכזית כוללת שתי האונות במוח הקדמי מחובר חוט העצב, אשר משתרע על האחורי (איור 3).
  2. מדוד את עוצמת פיקסל של חוט העצב (f (NC)) בכל נקודת זמן (t). להלן מתאר גישת ביאור ידנית, אך צעד זה יכול להיות אוטומטי.
    1. בפיג'י (או תוכנה דומה) בתפריט 'לנתח' להשתמש "מדידות הגדר ..." תיבת דו שיח לדווח הערך אפור מרושע slicעמדת דואר.
    2. ידני לצייר תיבה במרכז חוט העצב בפריים הראשון של הסרט (איור 3). צעד זה יכול גם להיות אוטומטי עם אלגוריתמי פילוח תמונה ורישום.
    3. השתמש בפקודה "מדוד" בתפריט 'לנתח' לדווח על עוצמת פיקסל הממוצע באזור עניין התאגרף. זה מייצר חלון "תוצאות".
    4. בפריים הבא, באופן ידני למקם את התיבה בלי שינוי גודל על ידי שימוש במקשי החיצים. השתמש בפקודה "מדוד" שוב. התוצאות מתעדכנות יוצגו בחלון "תוצאות". חזור על שלב זה עבור כל מסגרת של עניין.
    5. שמור את "תוצאות" באמצעות "שמירה בשם ..." הפקודה מתוך תפריט קובץ. התוצאות תיוצאנה כקובץ .xls.

5. ניתוח המדידות

  1. נרמל כל f (NC) ערך לערך בין 0 ל -1 (z (t) </ Em>).
    1. בגיליון אלקטרוני (או תוכנה אחרת), לפתוח את קובץ Results.xls. קובץ זה יהיה שני עמודים מייצגים מספר מסגרת ועוצמת קרינה ממוצעת.
    2. הפוך עמודה חדשה ולהשתמש בנוסחה z (t) = f (NC [t]) -min (f [NC]) / מקס (f [NC]) -min (f [NC]) כדי ליצור ערך הקרינה מנורמל מתאים בכל נקודת זמן.
  2. קבע את תקופת צעד עבור כל פסיעה בהקלטה.
    הערה: מחזור פסיעה הוא יחיד של תנועה בגוף כולו חוזרת עבור קדימה (הפוך) זוחל. לפי אמנה, ומתחיל לצעוד קדימה (ומסתיים) עם התנועה קדימה של הזנב, הראש, ואיברים פנימיים אחרים כגון במעיים או CNS 1.
    1. ידני לבדוק את ההקלטה התנהגותי ולהקליט את פעמי החניכה (i) של כל פסיעה (i (מחזור סטרייד [n])).
      הערה: בדוגמא הבאה, תנועה קדימהשל מערכת העצבים המרכזית כמו תחילתו של מחזור צעד שימש (איור 3).
    2. עבור כל פסיעה לחשב את התקופה: Δ t (מחזור סטרייד) = i (מחזור סטרייד [n + 1]) -i (מחזור סטרייד [n]).
  3. חישוב אחוז מחזור צעד שחלף עבור כל נקודת זמן של ההקלטה.
    1. תן עמודה נוספת של קובץ הגיליון האלקטרוני מייצג הזמן שחלף מאז תחילת מחזור פסיעה (ג). זמן הגדר מאז התחלת לצעוד יתאפסו על תחילתו של כל פסיעה (ג (מחזור סטרייד [n]) = 0). התאם פעמים לאחר תחילת בהתאם.
    2. תן עמודה נוספת של קובץ הגיליון האלקטרוני המייצג שחלף מחזור צעד אחוז (מחזור צעד%) מחלקי פעמים המתואם לפי תקופת צעד ולהתרבות על ידי 100 להמיר אחוז מחזור הפסיעה שעברה:. מחזור צעד% = (ג (מחזור סטרייד [n] )) / (Δ t (מחזור סטרייד) * 100).

6. צור פולאר תאם מגרשים לייצג דינמיקה של מבנים של ריבית לאורך מחזור סריקה

  1. ב MATLAB, השתמש דיאלוג 'יבוא הנתונים' בכרטיסיית הבית כדי לייבא את Results.xls המעודכנת.
  2. ליצור מערך חדש "תטא" ערכי מחזור צעד המכיל אחוז (מחזור צעד%). ( "תטא = var1" איפה var1 מייצג מחזור צעד%).
  3. ליצור מערך חדש "רו" מכיל ערכי קרינה מנורמלים (z (t)). ( "רו = גרסה 2" איפה גרסה 2 מייצג z (t)).
  4. השתמש בפקודת 'polarplot' לחרוש מזימות לתאם קוטביות עם מחזור צעד האחוזים כמו הזווית, ואת הקרינה כמו הרדיוס ( "polarplot (תטא, Rho)").

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מתאר שיטת מנחת התנהגות זחל תסיסנית באמצעות ערוצי agarose ו למדידת הדינמיקה של מבנים הזחל על פני מחזור זחילה. זחלי ערוצים ליניאריים לבצע התקפים מתמשכים של זחילה קצבית (איור 3). מכיוון שגם זחלים וערוצי ברורים אופטיים, ניתן להשתמש בערוצים עם זחלים להביע בדיקות ניאון מבוטאות בכל מבנה של עניין. הקלטנו הזחלים להביע GFP בכל נוירונים (elav-Gal4 / +; כטב"מ-MYR-GFP / +) וליווה את השינויים הדינמיים עוצמת הקרינה ב חוט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מכשיר microfluidic נבנה כדי להפוך את ערוצי agarose ליניארי שיכול להכיל זחלים תסיסנית (איור 1). כאשר זחלים תסיסנית ממוקמים ערוצי agarose הליניאריות האלה הרפרטואר ההתנהגותי שלהם מוגבל זחילה, המאפשרת תצפית מפורטת של הדינמיקה של מבנים הזחל על פני מחזור הזחילה.

הקלטה מוצלחת מתרחשת כאשר זחל לבצע שורה של צעדים קצובים (איור 3). אם זה לא קורה, לבדוק מכשולים כמו בועת אווי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להודות לכריס ורדן ומישל בלנד על ההערות על כתב היד ועל העזרה הטכנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
6 גרם בקבוק דרוזופילה מרובעScimartDR-103
אגרסיגמאA1296
סוכרוזסיגמאS9378
מיץלא מתרכיז
TegoseptFisherT2300methyl-p-hydroxybenzoate
35 x 10 מ"מ צלחת פטרי עגולהפישר351008
אופה
תבנית יציקה PDMSFlowJemניתן לבקש ממחברים
איזופרופיל אלכוהולפישרA417-1
מגבוני מעבדהפישר06-666-11
אוויר משומרפישר18-431
צלחת פטרי 10 ס"מBioPioneerGS82-1473-001
אגרוזפישר50-444-176
סכין גילוחפישר12-640
מלקחייםFST11241-40
22 x 40 זכוכית כיסוי, #1.5פישר50-365-605
פיג'י (גרסה 1.51d)NIHfiji.sc
Excel 2016מיקרוסופטwww.microsoftstore.com
MATLAB R2016Mathworkswww.mathworks.com
תפוחים שמרי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Heckscher, E. S., Lockery, S. R., Doe, C. Q. Characterization of Drosophila larval crawling at the level of organism, segment, and somatic body wall musculature. J Neurosci. 32 (36), 12460-12471 (2012).
  2. Marder, E., Calabrese, R. L. Principles of rhythmic motor pattern generation. Physiol rev. 76 (3), 687(1996).
  3. Mullins, O. J., Hackett, J. T., Buchanan, J. T., Friesen, W. O. Neuronal control of swimming behavior: Comparison of vertebrate and invertebrate model systems. Prog Neurobiol. 93 (2), 244-269 (2011).
  4. Ohyama, T., et al. A multilevel multimodal circuit enhances action selection in Drosophila. Nature. 520 (7549), 633-639 (2015).
  5. Landgraf, M., Thor, S. Development of Drosophila motoneurons: specification and morphology. Semin cell devl bio. 17 (1), 3-11 (2006).
  6. Heckscher, E. S., et al. Even-Skipped(+) Interneurons Are Core Components of a Sensorimotor Circuit that Maintains Left-Right Symmetric Muscle Contraction Amplitude. Neuron. 88 (2), 1-16 (2015).
  7. Green, C. H., Burnet, B., Connolly, K. J. Organization and patterns of inter-and intraspecific variation in the behaviour of Drosophila larvae. Anim Behav. 31 (1), 282-291 (1983).
  8. Graf, S. A., Sokolowski, M. B. Rover/Sitter Drosophila melanogaster Larval Foraging Polymorphism as a Function of Larval Development, Food-Patch Quality, and Starvation. J Insect Behav. 2 (3), 301-313 (1989).
  9. Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22 (3), 451-461 (1999).
  10. Rebay, I., Rubin, G. M. Yan Functions as a General Inhibitor of Differentiation and Is Negatively Regulated by Activation of the Rasl / MAPK Pathway. Cell. 81 (6), 857-866 (1995).
  11. Chen, T. -W., et al. Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity. Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).
  12. Tufte, E. R. The visual display of quantitative information. , Graphics Press. Cheshire, CT. (2004).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

GAL4

מאמרים קשורים