מאמר שיטה

Chondrogenic בידול האינדוקציה של תאי גזע שמקורם שומן על ידי הכביד צנטריפוגלי

DOI:

10.3791/54934

⸱

24 בפברואר 2017

 ,  , 
1CiSTEM Laboratory, Convergent Research Consortium for Immunologic Disease, Division of Rheumatology, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לחץ מכני יכול לגרום להתמיינות כונדרוגנית של תאי גזע, ולספק גישה טיפולית פוטנציאלית לתיקון סחוס פגום. אנו מציגים פרוטוקול לגרימת התמיינות כונדרוגנית של תאי גזע שמקורם בשומן (ASCs) באמצעות כבידה צנטריפוגלית (CG). ויסות מוגבר המושרה על ידי CG של SOX9 מביא להתפתחות פנוטיפים כונדרוגניים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סחוס לקוי אינו יכול להחלים באופן טבעי. נכון לעכשיו, הטיפול המתקדם ביותר לפגמים בסחוס הוא השתלת כונדרוציטים מובחנים מתאי גזע באמצעות ציטוקינים. למרבה הצער, התמיינות כונדרוגנית הנגרמת על ידי ציטוקינים היא יקרה, גוזלת זמן וקשורה לסיכון גבוה לזיהום במהלך התמיינות במבחנה. עם זאת, גירויים ביומכניים משמשים גם כגורמים מווסתים מכריעים לכונדרוגנזה. לדוגמה, לחץ מכני יכול לגרום להתמיינות כונדרוגנית של תאי גזע, מה שמרמז על גישה טיפולית פוטנציאלית לתיקון סחוס פגום. במחקר זה, הראינו כי כבידה צנטריפוגלית (CG, 2,400 × גרם), מתח מכני המופעל בקלות על ידי צנטריפוגה, גרם לוויסות מוגבר של אזור קובע המין Y (SRY)-box 9 (SOX9) בתאי גזע שמקורם בשומן (ASCs), וגרם להם לבטא פנוטיפים כונדרוגניים. ה-ASCs הצנטריפוגים ביטאו רמות גבוהות יותר של סמני התמיינות כונדרוגניים, כגון אגרקן (ACAN), קולגן מסוג 2 אלפא 1 (COL2A1) וקולגן מסוג 1 (COL1), אך רמות נמוכות יותר של קולגן מסוג 10 (COL10), סמן של כונדרוציטים היפרטרופיים. בנוסף, היווצרות אגרגטים כונדרוגניים, תנאי מוקדם לכונדרוגנזה, נצפתה ב-ASCs צנטריפוגים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פגמי סחוס במפרק לא לרפא באופן טבעי. כתוצאה מכך, השתלת תא גזע הוצעה גישה מבטיחה לתיקון סחוס לקוי. עם זאת, שיטה זו דורשת היא רכישת מספר מספיק של תאי גזע ואת האינדוקציה של תאים אלה כדי לעבור התמיינות chondrogenic. מח עצם (בע"מ) כבר בשימוש נרחב כמקור לתאי גזע, אבל בידוד תא מ- BM יש שני חסרונות עיקריים: הפולשנות ואת התשואה מספיק. בגלל הקלות של רכישתה, רקמת שומן היא מקור עדיף של תאי גזע. מחקרים קודמים הדגימו את ההיתכנות של בידוד תאי גזע מרקמות שומן התרמת בידול chondrogenic בתאים אלה באמצעות ציטוקינים, כגון TGF-β1 1, 2. שיטות אלו יעילות אבל יקרות.

כחלופה עלות נמוכה יותר כדי ציטוקינים, לחץ מכני יכול לשמשלהשרות התמיינות chondrogenic. העמסה מכאנית משחקת תפקיד קריטי בשמירה על הבריאות של סחוס במפרק 3, וזה יכול לגרום פנוטיפים chondrogenic בתאים שונים. לדוגמא, לחץ ההידרוסטטי גורם פנוטיפים chondrogenic ב ובתאים נגזרים synovium דרך מסלול קינאז / JNK MAP 4, ודחיסה מכאנית גורם chondrogenesis בתאי גזע mesenchymal אדם (MSCs) על ידי upregulating גני chondrocytic 5. בנוסף, מאמץ הגזירה תורם הביטוי של מטריקס הקשורות chondrogenesis (ECM) ב MSCs אדם 6. הכביד צנטריפוגלי (CG), מתח מכאני שיושם לשלוט בקלות שנוצר על ידי צנטריפוגה, יכול לגרום ביטוי גני הפרש בתאי 7. לדוגמה, בתאי קרצינומה אפיתל ריאות, הביטוי של אינטרלוקין (IL) -1b הוא upregulated ידי צנטריפוגה 8. Therefore, כמו לחץ מכאני מושרה באופן ניסיוני, CG יכול לשמש כדי לגרום ביטוי גני chondrocytic בתאי גזע. עם זאת, עדיין לא ברור האם CG יכול לגרום בידול chondrogenic של תאי גזע.

במחקר זה, מצאנו כי CG המושרה הגברת הביטוי של SOX9, רגולטור אדון chondrogenesis, ב ASCs האדם, וכתוצאה מכך ביטוי יתר של גנים chondrocytic. בנוסף, השווינו את ההשפעות של CG על chondrogenesis לאלה של β1 TGF, גורם הגדילה הנפוץ ביותר כדי לגרום במבחנה chondrogenesis בתאי גזע.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול מחקר אושר על ידי דירקטוריון הסקירה המוסדי של האוניברסיטה הקתולית של קוריאה (KC16EAME0162) ובצע בהתאם להנחיות NIH. כל הרקמות התקבלו עם הסכמה מדעת בכתב.

1. טוען Gravity צנטריפוגלי ו גלולה תרבות

  1. תרבות קציר ניידים
    1. ASCs תרבות (P2-P3; לראות רשימה של חומרים) ברמת הגלוקוז הבינוני-הנמוך של הנשר השונה של Dulbecco (DMEM-LG) בתוספת 10% בסרום שור עוברי (FBS) ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין (P / S) בשעה 37 ° C חממה humidified המכיל 5% CO 2.
    2. כאשר התאים מגיעים 80 מפגש%, לבטל את בינוני לשטוף את התאים עם 5 מ"ל של תמיסת מלח שנאגרו פוספט 1x (PBS).
    3. הוסף 1 מ"ל של המכיל 1 PBS mM EDTA דגירה במשך 2 דקות ב 37 מעלות צלזיוס חממה humidified המכיל 5% CO 2.
    4. הקש על צלחת תרבות בעדינות, להוסיף 4 מ"ל של מדיום חדש, ולהעביר את התאיםצינור חרוטי 15 מ"ל, ו צנטריפוגות התאים ב g 250 × 2 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  2. טעינה הכביד צנטריפוגלי
    1. לאחר צנטריפוגה (שלב 1.1.4), להסיר את supernatant מבלי להפריע גלולה ו resuspend גלולה ב 10 מ"ל של DMEM-LG עם 10% FBS. ספירת התאים באמצעות hemocytometer.
    2. לטעינת CG, להעביר 2.5 × 10 5 תאים לצינור צנטריפוגות 15 מיליליטר חרוטים חדשים g 2,400 × במשך 15 דקות.
  3. תרבות הגלולה
    1. מיד לאחר צנטריפוגה, לשאוב supernatant ולהוסיף 500 μL של מדיום בידול chondrogenic מוגדר (CDM, גבוהה גלוקוז DMEM בתוספת 1% FBS, 1% Premix + ITS, 100 dexamethasone ננומטר, 1x MEM שאינם חיוניים פתרון חומצה אמינו, 50 מיקרוגרם / מ"ל ​​L-פרולין, ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין). הוסף 50 מיקרוגרם / מיליליטר של פוספט 2 המוכן טרי L-החומצה אסקורבית בכל החלפה בינונית. כביקורת חיובית, לגרום differentiati chondrogenicעל בתאים uncentrifuged ידי הוספת CDM המכיל 10 ng / mL TGF-β1.
    2. מניח את צינורות כתרים רופפים המכילים את הכדורים בעמידה לדגור על 37 מעלות צלזיוס חממת humidified המכילה 5% CO 2.
    3. שינוי המדיום פעם ביומיים למשך 3 שבועות.
  4. תרבות Micromass
    1. מיד לאחר צנטריפוגה (שלב 1.2.2; 2,400 גרם × במשך 15 דקות), לשאוב supernatant ו resuspend גלולה ב 10 μL של CDM.
    2. כדי ליצור micromass, למקם את התאים resuspended במרכז באר צלחת 24 באר.
    3. לאחר 2 שעות, בזהירות להוסיף 1 מ"ל של CDM אל הבאר, pipetting אל הקיר של הצלחת כדי למנוע שיבוש micromass. כביקורת חיובית, לבצע תרבות micromass עם תאים uncentrifuged ידי הוספת CDM המכיל 10 ng / mL TGF-β1.
    4. דגירה micromass על 37 מעלות צלזיוס חממה humidified המכיל 2 5% CO.
    5. שנה את ev הבינוניery ימים למשך 3 שבועות.

2. תגובת שרשרת הפוך transcriptase-פולימראז (RT-PCR) כדי לאתר upregulation תעתיק של סמנים בידול Chondrogenic

  1. ביום 14, השתמש פיפטה להעביר את כדורי אליפטית לצינור 1.5 מיליליטר חדש ולשטוף אותם 1x PBS.
  2. חלץ את RNA הכולל את הכדורים בשיטת חילוץ פנול, כלורופורם thiocyanate guanidinium 9.
  3. לסנתז cDNA מ 2 מיקרוגרם של רנ"א סך באמצעות transcriptase הפוכה על פי הפרוטוקול של היצרן (לדגור על 42 מעלות צלזיוס למשך 1 שעות ולאחר מכן לנטרל את האנזים ב 70 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות).
  4. בצע PCR עם פריימרים ספציפיים עבור סמני בידול chondrogenic 10.

3. מכתים לזהות את התבטאות יתר של חלבונים מרקר בידול Chondrogenic

  1. פרפין הטבעת כדורי תא
    1. ביום 21,להשתמש פיפטה לקצור את כדורי אליפטית ולשטוף אותם עם PBS 1x.
    2. תקן את כדורי אליפטית על ידי טבילה paraformaldehyde 4% במשך 24 שעות.
      זהירות: Paraformaldehyde היא רעילה ביותר. יש להימנע ממגע עם עיניים, עור, או ריריות. מזעור החשיפה ולהימנע משאיפת במהלך ההכנה. ללבוש ציוד מגן אישי מתאים.
    3. מחק את מקבע ולשטוף את כדורי תא עם מים ללא יונים (DW).
    4. מניח שכבה אחת של גזה על הקלטת ולהעביר את הכדורים הקבועים בעזרת פיפטה. מכסה את הכדור על ידי קיפול הגזה ולסגור את מכסת הקלטת.
    5. מייבש את הכדורים.
      1. לטבול את הכדורים ב 70% אתנול (EtOH) במשך 5 דקות ב RT.
      2. לטבול את הכדורים ב 80% EtOH במשך 5 דקות ב RT.
      3. לטבול את הכדורים ב 95% EtOH במשך 5 דקות ב RT.
      4. לטבול את הכדורים ב 100% EtOH במשך 5 דקות ב RT. חזור פעמיים.
      5. לטבול את כדורי קסילן 100% במשך 15 דקות ב RT. טווי חזורלִספִירַת הַנוֹצרִים.
    6. הטמע את כדורי תא הקבועים פרפין ב 56 מעלות צלזיוס בתוך תבנית; ניתן להטביע את הכדורים לתוך פרפין באמצעות מערכות עיבוד רקמות מיוחדות אוטומטיות.
    7. חותכים 5 חלקים מיקרומטר בעובי מן התא גלולה מוטבע פרפין באמצעות microtome סיבובית.
    8. Float את הסעיפים 50% EtOH ולאחר מכן להעביר אותם באמבט מים 50 ° C באמצעות שקופיות.
    9. מניחים את הסעיפים צף על גבי שקופיות.
  2. Safranin O ו כתמים כחולים Alcian
    1. רעננותם חלקי פרפין.
      1. לטבול את השקופיות קסילן במשך 15 דקות. חזור פעמיים.
      2. לטבול את השקופיות EtOH 100% במשך 5 דקות. חזור פעמיים.
      3. לטבול את השקופיות 90% EtOH למשך 5 דקות.
      4. לטבול את השקופיות EtOH 80% במשך 5 דקות.
      5. לטבול את השקופיות EtOH 70% במשך 5 דקות, ולאחר מכן לשטוף אותם 1x PBS.
    2. כתם בסעיפי rehydrated עם 1% Safranin O פתרון ו -3% הכחולים Alcian עבור30 דק.
    3. מחק את הפתרון מכתים ולשטוף את החלקים עם DW.
    4. הכתם בסעיפים עם פתרון Hematoxylin / Eosin (counterstain) 1 דקות.
    5. מחק את הפתרון מכתים ולשטוף את החלקים עם DW.
    6. מניחים ירידה של המדיום גובר על coverslip לאחר הסרת כל שאריות מים. בזהירות במקום להחליק (תא בצד למטה) על coverslip המכיל את המדיום גובר.
    7. אפשר השקופיות להתייבש במשך 2-3 שעות ב RT.
    8. צלם תמונות באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר (מיקרוסקופ זקוף אוטומטי, 50X ו 200X).
  3. assay immunofluorescence
    1. רעננותם סעיפים כמפורט בסעיף 3.2.1.
    2. לטבול את שקופיות חיץ נתרן ציטרט (נתרן ציטרט 10 מ"מימ, 0.05% Tween 20, pH 6.0), ולאחר מכן לשמור אותם בטמפרטורה רותחת משנה עבור 10 דקות באמצעות מיקרוגל.
    3. מצננים את השקופיות עבור 20 דקות ב RT ולאחר מכן לשטוף אותם עם מי ברז.
    4. דגירת השקופיות ב 3%H 2 O 2 (ב 1x PBS) במשך 15 דקות, ולאחר מכן לשטוף אותם עם מי ברז במשך 15 דקות 11.
    5. חסום את השקופיות עם חסימת חיץ (10% נסיוב עז נורמלי ב PBS) במשך שעה 1.
    6. לשאוב את הפתרון החוסם, ולאחר מכן להחיל נוגדן ראשוני מדולל 5% נסיוב עז נורמלי על השקופיות.
    7. דגירת שקופיות הלילה ב 4 ° C..
    8. שטפו את השקופיות שלוש פעמים 1x PBS במשך 5 דקות כל אחד.
    9. דגירה השקופיות ב נוגדנים משני מצומדות fluorochrome מדולל 5% נסיוב עז נורמלי במשך שעה 1 ב RT בחושך.
    10. שטפו את השקופיות שלוש פעמים 1x PBS במשך 5 דקות כל אחד בחושך.
    11. דגירה השקופיות עם DAPI (1 מיקרוגרם / מ"ל) במשך 10 דקות, ולאחר מכן לשטוף אותם פעמיים ב 1x PBS במשך 5 דקות כל אחד.
    12. מניחים ירידה של המדיום גובר על coverslip לאחר הסרת כל שאריות מים. בזהירות במקום להחליק (תא בצד למטה) על הרכבה בינונית.
    13. אפשר השקופיות להתייבש במשך 2-3h בחושך ב RT.
    14. דמיינו את השקופיות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (Rhod: 594 ננומטר, DAPI: 340 ננומטר; 60X והגדלה 200X) 12.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הכביד צנטריפוגלי ומשרה את ביטוי היתר של סמני בידול chondrogenic בתאי גזע שמקורם שומן.

כדי לקבוע את מידת כוח הכבידה צנטריפוגלי שרלוונטי להשרות התמיינות chondrogenic, ASCs היו מגורה עם דרגות שונות של CG (0, 300, 600, 1,200, ו -2,400 XG) במשך 15 דקות. לאחר גירוי, את ASCs היו מחדש זורעים לצלחות תרבות בתרבית למשך 24 שעות. כפי שניתן לראות בתרשים ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מדינת stemness של תאים חשובה מאוד עבור ביטוי יתר נגרמת CG של SOX9. במחקר שלנו, ביטוי SOX9 יכול להיגרם על ידי CG ב ASCs מוקדם-חלוף (2-3), אך לא ASCs-מעבר מאוחר יותר. זה כבר דווח כי, במהלך טיפוח, ASCs מכיל CD34 + תאים עד 3 קטעים 16. ASCs נוטה לאבד את הביטוי של CD34 כמו התאים passaged, וכתוצאה מכך תגובה נמוכה כדי CG.

עם כוח הכבידה צנטריפוגלי, הלחץ ההידרוסטטי ניתן הועמסו על התאים במהלך הגירוי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מצהירים כי אין לנו ניגודי אינטרסים הקשורים לעבודה זו.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי מענק של פרויקט המו"פ של טכנולוגיית הבריאות של קוריאה באמצעות המכון לפיתוח תעשיית הבריאות של קוריאה (KHIDI), במימון משרד הבריאות והרווחה, הרפובליקה של קוריאה (מספר מענק: HI14C2116) ועל ידי קרן המחקר של בית החולים סנט מרי בסיאול, האוניברסיטה הקתולית של קוריאה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>כלי פלסטיק
100 מ"מ צלחתTPP93100
60 מ"מ צלחתTPP93060
50 מ"ל צינור קורניקלSPL50050
15 מ"ל צינור קורניקלSPL50015
10 מ"ל פיפטה חד פעמיתבז7551
5 מ"ל פיפטה חד פעמיתFalcon7543
ASC Culture Media Materials
DPBSLife Technologies14190-144
DMEM Low glucoseLife Technologies11885-084Growth Base
Media Penicilin StreptomycinSigma AldrichP43331%
Fetal BovineSerum Life Technologies16000-04410%
PBS/1 mM EDTALife Technologies12604-039
<חזק>חומרי מדיה התמיינות כונדרוגנית
DMEM טכנולוגיות חיים של גלוקוז גבוה11995מדיה בסיסית התמיינות כונדרוגנית
MEM תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות (100x)Life Technologies11140-050
דקסמתזוןסיגמא אולדריץ'D2915100 ננומטר
פניצילין סטרפטומיציןטכנולוגיות חייםP43331%
סרום בקר עובריטכנולוגיות חיים16000-0441%
אסקורבט-2-פוספטסיגמא אולדריץ'A896050 & #956; גרם/מ"ל
L-פרוליןסיגמא אולדריץ'P560750 & #956; גרם/מ"ל
ה-BDשלו354352-1%
TGF&בטא אנושי; 1Peprotech100-2110 ננוגרם/מ"ל
<חזק>חומרים
18 מ"מ כיסוי זכוכיתמעולהHSU-0111580
4% ParaformaldyhydeTech & חדשנותBPP-9004
Tween 20BIOSESANGT1027
בקר סרום אלבומיןוקטור מעבדהSP-5050
נוגדן אנטי-קולגן IIabcam ab347121:100
נוגדן משני נגד ארנב עיזים IgG (H+L), Alexa Fluor 594מצומד בדיקה מולקולריתA-110371:200
בדיקה מולקולריתDAPID1306
מגיב אנטי-דהייה זהב ProlongInvitrogenP36934
זכוכית שקופיות, מצופהHyun Il Lab-MateHMA-S9914
TrizolInvitrogen15596-018
כלורופורםסיגמא אולדריץ'366919
איזופריפילאלכוהולMillipore109634
אתנולדוקסן64-17-5
RevertAid ערכת סינתזה cDNA גדיל ראשוןThermo ScientficK1622
Taq DNA פולימראזiNtRON BIOTECH25021
UltraPure 10x TBE BufferLife Technologies15581-044
כוכב טעינהDyne BioA750
AgaroseSigma-Aldrich9012-36-6
1 kb (+) סמן סולם DNAEnzynomicsDM003
תאי גזע שמקורם בשומן אנושי (ASCs)תאי
מאסטר קתוליים

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Awad, H. A., Halvorsen, Y. D., Gimble, J. M., Guilak, F. Effects of transforming growth factor beta1 and dexamethasone on the growth and chondrogenic differentiation of adipose-derived stromal cells. Tissue Eng. 9 (6), 1301-1312 (2003).
  2. Erickson, G. R., et al. Chondrogenic potential of adipose tissue-derived stromal cells in vitro and in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 290 (2), 763-769 (2002).
  3. Sah, R. L., et al. Biosynthetic response of cartilage explants to dynamic compression. J Orthop Res. 7 (5), 619-636 (1989).
  4. Sakao, K., et al. Induction of chondrogenic phenotype in synovium-derived progenitor cells by intermittent hydrostatic pressure. Osteoarthritis Cartilage. 16 (7), 805-814 (2008).
  5. Li, Z., Yao, S. J., Alini, M., Stoddart, M. J. Chondrogenesis of human bone marrow mesenchymal stem cells in fibrin-polyurethane composites is modulated by frequency and amplitude of dynamic compression and shear stress. Tissue Eng Part A. 16 (2), 575-584 (2010).
  6. Alves da Silva, M. L., et al. Chondrogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells in chitosan-based scaffolds using a flow-perfusion bioreactor. J Tissue Eng Regen Med. 5 (9), 722-732 (2011).
  7. Maeda, S., et al. Changes in microstructure and gene expression of articular chondrocytes cultured in a tube under mechanical stress. Osteoarthritis Cartilage. 13 (2), 154-161 (2005).
  8. Yang, J., Hooper, W. C., Phillips, D. J., Tondella, M. L., Talkington, D. F. Centrifugation of human lung epithelial carcinoma a549 cells up-regulates interleukin-1beta gene expression. Clin Diagn Lab Immunol. 9 (5), 1142-1143 (2002).
  9. Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. (6), (2010).
  10. Lorenz, T. C. Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies. J Vis Exp. (63), e3998(2012).
  11. Jang, Y., et al. UVB induces HIF-1alpha-dependent TSLP expression via the JNK and ERK pathways. J Invest Dermatol. 133 (11), 2601-2608 (2013).
  12. Wu, Y. L., et al. Immunodetection of human telomerase reverse-transcriptase (hTERT) re-appraised: nucleolin and telomerase cross paths. J Cell Sci. 119, Pt 13 2797-2806 (2006).
  13. Bobick, B. E., Chen, F. H., Le, A. M., Tuan, R. S. Regulation of the chondrogenic phenotype in culture. Birth Defects Res C Embryo Today. 87 (4), 351-371 (2009).
  14. Akiyama, H., Chaboissier, M. C., Martin, J. F., Schedl, A., de Crombrugghe, B. The transcription factor Sox9 has essential roles in successive steps of the chondrocyte differentiation pathway and is required for expression of Sox5 and Sox6. Genes Dev. 16 (21), 2813-2828 (2002).
  15. Lefebvre, V., Huang, W., Harley, V. R., Goodfellow, P. N., de Crombrugghe, B. SOX9 is a potent activator of the chondrocyte-specific enhancer of the pro alpha1(II) collagen gene. Mol Cell Biol. 17 (4), 2336-2346 (1997).
  16. Jang, Y., et al. Characterization of adipose tissue-derived stromal vascular fraction for clinical application to cartilage regeneration. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 51 (2), 142-150 (2015).
  17. Chen, J., et al. Simultaneous regeneration of articular cartilage and subchondral bone in vivo using MSCs induced by a spatially controlled gene delivery system in bilayered integrated scaffolds. Biomaterials. 32 (21), 4793-4805 (2011).
  18. Janzen, V., et al. Stem-cell ageing modified by the cyclin-dependent kinase inhibitor p16INK4a. Nature. 443 (7110), 421-426 (2006).
  19. Muraglia, A., Cancedda, R., Quarto, R. Clonal mesenchymal progenitors from human bone marrow differentiate in vitro according to a hierarchical model. J Cell Sci. 113, Pt 7 1161-1166 (2000).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

SOX92AggrecanMicromass CultureSafranin OAlcian Blue

מאמרים קשורים