הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דור של תאי דנדריטים אדם נגזר מונוציטים מן הדם מלא

20.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54968

⸱

24 בדצמבר 2016

 ,  , 
1Division of Hygiene and Medical Microbiology, Medical University of Innsbruck

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מדגימים כיצד מונוציטים מבודדים על ידי הפרדת חרוזים מגנטיים מתאים חד-גרעיניים בדם היקפי לאחר צנטריפוגה בשיפוע צפיפות של דם אנושי נוגד קרישה. לאחר הדגירה במשך 5 ימים, מונוציטים אנושיים מתמיינים לתאים דנדריטיים לא בשלים ומוכנים להליכים ניסיוניים בסביבה לא קלינית.

תקציר

תאים דנדריטיים (DCs) מזהים מבנים זרים של פתוגנים שונים, כגון וירוסים, חיידקים ופטריות, באמצעות מגוון קולטנים לזיהוי דפוסים (PRRs) המתבטאים על פני התא שלהם ובכך מפעילים ומווסתים את מערכת החיסון.

התפקיד העיקרי של DCs הוא השראת חסינות נרכשת בבלוטות הלימפה על ידי הצגת אנטיגנים באמצעות מולקולות MHC I ו-MHC II ללימפוציטים T נאיביים. לכן, DCs צריכים לנדוד מהפריפריה לבלוטות הלימפה לאחר זיהוי פתוגנים באתרי הזיהום. עבור ניסויים במבחנה או אסטרטגיות חיסון DC, נעשה שימוש שגרתי ב-DCs שמקורם במונוציטים. תאים אלה מראים קווי דמיון בפיזיולוגיה, מורפולוגיה ותפקוד לתאים דנדריטיים מיאלואידים קונבנציונליים. הם נוצרים על ידי גירוי אינטרלוקין 4 (IL-4) וגורם מגרה מושבת גרנולוציטים-מקרופאגים (GM-CSF) של מונוציטים שבודדו מתורמים בריאים. כאן, אנו מדגימים כיצד מונוציטים מבודדים ומגורים מדם אנושי נוגד קרישה לאחר העשרת תאים חד-גרעיניים בדם היקפי (PBMC) על ידי צנטריפוגה בשיפוע צפיפות. מונוציטים אנושיים מובחנים ל-DCs לא בשלים ומוכנים להליכים ניסיוניים בסביבה לא קלינית לאחר 5 ימי דגירה.

מבוא

תאי דנדריטים (DCS) הם תאי מציגי אנטיגן המקצועיים החשובים ביותר של מערכת החיסון שלנו. בשלה DCS (iDCs) מתגוררת בעור או ברקמות ריריות ולכן הם בין תאי מערכת החיסון הראשונים אינטראקציה עם פתוגנים פולשים. DCs לייצג את הגשר בין מולד במערכת החיסונית אדפטיבית 1, שכן הם יכולים להפעיל T- ו- B-cell מהתשובות הבאות זיהוי הפתוגן. יתר על כן, הם תורמים תגובות פרו-דלקתיות חיסוניות בגלל הפרשת כמויות גבוהות של ציטוקינים, כגון IL-1β, IL-6, IL-12. DCs גם להפעיל תאי NK ולמשוך תאי חיסון אחרים לאתר של זיהום על ידי chemotaxis.

DCs ניתן לחלק תאים דנדריטים בשלים (iDCs) ותאים דנדריטיים בוגרים (mDCs) 2 מבוסס על מורפולוגיה ותפקודם. לאחר ההכרה של אנטיגנים זרים על ידי אחד הקולטנים זיהוי דפוסים רבים (למשל, קולטנים דמוי אגרה, C-typeלקטינים, או משלימים קולטנים) מבוטא בשפע על פני התא, iDCs עוברים שינויים גדולים מתחילים להבשיל. במהלך תהליך התבגרות זה, קולטנים ללכוד אנטיגן למטה מוסדרים, ואילו מולקולות חיוניות מצגת אנטיגן למעלה מוסדרות 3. בוגר DCs עד להסדיר את מתחמי histocompatibility הגדולות I ו- II (MHC I ו- II), מולקולות גירוי שיתוף כמו CD80 ו CD86, שחיוניים מצגת אנטיגן והפעלה של לימפוציטים מסוג T. בנוסף, הביטוי של CCR7 הקולטן chemokine על פני התא מושרה, המאפשרת הגירה של DCs מרקמות הפריפריה אל קשרי הלימפה. ההגירה הוא הקל על ידי "גלגול" של DCs יחד ליגנד chemokine 19 (CCL19 / MIP-3B) ו -21 ליגנד chemokine (CCL21 / SLC) שיפוע לבלוטות הלימפה 4-6.

בעקבות הגירה, mDCs להציג אנטיגן מעובד כדי נאיבי CD4 + ו- CD8 + T תאים, ובכך initiating תגובה חיסונית אדפטיבית נגד הפתוגן הפולש 7. אינטראקציה זו עם תאי T של בלוטות הלימפה קשורה גם עם התפשטות הנגיף 8. מחקרים אחרים במבחנה גילו כי DCs ביעילות ללכוד ולהעביר HIV לתאי T וכי תוצאות שידור זה זיהום נמרץ 9-12. ניסויים אלו מדגישים כי DCs מנצל in vivo HIV כמו הסעות מהפריפריה אל קשרי הלימפה. במהלך מצגת אנטיגן, DCS להפריש אינטרלויקנים מפתח המעצבים את ההתמיינות של תאי עוזר מפעיל T, ולכן, התוצאה של התגובה החיסונית כולה נגד החיידק נקבעה אינטראקציה מאוד זה. מלבד סוג 1 (Th1) וסוג 2 (Th2) מפעיל תאי T, תת אחרים של התאים המסייעים CD4 + T (למשל, סוג 17 (TH17) וסוג 22 (Th22) תאי T) תוארו, ואינדוקציה שלהם פונקציה נחקרה ביסודיות. DCs יתר מעורביםהדור של תאי T רגולטוריים (Tregs) 13,14. תאים אלה הם אימונוסופרסיבי ויכולים להפסיק או למטה להסדיר אינדוקציה או התפשטות של תאי T מפעיל ועל כן הם חיוניים לפיתוח חסינות וסובלנות.

DCs קונבנציונאלי האדם (cDCs) המורכבים מכמה תת קבוצות של תאים עם ממוצא מיאלואידית (כלומר, תאים לנגרהנס (LCS) ואת עורי DCs ביניים) או ממוצא הלימפה (כלומר, DCs plasmacytoid (PDC)). בניסויים במבחנה או אסטרטגיות חיסון DC, DCS-derived מונוציטים משמש באופן שגרתי כמודל DCs העור. תאים אלו מראים דמיון בפיזיולוגיה, מורפולוגיה, ותפקוד התאים הדנדריטים מיאלואידית קונבנציונאלי. הם מופקים על ידי תוספת של interleukin 4 (IL-4) ו גרנולוציט-מקרופאג גורם מגרה המושבה (GM-CSF) כדי מונוציטים מבודד מתורמים בריאים 12,15-18. תאי דנדריטים יכולים גם להיות מבודדים ישירות ביופסיות עורי או ברירית, או יכולים אפילו בדואר התפתח CD34 + ובתאי hematopoietic המבודדים דגימות דם חבל הטבור השיגו ברחם לשעבר. הנה, אנחנו מדגימים איך מונוציטים מבודדות מגורה מדם אדם אנטי-קרוש לאחר תא דם היקפיים mononuclear (PBMC) והעשרה על ידי צנטריפוגה שיפוע צפיפות. לאחר הדגירה במשך 5 ימים, מונוציטים אדם בתנאים מסוימים הם מובחן לתוך iDCs והם מוכנים פרוצדורות בסביבה הלא-קלינית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הצהרת אתיקה: נכתבה הסכמה מהדעת התקבלה כל תורמי הדם המשתתפות ידי המכון המרכזי עירוי דם & חיסוני מח', אינסברוק, אוסטריה. שימוש דגימות שאריות אנונימי למטרות מדעיות אושר על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה לרפואה של אינסברוק.

1. עשיית עושר של תאי הדם ההיקפי mononuclear (PBMCs)

  1. ריכוז של PBMCs ידי צנטריפוגה.
    1. פתח את חבילת דם לדם פיצול צינורות צנטריפוגות סטרילי 50 מ"ל פי כמות הדם שהתקבלו.
    2. במידת הצורך, להתאים את עוצמת הקול ל -50 מ"ל לכל צינור עם פוספט שנאגרו מלוחים של Dulbecco סטרילי (D-PBS).
    3. מניחים את צינורות לתוך צנטריפוגות ספין אותם ב 400 XG במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (RT) ללא הבלם.
    4. צייר את השכבה העליונה המכיל פלזמה וטסיות בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל סטרילי, עוזב את boundarשכבת y באין מפריע.
      הערה: אם פלזמה עצמית במקום FCS משמשת כדי להשלים את מדיום התרבות, הפלזמה יש לאסוף חום מומת בשלב זה.
    5. אוספים את התאים mononuclear (שכבות גבול) משני צינורות 50 מ"ל צנטריפוגות ולהעביר אותם לתוך צינור מ"ל אחד סטרילי 50 בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל סטרילי.
    6. כוון את עוצמת הקול ל -50 מ"ל לכל צינור באמצעות D-PBS סטרילית.
    7. מניחים את צינורות לתוך צנטריפוגות ספין אותם ב 400 XG במשך 15 דקות ב RT ללא בלם.
    8. צייר את השכבה העליונה המכילה את הפלזמה וטסיות בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל סטרילי, עוזב את שכבת הגבול באין מפריע.
    9. אוספים את התאים mononuclear (שכבות גבול) מן הצינורות צנטריפוגות 50 מ"ל ולהעביר אותם לשתי צינורות סטרילי 50 מ"ל אוסף בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל סטרילי.
    10. כוון את עוצמת הקול ל -50 מ"ל לכל צינור עם D-PBS סטרילית.
  2. הַפרָדָהשל PBMCs על ידי צנטריפוגה שיפוע צפיפות (איור 1).
    1. הכן ארבעה צינורות 50 מ"ל ו פיפטה 15 מ"ל של מדיום שיפוע צפיפות לתוך צינור אחד.
    2. קח 25 מ"ל של תאים ונקווה / דם מהצינור אוסף (שלב 1.1.10) ובזהירות כיסוי המדיום שיפוע צפיפות.
    3. מניחים את צינורות לתוך צנטריפוגות ספין אותם ב 700 XG במשך 30 דקות ב RT ללא בלם.
  3. איסוף וטיהור של PBMCs.
    1. צייר את השכבה העליונה המכילה את הפלזמה וטסיות בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל סטרילי, עוזב את שכבת PBMC באין מפריע.
    2. אסוף את שלבי PBMC מכל צינורות לרכז את התאים שני צינורות סטרילי 50 מ"ל בעזרת פיפטה סרולוגיות 25 מ"ל סטרילי.
    3. כוון את עוצמת הקול ל -50 מ"ל לכל צינור עם D-PBS סטרילית. מניחים את צינורות לתוך צנטריפוגות ספין אותם ב 400 XG במשך 15 דקות ב 4 ° C עם הבלם.
    4. לשאוב את supernatant מחדש להשעות אתתאי D-PBS סטרילית. פינת התאים משני צינורות ולהתאים את עוצמת הקול עד 50 מ"ל עם D-PBS סטרילית.
    5. מניחים את הצינורות לתוך בצנטריפוגה ספין אותם ב 400 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C עם הבלם.
    6. לשאוב את supernatant מחדש להשעות את התאים D-PBS סטרילית. כוון את עוצמת הקול עד 50 מ"ל עם D-PBS ו פיפטה סטרילית 50 μl כדי צינור 1.5 מ"ל המכיל 450 μl של D-PBS.
    7. וורטקס הצינור 1.5 מ"ל במרץ לספור את התאים בתא נויבאואר או כל מכשיר ספירת תאים אחרים.
    8. מניחים את צינורות 50 מ"ל לתוך בצנטריפוגה ספין אותם ב 400 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C עם הבלם.

בידוד 2. של מונוציטים ידי אנטי אנושי CD14 מגנטי חלקיקים

  1. תיוג של PBMCs עם חלקיקים מגנטיים.
    1. התאם את הריכוז PBMC עד 8 x 10 מ"ל 7 תאים / באמצעות חיץ בידוד.
    2. וורטקס חלקיקים מגנטיים אנטי אנושי CD14 thoroughly ולהוסיף 50 μl של חלקיקים עבור כל 1 x 10 7 PBMCs.
    3. מערבבים את ההשעיה-חלקיק תא ביסודיות דגירה אותו ב RT במשך 30 דקות.
  2. ההפרדה של שברים חיוביים ושליליים.
    1. התאם את הווליום עד 12 מ"ל באמצעות חיץ בידוד.
    2. הכן שישה צינורות סטרילית מסביב לתחתית פיפטה 2 מיליליטר של השעית תא-חלקיקים לתוך צינור אחד.
    3. מיד למקום את הצינורות על המגנט. דגירה אותם במשך 10 דקות ב RT.
    4. שמור את הצינורות על המגנט ובזהירות לצייר את supernatant. Supernatant מכיל את החלק היחסי שלילית.
    5. הסר את הצינור מתוך המגנט ולהוסיף 2 מ"ל של חיץ בידוד.
    6. בעדינות מחדש להשעות את התאים על ידי pipetting למעלה ולמטה.
    7. מניחים את הצינורות בחזרה על המגנט. דגירה במשך 5 דקות ב RT.
    8. שמור את הצינורות על המגנט ובזהירות לצייר את supernatant. Supernatant מכיל את החלק היחסי שלילית.
    9. הסר את הצינורות מן מגנט ומוסיפים 2 מ"ל של חיץ בידוד צינור אחד. בעדינות מחדש להשעות את התאים על ידי pipetting למעלה ולמטה.
    10. העברת חלק חיובי לצינור 50 מ"ל סטרילי ולהתאים את עוצמת הקול ל -50 מ"ל באמצעות D-PBS סטרילית.

3. גירוי של מונוציטים מבודדים עם IL-4 ו- GM-CSF

  1. מניחים את הצינור לתוך צנטריפוגות ומסובב אותו ב 400 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C עם הבלם.
  2. לשאוב supernatant מחדש להשעות את התאים 50 מ"ל של D-PBS.
  3. פיפטה 50 μl לתוך צינור 1.5 מ"ל המכיל 450 μl של D-PBS. וורטקס הצינור 1.5 מ"ל במרץ לספור את התאים בתא נויבאואר או מכשיר ספירת תאים אחרת.
  4. מניחים את הצינור 50 מ"ל לתוך צנטריפוגות ומסובב אותו ב 400 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C עם הבלם.
    הערה: אם חלק שלילי, המכיל לימפוציטים מדם היקפי (PBLs), נדרש גם, לבצע שטיפה ועוד היד נטויה צעדים דומים ל- tצינור של החלק החיובי (שלבי 3.1-3.5).
  5. התאם את הריכוז התא 1 x 10 6 / מ"ל עם המדיום תרבות מחומם מראש (בינוני RPMI 1640 בתוספת 10% חום מומת FBS ו 1% פתרון L-גלוטמין) ו פיפטה 3 מ"ל / גם לתוך 6 צלחות היטב.
    הערה: אם אתה משתמש פלזמה עצמית חומה מומת, להחליף את FCS 10% עם 1-5% פלזמה עצמית, על פי ניסיוני ההגדרה.
  6. לעורר את מונוציטים עם-4 IL אנושי רקומביננטי (250 U / ml) ו- GM-CSF אנושי רקומביננטי (1,000 U / ml) על ידי pipetting הציטוקינים ישירות לתוך המדיום תרבות. לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2.
  7. Re-לגרות את התאים עם IL-4 (250 U / ml) ו- GM-CSF (1000 U / ml) לאחר 48 שעות על ידי pipetting הציטוקינים ישירות לתוך מדיום התרבות.
    הערה: אם קיימים סימני ההחמצה שמוצגים על ידי אינדיקטור pH בטווח הבינוני, להחליף מחצית הבינונית עם מדיום התרבות מחומם מראש.
  8. קציר אינו בוגר תאים דנדריטים ביום 5 עבורמטה-זרם ניסויים על ידי pipetting תאים בתרבית מתוך צלחת 6-היטב לתוך צינור צנטריפוגה 50 מ"ל לאחר pipetting בינוני התרבות למעלה ולמטה כמה פעמים.
  9. ספירת התאים להכתים מדגם של מונוציטים מבודד עם נוגדנים אנטי אנושי נגד CD11b, CD11c, ו- DC-כניסה / CD209, יחד עם צבע כדאיות התא. כדי למנוע מחייב נוקבים של נוגדנים במהלך מכתים משטח, השימוש קולטן Fc חוסם ריאגנטים או אלבומין בסרום שור (BSA) מאגרים מומלץ מאוד.
  10. לנתח את המדגם באמצעות צבע כדאיות התא, על פי פרוטוקול של היצרן, על ידי ביצוע cytometry זרימה כדי להעריך את טוהר הכדאיות של iDCs שנוצר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

לאחר צנטריפוגה של דם קרוש אנטי באמצעות כרית סוכרוז, תאי הדם היקפיים mononuclear (PBMCs) מועשרים בתוך שלבים על גבי מדיום שיפוע צפיפות (איור 1). לאחר PBMCs נמשכים לסירוגין, ניתוח FACS מתבצע על מנת לאפיין את אוכלוסיות תאים שונות בתוך PBMCs באמצעות סמנים השושלת (למשל, CD3 עבור לימפוציטים מסוג T, CD14 עבור מונוציטים, ו CD19 עבור לימפוציטים מסוג B). איור 2 א מראה את התוצאות של ניתוח FACS נציג PBMCs שנאספו ומוכתמ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מתאר את הדור של תאים דנדריטים הנגזרות מונוציטים (MDDCs) דרך הבידוד של מונוציטים האדם מדם קרוש אנטי באמצעות assay מבוססי ננו-חלקיקים מגנטיים. בפרוטוקול זה, השלבים צנטריפוגה מבוצעים זרם הליך בידוד תא, מה שמוביל העשרת שבר PBMC. למרות שתאים הם אבדו במהלך צנטריפוגה, כדי כיסוי התוכן של חבילת דם מלאה על מדיום שיפוע צפיפות ידרוש 200-300 מיליליטר של מדיום מפל צפיפויות ולכן אינו יכול להיחשב עלות יעילה. בנוסף, להעשרת PBMCs ידי תוצאות צנטריפוגה באוכלוסייה תא מנקה, אשר השפעה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

אנו רוצים להודות לטכנאית שלנו קרולין תורנס, המחלקה להיגיינה ומיקרוביולוגיה רפואית, ולד"ר אנליס מילבאכר ולד"ר פול הורטנגל, המכון המרכזי לעירוי דם והמחלקה האימונולוגית, על עזרתם ותמיכתם רבת הערך בנוגע לכתב היד הזה. אנו מודים לקרן המדע האוסטרית על תמיכתה בעבודה הזו (P24598 ל-DW, P25389 ל-WP).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
APC עכבר אנטי אנושי CD19 שיבוט HIB19BD Biosciences555415
APC עכבר אנטי אנושי CD83 שיבוט HB15eBD Biosciences551073
BD Imag אנטי אנושי CD14 חלקיקים מגנטייםBD Biosciences557769
BD ImagnetBD Biosciences552311
BSA (Albumin Fraction V)Carl RothEG-Nr 2923225
Costar 6 Well Clear TC-Treated TC Multiple Well PlatesCostar3506
מדיית שיפוע צפיפות: Ficoll-Paque PremiumGE Healthcare Bio-Sciences17-5442-03
Dulbecco' s פוספט חוצץ מלח (D-PBS)סיגמא-אולדריץ'D8537
פלקון 10  מ"ל פיפט סרולוגיקורנינג357551
פלקון 25  מ"ל פיפט סרולוגיקורנינג357525
פלקון 50  מ"ל צינור צנטריפוגה PP בהירות גבוההקורנינג352070
פלקון צינורות תחתונים עגוליםקורנינג352054
FITC עכבר אנטי אנושי CD3 שיבוט HIT3aBD Biosciences555339
צבע רפאים סגול 510 (מגיב כדאיות התא)Tonbo biosciences13-0870
GM-CSFMACS Miltenyi Biotec130-093-862
FBS מומת בחום (סרום בקר עוברי), ממקור מאושר של האיחוד האירופי (דרום אמריקה)Gibco10500-064
Hettich Rotanta 460RHettich---
IL-4 CCPromoKineC-61401
מאגר בידוד: מאגר BD IMag (10x)BD Biosciences552362
תמיסת L-גלוטמיןSigma-AldrichG7513
צינורות מיקרוצנטריפוגה, 1.5 מ"ל, SuperSpinVWR211-0015
PE עכבר אנטי אנושי CD14 שיבוט M5E2BD Biosciences555398
עכבר PE אנטי אנושי CD209 שיבוט DCN46BD Biosciences551265
RPMI-1640 בינוניסיגמא-אולדריץ'R0883
UltraPure 0.5 מ' EDTA, pH 8.0Invitrogen15575020

מקורות

  1. Banchereau, J., Steinman, R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 392, 245-252 (1998).
  2. Steinman, R. M., Hemmi, H. Dendritic cells: translating innate to adaptive immunity. Curr Top Microbiol Immunol. 311, 17-58 (2006).
  3. Steinman, R. M., Inaba, K., Turley, S., Pierre, P., Mellman, I. Antigen capture, processing, and presentation by dendritic cells: recent cell biological studies. Hum Immunol. 60, 562-567 (1999).
  4. Schwarz, J., Sixt, M. Quantitative Analysis of Dendritic Cell Haptotaxis. Methods Enzymol. 570, 567-581 (2016).
  5. Weber, M., Sixt, M. Live cell imaging of chemotactic dendritic cell migration in explanted mouse ear preparations. Methods Mol Biol. 1013, 215-226 (2013).
  6. Sixt, M., Lammermann, T. In vitro analysis of chemotactic leukocyte migration in 3D environments. Methods Mol Biol. 769, 149-165 (2011).
  7. Randolph, G. J., Angeli, V., Swartz, M. A. Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels. Nat Rev Immunol. 5, 617-628 (2005).
  8. Wilflingseder, D., Banki, Z., Dierich, M. P., Stoiber, H. Mechanisms promoting dendritic cell-mediated transmission of HIV. Mol Immunol. 42, 229-237 (2005).
  9. Pope, M., Gezelter, S., Gallo, N., Hoffman, L., Steinman, R. M. Low levels of HIV-1 infection in cutaneous dendritic cells promote extensive viral replication upon binding to memory CD4+ T cells. J Exp Med. 182, 2045-2056 (1995).
  10. McDonald, D., et al. Recruitment of HIV and its receptors to dendritic cell-T cell junctions. Science. 300, 1295-1297 (2003).
  11. Pruenster, M., et al. C-type lectin-independent interaction of complement opsonized HIV with monocyte-derived dendritic cells. Eur J Immunol. 35, 2691-2698 (2005).
  12. Wilflingseder, D., et al. IgG opsonization of HIV impedes provirus formation in and infection of dendritic cells and subsequent long-term transfer to T cells. J Immunol. 178, 7840-7848 (2007).
  13. Kapsenberg, M. L. Dendritic-cell control of pathogen-driven T-cell polarization. Nat Rev Immunol. 3, 984-993 (2003).
  14. Mills, K. H. TLR-dependent T cell activation in autoimmunity. Nat Rev Immunol. 11, 807-822 (2011).
  15. Banki, Z., et al. Complement as an endogenous adjuvant for dendritic cell-mediated induction of retrovirus-specific CTLs. PLoS Pathog. 6, e1000891(2010).
  16. Posch, W., et al. Antibodies attenuate the capacity of dendritic cells to stimulate HIV-specific cytotoxic T lymphocytes. J Allergy Clin Immunol. 130, e1362 1368-1374 (2012).
  17. Posch, W., et al. Complement-Opsonized HIV-1 Overcomes Restriction in Dendritic Cells. PLoS Pathog. 11, e1005005(2015).
  18. Wilflingseder, D., et al. Immediate T-Helper 17 Polarization Upon Triggering CD11b/c on HIV-Exposed Dendritic Cells. J Infect Dis. 212, 44-56 (2015).
  19. Grassi, F., et al. Monocyte-derived dendritic cells have a phenotype comparable to that of dermal dendritic cells and display ultrastructural granules distinct from Birbeck granules. J Leukoc Biol. 64, 484-493 (1998).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

בידוד מונוציטיםבידול תאים דנדריטייםגלגולוני CD14 מגנטייםסנטריפוגת מדרג צפיפותהעשרה של PBMCציטומטריה זרימהאינטרלוקין 4סטימולציית GM-CSFתאים דנדריטיים לא בשליםהצגת אנטיגן
דור של תאי דנדריטים אדם נגזר מונוציטים מן הדם מלא
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.