ריחוף מגנטי יחד עם הדמיה ניידת וניתוח עבור אבחון מחלות

סיכום

אנו מציגים טכניקת ריחוף מגנטי בשילוב עם הדמיה וניתוח אוטומטיים הן במכשיר תואם סמארטפון והן במכשיר עם הדמיה ועיבוד משובצים. זה מיושם כדי למדוד את התפלגות הצפיפות של תאים עם שני יישומים ביו-רפואיים מוכחים: אבחון מחלת תאי חרמש והפרדת תאי דם לבנים ואדומים.

תקציר

נכון לעכשיו, הליכי אבחון קליניים רבים הם מורכבים, יקרים, לא יעילים ובלתי נגישים לאוכלוסייה גדולה בעולם. הדרישות לציוד מיוחד וכוח אדם מיומן מחייבות לבצע בדיקות אבחון רבות במעבדות קליניות מרוחקות ומרכזיות. ריחוף מגנטי הוא טכניקה פשוטה אך רבת עוצמה וניתן ליישם אותה על תאי ריחוף, התלויים בתמיסה פרמגנטית וממוקמים בשדה מגנטי, במיקום שנקבע על ידי שיווי משקל בין כוח מגנטי לכוח ציפה. כאן, אנו מציגים טכנולוגיית פלטפורמה רב-תכליתית המיועדת לאבחון נקודתי המשתמשת בריחוף מגנטי יחד עם הדמיה מיקרוסקופית וניתוח אוטומטי כדי לקבוע את התפלגות הצפיפות של תאי המטופל כאינדיקטור אבחון שימושי. אנו מציגים שתי פלטפורמות הפועלות על עיקרון זה: (i) גרסה תואמת סמארטפון של הטכנולוגיה, שבה מצלמת הסמארטפון המובנית משמשת להדמיית תאים בשדה המגנטי ואפליקציית סמארטפון מעבדת את התמונות ולמדידת התפלגות הצפיפות של התאים ו-(ii) גרסה עצמאית שבה לוח מצלמה משמש לצילום תמונות ויחידת עיבוד משובצת עם מסך טרנזיסטור סרט דק (TFT) מודד ומציג את התוצאות. היישומים המודגמים כוללים: (i) מדידת ההתפלגות המשתנה של אוכלוסיית תאים עם פנוטיפ מחלה בהשוואה לפנוטיפ בריא, המיושם לאבחון מחלת תאי חרמש, ו-(ii) הפרדה של סוגי תאים שונים על סמך הצפיפות האופיינית להם, המיושמת להפרדת תאי דם לבנים מתאי דם אדומים עבור ציטומטריה של תאי דם לבנים. יישומים אלה, כמו גם הרחבות עתידיות של מדידות מבוססות צפיפות חיוניות המתאפשרות על ידי טכנולוגיית פלטפורמה ניידת וידידותית למשתמש זו, ישפרו משמעותית את יכולות אבחון המחלות בנקודת הטיפול.

מבוא

כאן, אנו מציגים פלטפורמה טכנולוגית ו טכניקה המשתמשת ריחוף מגנטי יחד עם הדמיה אוטומטית וניתוח לנתח את התפלגות הצפיפות של התאים של חולה כאינדיקטור המחלה. גישה תכליתית זו לניתוח cytometric מבוסס צפיפות ניתן ליישם בסופו של דבר מגוון של אבחון מחלה. עם זאת, כדי להיות תואם עם בדיקות צבע של טיפול ולהשתמש במדינות מתפתחות, הטכניקה חייבת לספק את הדרישות עבור עלות נמוכה, ניידות, ואת השימושיות. המכשיר והחומרים המתכלים חייב להשיג בקלות ובעלות נמוכה. הכנת הדגימה חייבת להיות פשוט, ניתוח צריך להיות אוטומטי עם דרישות מינימאליות עבור קלט משתמש או פרשנות, ותוצאות יש להחזיר במהירות. יתר על כן, המכשיר חייב להיות קומפקטי ונייד להיות שימושי במסגרות קליניות וכן במדינות מתפתחות. לכן, פתחנו מכשיר ושיטה להשתמש ריחוף מגנטי טכנולוגית Point-of-care-תואמתogy ידי ניתוח הדמיה התמונה אוטומטית צימוד להחזיר תוצאות בדבר חלוקת צפיפות אוכלוסייה של תאים של החולה.

Point-of-care טכנולוגיות מציעות יתרון בולט מעל הליכי בדיקות מעבדה קליניים נוכחיים. הטכנולוגיה הזמינה כרגע הוא יקר מכדי להיות בבעלות מטפל או מורכבת מדי כדי להתבצע על ידי צוות רפואי. רבים מהליכים אלה דורשים פרוטוקולים עתירי עבודה שחייבת להתבצע על ידי טכנאי מיומן. מסיבות אלה, דגימות המטופל, כגון דם או שתן נאספים בדרך כלל במשרדו של הרופא, מועברים למעבדה לבדיקות מרחוק, מרכזי עבור ניסויים קליניים, אשר עשוי להימשך מספר ימים הרופא לקבל את תוצאות הבדיקה. זה יכול לגרום לעיכובים או סיבוכים במהלך טיפול ובמקרים מסוימים, עושה בדיקה זו מאוד יקרה ולא יעילה (שביקורים אלה יטילו עול כספי על משלמי ביטוח), ובהמשך גורם לנו לתחושהאבחון נגיש במסגרות דל במשאבים ומדינות מתפתחות.

כאן, אנו מציגים טכניקת ריחוף מגנטית יחד עם הדמיה אוטומטית וניתוח בשני מכשיר עם הדמיה מוטבעת ועיבוד (איור 1) למכשיר תואם לסמארטפון (איור 2). התקני ריחוף מבוסס המגנטיים אלה מייצגים פלטפורמת טכנולוגית חלים רחב אשר יש לו את הפוטנציאל להיות מיושמת על מגוון רחב של יישומים אבחוניים רפואיים שונים. תפקידי גישת הריחוף המגנטיים המבוססים על שיווי משקל בין שני כוחות: כוח מגנטי וכוח ציפת ^{1, 2, 3.} כאשר חלקיק מושעה במדיום פאראמגנטיים ונוסף שדה מגנטי שנוצר על ידי שני מגנטים בעלי קוטביות כמו זה מול זה, מעשי כוח מגנטיים על החלקיק בכיוון לעבר האמצע בין שני magn ETS. כוח הציפה נגרם על ידי הצפיפות היחסית של החלקיקים לעומת המדיום השעיית הוא כלפי מעלה במקרה של חלקיקים פחות צפופים מאשר המדיום וכלפי מטה במקרה של חלקיקים צפופים יותר סביב המדיום. בהתבסס על שני כוחות אלה, חלקיקים יגיעו למצב ריחוף שיווי משקל בתחום שמאזן שני כוחות אלה; עמדה זו קשורה באופן ישיר לצפיפות של החלקיק, עם חלקיקים צפופים מרחפים השדה נמוך מ חלקיקים צפופים פחות. מודול הדמיה, או מובנה המצלמה חכמה ^{4, 5, 6} או רכיבים אופטיים עצמאיים מצויד בעדשת מגדלת ^{7, 8,} משמש כדי להמחיש את עמדותיהם של החלקיקים. עיבוד תמונה, בין אם באמצעות יישום חכם ^{4, 5,}= "Xref"> 6 או יחידת עיבוד מוטבע ^{7, 8,} לאחר מכן מעבדת את התמונות שנתפסו לכמת את הפריסה המרחבית, ולכן חלוקת צפיפות האוכלוסייה. על מנת לנתח דגימות גדולות (כגון אלה עם רק כמה חלקיקים של עניין למיליליטר, זרימה יכולה להיות משולבת ישירות לתוך מכשיר החלקיקים כאלה לרחף ונותחה כשהם עוברים דרך אזור ההדמיה (איור 2).

איור 1: פלטפורמת ריחוף מגנטי המכיל את כל נדרש. (א) מכשיר ריחוף מגנטי קומפקטי כולל מודול התמקדות מגנטי, רכיבי הדמיה (דיודה פולטת אור (LED), עדשה אופטית, וגלאי המצלמה), ויחידת עיבוד עם מסך תצוגה. (ב) עוצמת השדה המגנטי של הקרוSS-קטע השטח שבין המגנטים שבו המדגם מוכנס. עוצמת השדה היא הגדולה ביותר על פני השטח של מגנטים שואף לאפס על האמצע ביניהם. (ג) חלקיקים, כגון תאים, בתוך הכוחות כמה ניסיון שדה המגנטי: כוח מגנטי _(מ F) לכיוון האמצע בין המגנטיות, עם גודל משתנים על פי המיקום של החלקיק; כוח כבידה _(G F ') אשר תלוי צפיפות החלקיקים ביחס לזה של המדיום מתלים, וכן כוח הגרר _(ד F) להתנגד תנועה החלקיקים. לשכפל, ברשות, מן Yenilmez, et al. ⁸ אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

תאנהיור 2: Smartphone תואם פלטפורמת ריחוף מגנטית בסיוע זרימה. (א - ג) קדמי (א), בצד (ב), ובחזרה (ג) נופים של מכשיר ריחוף מגנטי (ד) רכיבים של המכשיר כוללות: 1) מודול ריחוף מגנטי, כולל מגנטים קבועים, עדשה מגדלת, מפזר LED ואור, 2) במקרה החכם, 3) אלקטרוניקה, כולל מיקרו-בקר, הנהג המשאבה, מקלט Bluetooth, 4) בעל מיקרו-משאבה, 5) פתח מתכווננת, 6) בעל צינור פסולת, 7) מחזיק הסוללה, 8 בעל מדגם), 9) עמד דו-שימושי ומכסים. (ה) זרימה סכמטי, מראה שאיבה של המדגם דרך השדה המגנטי. (ו) חתך של מודול הריחוף המגנטי, מראה כיצד חלקיקים של צפיפויות שונות יישרו כפי שהם נשאבים דרך השדה; פחות חלקיקים צפופים, כגון חלקיקי 1, יהיו לאזן בכל t גובה ריחוף גבוההחלקיקים צפופים האן, כגון חלקיקים 2. לשכפל, ברשות, מן אמין, et al. ¹ אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

דרישות המינימום לשימוש של כל דגימת לצורך ביצוע אנליזת הפצת צפיפות במערכת זו כוללות את היכולת לקבל השעיה של תאים או חלקיקים גדולים מ כ 5 מיקרומטר ופחות מ כ 250 מיקרומטר בגודל (הדמיה ועיבוד תמונה) ובמידה שבה היא מתיישבת עם ערבוב בתמיסה של פתרון פאראמגנטיים כגון gadobutrol משמש כאן. לאבחון מחלה, יישומים תואמים כוללים את אלה שבהם (i) תאים של עניין יש מיסודו צפיפות שונה כאשר הם נושאי מחלה בהשוואה לקבוצת ביקורת בריאה, (ii) שינוי צפיפות יכול להיגרם בתא על ידי תוספת של מגיב או כמה טיפול אלטרנטיבי עבור קצרזמן cubation, או (iii) תאים מסוגים שונים מזוהים יחיד מדגם ו מטבעם (או באמצעות איזה טיפול) יש צפיפות מאפיין ייחודית.

אנמיה חרמשית היא מחלה גנטית גורמת צורת מוטציה של המוגלובין, HBS, כדי להיות מיוצר תאי הדם האדום של אדם (RBCs), אשר יכול לגרום לאירועים לסירוגין vaso-occlusive ו ^-9 אנמיה המוליטית כרונית. זה מאובחן או באמצעות התמקדות isoelectric המוגלובין, כרומטוגרפיה נוזלית בעל ביצועים גבוהים (HPLC) חלוקה, או אלקטרופורזה המוגלובין שהן מאוד מדויקים אבל חייבות להתבצע במעבדת ניסויים קלינית משום שהם אינם עולים בקנה אחד עם הגדרות צבע של טיפול. מסיסויות ובדיקות מבוססות נייר עבור מחלה חרמשית הוצעו, אך בדרך כלל דורשות פרשנות המשתמשים סובייקטיבית ובדיקה מאשר. כאן, אנו משתמשים גישה מבוססת-צפיפות לזהות RBCs מגל, אשר להשיג צפיפות גבוהה יותר מאשר RBCs מאנשים ללא אנמיה חרמשית. המנגנון כרוך פילמור של טופס מוטציה של המוגלובין, HBS, הגורמת להתייבשות RBC ב RBCs מחלה חרמשית בתנאים deoxygenated ^{10, 11, 12, 13.}

צפיפות זו מבוססת גישה יכולה להיות מיושמת גם על מנת להפריד בין תאים מסוגים שונים על בסיס צפיפות: תאי דם לבנים (WBCs) ו RBCs ^7. WBCs הוא בדרך כלל אחראי למלחמה בזיהומים בגוף. ניתן להשתמש cytometry WBC לכמת את מספר התאים הללו בדם ומשמש ככלי אבחון שימושיים. WBC ספירת גבוה מהרגיל (נחשב בדרך כלל יותר מ -11,000 תאים לכל μL) עשוי להצביע על זיהום, הפרעות במערכת החיסונית, או לוקמיה. WBC ספירה מתחת לטווח הנורמלי (כ -3,500 תאים לכל μL) עלולים להיגרם על ידי הפרעות או קונדיט אוטואימוניותמיונים מח עצם נזק. בניגוד טכנולוגיות חלופיות, התהליך המוצג כאן אינו מסתמך על תמוגה של RBCs או כתמים על מנת לזהות WBCs. מבחן מבוסס תא זו מנצל את צפיפות הטמון הייחודית של שני סוגי התאים לבצע הפרדה, כמו צפיפות אוכלוסיית WBC דווחה להיות נמוך מזה של אוכלוסיית RBC כפי שהיא מחושבת על שיפוע צפיפות בעבר צנטריפוגה ^{2, 3.}

לעומת בדיקות alterative במקומות מרוחקים, המבחן הזה הוא מהיר, עם הכנת מדגם פשוט (איור 3), הפרדת תאים בהתקן תוך 10 - 15 דקות, ו הדמיה אוטומטית ניתוח אשר דורשת פחות מ 1 דקות. בדרך זו, המכשיר יכול להחזיר תוצאות מהר להודיע ​​החלטות רפואיות טוב יותר, לאפשר טיפול להינתן מייד כדי להקל על כאב פיזי ונפשי, וכן להפחית את הסיכון של סיבוכי associated עם עיכוב טיפול רפואי. טכניקה זו יכולה להתבצע באתר או במסגרות קליניות עקב הכנת מדגם פשוט הדמיה אוטומטית וניתוח אשר מחזירה תוצאה עם קלט או פרשנות משתמש מינימאלי. בגלל השימוש בגישה פשוטה באמצעות מגנטים קבועים לניתוח מדגם והשימוש או סמארטפון או רכיבים חשמליים פשוטים הדמיה ועיבוד תמונה, המכשיר כמו גם את העלויות לכל מבחן הם מינימאליים לעומת כמה נהלי בדיקות מתוחכמים.

פרוטוקול

הצהרה אתית: כל הנהלים הקשורים דגימות דם אדם בוצעו על פי ההתקנות המוסדיות. כל הפרוטוקולים היו נבדקו ואושרו על ידי דירקטוריון הסקירה המוסדי. הסכמה מודעת ניתנה על ידי כל המשתתפים.

1. הכנת דוגמאות עבור ⁵ אבחון מחלה ^{חרמשית, 8}

1. כן פתרון 50 מ"מימ של gadobutrol תמיסת המלח המאוזן של האנק (HBSS).
2. ממיסים 10 metabisulfite נתרן מ"מ הפתרון גדוליניום.
   הערה: metabisulfite נתרן הוא רעיל על ידי שאיפה מאוד מעצבן עור ורקמות. זוהי חומצת מאכל כאשר מעורבב עם מים. זה עלול להתפרק כדי לפלוט אדים רעילים תחמוצת הגופרית ונתרן כשמחממים אותו לטמפרטורה גבוהה.
3. השג דגימת דם דרך או fingerstick או venipuncture.
   1. להקיז דם באמצעות מכשיר דקירה עם אזמל נקי, חד פעמי. Apלחץ רובדי סמוך לאתר פירסינג ולנגב את אגל דם שנוצרה שלוש עד ארבע פעמים לפני איסוף הדם בעזרת פיפטה; לדאוג שלא "חלב" האצבע על ידי כיווץ הרקמה, כמו זה יגרום לזיהום של המדגם עם נוזל רקמות.
   2. לחלופין, להקיז דם באמצעות נהלי venipuncture תקן ^14.
      הערה: אם דגימות תישמרנה במשך יותר מכמה שעות, לאסוף את הדם לתוך Vacutainer עם נוגד קרישה כגון EDTA.
4. להוסיף פחות מ -1 μL של דם עד 100 μl של פתרון metabisulfite גדוליניום-נתרן.

2. הכנת המדגם עבור Cytometry WBC ⁷

1. השג דגימת דם באמצעות fingerstick או venipuncture גם, כאמור בסעיף 1.
2. אופציונלי: Lyse RBCs עם מאגר תמוגה RBC. פיפטה 5 μL של דם לתוך 500 μL של חיץ תמוגה RBC דגירה בטמפרטורת החדר למשך 3 - 5 דקות.
   הערה:ניתן לבצע זאת על מנת לאשר את מגוון ריחוף של אוכלוסייה מבודדת של WBCs. עם זאת, אין זה הכרחי כדי לבצע שלב זה, כמו התוצאות המוצגות כאן מראות כי RBCs לרחף לעבר עמדה מובהקת נמוכה יותר WBCs.
3. לדלל דם מלא 1: 1,000 ב 25 מ"מ אלוקים HBSS
   הערה: אם תמוגה התא בוצעה, לדלל את המדגם lysed 9: 1 מדגם lysed: 250 מ"מ הקב"ה על מנת להשיג מדגם המכיל 25 מ"מ הקב"ה.

.3 ניתוח של דגימות באמצעות פלטפורמת ריחוף מגנטי ^{4, 5, 6, 7, 8}

1. הפעל את מכשיר הריחוף המגנטי:
   1. עבור מכשיר עצמאי, לחבר את המכשיר, יש לאפשר לה להידלק, ומניחים על משטח שטוח ומאוזן.
   2. כדי לקבל את הגירסה תואמת החכם, להפעיל את היישום הסמארטפונים להחליק ימינה להיכנס תמונהמצב לכיד, ומניח על משטח שטוח ומאוזן.
2. עבור ריחוף מגנטי סטטי:
   1. טען מדגם המוכן לתוך צינור microcapillary זכוכית מרובעת על ידי טבילה סוף לתוך הפתרון ומאפשר מדגם כדי למלא את נימי דרך פעולת נימים.
   2. חותם את הקצה עם איטום צינור על ידי דחיפה איטית קצה אחד הנימים לתוך החומר.
   3. הכנס את הנימים בין המגנטים של מכשיר הריחוף המגנטי כך שרק 1 סנטימטר של הצינור נשאר גלוי (ראה איור 3 לצורך המחשת הכנת המדגם).
      הערה: שלב זה נשאר זהה עבור שניהם החכם-תואם עצמאי המכשיר.
   4. חכה 10 דקות מבלי להפריע את המכשיר או הנימים.
3. עבור ריחוף מגנטי בסיוע זרימה:
   1. טענת מדגם לתוך הצינור המדגם.
   2. חבר את צינורות היניקה בין מיכל מדגם ותערובותcrocapillary ולחבר את צינורות מוצא בין microcapillary מיכל פסולת.
   3. הגדר את הפרמטרים עוצמת זרימת LED.
4. ודא כי תאים גלויים שדה הראייה, ולאחר מכן לחץ על הכפתור הלכיד ללכוד תמונה (כפתור 3 בהתקן העצמאי על לחצן מצלמה על החלק התחתון של המסך ביישום הטלפון החכם).
   הערה: אם ה- USB המשמש לאחסון תמונות, ליצור תיקייה בשם "תמונות" והכנס את USB לפני הפעלת המכשיר. אם אין כונן קיים, המכשיר יאחסן את התמונות בזיכרון הפנימי והועבר מאוחר יותר.
   הערה: תמונות מספר ניתן שנאספו ונותחו כדי להפחית את הסיכון של אנומליות ידי הזזת הנימים פנימה או החוצה על סנטימטר ½ בין לכידת תמונה.
   הערה: אם מספר תאים בתוך שדה הראייה הוא גבוה מדי או נמוך מדי (כפי שזוהה ודיווח על ממשק המשתמש), להעביר את הנימים פנימה או החוצה של המכשיר או להכין עוד sample.
5. הסר את המדגם וזורק במדגם לפי ההתקנות המוסדיות או מקומיות. נימים צריכים להיות מסולקים כמו חדה.

איור 3: הכנת מדגם וממשק משתמש. (א) הליך הכנת המדגם כרוך מפלח את האצבע של הנושא, ויצרתי טיפה של דם, העברת טיפת דם פתרון הבדיקה המדגמית, התססה המדגמת ומעמיסה לתוך צינור נימי דרך הפעולה נימי, והחדרת המדגם לתוך הריחוף המגנטי התקן. (ב) אלה צעדי הכנת מדגם גם מוצגים על המסך של המכשיר כדי להנחות הכנת מדגם. (ג) המכשיר כולל ארבעה לחצנים: לחצן זום לתוך התמונה מדגם על מנת לכוון את המיקוד כראוי באמצעות כפתור התאמה; כפתור כדי לקבל מ יחידeasurement (עיכוב של 5 מיושמת כדי לאפשר זמן עבור המשתמש להכניס את המדגם); מדידת הזמן לשגות (6 תמונות נלקחות s במרווחי 5); ולחצן כדי לכבות את המכשיר לאחר השימוש. לשכפל, ברשות, מן Yenilmez, et al. ⁸ אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

4. ניתוח תמונה ^{4, 5, 6, 7, 8}

1. הפעל את תוכנת ניתוח התמונה כללה במכשיר למדגם המתאים (חלוקת התא או הפרדה סוג התא).
   הערה: עבור מכשיר עצמאי, הניתוח מתבצע באופן אוטומטי ומוצג על ממשק המשתמש הגרפי. עבור מכשיר הטלפון החכם תואם, כדי לבצע את הניתוח, עבור אל הגלריהnd לבחור את קובץ הווידאו הרצוי כדי להיות מנותח.
2. הקפד להקליט את הפלט של הניתוח המוצג על המסך.
   הערה: לקבלת ניתוח חלוקת התא (כגון אבחון אנמיה חרמשית), הפלט יהיה רוחב של הכליאה של האוכלוסייה התא.
   הערה: לקבלת הפרדת סוג תא (כגון זיהוי WBC), הפלט יהיה דימוי עם אוכלוסיית WBC המזוהית. על מנת לחשב את מספר התאים לכל מיקרוליטר, להכפיל את המספר הממוצע של WBCs לכל תמונה בפקטור של 2,000. לדוגמה, אם 5 WBCs נצפו, זה יצביע 10,000 WBCs / μL. הטווח הנורמלי נחשב בדרך כלל להיות 3,500 - 11,000 WBCs / μL.
3. חזור על הניתוח על ידי הזזת הצינור מדגם פנימה או החוצה של המכשיר על ס"מ ½ לכידת תמונה אחרת כדי להיות מנותח כפי שתואר לעיל.
   הערה: מומלץ לחזור על הניתוח 5 - 6 פעמים לדגימה כדי למנוע שגיאות.

תוצאות

לקבלת ניתוח התפלגות צפיפות התאים, המהווה את טכניקה המשמשת לאבחון מחלת אנמיה חרמשית, המטרה היא לזהות את רוחב של חלוקת האוכלוסייה התא. תאי דם מחולים ללא אנמיה חרמשית יהיו כלוא בתוך רוחב לחיזוי. תאי מחולים עם מחלה חרמשית יופצו ברחבי אזור רחב יותר, עם הטיה כלפי מטה של חלוקת התא (ראה איור 4) עבור כל יישום מסוים, סף ניתן להגדיר בין רוחב חלוקת דגימות בקרה לעומת זה של בריאה דגימות כמו ניתוק בין "בריא" ו "חיובי למחלה"

דיון

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול
גורמים קריטיים בתהליך הזה כוללים את היישור הנכון של המגנטים. אם המגנטים להיות שלא במקומם או מופרדים יותר מרגיל בתוך המכשיר, זה יכול להשפיע על התוצאות. כדי לשלוט על פגם זה או אחר בתהליך, חלקיק שבשליטת צפיפות, כגון microspheres קלקר, שניתן להשתמש בם מדי פעם כדי לשלוט על שינויים לאורך זמן. יתר על כן, זמן ריחוף חשוב לאפשר לתאים להגיע לשיווי משקל. עבור תאי דם אדומים, 10 דקות מספיקות כדי לאפשר לכל התאים כדי להגיע לשיווי משקל. עם זאת, חשוב לציין כי חלק...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Gadavist (Bayer)	Jefferson Medical and Imaging	2068062	Gadavist מכיל 1M gadobutrol, כלאט של גדוליניום. רכשנו בקבוקונים של 2 מ"ל עם 15/ca.
צינורות מיקרו-נימי זכוכית מרובעים	Vitrocom	8270	אורך 50 מ"מ מספיק
נתרן metabisulfite	Sigma-Aldrich	S9000	נוסחה כימית: Na2S2O5
Leica Microsystems איטום צינור Critoseal	פישר סיינטיפיק	02-676-20
תמיסת	המלח המאוזנת של האנקסיגמא-אולדריץ'	H9269  SIGMA
Trypsin-EDTA	Sigma-Aldrich	T4049	או מגיב אחר כפי שהומלץ לסוג התא המשמש
מכשיר ריסוק מתכוונן MICROLET 2	Walgreens	246567	כל מכשיר ריסוק מקובל בשימוש על פי פרוטוקולי בטיחות ביולוגית
Microlet Lancets	Walgreens	667474	חייב להיות חד פעמי ולא לעשות שימוש חוזר
Hausser Bright-Line Phase Hemacytometer	פישר סיינטיפיק	02-671-6	או כל שיטה מועדפת לספירת תאים
ACK Lysing Buffer	ThermoFisher	A1049201