בדיקת FEeder (CAFE) היא שיטה פשוטה, ידידותית לתקציב ואמינה ביותר לחקירת מנגנונים העומדים בבסיס צריכת מזון. בשימוש עם אורגניזם המודל הגנטי הרב-תכליתי Drosophila melanogaster, הוא מספק אמצעי רב עוצמה להשגת תובנות חדשות לגבי מנגנוני ויסות צריכת מזון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
עבור רוב בעלי החיים, האכלה היא התנהגות חיונית להבטחת הישרדות, והיא משפיעה על ההתפתחות, התנועה, הבריאות והרבייה. לבליעת סוג וכמות המזון הנכונים יש אפוא השפעה רבה על איכות החיים. המחקר על התנהגות האכלה מתמקד בתהליכים הבסיסיים המבטיחים האכלה בפועל וחושף את תפקידם של גורמים המווסתים את הומאוסטזיס האנרגיה הפנימית ואת הבסיסים העצביים של קבלת החלטות. אורגניזם המודל Drosophila melanogaster, עם מגוון גדול של כלים הניתנים למעקב גנטי לתיוג ומניפולציה של נוירונים בודדים, מאפשר מיפוי של רשתות עצביות וזיהוי מפלי איתות מולקולאריים המעורבים בוויסות צריכת המזון. דוח זה מדגים את בדיקת הנימים (CAFE) ומראה כיצד למדוד צריכת מזון בקבוצת זבובים לטווחי זמן הנעים בין שעות לימים. בדיקה קלה לשימוש זו מורכבת מנימי זכוכית מלאים במזון נוזלי שזבובים יכולים לגשת אליו בחופשיות ולהיזון ממנו. צריכת המזון בבדיקה נקבעת במדויק באמצעות כלי מדידה פשוטים. כאן אנו מתארים שלב אחר שלב את השיטה מההתקנה ועד לביצוע מוצלח של בדיקת CAFE, ומספקים דוגמאות מעשיות לניתוח צריכת המזון של קבוצת זבובים בתנאים מבוקרים. הקורא מונחה דרך מגבלות אפשריות של הבדיקה, ומוערכים היתרונות והחסרונות של השיטה בהשוואה למבחני הזנה אחרים ב-D. melanogaster.
מבוא
אכילה היא חיונית; עם זאת, דה-רגולציה של צריכת המזון וכתוצאה מכך הפרעות אכילה כגון בולימיה, אנורקסיה או הנטייה הכללית לזלול מטילה עלויות על הפרט והחברה 1, 2, 3. מטרת המחקר הנוכחי היא לחשוף מנגנוני ויסות צריכת מזון ועל מנת לספק אסטרטגיה עקיפה היווצרות הפרעה. מחקרים רבים באמצעות אורגניזמים מודל יונקים סיפקו תובנות חדשות של המעגל ואת תפקידו של מערכות איתות הפרעות אכילה 4, 5, 6. עם זאת, הידע שלנו על הבסיסים העצבים מולקולריים שבבסיס הפרעות אלה עדיין....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. Assay CAFE
הערה: assay מורכב משלושה רכיבים: בקבוקון ניסיוני, מכסה ספציפית ונימים מיקרו. קופסת פלסטיק עם מכסה משמש להובלת בקבוקונים מוכנים וכדי לשלוט לחות בצורה יעילה יותר.
- השתמש בקבוקון פלסטיק תרבות תסיסנית (גובה אופציונלי 8 ס"מ, 3.3 ס"מ קוטר) כמו צינור עבור assay.
- חותם את הבקבוקון עם מכסה פרספקס מיוצרים המכיל טבעת O (איורים 1 א, 1B). טען זבובים על ידי הקשה או עם רובה הנשיפה דרך הפתח המרכזי של....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
זבובים של גנוטיפ w 1118 משמשים כדי להדגים כיצד assay מבוצע. מוטציות w 1118 משמשות בדרך כלל כדי ליצור קווים מהונדסים ולשלוט הרקע הגנטי של transgenes מסומנת הגן הלבן. בדרך כלל, עבור ניסויים התנהגותיים, כל הקווים המהונדסים הם backcrossed במשך חמישה דורות למלאים אותו w 1118, אשר ממשמש פקד הניסיון. אנחנו מראים ניסויים שונים: השוואה של אובדן אידוי עבור ההתקנה השונה שלנו, ניסוי בחירת מזו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הדו"ח מתאר את assay CAFE בצורת צעד אחר צעד, תוך התמקדות ההגדרה הטכנית והביצועים מוצלחים במעבדה. בשל הפשטות שלה, assay זה יכול לשמש גם מבחינה חינוכית כניסוי ספר. הדוגמות מראות כי assay מאפשר חקירה של חישת מזון, העדפה וצריכה תסיסנית על פני תקופות זמן קצרות יותר (שעות עד ימים). את assay CAFE כבר בשימוש נרחב בתחום לחקור נושאים, לרבות מזון צריכת סמים, התמכרויות, הומאוסטזיס אנרגיה ובקרה העצבית של האכלה 16, 18,.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים אין לי מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לחברי מעבדת שולץ בעבר ובהווה על הדיון ולהלגה דורינג על התמיכה הטכנית המצוינת. אנו מודים במיוחד לחברי סדנת הביוסנטר של אוניברסיטת קלן על תמיכתם ויצירתיותם. העבודה נתמכת על ידי SFB 1340, SysMedAlc ו-DAAD-Siemens.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בקבוקונים (רבייה) | גריינר ביו-וואן | 960177 | בקבוקוני www.greinerbioone.com |
| (בדיקת CAFE) | גריינר ביו-וואן | 217101 | סדנת |
| בדיקת www.greinerbioone.com-CAFE | ndash; | – | |
| קופסת פלסטיק, קיר נמוך | Plastime | 353 | |
| www.plastime.it כיסוי לקופסת הפלסטיק | סדנה | – | – |
| נימים | BLAUBRAND | REF 7087 07 | www.brand.de |
| קצות פיפטה | גריינר ביו-וואן | 771290 | www.greinerbioone.com |
| עיגולי נייר סינון | Whatman | 10 311 804 | |
| www.sigmaaldrich.com D(+)-סוכרוז | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
| אתנול מוחלט | VWR כימיקלים | 20,821,330 | www.vwr.com |
| צבע מאכל (אדום, E124) | Backfun | 10027 | www.backfun.de |
| צבע מאכל (כחול, E133) | www.backfun.de Backfun | 10030 | |
| (CVK 8) | CVH | 103220 | |
| www.cvh.de קליפר דיגיטלי | GARANT | 412,616 | בקבוקוני www.hoffmann-group.com |
| (רבייה) | גובה 9.8 ס"מ, קוטר 4.8 ס"מ | ||
| בקבוקונים (בדיקת CAFE) | גובה 8 ס"מ, קוטר 3.3 ס"מ | ||
| בדיקת | מיוצר בסדנה אוניברסיטאית, שרטוט טכני מסופק אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה. | ||
| קופסת פלסטיק, קיר | שיבוץ רשת פלסטיק נוצר בהתאמה אישית עבור 8 x 10 מיקומי בקבוקון | ||
| כיסוי לקופסת | מידות (37 x 29 x 18 ס"מ) | ||
| נימים | DIN ISO 7550 נורמה, IVD-guideline 98/79 EG, קצוות מלוטשים | ||
| קצות | פיפטה למעגל החיצוני נחתכים לפי המכסה | ||
| עיגולי | בקוטר 45 מ"מ עובד יפה אם מקופלים לבקבוקונים המשמשים | ||
| D(+)-סוכרוז | לא מזיק | ||
| אתנול מוחלט | נוזל ואדים דליקים מאוד | ||
| צבע מאכל (אדום, E124) | לא צוין | ||
| צבע מאכל (כחול, E133) | |||
| תמיסת סבון לא צוינה (CVK 8) | סבון ניטרלי ריח | ||
| קליפר | |||
| מזון | (עבור 20 ליטר) | ||
| אגר | 160 גרם | ||
| שמרי | 299.33 גרם | ||
| קמח | 1,200 גרם | ||
| מולסה | 1.6 ליטר | ||
| חומצה פרופיונית | 57.3 מ"ל | ||
| ניפגין 30% | 160 מ"ל |
מקורות
- Krauth, C., Buser, J., Vogel, K. How high are the costs of eating disorders - anorexia nervosa and bulimia nervosa - for German society. Eur. J. Health Econ. 3 (4), 244-250 (2002).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity and ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
