בדיקת FEeder (CAFE) היא שיטה פשוטה, ידידותית לתקציב ואמינה ביותר לחקירת מנגנונים העומדים בבסיס צריכת מזון. בשימוש עם אורגניזם המודל הגנטי הרב-תכליתי Drosophila melanogaster, הוא מספק אמצעי רב עוצמה להשגת תובנות חדשות לגבי מנגנוני ויסות צריכת מזון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
עבור רוב בעלי החיים, האכלה היא התנהגות חיונית להבטחת הישרדות, והיא משפיעה על ההתפתחות, התנועה, הבריאות והרבייה. לבליעת סוג וכמות המזון הנכונים יש אפוא השפעה רבה על איכות החיים. המחקר על התנהגות האכלה מתמקד בתהליכים הבסיסיים המבטיחים האכלה בפועל וחושף את תפקידם של גורמים המווסתים את הומאוסטזיס האנרגיה הפנימית ואת הבסיסים העצביים של קבלת החלטות. אורגניזם המודל Drosophila melanogaster, עם מגוון גדול של כלים הניתנים למעקב גנטי לתיוג ומניפולציה של נוירונים בודדים, מאפשר מיפוי של רשתות עצביות וזיהוי מפלי איתות מולקולאריים המעורבים בוויסות צריכת המזון. דוח זה מדגים את בדיקת הנימים (CAFE) ומראה כיצד למדוד צריכת מזון בקבוצת זבובים לטווחי זמן הנעים בין שעות לימים. בדיקה קלה לשימוש זו מורכבת מנימי זכוכית מלאים במזון נוזלי שזבובים יכולים לגשת אליו בחופשיות ולהיזון ממנו. צריכת המזון בבדיקה נקבעת במדויק באמצעות כלי מדידה פשוטים. כאן אנו מתארים שלב אחר שלב את השיטה מההתקנה ועד לביצוע מוצלח של בדיקת CAFE, ומספקים דוגמאות מעשיות לניתוח צריכת המזון של קבוצת זבובים בתנאים מבוקרים. הקורא מונחה דרך מגבלות אפשריות של הבדיקה, ומוערכים היתרונות והחסרונות של השיטה בהשוואה למבחני הזנה אחרים ב-D. melanogaster.
מבוא
אכילה היא חיונית; עם זאת, דה-רגולציה של צריכת המזון וכתוצאה מכך הפרעות אכילה כגון בולימיה, אנורקסיה או הנטייה הכללית לזלול מטילה עלויות על הפרט והחברה 1, 2, 3. מטרת המחקר הנוכחי היא לחשוף מנגנוני ויסות צריכת מזון ועל מנת לספק אסטרטגיה עקיפה היווצרות הפרעה. מחקרים רבים באמצעות אורגניזמים מודל יונקים סיפקו תובנות חדשות של המעגל ואת תפקידו של מערכות איתות הפרעות אכילה 4, 5, 6. עם זאת, הידע שלנו על הבסיסים העצבים מולקולריים שבבסיס הפרעות אלה עדיין רחוק מסיום. בשנים האחרונות, זבוב הפרות תסיסנית הפכה מערכת מודל ערך עבור נפרמי תובנה מכניסטית בסיסיות לתוך הסדרת metabolisמ 7, 8, 9. נימי מזין (CAFE) assay עבור תסיסנית הוקמה בשנת במעבדה של סימור Benzer בשנת 2007 בהשראת עבודה קודמת של Dethier ב blowfly 10, 11. את assay CAFE איפשר למדוד ישירות את צריכת המזון ב תסיסנית. במערכת מבחן התנהגותי זה, זבובי הניזונים מזון נוזלי מסופק נימי זכוכית מדורגות ממוקמות בתוך בקבוקון. הירידה של המניסקוס הנימים מציינת פסד של פתרון מזון באמצעות אידוי וצריכת מזון. קביעת שיעור האידוי על ידי בקבוקונים ללא זבובים מאפשר כימות מדויק של צריכת המזון.
את assay CAFE הוא אחד מכמה פרדיגמות התנהגותיים המשמשים למדידת האכלה תסיסנית וחוקרים צריכים לבחור את המתאים ביותר עבור הספציפיים שלהםשְׁאֵלָה. ההחלטה להשתמש assay מסוים כדאי לשקול את הנקודות הבאות: אופיו של המזון שמסר; תנאי ההאכלה; מדידת צריכה או ספיגת חומרים מזינות וצריכת מזון חקירה או תגובה למזון.
את assay CAFE כמתואר בדוח זה הנו אידיאלי עבור באי צריכת מזון של מקור מזון נוזלי תחת תנאי האכלה זקופים. לחלופין צריכת המזון ניתן למדוד עבור קבוצת זבוב על מקור מזון בצבע בבקבוקון או על צלחת. זבובים בדרך כלל נהרגים או בהרדמה לאחר ההאכלה והכמות לצבוע בליעה נקבעת על ידי ספקטרומטריית או בדיקה ויזואלית של הבטן המוכתמת. זבובים להתחיל להפריש האוכל לבלוע רק 30 דקות לאחר הצריכה, ולכן גישה זו קשה להשתמש לניתוח האכלה כבר רציפה התנהגויות 12, 13.
בניגוד זבובים נשמרים ללא פגע כאשר צבען נספגים עם קליעים נותבים רדיואקטיביים משמשים וצריכת רדיואיזוטופיים שלהם הוא הבקיע ב מונה הנצנץ 14, 15. הקליטה של radiolabel ידי מערכת העיכול זבוב עושה מדידה ספיגת מזון ארוכת טווח אפשרי, אבל עלול להוביל הערכה נמוכה מדי של בצריכה בגלל מולקולות נותב הלא נספג ומופרש. גישה נוספת למדוד בתגובת מזון תסיסנית היא התגובה הרחבה חוטם (PER), אשר מתרחשת בדרך כלל עבור צריכת מזון 16. שיטה אלגנטית זו מודדת את התגובה הראשונית לגירוי מזון אך אינו רושמת את הכמות צריכה. צריכת מזון מותאמת באופן דינמי במהלך האכלה באמצעות אותות משוב שלאחר עיכול מספר כי הם קריטיים עבור הסדרת ההאכלה 17, 18. מספר ניסיונות נעשו בשנים האחרונות לאוסף נתונים למחצה אוטומציה ב assay PER 19, 20. PER הוא זוהה על ידי כרית חשמלית או שילוב של אלקטרודות ומנה באמצעות מחשב. שילוב assay PER עם ספיגת רדיואיזוטופיים גילה כי assay זו מוגבלת על ידי רגישות נמוכה לזיהוי הבדלי האכלת כמות 18. את assay ההאכלה הידני (MAFE) 21, שבו זבוב מוזן באופן ידני עם נימי זכוכית, פותח לאחרונה למדוד ספיגת מזון זבוב משותק יחיד. את assay MAFE מבטל את ההתערבויות של ליקוט האכלת הייזום בעל רזולוצית זמן של שניות, וייזום PER וצריכת מזון ניתן לנטר באופן עצמאי ב assay. עם זאת, הדרך שבה חוסר תנועה של הזבוב משפיע על היבטים מסוימים של התנהגות אכילה (למשל תנועה, מוטיבציה) עדיין צריכה להיחקר. עבור ביקורות השוואתיות מעולות של מבחנים שונים למדידת צריכת מזון ב תסיסנית ליlanogaster וכדי לסייע לחוקרים למצוא את האדם המתאים ביותר, ראה דיווחי Deshpande ומרקס 13, 22.
את assay CAFE ימנע כמה מהחסרונות של מבחנים המתוארים לעיל ומשלב פשטות השימוש עם מדידה אמינה של צריכת מזון. כאן, תיאור מפורט של assay CAFE מסופק ואנחנו מראים שינוי התקנה פשוט להפחתת אידוי. נציג תוצאות כולל assay בחירת שני מזון (לזמן קצר ולזמן ארוך) ואת ספיגת סוכרוז זבובים מודגמות. בדיון נשווה השיטה המתוארת שלנו עם דרכים חלופיות כדי לבצע את assay CAFE, ולהאיר מגבלות פוטנציאליות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. Assay CAFE
הערה: assay מורכב משלושה רכיבים: בקבוקון ניסיוני, מכסה ספציפית ונימים מיקרו. קופסת פלסטיק עם מכסה משמש להובלת בקבוקונים מוכנים וכדי לשלוט לחות בצורה יעילה יותר.
- השתמש בקבוקון פלסטיק תרבות תסיסנית (גובה אופציונלי 8 ס"מ, 3.3 ס"מ קוטר) כמו צינור עבור assay.
- חותם את הבקבוקון עם מכסה פרספקס מיוצרים המכיל טבעת O (איורים 1 א, 1B). טען זבובים על ידי הקשה או עם רובה הנשיפה דרך הפתח המרכזי של המכסה (0.9 ס"מ קוטר), אשר מאפשר גם עבור זרימת אוויר ואספקת מים, ולסגור את החור עם פקק ספוג. שישה פתחים חרוטי קטן (0.4 ס"מ קוטר עליון, 0.3 ס"מ קוטר פנימי) המקיפים את החור המרכזי ולהשתלב הטיפים פיפטה של 2 - 20 נפח μL להחזיק הנימים במקום. (ראה דמויות הנוספת פרטים טכניים של המכסה.)
הערה: השימוששל פקק ספוג עם פתחים עבור הנימים במקום המכסה מחוייט המשמש כתב היד שלנו אפשרי. המכסה האישית שלנו מאפשרת טיפול בטוח של הבקבוקונים המוכנים ימזערו את הסיכון כרוך נימים נופלות למטה. - על מנת להציג את המזון הנוזלי, השתמש 5 microcapillaries μL עם 1 סימני μL. מקם את נימי הפתחים חרוטי במכסה ידי ניתוק העליון של 2 - קצה פיפטה μL 20 והחדרת הקצה לתוך החור (איור 1B, מסומנות קצה אדום). כדי למנוע זבובים לברוח, להכניס נימול 2 - קצה פיפטה 20 μL לאותו הפתיחה.
- כדי להתמודד עם בקבוקונים מוכנים מרובות בבטחה, ולהכניס אותם לתוך קופסת פלסטיק עם (איור 2 א) שיבוץ gridded.
2. הכנת זבובים
- שמור זבובים על מזון רגיל של 25 מעלות צלזיוס, 60% לחות יחסית מחזור 12 שעות / 12 שעות-כהה אור.
- כדי לשלוט תנאי גידול, להציג 35 נקבות בתולהד 15 זכרים לכל קבוצת הניסוי לתוך בקבוקון פלסטיק תרבות (גובה 9.8 ס"מ, 4.8 ס"מ קוטר) המכיל 50 מ"ל לעוף מזון. אפשר זבובים להטיל ביצים 3 הימים הראשונים, ולאחר מכן להעביר זבובים בוגרים כדי צלוחיות מזון טריות ולתת להם להטיל ביצים במשך ימים נוספים. אחרי זה, חזרו על העברה שוב. מבוגר מחק זבובים לאחר 2 ימים נוספים.
- כמו צריכת מזון תלויה בגודל זבוב, לקבוע את המשקל של קבוצת 100 זבובים ידי בהרדמת 2 עד 3 ימים בת מבוגר זבובים באמצעות כרית זבוב CO 2 ולאסוף אותם לתוך צינור פלסטיק 1.5 מיליליטר והמדידה עם תקן בקנה מידה מעבדתי. קבע את המשקל הרטוב של לפחות ארבע קבוצות לטוס עצמאיות מסודרות לפי מין (טבלה 1); להשתמש במשקל כדי לחשב את צריכת המזון μL לכל זבוב מ"ג. השתמש ערך כדי לקבוע את כמות המזון כי זבוב בודד הזנות לכל ניסוי ולהתאים את מספר הנימים מלאות מזון בהתאם כדי למנוע ריקון של נימים על ידי האכלה.
- עבור assay ג 3, שימוש20 זבובים ושני נימים מלאים. לצורך ניסוי לטווח ארוך (> 3 שעות ועד 9 ימים), השתמש קבוצה של שמונה זבובים עם אספקה של ארבעה נימים מלאים (תוצאות אמינות לא ניתן להשיג עם פחות משמונה זבובים בתנאים שתוארו).
- זבובים נפרדים לקבוצות (8 או 20 זבובים) לאחר מדידת משקל תחת חשיפת CO 2. מעביר את הקבוצה כדי בקבוקון מזון חדש (המכיל 15 מיליליטר מזון רגיל) כדי לאפשר התאוששות מן ההרגעה 2 CO במשך 48 שעות לפני הניסוי. השתמש 4 עד זבובים בן 6 ימים עבור assay CAFE.
- כמו זבובים wild-type שאינם מורעבים להאכיל באופן שולי בלבד 19, 21, מראש להרעיב טס למשך 3 שעות ניסויים האכלה. אין צום נדרש כאשר צריכת מזון מנוטרת על פני כמה ימים. לקבלת צום, העברת זבובים 16 עד 20 שעות לפני הבדיקה על ידי הקשה עליהם בעדינות לתוך בקבוקון המכיל רק נייר סינון מקופל בקוטר 45 מ"מ טבולה ~ 0.5 מ"ל DDH2 O (פעמיים מים מזוקקים), וקרוב עם מכסה assay CAFE פקוק.
3. הכנת מזון נוזלי
- הכן 3 M (10%, w / v) פתרון המניות סוכרוז על ידי מילוי 102.6 סוכרוז g (C 12 H 22 O 11) עד 100 מ"ל DDH 2 O. פיפטה 3 μL, 33 μL, 333 μL, 3.3 מ"ל ו 6.6 מ"ל של פתרון המניות לתוך צינור פלסטיק 15 מ"ל; להוסיף 2 מ"ל של צבע מזון (עבור אדום: זהורית [E124]; עבור כחול: ארגמן אינדיגו [E132]) ולמלא עד 10 מ"ל עם DDH 2 O. הריכוזים וכתוצאה מכך הם 0.001, 0.01, 0.1, 1, ו -2 M סוכרוז .
הערה: צבע המזון מאפשר לדמיין את המניסקוס ביתר קלות. עם זאת לצבוע עשוי להשפיע על צריכת המזון. כדי למנוע הטיה בשל צבע לוותר לצבוע מזון או באקראי את השימוש של צבעים על דגימות מזון במהלך הניסוי וקבוצות. - כדי לבדוק פיפטה העדפה אלכוהול 333 μL של פתרון המניות 3 M סוכרוז בתוך שפופרת פלסטיק 15 מ"ל.הוסף 1.5 מ"ל (2.3 מ"ל) של 100% EtOH (אתנול) ולהוסיף DDH 2 O עד 10 מ"ל להביא 15% (0.25 מ"מ) ו -23% (0.39 מ"מ) פתרונות עובד.
- שמור פתרונות המניה ב -20 ° C ופתרונות עובד על 4 מעלות צלזיוס; להשתמש בתוך 1 בשבוע.
- מלאו עד 10 נימים בעת ובעונה אחת עם פתרון מזון בצבע, בכוח נימים. הכנס את הקצוות של הנימים לתוך תמיסת סוכרוז (מחזיק נימים בזווית של 45 מעלות לפתרון). עצור אם הנוזל מגיע החלק העליון (5 μL) סימן של נימי, ולהסיר פתרון עודף על בחוץ ובפנים בנייר טישו.
4. הרכבת ביצוע assay נימי המזין
- אם בצום אינו נחוץ, להעביר את הזבובים הניסיונות אל assay על ידי קשה או על ידי מכת צנרת. הקפד לכלול שלושה בקבוקונים שליטים ללא זבובים לכמת אידוי.
- מוציאים בזהירות קצה פיפטה (2 - 20 נפח μL) כי היא סוגרת את אחד openin החיצוניGS, והכניס לקצה תחתון נימי זכוכית מלאה, ראשונה. אבטח את הנימים ידי צבת קצה פיפטה קודמת הבא אל הנימים. אם פתרונות מזון כמה נבדקות, לחזור על הליך זה בהתאם.
- מניח את הנימים מסתיימות בתוך כל הבקבוקונים באותה הרמה כדי למנוע הטיה שעלולה להתרחש אם מקורות המזון אותרו בגבהים שונים (3 - 4 סנטימטר מהמכסה); לשמור על מרחק אל נייר הסינון כדי למנוע הנימים מ דולף על ידי מקורות נגיעת מסנן נייר או צמיגויות שונות של מזון בטעות.
- לייבל בקצה העליון של הנוזל בצבע באמצעות עט סימון (סימן מתחיל). כדי להבטיח את הנימים השונים ניתן לזהות, לתייג אותם בנפרד באמצעות קוד צבע או פס.
- מניחים מבחני CAFE מרובים מוכן בתוך קופסת פלסטיק עם שיבוץ gridded ולהעביר את תיבת (איור 2 א) לעמדה בטוחה בתנאי מעבדה או בטמפרטורה, בהירי-עור-לחות מבוקרים Climתא (פרמטרים: 25 ° C, 60% לחות יחסית, 12 שעות / 12 שעות מחזור-כהה אור) אכלתי לתקופה הניסיונית (למשל 3 שעות או ימים).
- כמו נייר סינון תחתון מתייבש אם assay מבוצע על פני מספר ימים, החל מים טריים מדי 24 שעות באמצעות הפקק הספוג (100 μL) כדי לשמור קבועות לחות בתוך assay. השתמש ארבעה בקבוקונים נפרדים (8 ס"מ גובה, 3.3 ס"מ קוטר) מלא 30 מ"ל DDH 2 O כמכשירים לחות ומניחים אותם ליד מבחני CAFE בתיבת פלסטיק. השתמש כיסוי קופסת פלסטיק כדי ליצור סביבה מבוקרת לחות במהלך (איור 2 א) ניסוי.
הערה: השתנות רחבה מתרחשת בתנאי מעבדה; עם זאת, זה אינו ריאלי לביצוע assay CAFE בטמפרטורת החדר (למשל., בכיתה). השימוש במכשיר humidification (מסנן נייר, עם או בלי פקק ספוג רטוב, מלא צלוחיות מים כיסוי קופסת פלסטיק) מומלץ מאוד כדי להקטין התאדות ( איור 2B). - חלף הנימים עם אלה מלאים טריים לניסויים לטווח ארוכים כל 24 שעות. שים לב זבובים מתים לפני כל מרווח 24 שעות ולהשתמש מספר הזבובים חיו לחשב לתצרוכת למשק לטוס לתקופה הבאה. מחק את הנימים הישנים לאחר מדידת הירידה של המניסקוס (ראה 5.1).
הערה: במהלך ניסוי h 3 אנחנו בקושי רואים שום זבובים מתים. במהלך מחקר 4 ימים אנו מוצאים בדרך כלל 1 - 3 זבובים מתים. - בסוף של assay או לפני החלפת הנימים, לסמן את המניסקוס התחתון של (סוף הסימן) נימים עם עט סימון בעוד assay CAFE עדיין במצב הזקוף. מחק את הנתונים אם סוף הסימן אינו מתחת לסימון הראשוני (סימן המתחיל). אין להסיר את המכסה, שכן דבר זה עשוי לשנות את המניסקוס.
- מוציאים בזהירות את הנימים מן assay ולאחסן אותם לאיסוף נתונים. בדקו אם הנוזל בתוך הנימים הגיע לסוף הנמוך יותר אם לא discarד הנתונים, כמו האוכל היה לא נגיש הזבובים. לאסוף את כל הנימים לכל בקבוקון כקבוצה. הכנס טיפים פיפטה נימול לתוך כל הפתחים כדי למנוע זבובים לברוח. לפרק את ההתקנה ולשטוף צלוחיות, מכסים bungs ספוג באמבט וסבון לילה יבש בטמפרטורת החדר לשימוש נוסף.
הערה: זבובים ניתן לבצע עיבוד נוסף לאחר assay. אשר ספיגת מזון לפי העין או תחת מיקרוסקופ לנתיחה. - ניסויים חזרו עם אותו גנוטיפים בשלושה ימים שונים לפחות.
5. איסוף נתונים וניתוח
- למדוד את המרחק בין תחילת סימן וסיום חותם על הנימים באמצעות קליפר או סרגל. כדי להעביר נתונים ישירות גיליון אלקטרוני, להשתמש USB (Universal Serial Bus) מחובר קליפר דיגיטלי (איור 1E). מחק את הנימים לאחר המדידה.
- חשבון גודל נימים לחשב ספיגת מזון או אידוי. לדוגמה, שקול כובעillary כי הוא 73 מ"מ ארוך ומכיל 5 μL של פתרון מזון. ירידה של 14.6 מ"מ המניסקוס משקפת את הספיגה של 1 פתרון μL. לחשב ספיגת מזון באמצעות הנוסחה הבאה:
ספיגת מזון (μL) = מרחק נמדד (מ"מ) / 14.6 מ"מ - כדי לא לכלול את השפעת האידוי על צריכת מזון, לחשב מתכוון אידוי בשלושה (לכל הפחות) הבקבוקונים השליטים ללא זבובים. פחת ערך ממוצע זה מהערך שהיה מתקבל עבור צריכת מזון על ידי הזבובים.
- השתמש בנוסחה הבאה כדי לקבוע את צריכת סה"כ זבוב:
צריכת מזון (μL) = (ספיגת מזון [μL] - אובדן באידוי [μL]) / מספר כולל של זבובי הבקבוקון. בניסויים לטווח ארוך להשתמש את מספר הזבובים בחיים לפני תחילת הפסקת 24 שעות. - כדי להסביר את ההבדלים בגודל הגוף, כגון בין זכר נקבות הזבוב, לנרמל צריכת המזון למשקל הגוף (מזון μL / מ"ג זבובים).
- השתמש בתוכנה סטטיסטית לניתוח נתונים. לקבלת נורמהנתונים מבוזרים ברית, -tests T של תלמיד השימוש לקבוע הבדלים בין שתי קבוצות זבוב, ולהשתמש ANOVA (ניתוח שונה) עם בדיקות פוסט הוק Tukey קריימר במשך יותר משתי קבוצות. במצב בחירה, לנתח הבדלים לעומת בחירה אקראית באמצעות בדיקת סימן חד מדגם פרמטרית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
זבובים של גנוטיפ w 1118 משמשים כדי להדגים כיצד assay מבוצע. מוטציות w 1118 משמשות בדרך כלל כדי ליצור קווים מהונדסים ולשלוט הרקע הגנטי של transgenes מסומנת הגן הלבן. בדרך כלל, עבור ניסויים התנהגותיים, כל הקווים המהונדסים הם backcrossed במשך חמישה דורות למלאים אותו w 1118, אשר ממשמש פקד הניסיון. אנחנו מראים ניסויים שונים: השוואה של אובדן אידוי עבור ההתקנה השונה שלנו, ניסוי בחירת מזו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הדו"ח מתאר את assay CAFE בצורת צעד אחר צעד, תוך התמקדות ההגדרה הטכנית והביצועים מוצלחים במעבדה. בשל הפשטות שלה, assay זה יכול לשמש גם מבחינה חינוכית כניסוי ספר. הדוגמות מראות כי assay מאפשר חקירה של חישת מזון, העדפה וצריכה תסיסנית על פני תקופות זמן קצרות יותר (שעות עד ימים). את assay CAFE כבר בשימוש נרחב בתחום לחקור נושאים, לרבות מזון צריכת סמים, התמכרויות, הומאוסטזיס אנרגיה ובקרה העצבית של האכלה 16, 18,...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים אין לי מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לחברי מעבדת שולץ בעבר ובהווה על הדיון ולהלגה דורינג על התמיכה הטכנית המצוינת. אנו מודים במיוחד לחברי סדנת הביוסנטר של אוניברסיטת קלן על תמיכתם ויצירתיותם. העבודה נתמכת על ידי SFB 1340, SysMedAlc ו-DAAD-Siemens.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בקבוקונים (רבייה) | גריינר ביו-וואן | 960177 | בקבוקוני www.greinerbioone.com |
| (בדיקת CAFE) | גריינר ביו-וואן | 217101 | סדנת |
| בדיקת www.greinerbioone.com-CAFE | ndash; | – | |
| קופסת פלסטיק, קיר נמוך | Plastime | 353 | |
| www.plastime.it כיסוי לקופסת הפלסטיק | סדנה | – | – |
| נימים | BLAUBRAND | REF 7087 07 | www.brand.de |
| קצות פיפטה | גריינר ביו-וואן | 771290 | www.greinerbioone.com |
| עיגולי נייר סינון | Whatman | 10 311 804 | |
| www.sigmaaldrich.com D(+)-סוכרוז | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
| אתנול מוחלט | VWR כימיקלים | 20,821,330 | www.vwr.com |
| צבע מאכל (אדום, E124) | Backfun | 10027 | www.backfun.de |
| צבע מאכל (כחול, E133) | www.backfun.de Backfun | 10030 | |
| (CVK 8) | CVH | 103220 | |
| www.cvh.de קליפר דיגיטלי | GARANT | 412,616 | בקבוקוני www.hoffmann-group.com |
| (רבייה) | גובה 9.8 ס"מ, קוטר 4.8 ס"מ | ||
| בקבוקונים (בדיקת CAFE) | גובה 8 ס"מ, קוטר 3.3 ס"מ | ||
| בדיקת | מיוצר בסדנה אוניברסיטאית, שרטוט טכני מסופק אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה. | ||
| קופסת פלסטיק, קיר | שיבוץ רשת פלסטיק נוצר בהתאמה אישית עבור 8 x 10 מיקומי בקבוקון | ||
| כיסוי לקופסת | מידות (37 x 29 x 18 ס"מ) | ||
| נימים | DIN ISO 7550 נורמה, IVD-guideline 98/79 EG, קצוות מלוטשים | ||
| קצות | פיפטה למעגל החיצוני נחתכים לפי המכסה | ||
| עיגולי | בקוטר 45 מ"מ עובד יפה אם מקופלים לבקבוקונים המשמשים | ||
| D(+)-סוכרוז | לא מזיק | ||
| אתנול מוחלט | נוזל ואדים דליקים מאוד | ||
| צבע מאכל (אדום, E124) | לא צוין | ||
| צבע מאכל (כחול, E133) | |||
| תמיסת סבון לא צוינה (CVK 8) | סבון ניטרלי ריח | ||
| קליפר | |||
| מזון | (עבור 20 ליטר) | ||
| אגר | 160 גרם | ||
| שמרי | 299.33 גרם | ||
| קמח | 1,200 גרם | ||
| מולסה | 1.6 ליטר | ||
| חומצה פרופיונית | 57.3 מ"ל | ||
| ניפגין 30% | 160 מ"ל |
מקורות
- Krauth, C., Buser, J., Vogel, K. How high are the costs of eating disorders - anorexia nervosa and bulimia nervosa - for German society. Eur. J. Health Econ. 3 (4), 244-250 (2002).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity and instrumental variables approach. J. Health Econ. 31, 219-230 (2012).
- PriceWaterhouse Coopers LLP. The costs of eating disorders: Social, health and economic impacts. Assessing the impact of eating disorders across the UK on behalf of BEAT. PwC. , Available from: https://www.beat.co.uk/assets/000/000/302/The_costs_of_eating_disorders_Final_original.pdf (2015).
- Lenard, N. R., Berthoud, H. R. Central and peripheral regulation of food intake and physical activity: pathways and genes. Obesity. 16, S11-S22 (2008).
- Magni, P., et al. Feeding behavior in mammals including humans. Trends in Comp. Endocrinology and Neurobiology. 1163, 221-232 (2009).
- Morton, G. J., Meek, T. H., Schwartz, M. W. Neurobiology of food intake in health and disease. Nature Reviews Neuroscience. 15, 367-378 (2014).
- Bharuchka, K. N. The epicurean fly: using Drosophila melanogaster to study metabolism. Pediatr. Res. 65 (2), 132-137 (2009).
- Smith, W. W., Thomas, J., Liu, J., Li, T., Moran, T. H. From fat fruit fly to human obesity. Physiol. Behav. 136, 15-21 (2014).
- Rajan, A., Perrimon, N. Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies. BMC Biology. 11, (2013).
- Ja, W. W., et al. Prandiology of Drosophila and the CAFE assay. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104 (20), 8253-8256 (2007).
- Dethier, V. G. The Hungry Fly: A Physiological Study of the Behavior Associated with Feeding. , Harvard Univ Press. Cambridge, MA. (1976).
- Albin, S. D., Kaun, K. R., Knapp, J., Chung, P., Heberlein, U., Simpson, J. H. A subset of serotonergic neurons evokes hunger in adult Drosophila. Curr. Biol. 25, 2435-2440 (2015).
- Deshpande, S. A., et al. Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology. Nat. Methods. 11 (5), 535-540 (2014).
- Geer, B. W., Olander, R. M., Sharp, P. L. Quantification of dietary choline utilization in adult Drosophila melanogaster by radioisotope methods. J. Insect Physiol. 16, 33-43 (1970).
- Thompson, E. D., Reeder, B. A., Bruce, R. D. Characterization of a method for quantitating food consumption for mutation assays in Drosophila. Environ. Mol. Mutagen. 18, 14-21 (1991).
- Wong, R., Piper, M. D., Wertheim, B., Partridge, L. Quantification of food intake in Drosophila. PLoS One. 4 (6), e6063(2009).
- Scheiner, R., Steinbach, A., Classen, G., Strudthoff, N., Scholz, H. Octopamine indirectly affects proboscis extension response habituation in Drosophila melanogaster by controlling sucrose responsiveness. J. Insect Physiol. 69, 107-117 (2014).
- Liu, Y., Luo, J., Carlsson, M. K., Nässel, D. R. Serotonin and insulin-like peptides modulate leucokinin-producing neurons that affect feeding and water homeostasis in Drosophila. J. Comp. Neurol. 523, 1840-1863 (2015).
- Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PLoS One. 9 (6), e101107(2014).
- Itskov, P. M. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behavior in Drosophila. Nat. Commun. 5, 4560(2014).
- Qi, W., Yang, Z., Lin, Z., Park, J. Y., Suh, G. S. B., Wang, L. A quantitative feeding assay in adult Drosophila reveals rapid modulation of food ingestion by its nutritional value. Mol. Brain. 8, 87(2015).
- Marx, V. Metabolism: feeding fruit flies. Nat. Methods. 12 (7), 609-612 (2015).
- Spieth, H. T. Courtship behavior in Drosophila. Annu. Rev. Entomol. 19, 385-405 (1974).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Curr. Biol. 19 (24), 2126-2132 (2009).
- Lee, K. P., et al. Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105 (7), 2498-2503 (2008).
- Pohl, J. B., et al. Ethanol preference in Drosophila melanogaster is driven by its caloric value. Alcohol Clin. Exp. Res. 36 (11), 1903-1912 (2012).
- Vargas, M. A., Luo, N., Yamaguchi, A., Kapahi, P. A role for S6 kinase and serotonin in postmating dietary switch and balance of nutrients in D. melanogaster. Curr. Biol. 20 (11), 1006-1011 (2010).
- Masek, P., Scott, K. Limited taste discrimination in Drosophila. Proc. Natl. Acad. Sci. 107 (33), 14833-14838 (2010).
- Pool, A. H., Scott, K. Feeding regulation in Drosophila. Curr. Opin. Neurobiol. 29, 57-63 (2014).
- Luo, J. N., Lushchak, O. V., Goergen, P., Williams, M. J., Nässel, D. R. Drosophila insulin-producing cells are differentially modulated by serotonin and octopamine receptors and affect social behavior. Plos One. 9 (6), e99732(2014).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
