הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

12.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55721

⸱

30 באפריל 2017

 ,  ,  ,  , 
1Institute for Clinical and Experimental Surgery, Saarland University, 2Division of Plastic Surgery and Hand Surgery, University Hospital Zurich, University of Zurich

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים פרוטוקול לבודד שברי כלי דם ברקמה שומני נגזרות המייצגים יחידות כלי דם הבטיח. הם יכולים להיות מבודדים במהירות, אינו דורש עיבוד במבחנה, ובכך, ניתן להשתמש prevascularization צעד אחד בתחומים שונים של הנדסת רקמות.

תקציר

רשת כלי דם פונקציונלית היא בעל חשיבות המרכזית להישרדות והאינטגרציה של מבני רקמות מהונדסים. לשם כך, מספר אסטרטגיות אנגיוגנזה ו prevascularization הוקמו. עם זאת, רוב הגישות מבוססות תאים כוללות גוזלת זמן במבחנת צעדים ליצירת רשת כלי דם. לפיכך, הם אינם מתאימים נהלי צעד אחד תוך ניתוחיים. רקמת שומן הנגזרת שברי כלי דם (ad-MVF) מייצג יחידות כלי דם הבטיח. הם יכולים להיות בקלות לבודד מרקמות שומן ולהציג מורפולוגיה microvessel פונקציונלית. יתר על כן, הם להרכיב מחדש במהירות לתוך רשתות כלי דם חדשות לאחר השתלת in vivo. בנוסף, אד-MVF הוכח לגרום lymphangiogenesis. לבסוף, הם מקור עשיר של תאי גזע mesenchymal, אשר עשוי לתרום לפוטנציאל כלי הדם הגבוה שלהם. במחקרים קודמים אנו הדגמנו את vascularizati המדהיםעל יכולת של MVF מודעת תחליפי עצם ועור מהונדסים. במחקר הנוכחי, אנו מדווחים על פרוטוקול סטנדרטי עבור הבידוד אנזימטי של אד-MVF מרקמות שומן בעכברים.

מבוא

הנדסת רקמות מתמקדת הייצור של תחליפי רקמה ואיבר מקיימים, לשחזר או להגדיל את הפונקציה של שמיש ב עמיתיהם vivo 1, 2. גורלם של מבני רקמות מהונדסים תלוי באופן מכריע על כלי דם הולם 3. רשתות כלי דם בתוך המבנים האלה צריכים להיות מאורגנים באופן היררכי עם arterioles, נימים, ו venules לאפשר טפטוף דם יעיל אחרי inosculation אל כלי הדם של הנמען 4. הדור של רשתות כאלה הוא בין האתגרים המרכזיים בתחום הנדסת רקמות. לשם כך, קשת רחבה של אסטרטגיות כלי דם ניסיוני כבר הציגה במהלך שני העשורים האחרונים 5, 6.

גישות אנגיוגנזה לעורר את ingrowth של microvessels הנמען Tiss מהונדסיםUES באמצעות שינוי פיגום מבני או physicochemical, כגון השילוב של צמיחת גורמי 7. עם זאת, עבור כלי דם של המבנים התלת-ממדי גדול, אסטרטגיות תלויי אנגיוגנזה מוגבלים במידה ניכרת בשיעורי צמיחה איטית של פיתוח microvessels 8.

לעומת זאת, מושג prevascularization שואף עבור הדור של רשתות כלי דם פונקציונליות בתוך רקמת הבונה לפני ההשתלה שלהם 9. Prevascularization הקונבנציונלי כרוך לתרבות המשותפת של תאים מייצרי כלי, כגון תאי אנדותל, תאי ציור קיר או תאי גזע 10, בתוך פיגומים. לאחר היווצרות רשת כלי דם, מבני prevascularized לאחר מכן ניתן מושתלים לתוך פגמים ברקמות. ראוי לציון, גישת prevascularization זה קשה ליישם במסגרת רפואית, משום שהיא מבוססת על קומפלקס זמן רב במבחנה </ em> נהלים, אשר מוגבלים על ידי מכשולים רגולטוריים מרכזיים 9. בהתאם לכך, יש עדיין צורך לפיתוח אסטרטגיות prevascularization רומן כי הם יותר מתאימים יישום קליני רחב.

אסטרטגיה כזו prevascularization עשויה להיות היישום של שברי כלי דם נגזר רקמה שומני (ad-MVF). אד-MVF מייצג יחידות של כלי דם חזקים כי ניתן לקצור בכמויות גדולות מרקמת השומן של חולדות 11, 12 ו עכברים 13. הם מורכבים arteriolar, נימים, ומגזרי כלי venular, אשר מציגים מורפולוגיה microvessel פיזיולוגית עם לומן ותאי perivascular ייצוב 14, 15. תכונה ייחודית זו מאפשרת ההשתלה המיידית של פיגומי אד-MVF זרע לתוך פגמי רקמות ללא precultivation. יש, במודעה-MVF במהירות להרכיב מחדש בלרשתות כלי דם פונקציונליות. יתר על כן, אד-MVF מייצג מקור עשיר של תאי גזע mesenchymal 16, אשר עשוי גם לתרום יכולת ההתחדשות הבולטת שלהם. בהתאם לכך, אד-MVF משמש יותר ויותר בתחומים שונים של הנדסת רקמות 14, 15, 17, 18, 19, 20, 21.

בידודו של אד-MVF כבר נקבע במקור בחולדות 11, 12. בזאת, אנו מתארים פרוטוקול, אשר מאפשר בידוד הסטנדרטי של MVF מודעה בעכברים מן רפידות שומן epididymal. זה עשוי לספק תובנות נוספות המנגנונים המולקולריים שבבסיס פונקציה אד-MVF באמצעות מודלים עכבר מהונדס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הנהלים בוצעו על פי המכון הלאומי הנחיות הבריאות לשימוש בחיות מעבדה ועקבו הנחיות מוסדיים (Landesamt für Soziales, Gesundheit und Verbraucherschutz, אבט. Lebensmittel- und Veterinärwesen, ה"צנטרלשטלה", זארבריקן, גרמניה).

1. הכנת מכשירים כירורגיים

  1. שמור מוכנים מספריים לנתיחה, מלקחיים כירורגיים, מספרי הכנה קטנים, מלקחיים בסדר צלחת פטרי סטרילית עם 15 בינוני הנשר השונים של המ"ל Dulbecco (DMEM; 10% נסיוב עגל עוברי (FCS), 100 פניצילין U / mL, 0.1 מ"ג / mL סטרפטומיצין עבור) קציר רפידות שומן epididymal.
  2. לחשוף את מכשירי ניתוח לפתרון חיטוי עבור 5 דקות. לחלופין, לעקר אותם (עיקור קיטור; 121 ° C, 20 דקות).

2. בעלי חיים הרדמה

  1. בחר בקפידה את זן של עכברים כמצוין לחקר ואת הנושא תחת חקירה.
    הערה: במחקר זה השתמשנו C57BL / 6 עכברי-בר זכר כתורמות עבור קצירת השומן epididymal. מעניין, אד-MVF ניתן לבודד גם מחלבון ניאון ירוק מהונדסות (GFP) חיות תורמות -positive (C57BL / 6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb / J) 22. זו נושאת את היתרון העיקרי שרסיסי ניתנים לזיהוי בקלות על ידי מכתים immunohistochemical GFP לאחר ההשתלה לתוך עכברי-בר GFP שלילי 14.
  2. להרדים את החיות עם זריקה intraperitoneal של xylazine (15 מ"ג / ק"ג) ו קטמין (75 מ"ג / ק"ג). ודא כי בעלי החיים מורדמים עמוק על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן עם כל תגובה. חומר סיכת עין אינה שמוזכר בתור החיות התורמות מוקרבות לאחר קצירת שומן.
    הערה: ודא כי שיכוך כאבים ועקר כירורגיים עולים בקנה אחד עם ההנחיות המתאימות של המדינה ואת המוסד שבו הניסויים מתוכננים.
le "> 3. קציר רפידות epididymal שומן

  1. מעבירים את החיה אל שולחן הניתוח. מניחים את חיה במצב שכיבה תחת סטראו כירורגי לאשר הרדמה עמוקה באמצעות צביטה הבוהן.
  2. לשתק את הכפות ידי מקליט אותם לעטוף כירורגית ולחטא את הבטן עם חיטוי פתרון.
  3. הפרד את עור הבטן ללא שכבת השריר הבסיסית עם מספריים לנתיחה.
  4. בצעו פיום קו האמצע עם מספריים לנתיחה ו רוחבית נפרשים סגר היטב את דופן הבטן.
  5. בילטרלי לזהות האשכים, יותרת האשך ואת כרית שומן epididymal באמצעות מלקחיים עדינים (איור 1). אל תפגעו מבני המעיים כדי למנוע זיהום צואתי של רפידות השומן.
  6. קציר רפידות שומן epididymal עם מספרי הכנה קטנים מלקחי הקנס תחת סטראו. שמור מרווח ביטחון של כמה מ"מ בין יותרת האשך ואת השומןלהפחית את הסיכון של קצירת epididymal בשוגג.
    הערה: הליך זה יכול להתבצע גם ללא סטראו. עם זאת, זה עלול להגביר עוד יותר את הסיכון של פגיעה בשוגג של יותרת האשך ואת מיתרי הזרע.
  7. העברת רפידות שומן epididymal לתוך צלחת פטרי המכילה 15 מיליליטר של DMEM מחומם מראש על 37 מעלות צלזיוס להובלה למעבדת התא.
  8. להקריב את החיה על ידי חתך של אבי העורקים בבטן או נקע בצוואר הרחם.

בידוד 4. של אד-MVF

  1. הכן שלוש מנות סטרילי פטרי עם 15 מ"ל של בופר פוספט (PBS), פוליפרופילן 14 מ"ל סטרילי (PP) צינורות, בקבוק 50 מ"ל Erlenmeyer סטרילית, צינורות microcentrifuge חרוטי 1.5-מ"ל סטרילי מספריים קנס מעוקר.
  2. שלוש פעמים לשטוף את רפידות שומן בצלחות פטרי עם 15 מ"ל של PBS מתחת למכסה המנוע זרימה למינרית.
  3. מעבירים את השומן לתוך צינור 14 מ"ל PP. לקבוע את עוצמת הקול של רקמת שומן שנקטפה (ב מיליליטר) באמצעות tהוא בהיקף הצינור. לרכך את רקמת השומן מכאני עם המספריים בסדר עד השעית רקמה הומוגנית מתקבלת.
  4. העברת רקמה טחון עם שני כרכים של collagenase NB4G (0.5 U / mL PBS) לתוך בקבוק 50 מ"ל Erlenmeyer באמצעות 10 מ"ל מדידת פיפטה. הנפח הכולל הופך שלוש פעמים את נפח רקמת שומן נמדדה צעד 4.3. בצע לעיכול רקמה באינקובטור במשך 10 דקות תחת בחישה נמרצת באמצעות בוחש אוטומטי (בגודל של בר ומערבבים מגנטי: 25 מ"מ) ב- 37 ° C ותנאים אטמוספריים humidified עם 5% CO 2.
  5. שימו שבריר קטן (10 μL) של הרקמה מתעכל תחת מיקרוסקופ כדי לשפוט האם ניתן לעצור את תהליך העיכול. שיבטיח כי העיכול בעיקר מכיל "חינם" אד-MVF ליד תאים בודדים, המציין את הנקודה המתאימה כדי לעצור את תהליך עיכול אנזימטי (איור 2).
    הערה: שלב זה דורש ניסיון עם ההליך הוא קריטי לאיכותשל אד-MVF מבודד. ממושכת תוצאות עיכול שומן השעית תא בודד ללא פרסומות MVF.
  6. לנטרל את האנזים עם שני כרכים של PBS / 20% FCS. הנפח הכולל הופך שלוש פעמים את עוצמת הקול של השעית תא-כלי בשלב 4.4. מעביר את השעית תא-כלי בחזרה לתוך צינורות PP חדשים.
  7. לדגור על השעיית עבור 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס להפריד אד-MVF מן הנותרים שומן על ידי כוח הכבידה. אז בזהירות להסיר את supernatant השומן העיקרי עם טפטף דיוק 1-מיליליטר. חזור על מחזור זה כמה פעמים עם טפטף דיוק 100-μL עד ההשעיה שנראית ללא שומן.
  8. שים מסנן 500 מיקרומטר על גבי צינור צנטריפוגות חרוטי 50 מ"ל. מעבירים את ההשעיה-כלי התא עם טפטפת מדידה 10 מ"ל מן הצינורות PP 14 מ"ל על הממברנה הסינון כדי להסיר הנותרים קרישי שומן. מעבירים את ההשעיה מסונן לתוך צינורות חדשים 14 מ"ל PP לפי מספר מודעה-MVF הפרט מבודד עבור הניסויים המתוכננים.
    הערה: ב vitrמבחני o התמקדות ביצירת רשת כלי הדם, זה עשוי להיות מועיל יותר כדי לטהר את ההשעיה-כלי התא כדי לשפר את איכות ההדמיה במהלך ניתוחים מיקרוסקופיים. לשם כך, על השעיית ניתן לסנן גם פעם עם מסנן 20 מיקרומטר להסיר תאים בודדים מהמודעה-MVF שנאספו על המסנן.
  9. צנטריפוגה ההשעיה-כלי התא (600 XG, 5 דקות, בטמפרטורת החדר) כדי להשיג גלולה המכילה אד-MVF.
  10. לאחר צנטריפוגה, להסיר את supernatant עד 1 מ"ל שנשאר. Resuspend גלולה עם אד-MVF ב 1 זה מ"ל ולהעביר את ההשעיה לתוך צינור microcentrifuge 1.5 מ"ל חרוטית.
  11. צנטריפוגה ההשעיה אד-MVF בצינור microcentrifuge (600 XG, 5 דק ') כדי להשיג גלולה.
  12. הסר את supernatant מחדש להשעות את הגלולה בהיקף הסופי הנדרש של PBS / 20% FCS.
    הערה: מספר המודעה-MVF לכל לבודד ניתן להעריך על ידי ספירה מיקרוסקופית. לשם כך, 1/10 של התא-vesse הסופיl ההשעיה היא מדוללת 1:10 ב PBS ו 100 μL של דילול זה מועברים לתוך באר של צלחת 96-היטב. המספר השלם של אד-MVF מציג מורפולוגיה כלי דמוי נספר אז אקסטרפולציה לבודד כולו. ריכוז אד-MVF נדרש וטיהור ניתן להתאים באופן אישי את המתאימים במבחנה או ביישום vivo של אד-MVF. זה יכול לכלול את וההטבעה של MVF המודעה ג'ל קולגן לניתוח במבחנה של היווצרות רשת כלי דם או הזריעה של אד-MVF על פיגומים להשתלת in vivo לתוך פגמים ברקמות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

במחקר הנוכחי ביצענו שש פרוצדורות בידוד אד-MVF עם רקמת השומן בין 7 ל wild-type זכר בן 12 חודש C57BL / 6 עכברים (משקל הגוף הממוצע: 35 ± 1 g). איור 1 מדגים את הקצירה של רפידות שומן epididymal בעכברים עם בידוד מכנים האנזימטית שלאחר מכן אד-MVF. הזמן הדרוש קצירת השומן היה 30 דקות ו לבידוד של אד-MVF היה 120 דקות. בסך הכל, ההליך לקח 150 דקות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במחקר זה אנו מציגים פרוטוקול ומבוסס על הבידוד של אד-MVF. קבלת פרסומות MVF מרקמות שומן בעכברים היא הליך פשוט עם כמה צעדים קריטיים. עכברים להפגין תת עורית שונה ופיקדונות שומן intraabdominal. כפי שתואר לעיל עבור חולדות, מקור שומן המתאים ביותר עבור בידוד של אד-MVF הם רפידות שומן epididymal בשל גודלם, מבנה הומוגני זיהום מינימלי עם כלי דם גדול 11, 12. לעומת זאת, מצבורי שומן תת עורי בעכברים הם הרבה יותר קטנים יותר חסיד אל הרקמה ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

אנו מודים על הסיוע הטכני המצוין של ג'נין Becker, קרוליין Bickelmann ורות ניקלס. מחקר זה מומן על ידי מענק של (DFG - קרן המחקר הגרמנית) - LA 2682 / 7-1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צינור מיקרוצנטריפוגה חרוטי 1.5 מ"לVWR, קלסטרבאך, גרמניה700-5239
100-& L פיפטה דיוקאפנדורף, המבורג, גרמניה4920000059
פיפטה מדידה 10 מ"לCostar, Corning Inc., ניו יורק, ארה"ב4488
צינורות PP 14 מ"לGreiner bio-one, Frickenhausen, גרמניה187261
פיפטה דיוק 1 מ"לEppendorf, המבורג, גרמניה4920000083
500-µ מסנן m (pluriStrainer 500 ומיקרו; m)HISS Diagnostics, פרייבורג, גרמניה43-50500-03
צינור צנטריפוגה חרוטי 50 מ"לGreiner bio-one, פריקנהאוזן, גרמניה227261
50 מ"ל בקבוק ErlenmeyerVWR, קלסטרבאך, גרמניה214-0211
צלחת 96 בארותGreiner bio-one, פריקנהאוזן, גרמניה65518
תמיסת ניתוק תאים (Accutase)eBioscience, סן דיאגו, קליפורניה ארה"ב00-4555-56
C57BL/6 עכבריםצ'ארלס ריבר, קלן, גרמניה027
C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)1עכברי Osb/Jמעבדת ג'קסון, בר הרבור, ארה"ב003291
CD117-FITCBD Biosciences, היידלברג, גרמניה553373
CD31-PEBD Biosciences, היידלברג, גרמניה553354
קולגנאז NB4G Serva Electrophoresis GmbH, היידלברג, גרמניה17465.02לוט נבדק על ידי היצרן לפעילות אנזימטית
מספרייםדיסקציה Braun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, גרמניהלפני הספירה 601
צבע קושר DNA (Bisbenzimide H33342)Sigma-Aldrich, Taufkirchen, גרמניהB2261
מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) PAN Biotech, Rickenbach, גרמניהP04-03600
סרום עגל עוברי (FCS)Biochrom GmbH, ברלין, גרמניהS0615
מלקחיים עדיניםS& T AG, נויהאוזן, שוויץFRS-15 RM-8
מספריים עדיניםWorld Precision Instrumets, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב503261
תחליף עור עורי (אינטגרה)Integra Life Sciences, Sain Priest, צרפת62021
קטמין Serumwerk Bernburg AG (גרמניה ברנבורג) 7005294
M-IgG2akAL488   eBioscience, סן דייגו, קליפורניה ארה"ב53-4724-80
אוקטנידרם (תמיסת חיטוי)Schü לקה & Mayer, Norderstedt, Germany118211
פניצילין/סטרפטומיציןBiochrom, ברלין, גרמניהA2213
Petri dishGreiner bio-one, Frickenhausen, גרמניה664160
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)Lonza Group, באזל, שוויץ17-516F
pluriStrainer 20-µ M (20 ומיקרו; m filter)HISS Diagnostics, פרייבורג, גרמניה43-50020-03
Rat-IgG2akFITCBD Biosciences, היידלברג, גרמניה553988
Rat-IgG2akPEBD Biosciences, היידלברג, גרמניה553930
מספריים להכנה קטנהS& T AG, נויהאוזן, שוויץSDC-15 R-8S
מלקחיים כירורגייםBraun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, גרמניהBD510R
(Heftpflaster Seide) 1.25 ס"מפינק & Walter GmbH (גרמניה Mechweiler)1671801
Xylazine Bayer Vital GmbH, לברקוזן, גרמניה1320422
α-SMA-AL488eBioscience, סן דייגו, קליפורניה ארה"ב53-9760-82תיוג תוך-תאי דורש בנוסף ציטופיקס/ציטופרם (BD Biosciences, היידלברג, גרמניה; #554722)
קלטת

מקורות

  1. Langer, R., Vacanti, J. P. Tissue engineering. Science. 260 (5110), 920-926 (1993).
  2. Khademhosseini, A., Langer, R. A decade of progress in tissue engineering. Nat Protoc. 11 (10), 1775-1781 (2016).
  3. Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. Vascularization is the key challenge in tissue engineering. Adv Drug Deliv Rev. 63 (4-5), 300-311 (2011).
  4. Rouwkema, J., Khademhosseini, A. Vascularization and Angiogenesis in Tissue Engineering: Beyond Creating Static Networks. Trends Biotechnol. 34 (9), 733-745 (2016).
  5. Laschke, M. W., Menger, M. D. Vascularization in tissue engineering: angiogenesis versus inosculation. Eur Surg Res. 48 (2), 85-92 (2012).
  6. Sarker, M., Chen, X. B., Schreyer, D. J. Experimental approaches to vascularisation within tissue engineering constructs. J Biomater Sci Polym Ed. 26 (12), 683-734 (2015).
  7. Frueh, F. S., Menger, M. D., Lindenblatt, N., Giovanoli, P., Laschke, M. W. Current and emerging vascularization strategies in skin tissue engineering. Crit Rev Biotechnol. 20, 1-13 (2016).
  8. Utzinger, U., Baggett, B., Weiss, J. A., Hoying, J. B., Edgar, L. T. Large-scale time series microscopy of neovessel growth during angiogenesis. Angiogenesis. 18 (3), 219-232 (2015).
  9. Laschke, M. W., Menger, M. D. Prevascularization in tissue engineering: Current concepts and future directions. Biotechnol Adv. 34 (2), 112-121 (2016).
  10. Baiguera, S., Ribatti, D. Endothelialization approaches for viable engineered tissues. Angiogenesis. 16 (1), 1-14 (2013).
  11. Wagner, R. C., Kreiner, P., Barrnett, R. J., Bitensky, M. W. Biochemical characterization and cytochemical localization of a catecholamine-sensitive adenylate cyclase in isolated capillary endothelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 69 (11), 3175-3179 (1972).
  12. Wagner, R. C., Matthews, M. A. The isolation and culture of capillary endothelium from epididymal fat. Microvasc Res. 10 (3), 286-297 (1975).
  13. Laschke, M. W., Menger, M. D. Adipose tissue-derived microvascular fragments: natural vascularization units for regenerative medicine. Trends Biotechnol. 33 (8), 442-448 (2015).
  14. Laschke, M. W., et al. Vascularisation of porous scaffolds is improved by incorporation of adipose tissue-derived microvascular fragments. Eur Cell Mater. 24, 266-277 (2012).
  15. Frueh, F. S., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments improve vascularization, lymphangiogenesis and integration of dermal skin substitutes. J Invest Dermatol. 137 (1), 217-227 (2017).
  16. McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments. J Surg Res. 192 (1), 214-222 (2014).
  17. Nakano, M., et al. Effect of autotransplantation of microvessel fragments on experimental random-pattern flaps in the rat. Eur Surg Res. 30 (3), 149-160 (1998).
  18. Nakano, M., et al. Successful autotransplantation of microvessel fragments into the rat heart. Eur Surg Res. 31 (3), 240-248 (1999).
  19. Shepherd, B. R., Hoying, J. B., Williams, S. K. Microvascular transplantation after acute myocardial infarction. Tissue Eng. 13 (12), 2871-2879 (2007).
  20. Pilia, M., et al. Transplantation and perfusion of microvascular fragments in a rodent model of volumetric muscle loss injury. Eur Cell Mater. 28, 11-23 (2014).
  21. Laschke, M. W., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity. Eur Cell Mater. 28, 287-298 (2015).
  22. Okabe, M., Ikawa, M., Kominami, K., Nakanishi, T., Nishimune, Y. 'Green mice' as a source of ubiquitous green cells. FEBS Lett. 407 (3), 313-319 (1997).
  23. Honek, J., et al. Modulation of age-related insulin sensitivity by VEGF-dependent vascular plasticity in adipose tissues. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (41), 14906-14911 (2014).
  24. Cho, C. H., et al. Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue. Circ Res. 100 (4), e47-e57 (2007).
  25. Han, S., Sun, H. M., Hwang, K. C., Kim, S. W. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells: Update on Clinical Utility and Efficacy. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 25 (2), 145-152 (2015).
  26. Chen, Y. J., et al. Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues. J Vis Exp. (109), e53886(2016).
  27. Guillaume-Jugnot, P., et al. Autologous adipose-derived stromal vascular fraction in patients with systemic sclerosis: 12-month follow-up. Rheumatology (Oxford). 55 (2), 301-306 (2016).
  28. Tissiani, L. A., Alonso, N. A Prospective and Controlled Clinical Trial on Stromal Vascular Fraction Enriched Fat Grafts in Secondary Breast Reconstruction. Stem Cells Int. , 2636454(2016).
  29. Calcagni, M., et al. The novel treatment of SVF-enriched fat grafting for painful end-neuromas of superficial radial nerve. Microsurgery. , (2016).
  30. Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32 (7), 409-419 (1996).
  31. Kirkpatrick, N. D., Andreou, S., Hoying, J. B., Utzinger, U. Live imaging of collagen remodeling during angiogenesis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (6), H3198-H3206 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

בידוד רקמת שומןבידוד אנזימטיציטומטריה של זרימהתאים חיוביים ל-CD31תאי גזע מזנכימלייםרקמת שומן של עכבריםעיכול בקולגנאז
בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.