הכניסה פוליאוריתן קטטר לתוך לומן אבי העורקים ואת תפר מצדו של אבי העורקים לגרום היפוקסיה כרונית עקב זילוח של adventitial צינורי. מאמר זה מתאר מודל בעלי חיים הרומן של מפרצת אב-עורקית של הבטן (AAA) עם מאפיינים דומים לאלה של AAA בבני אדם.
מאמר שיטה
הכניסה פוליאוריתן קטטר לתוך לומן אבי העורקים ואת תפר מצדו של אבי העורקים לגרום היפוקסיה כרונית עקב זילוח של adventitial צינורי. מאמר זה מתאר מודל בעלי חיים הרומן של מפרצת אב-עורקית של הבטן (AAA) עם מאפיינים דומים לאלה של AAA בבני אדם.
Adventitial צינורי (VV) מספק חמצן וההזנה לקיר אבי העורקים. היפוקסיה בקיר אבי העורקים עלול לגרום מפרצת אבי העורקים בטן מוגדלת (AAAs). מאמר זה מציג ומתאר פרוטוקול סטנדרטי המשמש לזירוז AAAs דרך זילוח VV adventitial שנוצרו באמצעות שילוב של קטטר פוליאוריתן הכניסה לתוך לומן אבי העורקים ואת תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות.
הפרוטוקול כרוכה בשימוש הגברי חולדות במשקל של 300-400 g, אשר הינם מסופקים מים ואוכל ad libitum. לאחר פתיחת בטן עם חתך בבטן הגחון קו האמצע, מבוצע קילוף של אבי העורקים, אשר חוסם את זרימת הדם מן הרקמה perivascular. Aortotomy מעורבים חתך קטן סמוך הענפים עורק הכליות מבוצעת, מוכנס קטטר פוליאוריתן באמצעות מחט שכנה של בקוטר 18. לאחר תיקון החתך, צמוד מצדו של אבי העורקים על הצנתר חוסמת זרימת דם VV מהכיוון צינתור דרך דופן אבי העורקים מבלי להפריע את זרימת הדם של אבי העורקים. טכניקה זו יכול לגרום של AAA עם הרחבה הדרגתית של אבי העורקים.
היתרון הגדול של מודל זה הוא כי VV זילוח גורמת רקמות והתקפת התפתחות מתחת לכליות AAA, אשר מאפיינים פתולוגיים מורפולוגיים דומים לאלה של AAA אנושי.
. העורק הראשי מורכב שלושת הרבדים הבאים: הקיר הפנימי וסקולרית (אינטימה) שכבה המדיאלי (מדיה), הקיר החיצוני וסקולרית (adventitia), אלה, adventitia יש בדיקת דם ייחודי לספק מערכת המכונה ואזא וזורום (VV). אבי העורקים רקמות מסופק עם חמצן דרך adventitial VV זלוף, דיפוזיה חמצן פשוטה זרימת דם ותיני1. עם זאת, מבחינה גיאוגרפית, העורק הראשי יש התפלגות לפחות VVs בהשוואה לזה בחלקים אחרים של אבי העורקים. 2
מחקר קודם דיווחו על רקמות חמצן. ילד אנושי מפרצת אבי העורקים בבטן (AAA) קירות עם intraluminal עבה כגון (ILT)3. בנוסף, הוכח כי VV adventitial בקירות aneurysmal הוא occluded עם שינויים arteriosclerotic בשיעור גבוה יותר באופן משמעותי, אשר מזוהה עם רקמת היפוקסיה קירות AAA4. על סמך ממצאים אלה, מודל מכרסמים הרומן של AAA נוצר על ידי גרימת VV adventitial זילוח5. במודל זה, גרם VV זילוח רקמת והתקפת התפתחות מתחת לכליות AAA, אשר היו מאפיינים פתולוגיים מורפולוגיים דומים לאלה של AAA האנושי6. דוגמאות הממשלה היו הנוכחות של ILTs ההצטברות של hyperplastic adipocytes6ופוטנציאל לגרום קרע7,8. ממצאים אלה נצפו לעתים נדירות במודלים מכרסמים הקודם. לכן, מודל זה במידה רבה עשויים לתרום הבנה עמוקה יותר של מנגנון האחראי על פיתוח AAA, קרע. אנחנו מציגים. ומתארות פרוטוקול סטנדרטי המשמש לזירוז AAAs דרך זילוח VV adventitial, נסביר כיצד לגרום היפוקסיה בקיר אבי העורקים באמצעות טכניקות ניתוחיות.
טיפול בבעלי חיים, ניסויים בוצעו בהתאם לקווים המנחים של המלונות בהם צפיתי אוניברסיטת ועדות ביה ס של רפואה חיה טיפול במרכז לטיפול חיה.
1. הליך כירורגי ליצירת הדגם
הערה: למקם את מכשירי הניתוח מעקר חרוז 10 s preoperatively. להשתמש בכפפות סטריליות intraoperatively.
2. קציר, תיקון ו Elastica-ואן Gieson (EVG) Staining
טכניקות פעיל שתואר ליצור מודל בעלי חיים הרומן ממפרצת כרונית אבי העורקים היפוקסיה-induced על-ידי שימוש בשילוב של קטטר פוליאוריתן הכניסה עם תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות בחולדות. העכברושים המתוארות בסעיף פרוטוקול היו לאללה 28 ימים לאחר הניתוח. Aortas שנקטפו, עם תמונה להמחיש היווצרות מפרצת. איור 2 מציג את התפתחות כישורי AAA. הקצוות העליונים והתחתונים של אבי העורקים ב- ex-vivo יש קוטר רגילה ללא הרחבה. אבי העורקים קטרים נמדדו באמצעות בדיקת אולטרה סאונד transabdominal (איור 3). הקוטר בדרך כלל מגיע לגודלו המירבי כ 14 ימים לאחר ההליך; לאחר מכן, היא נותרת ללא שינוי או מעט מעלה. איור 4 מראה את התמונה histopathological של המפרצת-הקוטר המרבי שלה לאחר EVG מכתים. התמונה של הרקמה ביום 28 (מפרצת) הראה השפלה הבולטים של סיבים אלסטיים בהשוואה לזה ביום 0.

איור 1: ניתוחים לזירוז מפרצת אב-עורקית של הבטן (AAA).
(א) העורקים מתחת לכליות exfoliated מן הרקמה שמסביב. (ב) קטטר פוליאוריתן לחתוך 10 מ"מ מוחדר דרך חתך קטן באבי העורקים. (ג) את החתך יתוקן בתפר monofilament 8-0, זרימת הדם משוחזר. (ד) אבי העורקים הוא מאתרים בתפר משי 5-0 על הצנתר שנוספו. סרגל קנה מידה = 5 מ מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2: תוצאות נציג לאחר הניתוח.
נוף מאקרוסקופית 28 יום לאחר הניתוח מראה התפתחות כישורי מפרצות של אבי העורקים בבטן. מהשוליים מוגברות של מקבץ מקביל הקצה החיצוני של המפרצת (קווים שבורים; שמאלה). הקצוות העליונים והתחתונים של אבי העורקים ב- ex-vivo נורמליות (מימין). סרגל קנה מידה = 3 מ מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: מקסימום אבי העורקים קטרים נמדד באמצעות בדיקת אולטרה סאונד transabdominal.
קוטר אבי העורקים גדל בהתמדה במודל זה עכברוש. אבי העורקים קטרים מוצגות כחלק סטיית תקן זאת אומרת ± (n = 12). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4: להחליפן בתמונות של רקמת aneurysmal עם Elastica ואן Gieson מכתים.
הערכה היסטולוגית עם EVG מכתים מציג הנדן אלסטי ניוונית מדיה, היווצרות כגון intraluminal 28 יום לאחר ההליך (מימין). סיבים אלסטיים בתקשורת אבי העורקים ולהפיק סיבי קולגן דליל ב- adventitia אבי העורקים הם נצפו ביום 28. יום 0 הוא לפני ההליך (משמאל). סרגל קנה מידה = 500 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
בתנאים פיזיולוגיים, לשכבות הפנימיות של הקיר אבי העורקים מוזנים על ידי דיפוזיה של זרימת הדם luminal, ואילו השכבות החיצוניות או האמצעי מוזנים על ידי VV, אשר חודרים מ- adventitia אל ה VV המדיאלי1. VV זרימת הדם לתוך הקיר אב-עורקית של הבטן יכולות לנבוע מ- 3 הכיוונים/בתחומים הבאים: (1) לכיוון צינתור דרך הקיר אבי העורקים, כיוון הדיסטלי (2) דרך קיר של אבי העורקים, רקמות (3) perivascular10. הניתוח שלנו היסטולוגית של רקמות אנושיות זוהו בעבר, היצרות משמעותית או חסימה של VV בקיר AAA, רומז כי VV זרימת הדם לתוך הקיר של אבי העורקים בבטן יכול להיות מופחת4. זו נקודה מאוד חשובה של פרוטוקול זה מתחת לכליות AAA נגרמה על-ידי שילוב של קטטר פוליאוריתן ההכנסה תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות. פילינג בקפידה את שכבת רקמת, מנתחים עליך בצורה חלקה להכניס צנתר פוליאוריתן העורקים ולאחר בחוזקה מאתרים ומפסיקים לגרום היפוקסיה כרונית עקב זילוח adventitial VV, היווצרות מפרצת אבי העורקים. באמצעות טכניקות אלה, זרימת הדם בתוך הקיר אבי העורקים כתוצאה מכך יורדת, הנגרמת מחוסר חמצן סביבה מקומיים. הפחתת זרימת הדם של מפרצת היפוקסיה-induced היווצרות מציין כי VV זרימת הדם לתוך הקיר אב-עורקית של הבטן ממלא תפקיד בפתוגנזה של היווצרות AAA.
באופן ספציפי, מודל מפרצת אבי העורקים חייבים לעמוד בתנאים הבאים: עלייה 1.5-fold קוטר כלי הדם לעומת בסיסית, ניוון של התקשורת tunica, ודלקת של הקיר אבי העורקים. בעלי חיים הדגמים הפופולריים ביותר נבנו על ידי גרימת תגובות דלקתיות באמצעות חומרים, כגון2CaCl11, elastase12ו אנגיוטנסין II13. מודלים אלה תוכלו לעשות הפארמצבטית גבוהה, מן הסתם לגרום שינוי פתולוגי, הם בדרך כלל נעשה שימוש מחקרים. במודל שלנו, אנחנו העריכו את קוטר אבי העורקים באמצעות בדיקת אולטרה סאונד מדי 7 ימים בלבד לפני ההליך בוצע עד 28 יום לאחר ההליך (איור 3). תוצאות המחקר הראו כי קוטר אבי העורקים בינוני גדל במשך 28 הימים, המציינת כי שינוי זה קוטר דומה דגמים קודמים מכרסמים. תצפית ברוטו של הטופס כלי הדם הצביעו על צורה דמוי חלקה (איור 2). ביום 28, אנו הקריב את החולדות, לבצע ניתוח histopathological של אבי העורקים רקמת כי נמצאה. קורע והעלמות של סיבי אלסטי וקולגן adventitia ומדיה tunica נצפו (איור 4). יתר על כן, תאים דלקתיים, כגון מקרופאגים, היו במקום מ- adventitia tunica התקשורת tunica.
כיום, אפשרויות טיפול הזמינות עבור AAAs מוגבלים לתיקון כירורגי של endovascular הרכבה סטנט, עם שיעור תמותה של 30-50% אצל חולים עם קרע AAA14. עם זאת, התרופה לא אושרה לשימוש קליני לטיפול AAAs. אין ויכוח כי ישנם סתירות ממצאים פתולוגיים בין בני אדם ויצר מודלים בבעלי חיים השתמשו במחקר AAA. קווי דמיון בפתוגנזה בין האדם AAA AAA חייתיים חיוניים לפיתוח של טיפול תרופתי. לגבי האפקטיביות של מודלים מכרסמים, מודל עכברוש שלנו דומה מורפולוגית לבני במונחים של intraluminal כגון5 ו- adipogenesis8. יתר על כן, כ 20% של החולדות במחקר זה היה קרע AAA ומת בתוך 28 יום לאחר ההליך. אמנם האירוע הקריטי ביותר למחלה זו קרע מפרצת אבי העורקים, קרע נדיר עם ויצר מודלים AAA ניסיוני, המנגנון יש לא ובכל זאת כבר מבואר. לכן, מודל זה שימושי להבנת המנגנון של התרחבות של קוטר אבי העורקים, קרע של המפרצת.
היצירה של מודל זה נדרש עבור כמה ניתוחים. לכן, החוקרים חייבים לתרגל יצירת מודל זה, אשר הוא מגבלה של מודל זה. בעתיד, אנחנו רוצים ליצור מודל מכרסם בו נוכל לצמצם את זרימת הדם על ידי בהדרגה עיבוי הקירות VV, וכתוצאה מכך מפרצת אבי העורקים ספונטנית.
המחברים אין לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי Grants-in-Aid עבור מדעי מחקר (B) (20291958) N.U.; Grants-in-Aid מדענים ומפתחים צעירים (א) (25713024) כדי N.Z.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| עכברוש | יפן SLC. Inc | Slc:SD חולדה | Sprague– Dawley ratTM |
| פובידון-יוד תמיסת | Libatape Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| 5-0 מחרוזת משי | Akiyama רפואי MFG. CO., LTD | JIS מס' 1 | |
| כלי דם קליפים | Natsume Seisakusho Co., Ltd. | C-42-S-2 | |
| (מחט שוכנת 24 מד) | MEDIKIT | 24G | Supercath Z4VTM, קטטר פוליאוריטן מחט שוכנת 24 מד |
| (מחט שוכנת 18 מד) | MEDIKIT | 18G | Supercath Z3VTM, מחט שוכנת 18 מד |
| 8-0 מחרוזת מונופילמנט | אתיקון | c-42-S-2 | פרולן פוליפרופילן תפר , תקן את החתך עם התפר |
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה