כאן אנחנו מדגימים גישה מוזרה לשימוש טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (HR-SD-אוקטובר) כדי לסייע משלוח של סוכנים טיפול גנטי לחלל subretinal להעריך את פעולתה אמיתיות, לאפיין את קולט אור חיוניות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית
במאמר זה
סיכום
תקציר
HR-SD-אוקטובר מנוצל כדי לעקוב אחר ההתקדמות של ניוון קולט אור במודלים של העכבר בשידור חי, להעריך את המסירה של סוכני טיפולית לחלל subretinal, וכן להעריך רעילות והיעילות ויוו. HR-SD-אוקטובר משתמשת ליד אור אינפרא-אדום (800-880 ננומטר) ויש אופטיקה במיוחד המיועד של אופטיקה ייחודי של העין העכבר עם רזולוציה צירית sub-2-מיקרון. העכבר הטרנסגניים מודלים של ניוון הרשתית החיצונית (קולט אור) ופקדים היו עם תמונה כדי להעריך את התקדמות המחלה. Microneedles זכוכית משך שימשו כדי לספק זריקות ברשתית sub של adeno-הקשורים וירוס (AAV) או חלקיקים (NP) דרך בגישה טרנס-scleral, טרנס-חיבור. מיצוב זהיר של המחט לתוך מרחב subretinal נדרשה לפני זריקה מכויל ללחץ, אשר מספק נוזלים לחלל תת ברשתית. ניתוח subretinal בזמן אמת נערך על הרשתית שלנו מערכת (RIS) הדמיה. HR-SD-אוקטובר הפגינו מתקדמת ניוון הרשתית אחיד עקב ביטוי רעילים מוטציה האנושי מוטציה אופסין # רודופסין (P347S) transgene (RHOP347S) בעכברים. HR-SD-OCT מאפשר כימות קפדני של כל השכבות ברשתית. השכבה החיצונית גרעינית (גרת) בעובי ואת קולט אור מדידות אורך (OSL) קטע החיצוני לתאם עם קולט אור חיוניות, ניוון או הצלה. מערכת משלוח RIS מאפשר הדמיה בזמן אמת של זריקות subretinal במחלקת יולדות (~ P10-14) או עכברים בוגרים, ו- HR-SD-אוקטובר מיד קובע ההצלחה של משלוח ומפות המכסים איזורים. HR-SD-אוקטובר הוא כלי רב עוצמה שיכול להעריך את ההצלחה של הניתוח subretinal בעכברים, בנוסף כדי מדידה החיוניות photoreceptors vivo בתוך. HR-SD-אוקטובר יכול לשמש גם כדי לזהות אחיד גדודים בעלי חיים כדי להעריך את היקף ניוון הרשתית, רעילות, והצלה טיפולית בתוך הגן פרה טיפול מחקרים.
מבוא
חוקרים מפתחים ג'ין טיפולים למגוון רחב של מחלות ניוון רשתית ברשתית עם התקוות של הריפוי לתרגם טיפולים עבור מחלות אנושיות1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. ובזמן תחום או תחום ספקטרלי טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר) נעשה שימוש כדי לחקור את ההיבטים של ניוון הרשתית החיצונית במודלים של העכבר ספציפ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקולים בבעלי חיים היו שנסקרו, אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש ועדות של HCS יורד את VA והאוניברסיטה באוניברסיטה-באפלו. חיות שימשו בהתאם לאמור של האגודה לחקר חזון, רפואת עיניים (ארוו), את הצהרת הלסינקי.
1. עכבר מודלים
- לזהות העכבר מודלים להערכה כולל פקדים.
הערה: הדמיה בוצע עבור C57BL/6(J), hC1/hC1 / / mWT/mWT, מודל ניוון רשתית העכבר humanized חלקית homozygous עבור האדם מוטציה רוP347S hC1 אללים-הפראי-סוג (WT) העכבר רו+ + גנוטיפ26 , 27, hC1 x BL/6(J), מודל humanized חלקית עם עותק יחיד של מוטציה האנושי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הערכת את הנוכחות, קצב ואת אחידות של ניוון הרשתית החיצונית מודל
מדידות של גרת נרשמו מ- OPL בוקיצה, הגדרת גבולות גרת באמצעות הכלי caliper הניתנים התוכנה כלי נגינה. המטרה הייתה למפות את ההתקדמות של ניוון הרשתית החיצונית במודל של עכברים adRP humanized חלקית. תמונות דומות בין עכבר C57BL/6(J) הבקרה של mWT hC1/hC1 / / / דגם העכבר mWT, המבטאת שני עותקים של הגנים אופסין (RHOP347S) רוד האנושי מוטציה, הוצגו שהפגינו הממצאים ברשתית שליטה והן אלה של חמור, במהירות.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
HR-SD-אוקטובר מספק שיטה פשוטה פלואורסנציה פוטנציאליים מודלים חייתיים של מחלות אנושיות כדי לקבוע את התועלת שלהם בבדיקת פוטנציאל הרפוי. היכולת לאפיין במהירות ובאמינות מודל בעלי פוטנציאל של מחלות אנושיות חיוני לתהליך של גילוי תרופות טיפוליות (למשל, ריפוי גנטי חלופי, ריפוי גנטי תמונות ציפורים ריבוזים או shRNA, ריפוי גנטי משולב). HR-SD-אוקטובר מספק שיטה פשוטה, מהירה, לא פולשנית להערכת בריאות הרשתית יכול לשמש כדי לאפיין ולעקוב אחר ההתקדמות של ניוון רשתית במודל עכבר כמעט בכל. הדימויים OCT יכול לשמש כדי להשיג את המידות .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יחסים מסחריים: MCB: כלום; JMS: אף אחד. רשתית הדמיה מערכת (RIS)23 השתמשו במחקר זה הוא מכשיר הרומן של שימוש משמעותי לקבוצה כלשהי המבקשים לבצע מחקרים משלוח של טיפול גנטי עכברים, מכרסמים או חיות קטנות. בעוד המחברים אין התנגשויות להכריז לגבי המכשיר הזה בשלב זה, אוניברסיטת ב באפלו - SUNY וניהול ותיקי יש זכויות הקניין הרוחני ומחפשים עשויים למסחר המכשיר הזה בעתיד.
תודות
חומר זה מתבסס על עבודה נתמכת, בחלקו, על-ידי המחלקה של ותיקי פרשיות (וי אי), בריאות למינהלה, Office של מחקר ופיתוח (מחקר מעבדה ביו ופיתוח) (מענק הצטיינות VA 1I01BX000669). JMS מועסק, בחלקו, כמו צוות רופא-מדען, רפואת עיניים, על-ידי VA יורד; MCB הוא מועסק, בין השאר, על ידי VA יורד. המחקר שנערך, והוא נתמך בחלקה על ידי, ותיקי המינהל ווסטרן ניו יורק בריאות המערכת (באפלו, ניו יורק). תוכן אינם מייצגים את נופי המחלקה לענייני חיילים משוחררים או ממשלת ארצות הברית. גם נתמך, בחלק גדול, על-ידי NIH/NEI R01 הענק EY013433 (PI: JMS), NIH/NEI R24 להעניק EY016662 (UB חזון תשתית מרכז, PI: מ' שחיטה, מנהלת מודול ביו-פוטוניקה: JMS), גרנט בלתי מוגבלת כדי המחלקה של רפואת עיניים/אוניברסיטת ב תא....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| C57BL6 (J) | Jackson Laboratories | 664 | |
| N129R-N | /A | N/A | |
| 2HRho 1T/1T | N/A | N/A | |
| Envisu R-2200 מכשיר טומוגרפיה קוהרנטית עינית (OCT) | Bioptigen | 90-R2200-U1-120. | |
| מערכת הדמיית רשתית (RIS) | פנימית | N/A | |
| Stemi 2000C מיקרוסקופ | Zeiss | 000000-1106-133 | |
| P-97 חולץ מיקרופיפטה בוער/חום | Sutter Instrument Co | p-97 | |
| MMN-33 מיקרו מניפולטור | Narishige USA | MMN-33 | |
| PLI-100 מזרק מיקרו | מכשיר הרווארד | 64-1736 | |
| מחזיק מיקרופיפטה (מסתובב) | פנימי | N/A | |
| שקע אחסון מיקרופיפטה | World Precision Instruments Inc. | E210 | |
| צינורות נימי זכוכית בורוסיליקט 1.5-1.8 X 100 מ"מ, | הרווארד מנגנון | 30-0053 | |
| 2,2,2-Tribromoethanol | SIGMA Aldrich | T48402-25G | |
| טרט-אמיל אלכוהול | SIGMA Aldrich | 240486-100ML | |
| תמיסת עיניים אטרופין סולפט, USP 1% | Akorn Inc. | NDC 17478-215-05 | |
| Goniovisc | BioVision Limited | NDC 17238-610-15 | |
| תמיסת עיניים ציקלופנטולאט הידרוכלוריד, USP 2% | Akorn Inc. | NDC 17478-097-10 | |
| משחת ג'נטמיצין סולפט USP, 0.1% | Perigo | NDC 45802-046-35 | |
| Systane Ultra | Alcon Laboratories, Inc. | 9006619-1013 | |
| טטרקאין הידרוכלוריד | באוש ולומב | NDC 24208-920-64 | |
| תמיסת עיניים, USP 0.5% | באוש ולומב | NDC 24208-920-64 | |
| DPBS | Gibco Life Technologies | 14190-136 | |
| תכשירי וירוסים | ViGene /UNC | N/A | |
| ננו-מוטות זהב | NANOPARTz | D12M-850-1.75 | |
| פלואורסצאין סולפט AK-FLUOR 25% | Akorn Inc. | NDC 17478-250-20 | |
| כיסויים | פישר סיינטיפיק | 12-548-A | |
| מלקחיים | מילטון | 18-825 | |
| מחטים 30 גוד | בקטון דיקנסון | מזרקים W11604 | |
| בקטון דיקנסון | |||
| חבילת תוכנה Bioptigen | Bioptigen | N/A | |
| Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5% | Akorn Inc. | NDC 17478-263-12 | |
| Windows Excel | Microsoft | N/A | |
| Adobe Illustrator | Adobe | ||
| מספריים בקנה מידה | מטלר | ||
| מכשירים מדויקים | |||
| אגרוף אוזניים | Nat ' l להקה | ||
| CL 100 מקור אור | Welch Allyn | CL100 | |
| חנקן גז | ג'קסון אספקת ריתוך | N / A | |
| אמבט מים מחומם | Neslab | RTE-140 | |
| צלחת חימום | בבית | N / A | |
| מחצלת חימום | Cincinnatti Sub Zero | 273 | |
| מחזיק עכבר | חימר Plast.i.clay חברת אמריקן ארט קליי | לא ישים | |
| בטדין | MedLine | NDC53329-938-06 | |
| אפליקטורים של קצה כותנה | Ctag | ||
| EtOH 70% | Fisher Scientific | BP2818-100 | |
| כפפות ניטריל | VWR | 89038-272 | |
| מכשיר Diagnosys ERG Color Dome | Diagnosys Inc. | עדשות מגע D125 | |
| / | A | ||
| Diagnosys Software | Diagnosys Inc. | N/A | |
| Origin 6.1 תוכנה | OriginLab Corp. | N/A | |
| אלקטרודה | Ocuscience | F-Thread (DTL) 24 אינץ' |
מקורות
- Regus-Leidig, H., et al. In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses. Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).
- Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
