ניתוח פסיפס משוכפל ב תסיסנית הדיסק epithelia הדימוי הוא מודל מודל חזק ללמוד את המנגנונים הגנטיים והתאים של tumorigenesis. כאן אנו מתארים פרוטוקול כדי לגרום לגידולים בדיסקופיית כנף תסיסנית באמצעות מערכת GAL4-UAS, ולהציג שיטת אבחון לסווג את פנוטיפים הגידול.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
בשלבים המוקדמים של הסרטן, תאים מוטנטיים שהשתנו מראים תקלות ציטולוגיות, מתחילים בשגשוג בלתי מבוקר, ומפריעים בהדרגה לארגון הרקמות. תסיסנית melanogaster התפתחה כמערכת מודל ניסיוני פופולרי ביולוגיה של סרטן ללמוד את המנגנונים הגנטיים והתאים של tumorigenesis. בפרט, כלים גנטיים עבור דיסוזופיל דימיוני דיסקים (לפתח epithelia בזחלים) לאפשר יצירת תאים Pro- הגידול הופכים ברקמה אפיתל רגיל, מצב דומה לשלבים הראשונים של סרטן האדם. מחקר שנערך לאחרונה על tumorigenesis בדיסקופיית כנפיים תסיסנית , לעומת זאת, הראה כי ייזום הגידול תלוי cytoarchitecture המהותית ואת הסביבה microenviron המקומית, דבר המצביע על כך חשוב לשקול את האזור ספציפי רגישות לגירויים tumorigenic בהערכת פנוטיפים הגידול בדמיון דיסקים. כדי להקל על ניתוח פנוטיפי של הגידול progressiב דיסקים דמיוני, כאן אנו מתארים פרוטוקול ניסויים גנטיים באמצעות מערכת GAL4-UAS כדי לגרום לגידולים ניאופלסטיים בדיסקים דמיון כנף. בנוסף, אנו מציגים שיטת אבחון כדי לסווג את פנוטיפים של נגעים משובצים המושרה epithelia דמיוני, כמו שיטת סיווג ברור להפלות בשלבים שונים של התקדמות הגידול (כגון היפרפלזיה, דיספלזיה, או neoplasia) לא תוארה קודם לכן. שיטות אלה עשויים להיות חלים באופן נרחב על ניתוח המשוב של פנוטיפים הגידול באיברים שונים תסיסנית .
מבוא
רקמות אפיתל הן מערכות מאורגנות מאוד, כי יש יכולת הומיאוסטית יוצאת דופן לשמור על הארגון שלהם באמצעות פיתוח מחזור התא. מערכת זו עצמית מאורגנת, עם זאת, הוא שיבשו בהדרגה במהלך התפתחות הגידול. בתחילת התפתחות הגידול, תאים מוטציה בודדים הנובעים הפעלה אונקוגן או גידולים סרטניים inactivation להתגלות בתוך שכבת אפיתל. כאשר זה השתנה "Pro-הגידול התא" מתחמק בסביבה מדכאת, משבש ארגון אפיתל, ומתחיל התפשטות בלתי מבוקרת, tumorigenesis מתרחשת 1 . במהלך העשורים האחרונים, התקדמות טכנולוגית יוצאת דופן בגנטיקה וביולוגיה מולקולרית עשו התקדמות מדהימה על מחקר הסרטן. במיוחד, מחקרים שנעשו לאחרונה באמצעות כלי ניתוח פסיפס גנטית ב תסיסנית melanogaster , כגון FLP-FRT (flippase recombinase / flippase recombinase היעד) recombin מיטוטיAtion 2 ו flip-out-GAL4-UAS (במעלה מפעיל רצף) מערכות 3 , תרמו רבות להבנה טובה יותר של המנגנונים הגנטיים המעורבים היווצרות גרורות של גידולים 4 , 5 , 6 .
מחקרים של קבוצת גני תסיסנית גידול משתיק משומרים, זחלי ענק קטלניים (LGL), דיסקים גדולים (dlg), ולקשקש (scrib), הדגישו את הקשר הקריטי בין הפסד של ארגון אפיתל התפתחות גידולים, כמו גנים אלה ממלאים תפקידים מרכזיים ב ויסות קוטביות תא אפית, ותאי תאים ברקמות אפיתל 7 . בעוד שדיסקופיית הדיסקופיליה היא בדרך כלל אפיתיל מונוליר, מוטציות הומוזיגיות בכל אחד משלושת הגנים האלה גורמים לתאים לאבד מבנה וקוטביות,לשכור, overproliferate, ובסופו של דבר להרכיב multorayered המוני אמורפיים כי הפתיל עם רקמות סמוכות 7 . כמו כן, הפרעה של גנים אלה יונקים מעורב בפיתוח של גידולים ממאירים 8 , 9 . הפנוטיפים הניאופלסטיים המוצגים על ידי הרקמות המוטנטיות הובילו לסיווגם של שלושה גנים אלה כגנים משמרים, נויפלסטיים, מדכאי גידולים (nTSG) 7 , 8 . עם זאת, כאשר תאים הומוזיגיים nTSG מוטציה הם שנוצר באופן ספורדי בפיתוח wild-type דימויים דמיוניים באמצעות רקומבינציה מיטבית FLP-FRT בתיווך, תאים מוטציה מסולקות מן הרקמה דרך אפקטוזיס C- יוני K- מסוף (JNK), אפופטוזיס תלויים 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , שחול 15 , 16 , או engulfment ו phagocytosis על ידי השכנים 17 . ב אפיתל זה מוזאיקה גנטית, אפופטוזיס הוא זוהה בעיקר בתאי מוטציה nTSG הממוקם בגבול שיבוט, דבר המצביע על כך תאים נורמליים סמוכים מפעילה אפופטוזיס של תאים nTSG מוטציה 10 , 11 , 12 , 18 . מחקרים שנערכו לאחרונה בתאי יונקים אישרו כי חיסונים אלה התומכים בתאי גזע של תאים פרו-סרטניים הם מנגנון הגנה עצמית אפיתלי משומר מבחינה אבולוציונית נגד סרטן 19 , 20 , 21 , 22 , 23 .
מחקר שנערך לאחרונה תסיסנית דיסקים דמיוניים, לעומת זאת, הראה כי פסיפס nTSG-knockdown שיבוט גורם גידולים ניאופלסטיים specifאיזורים של כנפיים דימויים דימויים 16 . היווצרות ראשונית של הגידול נמצאה תמיד באזור "ציר" הפריפריאלי ולא נצפתה באזור המרכזי של "שקיק" של אפיתל הדיסק של האגף, דבר המצביע על כך שהפוטנציאל הטומוריגני של תאי NTSG-knockdown תלוי בסביבה המקומית. אזור שקיק מרכזי פונקציות כמו "coldspot הגידול" שבו תאים Pro הגידול אינם מראים overgroastic דיספלסטי, ואילו באזור ציר ההיקפי מתנהג כמו "נקודה חמה" 16 . ב "coldspot" אזורים שקיק, תאים nTSG-knockdown delaminate מן הצד הבסיסי ועוברים אפופטוזיס. לעומת זאת, כמו "נקודה חמה" תאים הציר להחזיק רשת של מבנים cytoskeletal חזקים על הצדדים הבסיסיים שלהם, תאים nTSG-knockdown delaminate מן הצד האפי של אפיתל וליזום צמיחת יתר של טומוריגנית 16 . לכן, ניתוח של פנוטיפים הגידול בדיסקים דמיוניים דורש consi זהירשל רגישות ספציפית לאזור לגירויים טומוריגניים.
כאן, אנו מתארים פרוטוקול כדי לעורר היווצרות הגידול neoplastic בתקליטורים כנף תסיסנית הדיסק באמצעות מערכת GAL4-UAS- RNAi שבו תאים nTSG-knockdown נוצרים epithelia דיסק epaghelia רגיל. למרות אלו מערכות ניסיוניות שימושיים ללמוד את השלבים המוקדמים של סרטן, שיטה סיווג ברור להעריך את השלבים של התקדמות הגידול ב epithelia דיסק דמיוני לא תוארה בבירור לפני. לכן, אנו מציעים גם שיטת אבחון לסווג פנוטיפים המשובטים הגידול המושרה epithelia דיסק האגף לשלוש קטגוריות: hyperplasia (הצטברות של מספר מופרז של תאים מופיעים נורמלי עם התפשטות מוגברת), דיספלסיה (רקמה prealignant מורכב להופיע באופן חריג תאים), ו neoplasia (גידול שפיר או ממאיר המורכב של תאים בעלי מראה חריג דפוס התפשטות לא נורמלי).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. לטוס צלבים ואינדוקציה משובטים
- הסר את כל הזבובים בבקבוקון 12 שעות לפני איסוף זבובים בתולה.
- להרדים את הזבובים בבקבוקון על ידי הזרקת גז CO 2 ומקום עף על גבי כרית זבוב CO 2.
- העברת 10 - 20 נשים בתולה ו -10 גברים מן CO 2 לטוס כרית לתוך בקבוקון טרי דגירה ליום 1 ב 25 ° C.
- העברת זבובים אלה לתוך בקבוקון טרי דגירה במשך 12 שעות ב 25 ° C.
הערה: להשליך את הבקבוקון הראשון כמו נקבות בתולה לא להניח מספיק ביצים ביום הראשון. - עבור משפר- GAL4 שורות, להסיר את הזבובים למבוגרים דגירה בקבוקון על 25 מעלות צלזיוס עד לנתיחה.
- עבור אינדוקציה של שיבוטים פסיפס על ידי להעיף החוצה- GAL4, להסיר את הזבובים המבוגרים דגירה בקבוקון עבור 2 - 4 ימים על 25 מעלות צלזיוס. זמן דגירה לפני הלם חום תלויה המטרה הניסויית. הלם חום 2 ימים לאחר הביצה בתצהיר (א.ד.) מייצר שיבוטי פסיפס בשנייה לא בוגר- אפיתיל דמיוני. הלם חום לאחר 3 או 4 ימים א.ד. מייצר שיבוטים פסיפס ב מובחן מוקדם עד אמצע השלישי epithelia הדמיון.
הערה: חשוב לבחון את ההשפעה של תזמון חום שהשתנה על פנוטיפים טומוריגניים. - עבור אינדוקציה של שיבוטים פסיפס על ידי להעיף החוצה- GAL4, הלם חום הבקבוקון על ידי טבילה באמבט מים 37 מעלות צלזיוס למשך 10 - 45 דקות ואחריו הדגירה של 2-3 ימים על 25 מעלות צלזיוס.
הערה: מידע על זמן הזעזוע החום, העיתוי וזמן הדגירה בכל ניסוי מוצג באיור האגדות.
2. דיסקציה של הזחלים
- איסוף נודדים instar השלישי עם מקל עץ או מלקחיים קהה, גנוטיפ אותם על ידי סמנים ניאון המתאים ( למשל , EGFP) תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי פלואורסצנטי ומניחים אותם צלחת לנתיחה עם PBS (פוספט שנאגרו מלוחים).
- לשטוף את הזחלים PBS ידי pipetting עם 2 מ"ל pipettes העברת פלסטיק.
- צבוט את מרכז הזחל עם מלקחיים אחת ולקרוע את הגוף לשניים עם מלקחיים אחרים.
- קמצוץ את הפה של החצי הקדמי עם מלקחיים אחד לדחוף את הפה לכיוון הגוף עם מלקחיים אחרים כדי להפוך את הגוף פנימה החוצה.
- הסר חומרים מיותרים כגון בלוטות הרוק או גופים שומן עם מלקחיים.
3. קיבוע נוגדן מכתים
- מעבירים את החלק הקדמי גזור של הגוף הזחל (כולל דיסקים כנפיים דמיוני) כדי צינור פלסטיק 1.5 מ"ל לתקן 1 מ"ל של פתרון תקן (פורמלדהיד 4% ב PBS) במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר בחושך עם סיבוב עדין.
זהירות: פורמלדהיד הוא רעיל ויש לו פוטנציאל מסרטן. ללבוש כפפות מגן ובגדים כדי למנוע מגע עם העור.
הערה: בחלק זה, כל השלבים מתרחשים על נוטאטור בטמפרטורת החדר בחושך, אלא אם צוין אחרת. - הסר את הפתרון תקן וזורקים. לשטוף את הרקמות עם 1 מ"ל של PBT (0.3% Tritב X-100 ב PBS) שלוש פעמים במשך 15 דקות כל אחד.
- הסר את PBT ולהוסיף 1 מ"ל של PBTG (0.2% אלבומין בסרום שור 5% בסרום עירום נורמלי PBT) לחסימת ו nutate 1 שעות בטמפרטורת החדר או לילה ב 4 ° C.
- הסר PBTG ולהוסיף פתרון נוגדן ראשוני בדילול נאות עם PBTG (ראה טבלה חומרים ) ו nutate לילה ב 4 ° C.
- הסר את הפתרון נוגדן ראשוני לשטוף את הרקמות עם 1 מ"ל PBT שלוש פעמים במשך 15 דקות כל אחד.
- הסר PBT ולהוסיף פתרון נוגדנים משני כראוי בדילול מלא עם PBTG (1: 400). Nutate עבור 2 שעות בטמפרטורת החדר או לילה ב 4 מעלות צלזיוס.
- הסר פתרון נוגדנים משני לשטוף את הרקמות עם 1 מ"ל של PBT פעמיים במשך 15 דקות כל אחד.
- כדי הכתם F- אקטין, להסיר PBT ולהוסיף פתרון Phalloidin בדילול נאותה PBS (1:40). ואז nutate במשך 20 דקות. הסר את הפתרון Phalloidin לשטוף את הרקמות עם 1 מ"ל של PBT פעמיים במשך 15 דקות כל אחד.
- כדי להדוף DNA גרעיני, להסיר PBT ולהוסיף DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole) פתרון (0.5 מיקרוגרם / מ"ל של DAPI ב PBS). ואז nutate 10 דקות.
זהירות: DAPI יש פוטנציאל מסרטן. ללבוש כפפות מגן ובגדים כדי למנוע מגע עם העור. - הסר פתרון DAPI לשטוף את הרקמות עם 1 מ"ל של PBT פעמיים במשך 15 דקות כל אחד.
- יש לשטוף פעם 1 מ"ל של PBS במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
- הסר PBS ולהוסיף 500 μL של גליצרול 100% כמו המדיום מראש הרכבה.
4. הרכבה על גבי שקופיות מיקרוסקופ
- מניחים את הרקמות המוכתמות בשקופית מיקרוסקופ באמצעות פיפטה העברת פלסטיק 2 מ"ל.
- מעבירים את הרקמות טיפות של המדיום גובר על שקופית מיקרוסקופ אחר עם מלקחיים.
- החזק את קצה הרקמה גזור עם מלקחיים אחת ולמשוך משם דיסקים antennal העין עם מלקחיים אחרים.
הערה: לשמור על המוח גזור למקום אותם ליד הדיסק דימיון כנף. המוח לפעול כפלטפורמה המונעת את coverslip מ מוחצת את האגף דיסקים דמיוניים. - כדי לבודד את הדיסק כנפיים הדימיון להחזיק בקצה של רקמה גזור עם מלקחיים אחד בעדינות לגרד את קיר הגוף ולקרוע את הדיסקים עם מלקחיים אחרים.
הערה: אם קשה למצוא דיסקיות דימויים כנפיים, לקלף את קנה הנשימה מן האחורי אל הצד הקדמי. כנפיים דיגיטליות כנפיים מקל על קנה הנשימה. - בעדינות לכסות את הדיסקים הדמיוניים עם coverslip וחותמת עם לק. חנות ב 4 ° C.
5. מיקרוסקופיה confocal
- כדי לרכוש תמונות confocal באמצעות מיקרוסקופ confocal להגדיר תמונה פרמטרים הרכישה כולל טווח של גל פליטה, עוצמת לייזר, רווח, היסט, מהירות סריקה גודל התמונה 24 .
הערה: לקבלת הליך מפורט של הגדרות רכישת תמונות, עיין במדריך ההוראות המצורף על ידי כל יצרן מיקרוסקופ. - כדי ללכוד שיתוף יחידקטעים nfocal של דיסק שלם אגף כולו, להשתמש בעדשה אובייקטיבית 20X.
- לרכוש 3-ממדי תמונות על ידי Z- מחסנית סריקה בגודל צעד של 0.5 - 1.0 מיקרומטר באמצעות עדשות 40X או 60X.
הערה: כדי לנתח פנוטיפים סלולריים ברזולוציה גבוהה, גודל התמונה צריך להיות גדול מ 512 x 512 פיקסלים.
6. ניתוח תמונה באמצעות ImageJ
- השתמש פיג 'י, קוד פתוח ImageJ התוכנה התמקדה ביולוגי ניתוח התמונה (https://fiji.sc/) 25 , לרכוש ולנתח confocal z- מחסנית תמונות.
- כדי לרכוש חלקים אנכיים, לפתוח את z- ערימת תמונות ImageJ ובחר פריט בתפריט "תמונה / ערימות / Reslice."
הערה: ניתן לבחור בציר XZ או בציר YZ בתפריט Reslice. סעיף אנכי ניתן להשיג גם בכיוון שרירותי על ידי ציור קו ישר או מלבן על התמונה z- מחסנית.
7. אבחון פנוטיפים ניאופלסטיים
- פתח את האנכימקטעים (XZ או ציר YZ) המתקבל קבוצה אחת של z- מחסנית תמונות ולנתח פנוטיפים מורפולוגיים מכתים נוגדן.
- עבור אבחון של פנוטיפים הגידול, בעיקר להתמקד בשלוש נקודות הבאות: (1) אם מסה התא, כולל שיבוטים מציאה, סוטה מן השכבה אפיתל הראשי, (2) אם לוקליזציה subcellular של חלבונים jnctional משתנה מסה זו התא , ו (3) אם הקוטר של מסת התא הזה הוא גדול מ 4 תאים.
- סיווג פנוטיפים הגידול לפי תרשים זרימה המתואר בתרשים 1 .
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי להדגים היווצרות הגידול נאופלסטיות המושרה בניסוי ידי RNAi בתיווך nTSG-מציאה ב דיסקים דמותי תסיסנית הכנף, שלושה נהגים GAL4 שונים שימשו להביע כטב"מ RNAi עבור LGL או scrib: (1) SD-GAL4, אשר מניע ביטוי כטב"מ חזקה כיס כנף והבעה קלה באזורי הצירים ( איור 2 ו איור 3 א ); (2) מעדכן GAL4, אשר כוננים בתת הצירים של ציר, כולל ב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מערכת GAL4-UAS הוא אחד הכלים הגנטיים החזקים ביותר עבור ביטוי גנים ממוקד תסיסנית 26 ומאפשר מאוד אינדוקציה תא הגידול וניתוח ב vivo 4 . מערכת זו מאפשרת את הדור של שיבוטים נושאת מציאה של גנים מדכאי גידול או overexpression של אונקוגנים בתוך רקמת אפיתל wild-type, מצב דומה מאוד בשלבים הראשונים של סרטן האדם שבו תאים פרו תאים סרטניים מוקפים בתאי אפיתל נורמלי. GAL4 קווי הנהג מוסדר על ידי רצפים משפר כגון GAL4 משפר קווי מלכודת ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לג 'ואוגן על קריאה ביקורתית של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מ JSPS KAKENHI מענק מספרים 26891025, 15H01500 ו Takeda מדע הקרן מענק מחקר YT
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>ריאגנטים | |||
| מי מלח פוספט (PBS) | Wako | 162-19321 | |
| TritonX-100 | Wako | 168-11805 | |
| פורמלדהיד | Wako | 064-00406 | |
| אלבומין סרום בקר | סיגמא | A7906 | |
| סרום עיזים רגיל | סיגמא | G6767 | |
| מדיום הרכבה, Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | |
| DAPI | Sigma | D9542 | |
| עכבר-אנטי-Dlg 4F3 | מחקרים התפתחותיים Hybridoma Bank | 4F3 anti-discs גדול, RRID:AB_528203 | לדלל ב-PBTG, 1:40 |
| עכבר-anti-MMP1 | מחקרים התפתחותיים Hybridoma Bank | 3A6B4, RRID:AB_579780 | 3 מעורב 1:1:1 ולדלל ב-PBTG, 1:40 |
| עכבר-אנטי-MMP1 | מחקרים התפתחותיים Hybridoma Bank | 3B8D12, RRID:AB_579781 | 3 מעורב 1:1:1 ודילול ב-PBTG, 1:40 |
| עכבר-אנטי-MMP1 | מחקרים התפתחותיים Hybridoma Bank | 5H7B11, RRID:AB_579779 | 3 מעורב 1:1:1 ודילול ב-PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-atubulin | Developmental מחקרים Hybridoma Bank | AA4.3, RRID:AB_579793 | לדלל ב-PBTG, 1:100 |
| Alexa Fluor 546 Phalloidin | Molecular בדיקות | A22283 | מדוללות ב-PBS, 1:40 |
| נוגדן IgG נגד עכברים עזים, Alexa Fluor 546 | בדיקות מולקולריות | A11030 | מדוללות ב-PBTG, 1:400 |
| <חזק>שם | ><חזק>חברה | <חזק>מספר קטלוגי | Comments |
| Fly זנים | |||
| sd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #8609 | משולב מחדש עם UAS-EGFP |
| upd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #26796 | משולב מחדש עם UAS-EGFP |
| UAS-lgl-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #51247 | |
| UAS-scrib-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #105412 | |
| UAS-RasV12 | מרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה | #64196 | |
| UAS-Yki3SAמרכז | המניות בלומינגטון דרוזופילה | #28817 | |
| hsFLP | מרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה | #6 | |
| Act>CD2>GAL4 (flip-out GAL4) | בלומינגטון דרוזופילה Stock Center | #4780 | משולב מחדש עם UAS-EGFP |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #5428 | X chromosome |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6658 | third chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington מרכז מניות דרוזופילה | #24650 | כרומוזום שני |
| UAS-Dicer2 | מרכז מניות בלומינגטון דרוזופילה | #24651 | כרומוזום שלישי |
| vkg-GFP | Morin et al. 2001 | מלכודת חלבון GFP |
מקורות
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
- Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117 (4), 1223-1237 (1993).
- Struhl, G., Basler, K. Organizing activity of wingless protein in Drosophila. Cell. 72 (4), 527-540 (1993).
- Potter, C. J., Turenchalk, G. S., Xu, T. Drosophila in cancer research. An expanding role. Trends Genet. 16 (1), 33-39 (2000).
- Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Dis Model Mech. 4 (6), 753-761 (2011).
- Tipping, M., Perrimon, N. Drosophila as a model for context-dependent tumorigenesis. J Cell Physiol. 229 (1), 27-33 (2013).
- Bilder, D. Epithelial polarity and proliferation control: links from the Drosophila neoplastic tumor suppressors. Genes Dev. 18 (16), 1909-1925 (2004).
- Humbert, P. O., et al. Control of tumourigenesis by the Scribble/Dlg/Lgl polarity module. Oncogene. 27 (55), 6888-6907 (2008).
- Huang, L., Muthuswamy, S. K. Polarity protein alterations in carcinoma: a focus on emerging roles for polarity regulators. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 41-50 (2010).
- Brumby, A. M., Richardson, H. E. scribble mutants cooperate with oncogenic Ras or Notch to cause neoplastic overgrowth in Drosophila. EMBO J. 22 (21), 5769-5779 (2003).
- Igaki, T., Pastor-Pareja, J. C., Aonuma, H., Miura, M., Xu, T. Intrinsic tumor suppression and epithelial maintenance by endocytic activation of Eiger/TNF signaling in Drosophila. Dev Cell. 16 (3), 458-465 (2009).
- Tamori, Y., et al. Involvement of Lgl and Mahjong/VprBP in cell competition. PLoS Biol. 8 (7), e1000422(2010).
- Cordero, J. B., et al. Oncogenic Ras diverts a host TNF tumor suppressor activity into tumor promoter. Dev Cell. 18 (6), 999-1011 (2010).
- Yamamoto, M., Ohsawa, S., Kunimasa, K., Igaki, T. The ligand Sas and its receptor PTP10D drive tumour-suppressive cell competition. Nature. 542 (7640), 246-250 (2017).
- Vaughen, J., Igaki, T. Slit-Robo Repulsive Signaling Extrudes Tumorigenic Cells from Epithelia. Dev Cell. 39 (6), 683-695 (2016).
- Tamori, Y., Suzuki, E., Deng, W. -M. Epithelial Tumors Originate in Tumor Hotspots, a Tissue-Intrinsic Microenvironment. PLoS Biol. 14 (9), e1002537(2016).
- Ohsawa, S., et al. Elimination of oncogenic neighbors by JNK-mediated engulfment in Drosophila. Dev Cell. 20 (3), 315-328 (2011).
- Menéndez, J., Pérez-Garijo, A., Calleja, M., Morata, G. A tumor-suppressing mechanism in Drosophila involving cell competition and the Hippo pathway. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14651-14656 (2010).
- Hogan, C., et al. Characterization of the interface between normal and transformed epithelial cells. Nat Cell Biol. 11 (4), 460-467 (2009).
- Kajita, M., et al. Interaction with surrounding normal epithelial cells influences signalling pathways and behaviour of Src-transformed cells. J Cell Sci. 123 (Pt 2), 171-180 (2010).
- Norman, M., et al. Loss of Scribble causes cell competition in mammalian cells. J Cell Sci. 125 (1), 59-66 (2012).
- Wagstaff, L., et al. Mechanical cell competition kills cells via induction of lethal p53 levels. Nat Commun. 7, 1-14 (2016).
- Kajita, M., Fujita, Y. EDAC: Epithelial defence against cancer-cell competition between normal and transformed epithelial cells in mammals. J Biochem. 158 (1), 15-23 (2015).
- North, A. J. Seeing is believing? A beginners' guide to practical pitfalls in image acquisition. J Cell Biol. 172 (1), 9-18 (2006).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
- Jory, A., et al. A survey of 6,300 genomic fragments for cis-regulatory activity in the imaginal discs of Drosophila melanogaster. Cell Rep. 2 (4), 1014-1024 (2012).
- McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila. Science. 302 (5651), 1765-1768 (2003).
- Rodrigues, A. B., et al. Activated STAT regulates growth and induces competitive interactions independently of Myc, Yorkie, Wingless and ribosome biogenesis. Development. 139 (21), 4051-4061 (2012).
- Khan, S. J., et al. Epithelial neoplasia in Drosophila entails switch to primitive cell states. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (24), E2163-E2172 (2013).
- Pagliarini, R. A., Xu, T. A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior. Science. 302 (5648), 1227-1231 (2003).
- Gonzalez, C. Drosophila melanogaster: a model and a tool to investigate malignancy and identify new therapeutics. Nat Rev Cancer. 13 (3), 172-183 (2013).
- Patel, P. H., Edgar, B. A. Tissue design: how Drosophila tumors remodel their neighborhood. Semin Cell Dev Biol. 28, 86-95 (2014).
- Nakajima, Y. -I., Meyer, E. J., Kroesen, A., McKinney, S. A., Gibson, M. C. Epithelial junctions maintain tissue architecture by directing planar spindle orientation. Nature. 500 (7462), 359-362 (2013).
- Colombani, J., Andersen, D. S., Léopold, P. Secreted peptide Dilp8 coordinates Drosophila tissue growth with developmental timing. Science. 336 (6081), 582-585 (2012).
- Garelli, A., Gontijo, A. M., Miguela, V., Caparros, E., Dominguez, M. Imaginal discs secrete insulin-like peptide 8 to mediate plasticity of growth and maturation. Science. 336 (6081), 579-582 (2012).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
