ההשפעות של חשיפה של פורמלדהיד מודל עכברוש של אטופיק דרמטיטיס המושרה על ידי קפסאיצין Neonatal טיפול

סיכום

נתאר כאן שיטות לטיפול קפסאיצין neonatal לזירוז אטופיק דרמטיטיס חולדות, חשיפה של פורמלדהיד מתאדה לחקור את ההשפעות של פורמלדהיד אינהלציה-אטופיק דרמטיטיס.

תקציר

אטופיק דרמטיטיס היא מתדרדרת באופן כרוני pruritic אקזמה, מנצחת ברחבי העולם, במיוחד במדינות המפותחות. אינטראקציה מורכבת בין גורמים גנטיים וסביבתיים ידועים לשחק תפקיד חשוב הפתופיזיולוגיה של אטופיק דרמטיטיס. עם זאת, אנו עדיין חוסר תמונה מפורטת בפתוגנזה של המחלה. לפיכך, יש חשיבות לפתח מודלים בעלי חיים המתאימים עבור שחקרתי את ההתקדמות של אטופיק דרמטיטיס. יתר על כן, חוקר את השפעת גורמים סביבתיים כגון מזהמי אוויר על אטופיק דרמטיטיס מרחיב את ההבנה של המחלה. כאן, אנו מתארים שיטה להשראת אטופיק דרמטיטיס בחולדות עם טיפול קפסאיצין neonatal, פרוטוקול חשיפה של ריכוז קבוע של פורמלדהיד חולדות לחשוף על ההתפתחות של אטופיק דרמטיטיס אינפנטילי, גיל ההתבגרות תקופות. פרוטוקולים אלה הוחלו בהצלחה על מספר ניסויים והוא יכול לשמש לחומרים אחרים.

מבוא

לחקור את ההשפעות של פורמלדהיד (FA) שאיפת על ההתקדמות אטופיק דרמטיטיס (AD), אנחנו הוקמה עבור המודעה אינדוקציה פרוטוקול ופיתח תא מחזור רגיל לחשיפה כרונית של הפא.

המודעה היא מחלת עור דלקתית כרונית לייחס את האינטראקציות מורכבים בין נטייה גנטית לבין גורמים סביבתיים^1,2. דגם בעל חיים ראוי נדרש ללמוד לספירה במדינה פרה. זה הכי חשוב כאשר שחקרתי בפתוגנזה של המודעה תחת ההשפעה של גורמים סביבתיים. יתר על כן, כדאי לחקור את ההשפעות של הגורמים הסביבתיים על ההתקדמות לספירה, זה חיוני כדי להפריד בין הגורמים הסביבתיים בודדים ולכמת את מידת החשיפה.

הראו מודל עכברוש הרומן של המודעה המושרה על ידי טיפול קפסאיצין neonatal. זה דגם AD³ יש כמה היתרונות על פני דגמים אחרים לספירה כמו הדגמים לספירה המושרה על ידי רגישות עולה epicutaneous, הדגמים לספירה מהונדס, הדגמים העכבר ספונטנית של המודעה⁴. ראשית, מודל זה מפתחת תסמינים דמויי לספירה בגיל 3 שבועות, אשר מקביל התינוק לספירה היא קודמת מאשר דגמים אחרים העכבר ספונטנית של AD כגון העכבר NC/נגה. במקרים מסוימים, בניגוד הדגמים לספירה מהונדס, הסימפטומים של הדגמים לספירה להתפוגג, נסיגה ספונטנית במשך 20 שבועות. יתר על כן, תהליך אינדוקציה של תסמינים דמויי לספירה במודל קל יותר מזה של המודל רגישות עולה epicutaneous, הדומה יותר ממגע אלרגית בפרספקטיבה של תהליך הגיוס.

יש לנו הציג פרוטוקול חדשניים עבור הפא חשיפה במודל חיה באמצעות תא זכוכית אקרילית, הרגולטור חמצן רפואי קונבנציונלי⁵ כדי לחקור את ההשפעות של שאיפת הפא על הפיתוח של המודעה בתקופות אינפנטילי, בגיל ההתבגרות. הרגולטורים אפשרה לנו לחשוף את החיות על ריכוז קבוע של הגז על ידי התאמת המחירים זרימה וריכוז פתרון. מחקרים קודמים דיווחו על מספר דרכים של חשיפה של פא חייתיים. Xu. ואח תיאר את שיטת החשיפה בפא איזה פתרון היה מוחל ישירות על העור⁶. מחקר שנערך אחר התייחס הפרוטוקול של חשיפה גז הפא באמצעות גנרטור ממסים נדיפים מיוחדים, מודל 4912⁷. לעומת שיטות של מחקרים קודמים, השיטה החדשה מצויד ביתר קלות, יכול להיות מיושם עבור פתרונות אחרים בנוסף הפא.

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים הבינלאומי ועל שימוש הוועדה (IACUC) של קוריאה אוניברסיטת מכללת של רפואה. 6 שבועות לאחר הלידה, ניסויים יכול לגרום enthansasia ולאסוף מדגמים שונים כגון עור, סרום של חולדות.

1. אינדוקציה של המודעה על ידי טיפול קפסאיצין Neonatal

1. כדי להכין 5 מ"ג/מ"ל פתרון קפסאיצין, להוסיף 50 מ"ג של קפסאיצין 1 מ"ל של Tween 80 ו- 1 מ"ל של 100% אתנול צינור חרוטי 15 mL-
2. להוסיף 8 מ"ל של תמיסת הצינור חרוט. לנער את הצינור נמרצות עד אין שכבות נפרדות גלויים
3. להזריק הפתרון קפסאיצין (µL 10/g) לתוך הרקמה התת עורית, על קו האמצע, הצד האחורי של הצוואר של חולדה ספראג-Dawley neonatal.
   1. לספק קפסאיצין בין h 12 עד 48 שעות לאחר הלידה (קריטי).
      הערה: אם הזריקה מתעכב יותר מכמה ימים, דרמטיטיס לא יתפתח או זה יישמר רק במשך כמה שבועות. אם הזריקה מוקדם מדי, מצוקה נשימתית יכול להתרחש עקב כאבים עזים.
   2. למניעת חולדות neonatal של דום נשימה בעקבות הזריקה קפסאיצין, לדחוף את התיבה של neonates כדי לעודד נשימה, או לשמור את neonates על חדר חמצן עד הנשימה הופך רגיל. מאז קפסאיצין המושרה הכאב יכול להרתיע נשימה, הוספת הרדמה כללית עלולה להחמיר ואולי קושי נשימה. לפיכך, ניסויים לא צריך להשתמש anesthesics כדי להגדיל את ההישרדות של חולדות.

2. הערכה של Pruritus, דרמטיטיס במודל של עכברים של AD

1. מדידה של pruritus על ידי ספירת התנהגות של גירוד ספונטנית
   1. פלסטיק הכן צ'יימברס (20 ס"מ על 30 ס"מ x 20 ס"מ) מצוידים עם מראה כדי לאפשר כיסוי מלא עבור צפייה וחורים כדי לאפשר את החולדות לנשום.
   2. להגדיר למעלה ולהתאים מצלמת וידאו דיגיטלית כראוי כדי להקליט את מראה נוף ונוף קבלה של החולדות בו זמנית.
   3. המקום חולדות בפלסטיק קאמרית ולכסות את תקרת החדר עם חפץ כבד על מנת למנוע פתיחת.
   4. להקליט את התנהגויות ספונטנית של חולדות עבור 1 h להשמיע את סרטוני הווידאו, לספור את מספר התנהגויות מגרד.
2. הערכה של נגע עורי באמצעות שיטת הניקוד
   1. למקם את החולדה בבית הבליעה אינדוקציה-
   2. להפוך את זרימה חמצן כדי 2 ל'/min לזרום בקצב ולהתאים את מאדה איזופלוריין 3% עבור הרדמה.
   3. לזהות את היקף וחומרת דרמטיטיס האוזניים וחלקים אחרים של עכברוש.
   4. מגדירים את גודל יחידת עבור היקף נגעים בעור 0.25 ס מ ² ואת חומרת נגעים בעור על ידי הבאים טבלה 1: מדד לחומרת; מידת דרמטיטיס הציון על-ידי הכפלת במידה ואת חומרת (לראות את התוצאה דרמטיטיס ב < מחלקה חזקה = "xfig" > איור 1B).

3. חשיפה של פא גזי חיות

1. הכנת החדר שאיפה
   1. להכין קופסת זכוכית אקרילית (55 ס"מ על 40 ס"מ x 35 ס מ) בעל שני שקעים משני צידי המתרס.
   2. התראה. זרימת הגז פא, מקום גבוה יותר מאשר כניסת השקע ולבצע את הגודל של השקע גדול מזה של הים-
   3. התראה. מדידות ריכוז הגז הפנימי, על צד אחר של האסלות, לקדוח שלושה קטעים קטנים, אשר ניתן לסגור.
   4. חיבור צינורות לשקעי בשני. המקום של צינור עודפים מחזור המנוע או מחוץ לבניין על פליטת הגז, והתחבר הצינור לשקע אחרים הרגולטור חמצן רפואי.
   5. מקום לכלוב חולדה המקובלת בתוך תיבת זכוכית אקרילית.
   6. לשים חולדות בכלוב של שבוע לאחר הלידה למשך 5 שבועות (2 h/יום, 5 ימים בשבוע).
   7. לאטום את תיבת זכוכית אקרילית חזק ככל האפשר כדי למנוע דליפת גז-
      הערה: עבור איטום צר, המכסה קאמרית להכיל גומי. החלת תיאחז הסרט לעטוף את התא עבור איטום חזק.
2. דור גז הפא על-ידי שימוש הרגולטור חמצן רפואי
   1. יתמוסס 5 g של פא 1 ליטר של מים-
   2. להכניס את הפתרון פא 0.5% הבקבוק מעשיר של הרגולטורים חמצן רפואי.
   3. לאחר חיבור צינור כניסת כדי הרגולטורים, להפעיל את הרגולטור וקבע את קצב הזרימה כדי 5 L לדקה
   4. להתאים את הריכוז פתרון ואת קצב הזרימה כדי לקבוע ריכוז הגז בתא.

תוצאות

הדלקת לספירה דמוי עור בדגם שטופלו קפסאיצין לספירה עכברוש רוב בגיל 7 שבועות מוצג איור 1A. התנהגויות של גירוד חזקה של המודל שטופלו קפסאיצין עכברוש לספירה מוצג 1 וידאו. קפסאיצין neonatal טיפול elicited דרמטיטיס ולהחמרה מגרד התנהגויות אצל חולדות בגיל 3 שבועות, תסמינים דמויי לספירה שהתמידו למשך מספר שבועות (איור 1B, ג). למרות התואר היה חמור פחות, תוכניות rat סבלה ושבה דרמטיטיס בגיל 16 שבועות של גיל לא...

דיון

הפרוטוקול המתואר כאן לשם אינדוקציה של תסמינים דמויי לספירה בחולדות יכול להיות מותאם לימוד פתופיזיולוגיה לספירה, משמש ככלי מיון בדיקת סמים. ניתן להחיל את נכשיר חשיפת פא גזי חולדות שטופלו קפסאיצין כדי להעריך את ההשפעות של חשיפה גזים שונים על מודלים מגוונים.

דגם AD neonatal שטופלו קפסאיצין מסתמך על הליך פשוט יותר מאשר דגמים אטופיק אחרים כגון DNCB טיפול דגם⁹ ו- epicutaneous רגישות עולה מודל⁴, במחיר נוח יותר מאשר העכבר NC/נגה⁴....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ווסת חמצן רפואי	Yuyao Jiahua		לא ישפיע על התוצאות
הצינור			לא ישפיע על התוצאות
תא אקרילי	Taejin יצרן אקריל		לא ישפיע על התוצאות
תא פלסטיק	Taejin יצרן אקריל		לא ישפיע על התוצאות
Paraformaldehyde, אבקה	יצרן Sigma	158127	לא ישפיע על התוצאות
עטיפה	Uniwrap		לא ישפיע על התוצאות
יצרן Capsaicin	Sigma	M2028	לא ישפיע על התוצאות
יצרן Tween 80	Sigma	P4780	לא ישפיע על התוצאות
מצלמת וידאו דיגיטלית	Sony	HDR-CX380y	יצרן לא ישפיע להשפיע על התוצאות
התרופות		Isoflurane	לא ישפיע על התוצאות