מאמר שיטה

שיטות וטיפים על עירוי לוריד של Adeno-הקשורים וירוס חולדות והערכה של מערכת העצבים המרכזית התמרה חושית

11.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55994

⸱

25 באוגוסט 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Toxicology, and Neuroscience, Louisiana State University Health Sciences Center, 2Department of Molecular & Integrative Physiology, University of Kansas Medical Center

במאמר זה

סיכום

שיטות משלוח הגן רחב היקף מערכת העצבים המרכזית בחולדה מכוסים. בדוגמה זו, המטרה היא לחקות מחלה המשפיעה על חוט השדרה כולו. התמרה חושית רחבה יכול לשמש כדי לספק חלבון טיפולית מערכת העצבים מהמינהל, היקפי חד פעמי.

תקציר

וקטורים Adeno-הקשורים וירוס (AAV) הם ריאגנט מפתח בהנורולוגיה עבור מקובצים באשכולות חזרה palindromic קצר באופן קבוע interspaced (CRISPR), optogenetics, מיקוד cre-סלומון, וכו '. מטרתו של כתב יד זה היא לסייע החוקר ניסיון ולקיבולת מערכת העצבים המרכזית (CNS) העברה גנטית בחולדה באמצעות הזרקת וריד הזנב AAV. רחב היקף הביטוי רלוונטי עבור תנאים עם פתולוגיה נפוצה, מודל עכברוש הוא משמעותי בשל גודל גדול שלה הדמיון הפיזיולוגיות לבני בהשוואה לעכברים. ביישום זה דוגמה, התמרה חושית עצביים בהיקף נרחב משמש כדי לחקות את מחלת ניוון עצבי המשפיעה על חוט השדרה כולו, נוירודגנרטיביות (ALS). התמרה היעילה של CNS רחב היקף חושית יכול לשמש גם כדי לספק חלבון טיפולית גורמים במחקרים קליניים. לאחר מרווח זמן פוסט-הזרקת ביטוי של מספר שבועות, השפעות התמרה חושית מוערכים. עבור וקטור שליטה חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), כמות ה-GFP ושההתפתחות מוערך במהירות ובאמינות על-ידי תוכנית ההדמיה הבסיסיים. עבור פנוטיפים מחלות מנוע זה הן תוצאה של ALS קשורים לתגובה טרנזקטיבי חלבון ה-DNA מחייב חלבון של 43 kDa (TDP-43), הגירעונות ציון על-ידי רפלקס הבריחה rotarod. מעבר מידול המחלה, טיפול גנטי, יש מגוון יישומים אפשריים עבור מיקוד רחב היקף ג'ין המתוארים כאן. השימוש המורחב של שיטה זו יסייעו לזירוז בדיקת מדעי המח, לנוירוגנטיקה השערות.

מבוא

וקטורים וירוס adeno-הקשורים רקומביננטי (AAV) הם כלי הכרחי לחקר מערכת העצבים המרכזית כי הם כל כך יעיל עבור transducing נוירונים ויוו. וקטורים AAV הם מאוד תכליתי לימוד שונים transgenes, חלבון איזופורמים ברקמות שונות, מארח שונים מינים, מסלולים שונים של ניהול. למשל, AAV יכול להיות מנוהל על מנת עכברים על ידי ציוד היקפי, יחסית לא פולשנית, לעירוי הזרקה כדי מגלי נוירונים לאורך מערכת העצבים ראשון המתוארים Foust. et al. , Duque. et al. (ראה יופיטר נייר על-ידי. Gombash et al. (2014)). 1 , 2 , 3 גישה מסירה זו ג'ין משמש בחולדות לבטא בצורה יעילה גם חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) או מכשיר הלייזר הקשורים חלבון, התגובה טרנזקטיבי DNA מחייב חלבון של 43 kDa (TDP-43) ב מערכת העצבים. 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 עובדים אצל חולדות היא משמעותית כי הפרמטרים של החולדה הפיזיולוגיות וחילוף קרובים לבני לעומת עכברים ישנם מבחני רעילות ורגשיים שתוכננה במיוחד עבור חולדות. יתר על כן, יותר שורות עכברוש הטרנסגניים המשתפרת זה יכול להיות מנוצל AAV ג'ין העברת מחקרים.

שיטות מפורטים עבור העברה גנטית CNS מרחיבה את החולדה, מהיר, אמין כימות של התוצאות. התמרה חושית CNS רחב היקף משמש כדי לחקות את התנסותו של ALS בחולדות בהבעת TDP-43 לאורך חוט השדרה. השיטה היא זריקות וריד הזנב של וקטור TDP-43 חולדות למבוגרים צעירים כמו בשימוש. ג'קסון et al. 6 , 8 , 9 לאחר מספר שבועות, TDP-43-induced גירעונות מוטוריים הן שבוים על ידי שתי שיטות: לברוח רפלקס, rotarod משמש בין Dayton. ואח . ג'קסון et al. 5 , 6 , 7 , 9 עבור וקטור GFP שליטה, בניתוח שלאחר המוות, האזור פלורסנט של הצרבלום מחושב כמו אינדקס של התמרה חושית יעילות בשימוש ב. ג'קסון et al. 6 , 8 הניתוח של המוח הקטן הוכיחה להיות בעלת אינדקס מהיר ואמין של דרגת התמרה חושית CNS לאחר המסירה הגן היקפיים, צריך להיות ישים למגוון רחב של גישות ניסיון העברה גנטית ההיקפית אל מרכזי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הליכים בעקבות ההנחיות NIH המתאים. כל הנהלים בעקבות בעלי חיים פרוטוקולים שאושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה ב LSU למדעי הבריאות מרכז בשריבפורט. חולדות נקבות ספראג-Dawley רוב בגיל 6 שבועות שימשו עבור הליך זה.

1. לקבוע המינונים/אמצעי האחסון של וקטור צריך

  1. שוקלים החולדות להיות מוזרק, לקבוע את כמות וקטור ויראלי הדרושים עבור כל בעל חיים המבוסס על כייל נוגדנים (ריכוז) התכשיר וקטור. להשתמש במינונים וקטור זה היו הצלחה להבעה יעיל העכברוש CNS בעבר (ראה ג'קסון et al. 6).
    הערה: עבור AAV9 TDP-43 או AAV9 GFP, מנה טיפוסית היא בין 3 x 10 13 - 1 x 10 14 וקטור הגנום/ק ג.... העכברושים למבוגרים צעירים רוב בגיל 6 שבועות שוקל כ-150 ג'י
  2. להפוך במינון שווה ערך לכל ק ג כל החיות להשוואות שיטתית. ודא אמצעי האחסון אינו עולה על תקן הזרקה מומלץ כרכים (250-500 µL עבור מלשן 250 גרם). אמצעי אחסון הזרקת טיפוסי הוא μl 200 לחולדה למבוגרים צעירים.

2. הכנת תחנת העבודה

  1. לאסוף חומרים כל הנדרש: סרט פרפין אחד מרובע (בערך 5 x 5 ס מ) לכל חיה, אלכוהול אחד משטח הכנה לכל בעל חיים, תחבושות גזה (2-3 לכל חיה), טיפים pipet, micropipette.
  2. להכין את משטח העבודה על-ידי ניקוי פני השטח עם 70% אתנול. מקם כרית החימום למטה עם הטמפרטורה להגדיר נמוך (~ 37 ° C). מקם כרית ספסל על גבי כרית החימום.
  3. להכין את ההרדמה גז (איזופלוריין). ודא חמצן נאותה, גז הרדמה לניתוח. לנקות את התא אינדוקציה ומסכת הרדמה עם 70% אתנול, ולמקם את מסיכת ההרדמה על משטח הספסל.

3. להכין את הווקטור

  1. להפשיר את הווקטור בטמפרטורת החדר ולאחר תווית שפופרת אחת microcentrifuge סטרילי עבור כל חיה.
  2. Pipet עוצמת הקול של AAV נקבע צעד 1.1 לתוך הצינור המתאים ולהביא את אמצעי האחסון עד האחסון הרצויה הזרקה (כאן, 200 μl) עם צלצול lactated ' s פתרון או תמיסת מלח.
  3. דופק מערבולת המדגם עבור s 1-2, ואז דופק צנטריפוגה עבור 5 s כדי להביא את הדגימה לתחתית הצינור.
  4. Pipet האחסון הכוללת הזרקה לעכבר יצאה מהשפופרת, אל הכיכר של הסרט פרפין.
  5. במקום מחט מד 30 על מזרק 1 מ"ל.
  6. מקום המחט עם המסגרת המשופעת כלפי מטה לתוך הווקטור על הסרט פרפין. משוך לאחור על הבוכנה המזרק עד כל הנגיף מחט, מזרק. יש להקפיד להימנע ציור בועות אוויר לתוך המחט, אשר הופך להיות יותר קל עם אימון.

4. להכין את העכברוש

  1. להפוך את החמצן עד 1 ליטר/דקה והגדר את ההרדמה איזופלוריין 5%. להבטיח כי ההרדמה גז זורם אל התא אינדוקציה על-ידי בדיקת כל הצינורות מחוברים וכיוונים צימוד.
  2. למקם את החולדה לתא הגזים הרדמה אינדוקציה כ 3 דק ', עד העכברוש אינו מגיב.
  3. להבטיח עומק נאותה של הרדמה על ידי צובט את הבוהן. צריך להיות אין תנועה ברגל או הרגל לאחר ה"צביטה הבוהן.
  4. לצמצם את ההרדמה איזופלוריין 2% לצורך תחזוקה של הרדמה ולהתאים את צימוד כך ההרדמה זורם למסיכה הרדמה.
  5. למקם את העכברוש ' s האף במסכה הרדמה ולהתאים את החולדה כך הוא שוכב על צידו.
  6. לזהות את הווריד הזנב לרוחב.
    הערה: הוורידים הזנב לרוחב שוכב כ 10 ו- 2 o ' שעון עם העליון הגבי של הזנב כמו 12 o ' השעון. עם העכבר שוכבת על צדה, וריד הזנב לרוחב האיש למעלה
  7. למחוק את אזור ההזרקה עם משטח ההכנה אלכוהול. ההזרקה הוא שני שלישים למטה אורך הזנב.

5. הזרקת וקטור

  1. בחוזקה שתחזיק את הזנב מעט מעל אזור ההזרקה עם אצבע אחת ישירות מעל הווריד הזנב לרוחב; זה להתרחב את הווריד.
  2. עם שפוע פונה כלפי מעלה, ליישר את המחט עם הווריד של הזנב גלוי באותו כיוון.
  3. לחדור את העור מעל וריד הזנב תוך לקיחת בקפידה רבה כדי למנוע את היד השנייה אוחזת בזנב והקשה על הווריד הזנב של.
  4. לשחרור לחצים מן הווריד של זנב כדי לאפשר את זרימת הדם נורמלי.
  5. להזיז את המחט לווריד. כדי להבטיח כי המחט ניקבה את הווריד הזנב, לסגת מעט על הבוכנה. אם המחט בווריד, דם יזרום לתוך המחט.
    1. מיקום מחדש המחט לפי הצורך. לאחר מכן, כדי לייצב את המחט, להזיז את היד מעל האתר הזרקה מתחת ההזרקה והחזק בסוף המזרק נגד הזנב.
  6. לאט לאט להחדיר וקטור לתוך הזנב (כ-20 µL/s).
    הערה: הווריד עלול לאבד צבע כמו וקטור זורם דרכו. סימנים כי הפתרון הוזרק מחוץ הווריד כוללים blebbing, בישול לבן של העור, או התנגדות כאשר הזרקת וקטור. עם התרגול, ניתן למזער חשיפה במיוחד כלי דם-
  7. לאחר מנוהל וקטור, הסר את המחט מהחולדה ולחץ על כרית גזה נגד ההזרקה כדי לסייע נטפל בדימום במשך 30-60 ס

6. ניקיון

  1. בטל איזופלוריין ההרדמה וחמצן. לנטר את החולדה עד שזה יחזור להכרה, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב שלו.
  2. מקום בקפידה מחטים כל המכולה שרפ. השלך כל החומרים חד פעמיות אחרים כי הם מזוהמים פוטנציאלי עם AAV לתוך המיכל הביולוגי המתאים. לנקות את תחנות העבודה עם אתנול 70%-

7. להעריך את רפלקס הבריחה hindlimb

הערה: גירעונות Hindlimb נובעים בדרך כלל 2-6 שבועות לאחר העברה גנטית TDP-43, תלוי במנה וקטור.

  1. על משטח שטוח ברור של פסולת, עם שתי אצבעות לתפוס את העכברוש ' s זנב כ 2 ס מ מהגוף. הרם את החולדה בעדינות עד forelimbs תלויות בזמן הצגת החלק התחתון הגחון של העכברוש.
    1. בצע ההליך שבועי במהלך ניסיוני הזמן-לאחר העברה גנטית (למשל, עד 12 שבועות לאחר העברה גנטית).
      הערה: גם הציון גירעונות forelimb באופן זה, אך hindlimb גירעונות נוטים יותר להתרחש במודל זה, תלוי במנה וקטור להשתמש.
  2. לבחון את hindlimbs עבור הערה ס' 10 אם אחת או את שתיהן hindlimbs אגרפי כף יד כלפי האמצע במהלך ה 10 ס
  3. לחזור על בדיקה זו עבור סכום כולל של שלוש פעמים עם 30 s בין ניסויים. אם אחת או את שתיהן hindlimbs הן קפוצות עבור כל אחד שלושה ניסויים, החולדה מראה תפקוד מוטורי. לרשום את הנתונים (באופן ידני ב- notes) כמו גם קשב hindlimb חד-צדדית או דו-צדדית הנוכחי אם יש עקביות לאגרוף על פני כל האתגרים.

8. להעריך המוטורית על rotarod

  1. כדי להגדיר את rotarod, הניחו כרית ספסל מתחת rotarod והגדר האצת 4-40 סיבובים לדקה (סל ד) יותר מ 2 דקות (הקצב מגדילה ~0.3 סל ד/s). פעם בשבוע 12-קורס, להפעיל את הנושאים 2, 4, 8, 12 שבועות לאחר ג'ין להעביר.
    2. לאפשר
  2. העכברוש להסתגלות לחדר בדיקות למינימום 20
  3. לאמן את החולדה להשתמש את rotarod בפעם הראשונה, תחילה להתחיל את rotarod במהירות קבוע של סל ד 4 ולאחר מכן למקם את העכברוש rotarod. לאפשר את החולדה ללכת למהפכה מלאה אחת ב 4 סל ד, ולאחר מכן להתחיל את האצת ולאפשר את החולדה ללכת על rotarod עד שהוא נופל. המשך הדרכה עד העכברוש יכולים ללכת באופן עקבי לפחות 40 s. חולדה למבוגרים בריאים, צעירים יוכשרו בקלות באופן זה.
    1. במקרה של עכברוש עם ליקוי מוטורי מורגש, אשר עלול למנוע את החולדה להשגת של השהיה בסיסית ליפול של 40 s, לספק החולדה 3-5 ניסיונות ההכשרה לפני תחילת הניקוד rotarod.
  4. כדי להתחיל בדיקות rotarod, למקם את העכברוש rotarod ולהתחיל האצה של rotarod. שימו לב לשעה שבה העכברוש נופל מן rotarod; זהו ההשהיה ליפול. אם החולדה נשאר על rotarod לאחר 120 s, קאפ ההפעלה בשלב זה, להסיר את העכברוש rotarod ולהקליט עם השהיה הנפילה של 120 ש
  5. לחזור על הבדיקה עוד פעמיים עבור סכום של שלושה ניסויים. כדי למזער את ההשפעה של עייפות, מרחב את ניסויים לפחות 5 דקות אחד מהשני. ממוצע הציונים של שלושה משפטי. עכברוש למבוגרים unimpaired כולל בדרך כלל של השהיה הממוצע ליפול של > 40 ס
  6. למקם את החולדה חזרה לכלוב, ולנקות את rotarod והסביבה עם אתנול 70%-

9. כימות של הביטוי GFP המוח הקטן

  1. עזים ומתנגד העכברושים, perfuse עם פוספט buffered תמיסת מלח (PBS) ולאחר מכן 4% paraformaldehyde. לנתח את המוח ואת חוט השדרה ו לטבול הרקמות מקבע בן לילה ולאחר מכן להעביר אותם 30% סוכרוז פתרון. לאחר equilibration, לחתוך 50 חלקים הילתית μm מיקרוטום הזזה עם מקפיא שלב 4 , 5 , 6-
    2. בחר
  2. ' 3-6 חלקים של המוח הקטן זה רווח אחיד vermis, גזע המוח של המוח הקטן. Fluorescently תווית GFP כדי למקסם את האות. משתמש נוגדן ראשוני עבור GFP-שבערך ולהשתמש הנוגדן משני מצומדת אלקסה-488-לדילול 1:300 4 , 5 , 6-
    הערה: ראה הפניות 4 , 5 ,, 6, לקבלת פרטים נוספים על הדגימה, חלוקתה, צביעת נהלים.
  3. Photomicrograph כל מקטע באזור מוגדר עניין עם עדשת הגדלה נמוכה באמצעות מיקרוסקופ. שימוש מטרה X 2.5 (נ. א. 0.12) ומסנן להגדיר 10, 450-490/515-565 עירור/פליטה). שמור את הגדרות המצלמה (חשיפה פעמים, למשל, 2 s) זהה מדגמים כדי להיות מנותח. שמור. קובץ TIF.
  4. פתח את photomicrograph בתוכנית התמונה הנפוצה נצר; שני חלונות ייפתח. סגור החלון שצוין כמו " צבעי אינדקס ".
  5. בחר " אפשרויות ", ואז " SliceŔ צפיפות מגוון רחב של גוונים תסומן בצבע אדום על החלון טבלת בדיקת מידע (LUT). בחלון, השתמש הסמן למילוי בתווית ספציפי GFP רק ולהפסיק כאשר ברקע שאינם ספציפיים מתחילה להיבחר בתמונה.
    הערה: זה ידגיש לאזור פלורסנט photomicrograph כדי ניתן לכמת. צריך ניתן למטב את ההגדרות ללכוד כל התאים בעליל פלורסנט במיוחד. עם התרגול, בשיטה זו ניתן בדיוק לסמן את קרינה פלואורסצנטית ספציפי.
  6. לפני מדידת שטח פלורסנט, תחילה ודא כי המדידות שנעשו הם יחידות הנכון (פיקסלים). כדי לעשות זאת, לחץ על " ניתוח ", ואז " ScaleŔ להגדיר בשורה הרביעית צריך לומר " יחידות ". מהרשימה הנפתחת, בחר פיקסלים כדי למדוד בפיקסלים, ולאחר מכן לחץ על " אישור ". להחליף את אפשרויות ניתוח כדי " כוללים פנים חורים " כדי להבטיח הכללת כל תאי הגוף בניתוח.
    7. לחץ על
  7. כדי למדוד את השטח פלורסנט, " ניתוח " ולאחר מכן לחץ על " מדד ". כדי לראות את הערך, לחץ " ניתוח " מכן לחץ על " להראות ResultsŔ יופיע חלון תוצאות. מדידת השטח פלורסנט יהיה תחת הכותרת הנקרא " באזור ".
  8. כדי להבטיח סטנדרטיזציה על פני המדידות, אינם משנים את הערכים מסומנים בחלון LUT-
  9. לאחר כל המדידות תועדו, ממוצע הערכים עבור כל בעל חיים (מתוך סעיפים 3-6 לכל חיה). השתמש מבחן סטטיסטי המתאים כדי להשוות את האזורים transduced בין הקבוצות. 6

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ליקויים מוטוריים המושרה TDP-43 אמור להיווצר תוך 2-6 שבועות, תלוי במנה של AAV TDP-43 בשימוש (איור 1). זריקות וריד הזנב לא מוצלח יגרום חלקית או ללא מגבלות; AAV צריך להגיע למחזור הדם כדי לייצר את האפקט. זריקה מוצלחת של AAV GFP תגרום בביטוי GFP ברחבי המוח וחוט השדרה באופן תלוי מינון וקטור. בעת שימוש האמרגן רקומביננטי חזקה לביטוי נסיעה, cytomegalovirus עוף ביתא אקטין היברידית מקדם, הידוע גם בשם מקדם החטיבה, יש ביטוי יעיל של מערכת העצבים המרכזית, כמו גם מספר רקמות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מגוון רחב של מסלולים משלוח נבדקו עבור AAV וקטורים: אינטרה-parenchymal, אינטרה-cerebroventricular, thecal-"אינטרה", תוך ורידי, תוך-אפי, התוך שרירי, וכד'. כל המסלול ייתכן יתרונות ספציפיים, כמו גם חסרונות. מינהל וריד זנב AAV חולדות למבוגרים היא שיטה אמינה להשגת התמרה חושית עקבית של מערכת העצבים. בשיטת הזרקת היקפיים מונע המבוא של בצינורית הזרקה לתוך הרקמות CNS ולכן פולשנית. הביטוי CNS יעילה יכולה להיות מושגת על ידי שיטה זו הוא היתרון הגדול ביותר של הטכניקה. יתרונות מעשיים אחרים הם כי שיטת ההזרקה הוא מאוד מהיר (בערך 10 דקות ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

עבודה זו מומן על ידי של ALS האגודה, הרפוי Karyopharm, inc., מאירה GTx, תרומה נדיבה למחקר ALS מ תומאס לאוסון, שעבורו אנחנו אסירי תודה. אנו מודים Elysse הפרדס, דונה ברני ייעוץ והדרכה. JAS נתמכה על ידי קרן שיקר ולהעניק מכוני הבריאות הלאומיים GM103418.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
סולםפלוזSP5
דלי נלג'ןתרמו סיינטיפיק120140004000 מ"ל
צינור מיקרוצנטריפוגהארה"ב סיינטיפיק1615-5500
תמיסת רינגר חלבבקסטר הלת'0338-0114-04
מיני מערבולתפישר סיינטיפיק128101
צנטריפוגהEppendorf22624415
סרט מעבדהBemisPM996
מזרק 1 מ"לBD309626מגיע עם מחט 25 גרם מחוברת.
החלף במחט 27-30 גרם להזרקה
30 גרם מחטBD305106
IsofluranePiramal Healthcare66794-013-25Isoflurane USP 250 מ"ל
מסכת הרדמהKopf Instruments906
גזההנרי שיין100-25242 אינץ' x 2 אינץ' (5 ס"מ x 5 ס"מ)
טיפים לפיפטארה"ב סיינטיפיק1111-0816
MicropipetGilson4642080
וופורייזר הרדמה בגזSurgiVet4214322קלאסי T3
נבלות הרדמהבגז SurgiVet32373B10כרית חימום Enviro-PURE
Sears17280
כרית ספסלVWR56617-006
RotarodPanlab/Harvard Apparatus76-07724 חולדות/ 4 עכברים
70% אתנולDecon Laboratories, Inc.2401140 הוכחה
70% איזופרופנולVWR89108-160
Scion ImageScion Corporation
GFP תג נוגדן פוליקלונליInvitrogenA11122נוגדן ראשוני - 1:500 דילול
AlexaFluor 488InvitrogenA11070נוגדן משני - 1:300 דילול
Axioskop 40 מיקרוסקופZeiss

מקורות

  1. Foust, K., Nurre, E., Montgomery, C., Hernandez, A., Chan, C., Kaspar, B. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nat. Biotechnol. 27 (1), 59-65 (2009).
  2. Duque, S., et al. Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons. Mol. Ther. 17 (7), 1187-1196 (2009).
  3. Gombash Lampe, S., Kaspar, B., Foust, K. Intravenous injections in neonatal mice. J. Vis. Exp. (93), e52037(2014).
  4. Wang, D., et al. Expansive gene transfer in the rat CNS rapidly produces amyotrophic lateral sclerosis relevant sequelae when TDP-43 is overexpressed. Mol. Ther. 18 (12), 2064-2074 (2010).
  5. Dayton, R., et al. Selective forelimb impairment in rats expressing a pathological TDP-43 25 kDa C-terminal fragment to mimic amyotrophic lateral sclerosis. Mol. Ther. 21 (7), 1324-1334 (2013).
  6. Jackson, K., Dayton, R., Klein, R. AAV9 supports wide-scale transduction of the CNS and TDP-43 disease modeling in adult rats. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2, 15036(2015).
  7. Jackson, K., et al. Preservation of forelimb function by UPF1 gene therapy in a rat model of TDP-43-induced paralysis. Gene Therapy. 22 (1), 20-28 (2015).
  8. Jackson, K., Dayton, R., Deverman, B., Klein, R. Better targeting, better efficiency for wide-scale neuronal transduction with the synapsin promoter and AAV-PHP.B. Front. Mol. Neurosci. 9, 116(2016).
  9. Jackson, K., et al. Severe respiratory changes at end stage in a FUS-induced disease state in adult rats. BMC Neuroscience. 17 (1), 69(2016).
  10. Xu, L., et al. CMV-beta-actin promoter directs higher expression from an adeno-associated viral vector in the liver than the cytomegalovirus or elongation factor 1 alpha promoter and results in therapeutic levels of human factor X in mice. Hum Gene Ther. 12 (5), 563-573 (2001).
  11. Jackson, K., Dayton, R., Klein, R. Gene vector "magic bullet": targeted expression in the central nervous system after peripheral delivery using the synapsin promoter. Expert Opin Ther Targets. 20 (10), 1153-1154 (2016).
  12. van Hulst, R., Klein, J., Lachmann, B. Gas embolism: pathophysiology and treatment. Clin. Physiol. Funct. Imaging. 23 (5), 237-246 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

GFPScion Image

מאמרים קשורים