Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

Eliane H. Dutra; Mara H. O'Brien; Alexandro Lima; Ravindra Nanda; Sumit Yadav

doi:10.3791/55998

Method Article

Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

DOI:

10.3791/55998

⸱

January 11th, 2018

Eliane H. Dutra¹ , Mara H. O'Brien¹ , Alexandro Lima¹ , Ravindra Nanda¹ , Sumit Yadav¹

¹Division of Orthodontics, University of Connecticut Health Center

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה מציג שיטות לניתוח morphometric, שינויים סלולריים בתוך בעצם הלסת של מכרסמים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מפרק לסתי-רקתי (TMJ) יש את היכולת להסתגל לגירויים חיצוניים, טעינת שינויים יכול להשפיע על המיקום של condyles, כמו גם את הרכיבים הסלולר מבניים של הסחוס condylar mandibular (MCC). כתב יד זה מתאר שיטות לניתוח שינויים אלה, שיטה לסירוס ועיקור הטעינה של למפרק לסתי-רקתי בעכברים (קרי, compressive סטטי TMJ טעינה). ההערכה מבניים מאויר כאן היא גישה פשוטה morphometric משתמשת התוכנה Digimizer, מבוצע במסגרת צילומי רנטגן של עצמות קטנות. בנוסף, הניתוח של הסלולר משתנה מובילים שינויים בביטוי קולגן, עצם שיפוץ, חלוקת התא, הפצה פרוטאוגליקן MCC מתואר. כימות של שינויים אלה בסעיפים היסטולוגית - על ידי ספירת הפיקסלים פלורסנט חיובי באמצעות תמונה תוכנה ומדידת מרחק המיפוי והמוכתמות אזור עם Digimizer - גם הוכח. השיטות המוצגות כאן אינם מוגבלים למפרק לסתי-רקתי מאתר, אך יכול לשמש על נוספים עצמות של חיות ניסוי קטן ובאזורים אחרים של התקשות endochondral.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למפרק לסתי-רקתי ג'וינט-נושאת ייחודי הממוקם באזור ואסטתיים, בנוי fibrocartilage. MCC של למפרק לסתי-רקתי הוא חיוני עבור תפקוד המפרקים, כולל תנועת הלסת בוויטנברג באין מפריע תוך כדי דיבור, masticating, אבל זה מושפע בדרך כלל מחלות ניווניות, כולל דלקת מפרקים ניוונית¹. למפרק לסתי-רקתי יש את היכולת להסתגל לגירויים חיצוניים והשינויים הטעינה, מובילים לשינויים מבניים הסלולר הרכיבים של⁴^,⁵³^,²^,MCC. מאפייני-נושאת MCC יכולה להיות מוסברת על ידי האינטראקציות בין המרכיבים שלה, כולל מים, הרשת קולגן, וארזו בצפיפות proteoglycans. MCC ה יש ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים של מרכז הבריאות באוניברסיטת קונטיקט אישר כל ההליכים בבעלי חיים.

1. compressive לסתי-רקתי סטטי טעינה: הפה פרץ

הערה: בת שבוע-ארבע העכברים הטרנסגניים מחסה פלורסנט כתבים של קולגן (Col2a1XCol10a1), יצר לנוחיותנו מאת ד ר דוד רואו (מאוניברסיטת קונטיקט), שימשו את הניסויים המתוארים בכתב היד (n = 8; 4 זכרים ונקבות 4). Transgene (כחול) Col2a1 ציאן מתבטא בתאים באיזור prehypertrophic של MCC, תוך Col10a1 תאים (אדום) דובדבן נמצאים באזור היפרטרופית⁸ (איור 1). עכברים באותה מידה היו מחולקים לשתי קבוצות: קבוצה 1) טעון, שבו היו נתונים עכברים compress....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סטטיסטיקה תיאורית בוצעו כדי לבחון את חלוקת morphometric מידות (אורך הלסת, condylar אורך, רוחב condylar) וניתוחים היסטולוגית. התוצאות הושוו בין הקבוצה טעון (קרי, עכברים נתון טעינה compressive עם המעיין טיטניום בטא) קבוצת הביקורת (קרי, התאמת עכברים שליטה שלא קיבלו בכל הליך). הבדלים משמעותיים סטטיסטית בין ממוצעי נקבעו על ידי אינטראקצית-t-test, ערך-p של < 0.05 הוערך להיות משמעותיים מבחינה סטטיסטית.

מדידות Morpho.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה תיאר שיטות morphometric מדידה וניתוח הסלולר של מאתר condyles mandibular הלסת. המדידות morphometric רדיוגרפי יכול לשמש גם כדי לנתח אחרים עצמות של חיות ניסוי קטן. בנוסף, הניתוח הסלולר (כימות תא ומיפוי הסחוס מרחק) אינם מוגבלים מכרסם בעצם הלסת, אך יכול לשמש כדי לכמת מקטעים היסטולוגית של רקמות רבות.

מודלים מהונדס העכבר לבטא כתבים פלורסנט הן כלי מעולה להבין באופן חזותי שינויים בביטוי הגנים. המודל העכבר כתב פלורסנט כפול-קולגן (Col2a1XCol10a1) נעשה שימוש בדו ח זה היה מתאים במיוחד עבור חקר MC.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים יש אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצה להודות ד ר דוד רואו מתבקשים לספק את העכברים הטרנסגניים Li Chen על הסיוע היסטולוגית.

המחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי את נבחרת המכון של שיניים ותחקיר ואסטתיים של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר K08DE025914 על ידי האמריקאי האגודה של אורתודונטי לקרן Sumit Yadav.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
מערכת רדיוגרפיה MX20	Faxitron X-Ray LLC
תוכנת דיג'מייזר תדמית	MedCalc Software
Shandon Cryomatrix הטמעת שרף	תרמו סיינטיפיק	6769006
ידני Axio Imager Z1	Carl Zeiss	208562
מסנן חלבון פלואורסצנטי צהוב - EYFP	Chroma Technology Corp	49003
מסנן חלבון פלואורסצנטי ציאן - ECFP	Chroma Technology Corp	49001
מסנן חלבון פלואורסצנטי אדום - Cy5	Chroma Technology Corp	49009
נתרן אצטט נטול מים		S2889
נתרן L-טרטרט די-בסיסי דיהידרט	סיגמא-אולדריץ'	228729
נתרן ניטריט	Sigma-Aldrich	237213
ELF97 מצע	תרמו פישר מדעי	E6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS ערכת	Life Technologies	C10339	כולל EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)	Thermo Scientific	D1306
נתרן פוספט דו-בסיסי	Sigma-Aldrich	S3264
נתרן פוספט מונובסיסי	סיגמא-אולדריץ'	71505
טולואידין כחול O	סיגמא-אולדריץ'	T3260
אדובי פוטושופ	Adobe Systems Incorporated
טבליות מלח עם חוצץ פוספט (PBS)	מוצרי מחקר בינלאומיים	P32080-100T
CNA Beta III ללא ניקל	Archwire Ortho Organizers, Inc.
פריזמה של GraphPad	תוכנת GraphPad, בע"מ

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LeResche, L. Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors. Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).
Chen, J., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles