מאמר שיטה

דור של מחלת ריאות חסימתית כרונית מודל בעכברים על ידי חשיפה חוזרת ונשנית האוזון

DOI:

10.3791/56095

⸱

25 באוגוסט 2017

 ,  ,  , 
1Cellular Biomedicine Group, Shanghai, 2Cellular Biomedicine Group, Cupertino, 3Department of Respiratory Medicine, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiaotong University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מתאר את הדור מוצלחת של מודל חדש של בעלי חיים מחלת ריאות חסימתית כרונית (COPD) על ידי חשיפת שוב ושוב עכברים ריכוזים גבוהים של אוזון.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת ריאות חסימתית כרונית (COPD) מאופיין על ידי הגבלת זרימת האוויר מתמשך והרס parenchymal ריאות. יש שיעור גבוה מאוד של הזדקנות האוכלוסייה. טיפולים קונבנציונליים הנוכחי COPD דגש בעיקר על שינוי סימפטום סמים; לפיכך, ההתפתחות של טיפולים חדשים דרוש בדחיפות. מוסמך מודלים חייתיים של COPD יכול לעזור כדי לאפיין את המנגנונים המשמשת כבסיס, יכול לשמש עבור חדש והתרופות הקרנה. המודלים הנוכחיים של COPD, כגון ליפופוליסכריד (LPS) או elastase הלבלב חזירי (עיקרון השוויון הפוליטי)-מודל אמפיזמה המושרה, ליצור נגעים COPD, כמו ריאות, דרכי הנשימה אבל אחרת לא דומים בפתוגנזה של COPD אנושי. לעשן סיגריה (CS)-מודל המושרה נותר אחד הפופולריים ביותר כי זה לא רק מדמה COPD דמוי נגעים במערכת הנשימה, אבל זה גם מבוסס על אחד החומרים המסוכנים העיקרית הגורמת COPD בבני אדם. עם זאת, ההיבטים מהגידולים ועתירת של דגם CS-induced להגביל באופן דרמטי שלה יישום חדש והתרופות הקרנה. במחקר זה, בהצלחה יצרנו מודל חדש של COPD על ידי חשיפת עכברים לרמות גבוהות של האוזון. מודל זה הפגין את הפעולות הבאות: 1) ירד קיבולת ויטל 25, 50, והכריח את 75/נפח expiratory בכפייה (FEV25/FVC, FEV50/FVC, FEV75/FVC), המציין את התדרדרות תפקוד הריאות; 2) alveoli ריאות מוגדלת, עם הרס parenchymal ריאות; 3) מופחת עייפות הזמן והמרחק; . ו-4) מוגבר דלקת. יחדיו, נתונים אלה מדגימים כי המודל חשיפה (OE) האוזון הוא מודל בעלי חיים אמין דומה לבני כי חשיפת יתר האוזון הוא אחד הגורמים etiological של COPD. בנוסף, לקח רק 6-8 שבועות, בהתבסס על העבודות הקודמות שלנו, כדי ליצור מודל OE, ואילו זה דורש 3-12 חודשים לזירוז המודל עשן סיגריות, המציין כי המודל OE עשוי להיות בחירה טובה עבור מחקר COPD.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההערכה היא כי COPD, כולל אמפיזמה וגם ברונכיטיס כרונית, עשוי להיות הגורם המוביל השלישי המוות בעולם 20201,2. שכיחות COPD פוטנציאליים בקרב אוכלוסיה מעל גיל 40 מוערך 12.7% אצל גברים ו- 8.3% אצל נקבות בתוך 40 שנה הבאה3. אין תרופות זמינים כעת להפוך את הידרדרות הדרגתית חולי COPD4. אמין מודלים חייתיים של COPD לא רק דורשים החיקוי של תהליך פתולוגי המחלה אך גם לדרוש תקופה קצרה הדור. המודלים הנוכחיים COPD, כולל את התקליטים או מודל הנוצרות על-ידי עיקרון השוויון הפוליטי, יכול לגרום תסמינים דמויי אמפיזמה5,6. ניהול יחידה או אתגר השבוע של LPS או עיקרון השוויון הפוליטי תוצאות עכברים או חולדות neutrophilia המסומן בנוזל שטיפה bronchoalveolar (BALF), מגביר pro-מתווכים דלקתיים (למשל, TNF-α ו- IL-1β) BALF או סרום, מייצרת ריאות האיזורים אוויר מוגדל-הרס parenchymal, גבולות זרימת אוויר5,6,7,8,9,10. עם זאת, LPS או עיקרון השוויון הפוליטי אינם גורמים אנושיים COPD, ובכך לא לחקות את תהליך פתולוגי11. דגם CS-induced המיוצר על הגבלת זרימת האוויר מתמשך, הרס parenchymal ריאות, מופחתת יכולת תפקודית פעילות גופנית. עם זאת, פרוטוקול CS מסורתי דורש לפחות 3 חודשים כדי להפיק COPD מודל12,13,14,15. לכן, חשוב לייצר מודל בעלי חיים חדשים, יעיל יותר העומד בדרישות שני.

לאחרונה, בנוסף עישון סיגריות, זיהום אוויר, חשיפה תעסוקתית הפכו הסיבות השכיחות יותר של COPD16,17,18. האוזון, כאחד המזהמים העיקריים (אם כי לא המרכיב העיקרי של זיהום אוויר), יכולים להגיב עם מערכת הנשימה באופן ישיר לנזק רקמת הריאה של ילדים והן צעירים מבוגרים19,20,21 ,22,23,24,25. אוזון, כמו גם תכשירים אחרים כולל LPS, עיקרון השוויון הפוליטי של הפקולטה למדעי המחשב, מעורב של משעולים הביוכימי של סטרס חמצוני ריאתי, נזק לדנ א הינם מקושרים על ייזום וקידום של COPD26,27. גורם נוסף הוא כי הסימפטומים של חלק מהחולים COPD להתדרדר אחרי נחשפים האוזון, המציין כי האוזון יכול לשבש את הריאה פונקציה18,28,29. לכן יצרנו מודל חדש של COPD על ידי חשיפת שוב ושוב עכברים ריכוזים גבוהים של אוזון 7 שבועות; כתוצאה מכך זרימת אוויר פגמים ונזק ריאות parenchymal דומים לאלה של חקירות קודמות30,31,32. עלינו להרחיב את פרוטוקול OE עכברים הנשי במחקר זה, בהצלחה לשכפל האמפיזמה נצפתה בעכברים זכרים ב שלנו הקודם מחקרים30,31,32. כי COPD התמותה ירדה בגברים אך גדל אצל נשים אצל מדינות רבות33, מודל COPD אצל נקבות יש צורך ללמוד את המנגנונים וכדי לפתח שיטות טיפוליות לחולים COPD הנשי. תחולת שמודל OE כל המינים משאיל תמיכה נוספת לשימוש שלה כמודל COPD.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערה: מודל ה OE שנוצר, המשמשים למחקר שדווחה בעבר 30 , 31 , 32. ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של אוניברסיטת שנחאי ג'יאוטונג של.

1. עכברים

  1. בית נטולת הפתוגן, 7 עד 9-בת נקבה BALB/c עכברים בכלובים מאוורר בודד בחיה מתקן תחת מבוקר טמפרטורה (20 ° C) ולחות (40-60%). מספקים אור 12 שעות ו 12 שעות מחזור כהה במתקן. לספק מזון ומים ad libitum.

2. האוזון או חשיפה אוויר

  1. צור האוזון עם גנרטור חשמלי בתוך קופסה איטום אקרילי (למשל פרספקס). לנשוף האויר מחוץ לקופסה באמצעות מפוח אוויר קטן דרך צינור אוורור אוויר המחובר מבפנים, מחוץ לקופסה. נטר את ריכוז האוזון בתיבה באמצעות בדיקה של האוזון. המתן עד ריכוז האוזון בתיבת מגיע ל- 2.5 חלקים למיליון (ppm).
    הערה: החללית האוזון יכולה להחליף באופן אוטומטי את מחולל האוזון או ביטול, באפשרותך לשמור על רמת האוזון בתיבה בחלק 2.5 ppm.
  2. למקם את העכברים לתוך התיבה בעת הרמה של האוזון מגיע ל- 2.5 ppm. לשמור את העכברים בתיבה עבור 3 שעות בכל פעם לחשוף אותם האוזון.
    הערה: תיבת יכול לשמר רמה האוזון של 2.5 ppm במהלך ה 3 על-ידי מיתוג אוטומטית את מחולל האוזון או ביטול ו CO 2 הזמבורה המיוצר על ידי העכברים מהקופסה.
  3. לתת אוזון שתי חשיפות (בכל חשיפה מתמשכת 3 h) בשבוע (פעם אחת כל 3 ימים) במשך 7 שבועות; לחשוף את העכברים הבקרה האווירית, באותו זמן, באותה התקופה.

3. מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

  1. בסוף שבוע 7, עזים ומתנגד העכברים עם זריקה בקרום הבטן של pelltobarbitalum natricum (1%, 0.6 - 0.8 מ ל/100 גרם) להתאים את המינון על פי מצבים בודדים כדי לראות העכבר אינו להגיב הבוהן קמצוץ. צג ולשמור העכבר בתדר נשימה קבועה; וודא כי אין הרצוניות קיים במהלך ההליכים.
  2. מקום העכברים anesthetized בחדרו של טומוגרפיה שחושב מיקרו (µCT).
  3. לכייל את µCT באמצעות הפרוטוקול הסטנדרטי והיצרן ' s הוראות. הגדר את שפופרת רנטגן 50 kV והזרם ב 450 µA.
    הערה: שניהם הרנטגן והגלאי סובב סביב העכברים.
  4. לבצע את הניתוח µCT על-ידי השגת תחזיות 515 עם גודל פיקסל אפקטיבי של 0.092 מ מ, של זמן חשיפה של ms 300 בשביל פרוסה אחת, עובי הפרוסה של מ"מ 0.093.
  5. לשחזר את הריאה עם תמונות נרכשות באמצעות תוכנה. לכוונן את בהירות התמונה בגווני אפור על-ידי הגדרת את מינימום ומקסימום של גווני האפור ב-750 ו-550 נ. האונספילד יחידות, בהתאמה.
    הערה: התוכנה יחשב באופן אוטומטי את אמצעי האחסון של parenchyma הריאה, 35 אזור נמוך-הנחתה (LAA) 34 ,.
  6. לחשב את אחוז LAA (LAA %) על-ידי חלוקת האחסון LAA לפי נפח הריאות הכולל.

4. הבדיקה על ההליכון

  1. לתת העכברים הסתגלות לבדוק במהירות של 10 מ' לדקה 10 דקות ריצה הליכון המכונה הערה: החשמל הוא תמיד כבוי כאשר ההליך מתנהל.
  2. מנהל מבחן עייפות לעכברים.
    1. לחמם את העכברים במהירות של 10 מ' לדקה במשך 5 דק.
    2. להגדיל את המהירות עד 15 מ' לדקה במשך 10 דקות
    3. להגדיל את עצימות: הגדלת המהירות על ידי 5 מטר/דקה, החל מ- 20 מ'/דקה, כל 30 דקות עד עכברים אין אפשרות להמשיך לפעול 36.
  3. להקליט את הסיכום רץ מרחק ויפעילו את הזמן כמו עייפות מרחק וזמן עייפות, בהתאמה.

5. מדידות תפקוד ריאתי

  1. עזים ומתנגד העכברים עם זריקה בקרום הבטן של pelltobarbitalum natricum (1%, 0.6 - 0.8 מ ל/100 גרם) להתאים את המינון על פי מצבים בודדים לראות כי העכבר עושה לא להגיב קמצוץ הבוהן ולחכות עד העכברים נשימה ספונטנית. צג שמרו ולשמור העכבר בתדר נשימה קבועה; וודא כי אין הרצוניות קיים במהלך ההליכים.
  2. בעיון tracheostomize העכברים ומניחים היא תגלה הגוף שאליו מחובר חמה מבוקר-מחשב-
    הערה: אוורור נשלטת דרך שסתום הממוקם הציר הקרוב הצינור אנדוטרכאליות. הגדרת מספק תמרונים חצי אוטומטי שונים, כולל את התמרון של אמצעי האחסון לחץ סטטי ומעין ולתמרן את נפח זרימה מהירה.
  3. לכפות ממוצע נושם התדירות של 150 נשימות לדקה העכבר anesthetized באמצעות אוורור מבוקר ללחץ עד דפוס נשימה רגיל והשיג תפוגה מלאה על כל מחזור הנשימה.
  4. לבצע את התמרון לחץ סטטי ומעין-נפח עם המכשיר באמצעות הלחץ השלילי שנוצר היא תגלה.
  5. לבצע את התמרון נפח זרימה מהירה בתוך לולאות לחץ סטטי ומעין-נפח להקליט את FVC ואני את FEV. לנפח הריאה +30 ס"מ H 2 O ומיד לאחר מכן לחבר אותו כדי לחץ שלילי מאוד כדי לאכוף תפוגה עד שאמצעי האחסון שיורית ב-30 ס מ H 2 O. שיא FEV הראשון 25, 50, ו ms 75 של נשיפה (FEV 25 FEV 50, FEV 75, בהתאמה). דוחים את התמרונים שיוצרת. עבור כל בדיקה עם כל עכבר אחת, לנהל מינימום של שלושה מקובל תמרונים כדי לקבל ממוצע אמין עבור כל הפרמטרים מספריים.

6. אוסף BALF

  1. בעקבות הרדמה מסוף עם pelltobarbitalum natricum ((1%, 1.8-2.4 גרם/100 גרם) להתאים את המינון על פי מצבים בודדים לראות כי העכבר לא מגיב קמצוץ הבוהן, לאבד את הנשימה), שטיפה עכברים עם 2 מ של PBS דרך 1 מ מ קוטר צינור אנדוטרכאליות ו מכן לאחזר BALF 10-
  2. מאגר של aliquots שטיפה שאוחזרו ו centrifuge אותם ב 4 ° C ו- g x 250 במשך 10 דקות
  3. לאסוף את תגובת שיקוע לשימוש מיידי ולאחסן את השארית ב-80 מעלות צלזיוס או נוזל חנקן.
  4. לספור את המספר הכולל של תאים באמצעות hemocytometer.
  5. Resuspend בגדר תא PBS, ואז ספין (1,400 x g, 6 דקות) µL 250 תאים resuspended על השקופיות בעזרת צנטריפוגה טווה שקופיות.
  6. רייט להחיל מכתימה את התאים של השקופיות לפי היצרן ' פרוטוקול s.
  7. לספור תאים 200 לכל עכבר; לזהות את התאים המקרופאגים או נויטרופילים, על פי המורפולוגיה סטנדרטי, תחת הגדלה X 400; ולספור את המספרים שלהם.

7. דגימה דם לב

  1. לאסוף דם באמצעות דקירה בלב, לטעון אותו לתוך צינורות 1.5-mL, ולשמור את זה על קרח במשך 30 דקות
  2. Centrifuge את דגימות הדם למשך 5 דקות ב 2,000 x g ו- 4 מעלות צלזיוס
  3. להעביר את תגובת שיקוע (סרום) צינור ואחסן אותו ב-80 מעלות צלזיוס או נוזל חנקן.
  4. להכין את הנסיוב IL-1β, IL-10, ו- TNF-α בדיקות זיהוי באמצעות ערכות אליסה בהתאמה.

8. ניתוח ריאות Morphometric

  1. לנתח את הריאות ואת tracheas של העכברים.
    1. למקם כל עכבר לאללה על גבי לוח כירורגית מיד לאחר ההקרבה.
    2. לנתח משם platysma את שרירי הנשימה הקדמי כדי להמחיש ולגשת הטבעות והכו אותי.
    3. פתח את החזי חלל. לנתח את הריאות, קנה הנשימה, אך אל תפריד את הלב מהריאות.
  2. להתחבר הקטטר אנדוטרכאליות המזרק המכיל 4% paraformaldehyde דרך צינור פוליאתילן PE90.
    התראה: Paraformaldehyde הוא רעיל. ללבוש כפפות בטיחות משקפיים ולהשתמש הפתרון בתוך ברדס fume.
  3. מנפח הריאות לחלוטין באמצעות paraformaldehyde 4% (10 טיפות, µL ~ 200) דרך הקטטר אנדוטרכאליות. להסיר את הלב לאחר השלמתו של האינפלציה.
  4. שמור על הריאה בשפופרת 15 מ"ל המכיל 10 מ"ל של 4% paraformaldehyde לפחות 4 h
  5. להטביע את הריאה פרפין. לקבל סעיפים 5-מיקרומטר על-ידי בלוק פראפין חלוקתה עם מיקרוטום רוטרי. במהלך חלוקתה, לחשוף את פני השטח המרבי של רקמת הריאה בתוך אזור עץ הסמפונות.
  6. ניתוח morphometric, לבצע hematoxylin אאוזין (H & E) צביעת במקטעי.
  7. תמונה הסעיפים עם מיקרוסקופ זקוף בהיר-שדה (המטרה עדשה, 20 X; זמן החשיפה, 1.667 ms).
  8. שני חוקרים עיוור בפרוטוקול טיפול באופן עצמאי לספור הסעיפים היסטולוגית. השתמש בנקודת החיתוך ליניארי רשע (L m) כפרמטר למדידת המרחק של הקיר במחיצה הבין-מכתשי. לקבוע את L m באמצעות השלבים הבאים:
    1. לפתוח את התמונות של הסעיפים ב- Photoshop וצייר החריט-רשת על התמונה עם תורים ארוכים 550 5 מיקרומטר.
    2. לספור את מספר alveoli מעבר לקו רשת.
    3. לחשב את ה L m על-ידי חלוקת אורך הקו ברשת על ידי מספר alveoli. על כימות, תמונה לחמישה מדורים לכל העכבר. לרכוש עשר תמונות של כל אחד מהמקטעים (תמונה אחת לכל שדה), להעריך באופן אקראי. בעת בחירת שדה, להימנע שדות של דרכי הנשימה וכלי על-ידי הזזת שדה אחד קדימה או לכיוון אחר.
      הערה: הנתונים מוצגים גם זאת אומרת ± S.E.M. מבחן-t בלתי מזווג בוצע לשם השוואה בין עכברים החשופים אוויר ועכברים החשופים האוזון. שלוש חיות של כל קבוצה שימשו כדי לחשב את ההבדל המשמעותי. ערך-p של < 0.05 נחשב משמעותי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דוגמאות של תמונות תלת-ממד µCT של כל קבוצה מוצגים באיור 1. העכברים החשופים האוזון היה נפח הריאות הכולל גדול יותר באופן משמעותי (איור 1ו- b) LAA % (איור 1c) מאשר העכברים בקרת אוויר החשופים. נפח הריאות ואת LAA % נשארו גבוהות לאחר שישה שבועות של אוזון חשיפה31,32. נפח הריאות מוגברת LAA % מייצגים א...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה, אנו מציגים שיטה אמינה ליצירת מודל חדש של COPD. מודל זה OE לעומת דגמים אחרים (קרי, LPS או עיקרון השוויון הפוליטי מודלים), recapitulates את תהליך פתולוגי של מטופלי COPD. כי עישון סיגריות הוא החומר מסוכנים העיקרית שגורמת COPD בחולים אנושיים40, דגם CS נשאר הפופולרי ביותר COPD דגם41,42. עם זאת, דגם CS דורש a R 3 - 12 חודש & D תקופה עבור תרופות חדשות. לעומת דגם CS, המודל הנוכחי OE מצמצם תקופה דור 6-8 שבועות. הבחנו אמפיזמה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Z.W.S. וו. וו הם העובדים הנוכחי ומחזיקים אופציות של קבוצת וההתערבות הסלולר (סימול: CBMG). המחברים אחרים מצהירים כי יש להם אין אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים ברצוננו להביע תודה מר אדם מאוד צ'ין (שנגחאי בריאות הציבור קלינית במרכז) לסיוע טכני עם ההערכה µCT ב פרוטוקול זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
בעכברי BALB/cמעבדה Slac, שנחאי, סיןN/Aנקבות עכברי BALB/c בנות 7 עד 9 שבועות.
כלובים מאווררים בודדיםסוהאנג, שנחאי, סיןמספר דגם: MU64S7הכלובים שימשו לשיכון עכברים במתקן לבעלי חיים.
איטום קופסת פרספקססוהאנג, שנחאי, סיןN/Aהקופסה שימשה להכיל את מחולל האוזון. עכברים נחשפו לאוזון בתוך הקופסה.
גנרטור חשמליסנדר אוזוניזר, Uetze-Eltze, גרמניהדגם 500 המכשיר שימש לייצור אוזון.
בדיקת אוזוןATi Technologies, Ashton-U-Lyne, מנצ'סטר רבתי, בריטניהאוזון 300המכשיר שימש לניטור ובקרה של ייצור האוזון.
Pelltobarbitalum natricumSigma, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בP3761עכברים הורדמו על ידי הזרקה תוך-צפקית של pelltobarbitalum natricum.
טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבתGE Healthcare, לונדון, אונטריו, קנדהRS0800639-0075מכשיר זה שימש לרכישת תמונות של הריאה.
Micro-view 2.01 תוכנת ABAGE Healthcare, לונדון, ON, קנדהMicro-view 2.01 מכשיר זה שימש לשחזור הריאה ולניתוח נפח LAA של הריאה.
מכונת הליכון דואנשי, האנגג'ואו, ג'ג'יאנג, סיןDSPT-208מכונה זו הייתה usd לבדיקת עייפות.
פלתיסמוגרף גוףeSpira™ מערכת תמרונים כפויים, EMMS, אדינבורו, בריטניהמערכת תמרונים כפוייםמכשיר זה שימש לבדיקת תפקוד ריאתי של ספירומטריה.
מכונת הנשמהeSpira&Trade; מערכת תמרונים כפויים, EMMS, אדינבורו, בריטניהמערכת תמרונים כפוייםמכשיר זה שימש לבדיקת תפקוד ריאתי של ספירומטריה.
צנטריפוגת ספינר שקופיותדנוויל סיינטיפיק, הוליסטון, מסצ'וסטס, ארה"בC1183 הוא שימש לסיבוב תאי BALF על שקופיות.
Wright StainingHanhong, שנגחאי, סיןRE04000054  הוא שימש להכתמת מקרופאגים, נויטרופילים ב-BALF התלוי.
המוציטומטרהאוסר סיינטיפיק, הורשאם, פנסילבניה, ארה"ב4000הוא שימש לספירת תאים.
IL-1 ובטא;אבקאם, קיימברידג', MA, ארה"ab100704הם שימשו לבדיקת הגורמים המתאימים בסרום.
IL-10Abcam, קיימברידג', MA, ארה"ab46103הם שימשו לבדיקת הגורמים המתאימים בסרום.
TNF ואלפא;אבקאם, קיימברידג', MA, ארה"ab100747הם שימשו לבדיקת הגורמים המתאימים בסרום.
פרפורמלדהיד סיגמא, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בP6148הריאה נופחה ב-4% פרפורמלדהיד.
פרפיןHualing, שנגחאי, סין56#הוא שימש להטמעת הריאה.
מיקרוטום רוטרילייקה, וצלר,  הסן, גרמניהRM2255הוא שימש לחיתוך הריאה.
Hgaematoxylin ו-Eosin (H& ה) תמיסת צביעהSolarbio, בייג'ינג, סיןG1120H& צביעה E נעשתה לניתוח מורפומטרי.
מיקרוסקופ שדה בהיר זקוףאולימפוס, סנטר ואלי, פנסילבניה, ארה"בCX41הוא שימש להדמיית H& שקופיות מכתים E.
Adobe Photoshop 12Adobe, סן חוזה, קליפורניה, ארה"בAdobe Photoshop 12הוא שימש לספירת מספר הנאדיות ב-H& תמונות מוכתמות E.
פריזמה GraphPad 5תוכנת Graphpad בע"מ, סן דייגו, קליפורניהפריזמה GraphPad 5הוא שימש לניתוח נתונים והפקת דמויות.
במחקר זה נעשה שימוש חיית ב ב ב

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lozano, R., et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2095-2128 (2012).
  2. Chapman, K. R., et al. Epidemiology and costs of chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 27, 188-207 (2006).
  3. Afonso, A. S., Verhamme, K. M., Sturkenboom, M. C., Brusselle, G. G. COPD in the general population: prevalence, incidence and survival. Respir Med. 105, 1872-1884 (2011).
  4. Rabe, K. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: GOLD executive summary. Am J Respir Crit Care Med. 176, 532-555 (2007).
  5. Ogata-Suetsugu, S., et al. Amphiregulin suppresses epithelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. Biochem Biophys Res Communi. 484, 422-428 (2017).
  6. Oliveira, M. V., et al. Characterization of a Mouse Model of Emphysema Induced by Multiple Instillations of Low-Dose Elastase. Front Physiol. 7, 457(2016).
  7. Vernooy, J. H., Dentener, M. A., van Suylen, R. J., Buurman, W. A., Wouters, E. F. Long-term intratracheal lipopolysaccharide exposure in mice results in chronic lung inflammation and persistent pathology. Am J Respir Cell Mol Biol. 26, 152-159 (2002).
  8. Birrell, M. A., et al. Role of matrix metalloproteinases in the inflammatory response in human airway cell-based assays and in rodent models of airway disease. J Pharm Exp Ther. 318, 741-750 (2006).
  9. Gamze, K., et al. Effect of bosentan on the production of proinflammatory cytokines in a rat model of emphysema. Exp Mol Med. 39, 614-620 (2007).
  10. Vanoirbeek, J. A., et al. Noninvasive and invasive pulmonary function in mouse models of obstructive and restrictive respiratory diseases. Am J Respir Cell Mol Biol. 42, 96-104 (2010).
  11. Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, 1-15 (2008).
  12. Huh, J. W., et al. Bone marrow cells repair cigarette smoke-induced emphysema in rats. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301, 255-266 (2011).
  13. Schweitzer, K. S., et al. Adipose stem cell treatment in mice attenuates lung and systemic injury induced by cigarette smoking. Am J Respir Crit Care Med. 183, 215-225 (2011).
  14. Guan, X. J., et al. Mesenchymal stem cells protect cigarette smoke-damaged lung and pulmonary function partly via VEGF-VEGF receptors. J Cell Biochem. 114, 323-335 (2013).
  15. Gu, W., et al. Mesenchymal stem cells alleviate airway inflammation and emphysema in COPD through down-regulation of cyclooxygenase-2 via p38 and ERK MAPK pathways. Sci Rep. 5, 8733(2015).
  16. Cordasco, E. M., VanOrdstrand, H. S. Air pollution and COPD. Postgrad Med. 62, 124-127 (1977).
  17. Berend, N. Contribution of air pollution to COPD and small airway dysfunction. Respirology. 21, 237-244 (2016).
  18. DeVries, R., Kriebel, D., Sama, S. Outdoor Air Pollution and COPD-Related Emergency Department Visits, Hospital Admissions, and Mortality: A Meta-Analysis. COPD. 14 (1), 113-121 (2016).
  19. Penha, P. D., Amaral, L., Werthamer, S. Ozone air pollutants and lung damage. IMS Ind Med Surg. 41, 17-20 (1972).
  20. Stern, B. R., et al. Air pollution and childhood respiratory health: exposure to sulfate and ozone in 10 Canadian rural communities. Environ Res. 66, 125-142 (1994).
  21. Tager, I. B., et al. Chronic exposure to ambient ozone and lung function in young adults. Epidemiology. 16, 751-759 (2005).
  22. Romieu, I., Castro-Giner, F., Kunzli, N., Sunyer, J. Air pollution, oxidative stress and dietary supplementation: a review. Eur Respir J. 31, 179-197 (2008).
  23. Hemming, J. M., et al. Environmental Pollutant Ozone Causes Damage to Lung Surfactant Protein B (SP-B). Biochemistry. 54, 5185-5197 (2015).
  24. Chu, H., et al. Comparison of lung damage in mice exposed to black carbon particles and ozone-oxidized black carbon particles. Sci Total Environ. 573, 303-312 (2016).
  25. Jin, M., et al. MAP4K4 deficiency in CD4(+) T cells aggravates lung damage induced by ozone-oxidized black carbon particles. Environ Toxicol Pharmacol. 46, 246-254 (2016).
  26. Brusselle, G. G., Joos, G. F., Bracke, K. R. New insights into the immunology of chronic obstructive pulmonary disease. Lancet. 378, 1015-1026 (2011).
  27. Valavanidis, A., Vlachogianni, T., Fiotakis, K., Loridas, S. Pulmonary oxidative stress, inflammation and cancer: respirable particulate matter, fibrous dusts and ozone as major causes of lung carcinogenesis through reactive oxygen species mechanisms. Int J Environ Res Public Health. 10, 3886-3907 (2013).
  28. Medina-Ramon, M., Zanobetti, A., Schwartz, J. The effect of ozone and PM10 on hospital admissions for pneumonia and chronic obstructive pulmonary disease: a national multicity study. Am J Epidemiol. 163, 579-588 (2006).
  29. Lee, I. M., Tsai, S. S., Chang, C. C., Ho, C. K., Yang, C. Y. Air pollution and hospital admissions for chronic obstructive pulmonary disease in a tropical city: Kaohsiung, Taiwan. Inha Toxicol. 19, 393-398 (2007).
  30. Triantaphyllopoulos, K., et al. A model of chronic inflammation and pulmonary emphysema after multiple ozone exposures in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 300, 691-700 (2011).
  31. Li, F., et al. Effects of N-acetylcysteine in ozone-induced chronic obstructive pulmonary disease model. PLoS ONE. 8, e80782(2013).
  32. Li, F., et al. Hydrogen Sulfide Prevents and Partially Reverses Ozone-Induced Features of Lung Inflammation and Emphysema in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 55, 72-81 (2016).
  33. Rycroft, C. E., Heyes, A., Lanza, L., Becker, K. Epidemiology of chronic obstructive pulmonary disease: a literature review. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 7, 457-494 (2012).
  34. Washko, G. R., et al. Airway wall attenuation: a biomarker of airway disease in subjects with COPD. J Appl Physiol. 107, 185-191 (2009).
  35. Yamashiro, T., et al. Quantitative assessment of bronchial wall attenuation with thin-section CT: An indicator of airflow limitation in chronic obstructive pulmonary disease. AJR Am J Roentgenol. 195, 363-369 (2010).
  36. Tang, X., et al. Arctigenin efficiently enhanced sedentary mice treadmill endurance. PLoS ONE. 6, e24224(2011).
  37. Schmidt, G. A., et al. Official Executive Summary of an American Thoracic Society/American College of Chest Physicians Clinical Practice Guideline: Liberation from Mechanical Ventilation in Critically Ill Adults. Am J Respir Crit Care Med. 195, 115-119 (2017).
  38. ATS Committee on Proficiency Standards for Clinical Pulmonary Function Laboratories. ATS statement: guidelines for the six-minute walk test. Am J Respir Crit Care Med. 166, 111-117 (2002).
  39. Shigemura, N., et al. Autologous transplantation of adipose tissue-derived stromal cells ameliorates pulmonary emphysema. Am J Transplant. 6, 2592-2600 (2006).
  40. Bchir, S., et al. Concomitant elevations of MMP-9, NGAL, proMMP-9/NGAL and neutrophil elastase in serum of smokers with chronic obstructive pulmonary disease. J Cell Mol Med. , 1-12 (2016).
  41. Fricker, M., Deane, A., Hansbro, P. M. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Expert Opin Drug Discov. 9, 629-645 (2014).
  42. Perez-Rial, S., Giron-Martinez, A., Peces-Barba, G. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Arch Bronconeumol. 51, 121-127 (2015).
  43. Antunes, M. A., et al. Effects of different mesenchymal stromal cell sources and delivery routes in experimental emphysema. Respir Res. 15, 118(2014).
  44. Celli, B. R., MacNee, W., Force, A. E. T. Standards for the diagnosis and treatment of patients with COPD: a summary of the ATS/ERS position paper. Eur Respir J. 23, 932-946 (2004).
  45. U.S. Preventive Services Task Force. Screening for chronic obstructive pulmonary disease using spirometry: U.S. Preventive Services Task Force recommendation statement. Ann Intern Med. 148, 529-534 (2008).
  46. Ward, R. E., et al. Design considerations of CareWindows, a Windows 3.0-based graphical front end to a Medical Information Management System using a pass-through-requester architecture. Proc Annu Symp Comput Appl Med Care. , 564-568 (1991).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

COPD

מאמרים קשורים