ומכניקה מורכבות בסביבות נטורליסטי הדורשים תיאום זהיר של הגפיים כולל אזורים של קליפת הקודקוד. הפרוטוקול הבא המתאר את השימוש הפיך קירור-induced הביטול כדי להדגים את התפקיד של אזור הקודקוד 5 ב מונחה זיכרון ממכשולים של החתול הליכה.
מאמר שיטה
ומכניקה מורכבות בסביבות נטורליסטי הדורשים תיאום זהיר של הגפיים כולל אזורים של קליפת הקודקוד. הפרוטוקול הבא המתאר את השימוש הפיך קירור-induced הביטול כדי להדגים את התפקיד של אזור הקודקוד 5 ב מונחה זיכרון ממכשולים של החתול הליכה.
על שטח מורכבות, נטורליסטי, מידע חושי על מכשול סביבתי יכול לשמש כדי להתאים במהירות את תנועות גינקולוגיות על הימנעות. לדוגמה, אצל חתולים, מידע חזותי של מכשול הממשמש ובא יכול לווסת לדרוך על הימנעות. הסתגלות גינקולוגיות יכולות להתרחש גם עצמאית של חזון, כפי פתאומי תשומות מישוש ברגל על ידי מכשול הצפוי יכול לשנות הצעידה של כל ארבע רגליים על הימנעות. תאום גינקולוגיות מורכב כרוך מבנים supraspinal, כגון קליפת הקודקוד. פרוטוקול זה מתאר את השימוש הפיך, קירור-induced קורטיקלית שחרור משרות כדי להעריך את קליפת הקודקוד תרומות מכשול מונחה זיכרון ומכניקה של החתול. לולאות קירור קטנים, המכונה cryoloops, עוצבו במיוחד כדי לבטל אזורים נפרדים עניין כדי להעריך את תרומתה התנהגות גלויה. שיטות כאלה שימשו התירי את התפקיד של אזור הקודקוד 5 ב מונחה זיכרון ממכשולים של החתול.
על פני השטח נטורליסטי, לא אחיד, מידע חושי על מכשול, אשר ניתן לרכוש דרך החזון או מגע, באפשרותך לשנות במהירות ומכניקה של הימנעות. תיאום זהיר של תנועות דריכה כולל אזורים קורטיקליים מספר1,2. לדוגמה, אזורי קורטקס מוטורי3,4 ו קליפת הקודקוד5,6,7 היו מעורבים במהלך משימות מורכבות גינקולוגיות כגון ממכשולים. ב quadrupedal בעלי חיים, האפנון הצעד הנדרש ממכשולים חייב להרחיב את הרגליים הקדמיות ואת hindlegs. אם ומכניקה קדימה מתעכב בין סיווג מכשול וריסקה ו- hindleg (אשר ייתכן מתעוררות כאשר חיה דורכת בזהירות דרך טרף לעקוב אחרי סביבה מורכבות, נטורליסטי), מידע אודות המכשול נשמר בזיכרון משמש כדי להנחות hindleg חוצה המכשול פעם הליכה קורות חיים.
טכניקות ניסויית שמטרתה לבטל אזורים קורטיקליים דיסקרטית ניתן ללמוד תרומות קורטיקלית מכשול מונחה זיכרון ומכניקה. קירור-induced לנטרול קורטיקלית מספק הפיך, אמינים ובעלי לשחזור שיטה להערכת התרומה. התנהגות גלויה8קורטיקלית. Cryoloops עשוי נירוסטה צינורות הם בצורת ספציפי לאזור בקליפת המוח של עניין, הבטחת מאוד סלקטיבי ודיסקרטי שחרור משרות של לוקוסים. מהרגע בו הוקנו, מתנול צוננת דרך לומן של cryoloop מתקררת האזור של הקורטקס ישירות מתחת לתמונה כדי < 20 º C. מתחת לטמפרטורה זו קריטית, הסינאפסית מעוכבת באזור של קליפת ישירות מתחת לתמונה. יכול להיות הפוך כזה הביטול פשוט על ידי הפסקת הזרימה של מתנול. בשיטה זו נעשה שימוש כדי ללמוד תרומות קורטיקלית עיבוד חושי והתנהגויות9,10,11,12,13,14,15 , 16 , 17, כמו גם שליטה מוטורית של תנועות העין saccadic18 ומכשול מונחה זיכרון ומכניקה19.
המטרה של פרוטוקול זה היא להשתמש deactivations קירור-induced הפיך כדי להעריך את מעורבותם של אזורים קורטיקליים הקודקוד לתיאום גינקולוגיות של החתול. באופן ספציפי, גפיים מכשול מונחה זיכרון נבדק עם או בלי קליפת הקודקוד פעיל. שיטות אלה שימשו להפגין בהצלחה את התפקיד של אזור הקודקוד 5 ב מונחה זיכרון ממכשולים החתול הליכה19.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים נערכו בהתאם המדריך של המועצה הלאומית למחקר על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (המהדורה השמינית; 2011), המועצה הקנדית על בעלי חיים טיפול של מדריך טיפול, שימוש של חיות ניסוי (1993), היו אושרה על ידי הוועדה שימוש בבעלי חיים מאוניברסיטת מערב אונטריו של מועצת האוניברסיטה על טיפול בעלי חיים.
ההליך הבא ניתן ליישם ניסויים לומד תרומות קורטיקלית גינקולוגיות שליטה ברכב ההליכה.
1. מכשיר
2. אימון נהלים
הערה: עבור ייבוא נתונים מוצלחת, תקופה של אימון מקדים בדיקה התנהגותית מבטיחה כי כל בעל חיים כהלכה שאמבטיה חדר ו מכשירי הבדיקה. חשיפה חוזרת ונשנית סביבה הרומן יסייע להפחית התנהגויות מלחיץ מבהילה או אחרים. להתאקלמות עשויים להשתנות בין חיות, עשויים לדרוש 1-2 חודשים של אימון. הפעלות להתאקלמות הראשוני עשוי להיות עד 5 דקות אורך בהתאם המיקוד ואת המוטיבציה של החיה לאכול. הפעלות עוקבות צריך שואפים להגדיל את משך זמן זה בעל מוטיבציה גבוהה לעבודה (בדרך כלל בסביבות 20-25 דקות).
3. התנהגות הדרכה ובדיקות פרוטוקול
הערה: הזיכרון מכשול מוערך בשתי פרדיגמות: משימה זיכרון חזותי תלויי-מכשול ולאחר פעילות זיכרון תלוי-מישוש מכשול. שתי פרדיגמות אמור לשמש במהלך ההכשרה הראשונית, בדיקות עוקבות.
4. וידאו ניתוחים
הערה: כדי להעריך מכשול זיכרון, ניתוחים במהלך ההכשרה הראשונית, בדיקות עוקבות אחרי קירור לולאה ההשתלה כרוכה לכימות שיא הגובה שלב שלב אישור, את המרחק האופקי בין הבוהן לבין מכשול בשיאו של כל שלב עבור גם ויזואלית וגם חוש המישוש פרדיגמות (איור 2C).
5. קירור לולאה (Cryoloop) השרשה
6. פרוטוקול קירור בקליפת המוח
7. אימות היקף קירור
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה שימש בהצלחה לבחון תרומות קליפת הקודקוד מכשול בזיכרון החתול הליכה19. במחקר זה, cryoloops שהיו מושתלים דו צדדיים מעל הקודקוד אזורים 5 ו 7 מתוך שלושה מבוגרים (> בגיל 6 חודשים) חתולות (איור 5A). בעלי חיים היו העריך בהדפוס זיכרון מכשול מישוש בהיעדר קירור (חם, בקרת תנאי), או כאשר שטח 5 או 7 היה דו צדדיים שהפעלתם בוטלה.
תוצאות המחקר הזה נציג להדגים כי כאשר אזור 5 היה ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרדיגמה שתואר מעסיקה קירור-induced deactivations של אזורים קורטיקליים נפרדים באמצעות את cryoloop על מנת ללמוד מכשול מונחה זיכרון ומכניקה של החתול. הפארדיגמות זיכרון חזותי של חוש המישוש מכשול פשוטים למדי לבעלי לביצוע כפי שהם לנצל נטורליסטי התנהגויות גינקולוגיות מתרחשות במינימום מאמץ, כאשר חיים הוא מוטיבציה כדי לעקוב אחר מקור מזון נע. לפיכך, הרוב המכריע של תקופת ההכשרה מוקדש הסתגלות החיה את בדיקת חדר וקירור ציוד. רוב בעלי החיים דורשים חשיפה חוזרת ונשנית לבישת הרתמה, להיות קשורה דרך הרצועה לפני הליכה בנוחיות ובטבעיות על המ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים אין לחשוף.
אנו להכיר בהכרת תודה התמיכה של מוסדות הקנדי למחקר בריאות, מדעי הטבע, הנדסה מחקר המועצה של קנדה (NSERC), קרן קנדה לחדשנות. . סי-וו נתמכה על ידי אלכסנדר גרהם בל קנדה בוגר מלגה (NSERC).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מערכות | פיתוח הדמיה של מצלמה IDS GmbH | דגם: UI-5240CP-C-HQ | |
| צינורות יניקה | Restek | 25306 | קצה לא אוגן שקוע במאגר המתנול בעוד הקצה האוגן מחובר למשאבה |
| Pump | Fluid Metering, Inc. | דגם: QG 150 | |
| בקבוק ואקום Nalgene Dewar | Sigma-Aldrich | F9401 | |
| צינורות טפלון | Ezkem | A051754 | |
| מדחום מיקרו-בדיקה | Physitemp | דגם: BAT-12 | |
| אביזרי קצה צינור אוגן | Valco Instruments Co. Inc. | CF-1BK | מגוון צבעים זמינים לקידוד צבעים. החבילות כוללות את אותו מספר מכונות כביסה כמו אביזרי |
| Washers | Valco Instruments Co., Inc. | CF-W1 | דסקיות נוספות |
| ערכת Flanging Pro | Liquid GmbH | 201553 | |
| מחבר צינורות | Restek | 25323 | |
| חותך צינורות | Restek | 25069 | |
| מחבר צמד תרמי זכר | Omega | SMPW-T-M | משמש ליצירת חיבור כבל למדחום |
| חוט צמד תרמי | Omega | PP-T-24S | משמש לייצור חיבור כבל למדחום |
| MATLAB | MathWorks | n/a |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה