מאמר שיטה

הנדסת רקמות הקרנית: במבחנה מודל של אינטראקציות סטרומה-עצב של הקרנית האנושית

DOI:

10.3791/56308

⸱

24 בינואר 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department of Cell Biology, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Department of Ophthalmology/Dean McGee Eye Institute, University of Oklahoma Health Sciences Center, 3Department of Physiology, Harold Hamm Diabetes Center, University of Oklahoma Health Sciences Center

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר את הרומן תלת מימדי במבחנה מודל, שבו תאי סטרומה הקרנית ואת תאים עצביים מתורבתים יחד כדי לסייע בדיקה והבנה של האינטראקציות של תא שני הסוגים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הנדסת רקמות זכה להכרה משמעותית בשל הביקוש הגבוה החלפת הקרנית האנושית בערך 10 מיליון אנשים ברחבי העולם הסובלים אובדן ראייה הקרנית1. כדי לענות על הביקוש קיימא הקרנית האנושית, התקדמות משמעותית ברקמה תלת מימדי (3D) הנדסה הפך2,3,4. מודלים אלה קרנית נע בין מערכות חד שכבתי פשוטה דגמי מרובה שכבות, שמוביל תלת-ממד מלא-עובי הקרנית ששווי הערך2.

עם זאת, השימוש של הקרנית רקמות מהונדסים 3D בהקשר של במבחנה המחלה מודלים למד עד תאריך חסר דמיון המבנה מרובה שכבות תלת-ממד רקמת הקרנית, פונקציה של הרשתות של סוגי תאים שונים (כלומר, חוצפה, אפיתל stroma, אנדותל)2,3. בנוסף, גדל הביקוש במבחנה מודלים רקמת הקרנית בניסיון להפחית את הניסויים בחיות עבור מוצרים פרמצבטיים. לפיכך, דגמים מתוחכמים יותר נדרשים על מנת שיתאימו יותר מערכות לדרישות הפיזיולוגיות האנושי, הפיתוח של מודל זה יותר רלוונטי האוכלוסייה המטופלת הוא הכרחי. בהתחשב בכך סוגי תאים מרובים הקרנית מושפעים ומחלות dystrophies, כגון קרטוקונוס, Keratopathy סוכרתית, פוקס, מודל זה כולל דגם תלת-ממד תרבות משותפת של ראשי האדם הקרנית fibroblasts (HCFs) תורמים בריא, נוירונים מ הקו תא SH-SY5Y. זה מאפשר לנו לראשונה לחקור את האינטראקציות בין סוגי שני תאים בתוך הרקמה הקרנית האנושית. אנו מאמינים כי מודל זה יכול באופן פוטנציאלי לנתח המנגנונים הבסיסית המשויכת את האינטראקציות סטרומה-עצב של מחלות קרנית כי התערוכה עצב נזקים. דגם תלת-ממד זה מראות הטבע אנטומית, פיזיולוגית בסיסית של ה רקמת הקרנית ויוו , יכול לשמש בעתיד ככלי עבור חוקרים פגמים הקרנית, כמו גם הקרנת את היעילות של סוכנים שונים לפני הניסויים בחיות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בגוף האדם, הקרנית היא הרקמה innervated ביותר. העצבים אחראים על תחושות שונות כמו מגע, כאב, טמפרטורה, ויש גם תפקיד חיוני ריפוי פצעים, ממצמץ רפלקסים, לקרוע הייצור, ועל הפרשת5,6,7. הקרנית, גזעי עצב סטרומה נובעים מקלעת limbal והזן stroma הקרנית היקפיים בצורה רדיאלית. הארגון עצב סטרומה במקביל lamellae קולגן, הם עוד סניף לתוך קטנות fascicles הם התקדמותך לעבר שטחי משתית5,8. סיבי העצב עוד לחדור את שכבת האפיתל, לפיכך, העצבוב נרחב מתפרסת על פני אפיתל הקרנית משתית. לכן, העצבוב יש תפקיד חיוני במדינת בריאים וחולים של הקרנית. ב פרוטוקול זה, אנו חושפים את ההתקדמות של הרומן 3D במבחנה דוגמן, הוא הראשון מסוגו כדי לחקות את האינטראקציות סטרומה-עצב ויוו . שורת התאים SH-SY5Y נעשה שימוש במחקר זה, כי הוא אחד הקווים הוותיקים ביותר, טוב מאופיין המשמשות ללימוד צמיחה עצביים. שורת התאים SH-SY5Y כבר מתואר לייצר שני מחסידי המצע (S-type), neuroblastic (מסוג N) תאים זה יכול לעבור transdifferentiation9. כתוצאה מכך, אף-על-פי קו תא זה נגזר מתוך מבחר טריפל subclone רצופות של תאים מסוג N, הוא מכיל גם מספר קטן של S-type תאים שעברו התמיינות לתוך הנוירונים באמצעות retinoic חומצה, נגזר המוח neurotrophic פקטור9. זה מספק כלי זה עשוי להוביל להבנה טובה יותר של הקרנית הסיבוכים עם רטינופתיה סוכרתית (DM) ומחלות אחרות עינית. בשל הקשיים הקשורים בהשגת culturing נוירונים של חולים עם מחלה עינית, מודל זה 3D במבחנה מספק השלכות משמעותית הלומדים את האינטראקציות עצביים, איתות עם stroma הקרנית.

תנאים חולה לעיתים קרובות משפיעים על רקמות שונות בגוף בקנה מידה גדול מאוד, המוביל אל איכות חיים בסכנה. Dystrophies עינית סיבוכים נפוצים קשורה לעיתים קרובות עם מחלות מערכתיות ולהוביל אובדן של חדות הראייה או אובדן ראייה ואפילו קבע. מחקרים מקיפים חיוניים לעתים קרובות לצורך הבנה טובה יותר של מצב המחלה, כמו גם את ההשפעות ברמה התאית הבזליים. לחקור את ההשפעות של מחלות כאלה, פותחו מודלים שונים ב- vivo ו- in vitro לקשרי עם העזרה של רקמות יישומי הנדסה. יישומי הנדסת רקמות הקרנית משכו עניין רב ברחבי בתחומים השונים של מדעי10,11,12,13,14, אך ישנן מגבלות הגדולות עדיין במהלך יישום בפועל, לרבות הקרנית להשתיל דחיות, דלקות וצלקות10,11,12,13,14. ישנם מספר מחקרים יש בהצלחה פיתח והקים שונים במבחנה מודלים3,15,16,17,18, 19,20,21,22,23,24,25,26. דגמי תלת-ממד במבחנה הם המבטיחים ביותר עניין מדעי רב. דגמי תלת-ממד ידועים יותר לשקף ויוו הסלולר האירועים ופיזיולוגיים הן קריטיות במהלך פיברוזיס, פצע ריפוי15,27,28,29. מודלים אלה במבחנה לשחק תפקיד חשוב למצוא גישות טיפוליות חדשות לטיפול במצבים למחלות שונות כולל סיבוכים הקרנית. למרות תפקיד קריטי של העצבוב בפונקציות הקרנית, הפך מעט מאמץ כדי לקדם את הפצת במערכת העצבים ההיקפית בתוך הקרנית בונה רקמות מהונדסים2,3. עם זאת, המבנה תא המוצע 3D במבחנה לחקות את רקמת המטרה כדי להשיג את הפונקציונליות הרקמה הרצויה.

בעוד keratopathy סוכרתית הוא יישום ברור עבור המודל המתואר כאן בשל הליקויים עצביים, ישנן מספר מחלות הקרנית אחרות יכולים להפיק תועלת מודל אנושי במבחנה כולל dystrophies קרטוקונוס, פוקס. דגם התלת-ממד שלנו מגיח זה פרוספקט, מציע הפיתוח של ייצוג במבחנה של רקמת הקרנית כדי להעריך תרופות והבטיחות של תרופות חדשות עינית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה עוקב אחר הקווים המנחים של ועדת הבדיקה אוניברסיטת אוקלהומה למדעי הבריאות מרכז/המוסדי (IRB #4509). כל חלקי הפרוטוקול פגש את העיקרים של ההכרזה של הלסינקי. דוגמאות הקרנית התקבלו פיתוח לאומי, מכון מחקר (NDRI) והגדה העין אריות אוקלהומה.

1. בידוד תאי ראשי

  1. עם קבלת דגימות רקמות הקרנית האנושית, להעביר את הרקמות 21.5 ס מ2 פטרי המכילות 2 מ ל תמיסת סטרילית של Dulbecco באגירה פוספט (DPBS) (1 x).
  2. לגרד ולהסיר את אפיתל הקרנית על-ידי הצבת את הקרנית כיפת פנים כלפי מעלה. כדי להבטיח הסרה מלאה, לגרד את השכבה אפיתל ביסודיות בעזרת סכין גילוח בזווית של 45°. בשלב הבא, הפוך את הקרנית הכיפה, הפנים כלפי מטה, ביסודיות שתגרד אנדותל מ stroma עם סכין גילוח בזווית של 45° כדי להבטיח הסרה מלאה. לשטוף את הרקמה סטרומה עם DPBS.
  3. חותכים את רקמות סטרומה לחתיכות קטנות, באמצעות להב כירורגי מספר 10, שמירה על החלקים סטרומה רטוב כל הזמן באמצעות DPBS. להרים חתיכות סטרומה עם מלקחיים סטרילי ומקום לתוך בקבוקון תרבות T25 ללא מדיה (4 או 5 חתיכות של 2 x 2 מ"מ רקמות לאדם את הבקבוק).
  4. אפשר את explants לדבוק בתחתית הבקבוק ב 37 מעלות צלזיוס במשך כ- 30-40 דקות. ברגע דבקה, להוסיף לאט המינימום חיוני בינוני רשנה (EMEM) המכיל 10% סרום שור עוברית (FBS) ו 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic את. הבקבוק מבלי להפריע את explants.
  5. הנח בעדינות את הבקבוק בחממה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2. להשאיר את explants ללא הפרעה עד והתאים מתחילים בידוד ושל העברת בתוך הבקבוק. לאחר כ- 2-4 שבועות, תאים כדאי להגיע למפגש 100%. על 100% הנהרות, המעבר את התאים על ידי הסרת התקשורת תרביות רקמה, לשטוף את התאים עם DPBS.
  6. להוסיף טריפסין לתאים ולאחר מכן דגירה אותם ב 37 º C. לאחר כ 5 דקות, הצג את התאים תחת מיקרוסקופ אור כדי לאשר כי הם יש תלושים, אז לעצור את proteolysis על-ידי הוספת מדיה טריים.
  7. העברת התליה תא לתוך צינור חרוטי 15 mL עבור צנטריפוגה-1,000 x g... להסיר את תגובת שיקוע בזהירות מבלי להפריע בגדר והשהה את התאים EMEM טריים 10% FBS 1% לאנטיביוטיקה. לספור את התאים ואת זרע על עונה 1 פרק 106 תאים T75 הבקבוק תרבות להרחבה נוספת עם EMEM טרי 1% FBS 1% לאנטיביוטיקה.

2. ראשי HCFs תרבות, מכלול מבנים תלת-ממד

  1. להרכיב 3D מבנים מן explants EMEM בעבר מבוגר ב 10% FBS 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic, מעבר, הרוזן HCFs.
  2. זרע כ עונה 1 פרק 106 תאים/טוב של HCFs ראשי-פוליקרבונט מוסיף קרום עם נקבוביות 0.4-מיקרומטר מן המבנה התלת-ממד, יחד עם 1.5 מ של טרי EMEM 10% FBS 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic לחלק העליון של הבונה. להוסיף עוד כ- 1.5 מ ל אותה מדיה לתחתית של כל המבנה.
  3. לאחר 24 שעות של התא זריעה, התרבות התאים עם EMEM 10% FBS 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic, מגורה בחומצה 2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic 0.5 מ מ (ויטמין C) על ידי הוספת 1.5 mL בחלק העליון ו- mL 1.5 על החלק התחתון של כל המבנה.
  4. לשמור על התרבויות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 למשך 3 שבועות והענק מדיה טריים בכל יום במהלך תקופת המחקר כולו. אין מעבר נוספת נדרשת.

3. תא בידול ותרבויות שיתוף

  1. לאחר 3 שבועות, להוסיף 8 x 103 תאים/טוב של תאים נוירובלסטומה האנושי SH-SY5Y בראש 3D בעבר שהורכב בונה המכילה 1.5 מ ל EMEM המכיל 10% FBS, 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic, ו- 0.5 מ מ 2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic חומצה (ויטמין C).
    1. אפשר לגדול על גבי תאי סטרומה קרנית לפחות 24 שעות לפני ביצוע תאית התמיינות התאים נוירובלסטומה SH-SY5Y.
  2. ליזום SH-SY5Y תאית התמיינות על ידי גירוי התאים עם EMEM המכיל 1% FBS ו 1.5 מיליליטר 10 מיקרומטר חומצה Retinoic מעל הבונה. להוסיף 1.5 מ ל מהל EMEM 10% FBS 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic 0.5 מ מ 2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic (ויטמין C) לתחתית של הבונה. שימו לב כי יש לבצע את הצעד חומצה Retinoic בחושך.
    1. להמשיך התרבות התאים בתקשורת בידול זה במשך 5 ימים.
  3. כאשר התאים מגיעים לשלב בידול, להחליף את התאים 1.5 מ של מדיה ללא סרום המכיל 2 nM של neurotrophic המוח-derived factor (BDNF) ו 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic להוסיף EMEM, על-ידי הוספת לחלק העליון של הבונה. להוסיף 1.5 מ ל מהל EMEM 10% FBS 1% אנטיביוטיקה/Antimycotic 0.5 מ מ 2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic (ויטמין C) לתחתית של הבונה. שימו לב כי יש לבצע את הצעד BDNF בחושך.
  4. התרבות התאים 2 ימים נוספים לפני עיבוד עבור כל ניתוח נוסף כמצוין בטבלה1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 1 היא תמונה מייצגת שלב אחר שלב של דגם תלת-ממד in vitro לקשרי עבודה. בשלב הראשון, תאים מבודדים מן הקרנית האנושית. לאחר מכן, הם גדל על קרום פוליקרבונט, גירוי עם ויטמין C להרכיב עצמית על ידי מטריצה תלת-ממד. מערכת זו לבנות 3D גורם הסינתזה של יישום מרובה שכבות הסלולר ויוו-כמו מטריקס סטרומה. לאחר מכן, נוירובלסטומה תאים הם נזרע על גבי תאי סטרומה ואחריו מתחילה התמיינות תאים עצביים. זה מוביל תרבות משותפת של הקרנית סטרומה תאים תאים עצביים במודל ת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מספר מחקרים התמקדו על פיתוח מודלים בבעלי חיים שונים יכולים לעזור לפתח הבנה טובה יותר של מחלות הקרנית וכן לגלות טיפולים. עם זאת, ערך משמעותי לבני ממחקרים אלה לא אומת. עד כה, מודלים שונים במבחנה יש כבר שפותחו ונחקרו נרחב עקב שלהם משמעות קלינית יוצא מן הכלל. המודל שלנו שנקבעו קודם 3D במבחנה הוא מערכת הרומן משמעותית תורם התקדמות מדע הרפואה מחקר חזון, מציג יכולת ללא רבב של recapitulating ויוו אירועים במבחנה28 , 29 ,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להרחיב שלנו כנה בזכות ד ר בן פאולר לעזרה טכנית שלו עם הניסויים TEM.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
רקמת קרנית בריאהדגימות NDRIמתורמים ללא טראומה עינית או מחלה מערכתית
Dulbecco' s Phosphate Buffered Solution (1X)Gibco by Life Technologies14190-144
מלקחיים סטרילייםFischer Scientific13-812-42Fisherbrand Dissecting Extra-Ped-Pointed Splinter Celinters
סכיני גילוח בקצה יחידPersonna270100
להבי אזמל כירורגיים סטריליים מס' 10להב כירורגי נוצה2976#10
Eagle' s Minimum Essential MediumATCC30-2003
סרום בקר עובריAtlanta BiologicalsS1155010% FBS נדרש להכנת מדיה
אנטיביוטיקה-אנטימיקוטיקה (100X)Gibco by Life Technologies15240-0621% אנטיביוטיקה-אנטימיקוטיקה נדרשת להכנת מדיה
0.05% טריפסין EDTA(1X)Gibco של Life Technologies25300062
מוסיף קרום פוליקרבונט עם 0.4-μ נקבוביותקורנינג קוסטאר3412
2-O-α-Dglucopyranosyl-L-חומצה אסקורבית (ויטמין C)סיגמא-אולדריץ'SMB00390-14יש להשתמש בריכוז של 0.5 מ"מ למחקר
בלוק שעווהVWR50-949-027
SH-SY5Y תאי נוירובלסטומהATCCSHSY5YATCC CRL-2266
חומצה רטינואיתסיגמא-אולדריץ'SRP3014-10UGיש להשתמש בריכוז סופי של 10uM
BDNFSigma-AldrichR2625-100MGיש להשתמש בריכוז סופי של 2nM
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)VWR-Alfa Aesar67-68-5Ultra Pure Grade-Sterile DMSO לשימוש
מדעי Nunc Cell Culture מטופל EasYFlasks (T25)Fisher Scientific12-565-351
תרבית תאים Nunc Thermo Scientific מטופלת EasYFlasks (T75)פישר סיינטיפיק12-565-349
תרמו

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pascolini, D., Mariotti, S. P. Global estimates of visual impairment: 2010. Br J Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2012).
  2. Rönkkö, S., Vellonen, K. -S., Järvinen, K., Toropainen, E., Urtti, A. Human corneal cell culture models for drug toxicity studies. Drug Delivery and Translational Research. 6 (6), 660-675 (2016).
  3. Ghezzi, C. E., Rnjak-Kovacina, J., Kaplan, D. L. Corneal tissue engineering: recent advances and future perspectives. Tissue Eng Part B Rev. 21 (3), 278-287 (2015).
  4. Shafaie, S., Hutter, V., Cook, M. T., Brown, M. B., Chau, D. Y. S. In Vitro Cell Models for Ophthalmic Drug Development Applications. BioResearch Open Access. 5 (1), 94-108 (2016).
  5. Shaheen, B. S., Bakir, M., Jain, S. Corneal nerves in health and disease. Surv Ophthalmol. 59 (3), 263-285 (2014).
  6. Beuerman, R. W., Schimmelpfennig, B. Sensory denervation of the rabbit cornea affects epithelial properties. Exp Neurol. 69 (1), 196-201 (1980).
  7. Heigle, T. J., Pflugfelder, S. C. Aqueous tear production in patients with neurotrophic keratitis. Cornea. 15 (2), 135-138 (1996).
  8. Wang, S., et al. In vitro 3D corneal tissue model with epithelium, stroma, and innervation. Biomaterials. 112, 1-9 (2017).
  9. Ross, R. A., Spengler, B. A., Biedler, J. L. Coordinate morphological and biochemical interconversion of human neuroblastoma cells. J Natl Cancer Inst. 71 (4), 741-747 (1983).
  10. Griffith, L. G., Naughton, G. Tissue engineering - Current challenges and expanding opportunities. Science. 295 (5557), (2002).
  11. Guo, X., et al. Morphologic characterization of organized extracellular matrix deposition by ascorbic acid-stimulated human corneal fibroblasts. Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (9), 4050-4060 (2007).
  12. Karamichos, D. Ocular tissue engineering: current and future directions. J Funct Biomater. 6 (1), 77-80 (2015).
  13. Karamichos, D., Brown, R. A., Mudera, V. Collagen stiffness regulates cellular contraction and matrix remodeling gene expression. J Biomed Mater Res A. 83 (3), 887-894 (2007).
  14. Ruberti, J. W., Zieske, J. D. Prelude to corneal tissue engineering - gaining control of collagen organization. Prog Retin Eye Res. 27 (5), 549-577 (2008).
  15. Karamichos, D., Guo, X. Q., Hutcheon, A. E., Zieske, J. D. Human corneal fibrosis: an in vitro model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (3), 1382-1388 (2010).
  16. Chen, F. M., Liu, X. Advancing biomaterials of human origin for tissue engineering. Prog Polym Sci. 53, 86-168 (2016).
  17. Priyadarsini, S., Sarker-Nag, A., Rowsey, T. G., Ma, J. X., Karamichos, D. Establishment of a 3D In Vitro Model to Accelerate the Development of Human Therapies against Corneal Diabetes. PLoS One. 11 (12), e0168845(2016).
  18. Karamichos, D., Hjortdal, J. Keratoconus: tissue engineering and biomaterials. J Funct Biomater. 5 (3), 111-134 (2014).
  19. Wilson, S. L., Yang, Y., El Haj, A. J. Corneal Stromal Cell Plasticity: In Vitro Regulation of Cell Phenotype Through Cell-Cell Interactions in a Three-Dimensional Model. Tissue Engineering Part A. 20 (1-2), 225-238 (2014).
  20. Proulx, S., et al. Reconstruction of a human cornea by the self-assembly approach of tissue engineering using the three native cell types. Molecular Vision. 16 (234-236), 2192-2201 (2010).
  21. Gonzalez-Andrades, M., et al. Establishment of a novel in vitro model of stratified epithelial wound healing with barrier function. Sci Rep. 6, 19395(2016).
  22. Hopkins, A. M., DeSimone, E., Chwalek, K., Kaplan, D. L. 3D in vitro modeling of the central nervous system. Prog Neurobiol. 125, 1-25 (2015).
  23. Schulz, S., et al. Natural Corneal Cell-Based Microenvironment as Prerequisite for Balanced 3D Corneal Epithelial Morphogenesis: A Promising Animal Experiment-Abandoning Tool in Ophthalmology. Tissue Engineering Part C-Methods. 20 (4), 297-307 (2014).
  24. Gao, J., Wang, Y., Zhao, X., Chen, P., Xie, L. MicroRNA-204-5p-Mediated Regulation of SIRT1 Contributes to the Delay of Epithelial Cell Cycle Traversal in Diabetic Corneas. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (3), 1493-1504 (2015).
  25. Koulikovska, M., et al. Enhanced regeneration of corneal tissue via a bioengineered collagen construct implanted by a nondisruptive surgical technique. Tissue Eng Part A. 21 (5-6), 1116-1130 (2015).
  26. Ljubimov, A. V., Saghizadeh, M. Progress in corneal wound healing. Progress in retinal and eye research. 49, 17-45 (2015).
  27. Zieske, J. D. Extracellular matrix and wound healing. Curr Opin Ophthalmol. 12 (4), 237-241 (2001).
  28. Karamichos, D., Hutcheon, A. E., Zieske, J. D. Transforming growth factor-beta3 regulates assembly of a non-fibrotic matrix in a 3D corneal model. J Tissue Eng Regen Med. 5 (8), e228-e238 (2011).
  29. Karamichos, D., Lakshman, N., Petroll, W. M. An experimental model for assessing fibroblast migration in 3-D collagen matrices. Cell Motil Cytoskeleton. 66 (1), 1-9 (2009).
  30. Karamichos, D., et al. Novel in Vitro Model for Keratoconus Disease. J Funct Biomater. 3 (4), 760-775 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

SH SY5YC

מאמרים קשורים