מאמר שיטה

אנליזת נשימה בזמן אמת באמצעות Nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה

DOI:

10.3791/56465

9 במרץ 2018

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול עבור אפיון ההרכב הכימי של והבל הפה בזמן אמת באמצעות nanoelectrospray משני יינון מצמידים ברזולוציה גבוהה ספקטרומטר מסה הוכח.

תקציר

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תרכובות אורגניות נדיפות (Voc) בריכוז עוררו עניין רב, מאז הם יכולים לשמש סמנים ביולוגיים עבור אבחון מחלת וחשיפה סביבתית בצורה לא פולשנית. בעבודה זו, אנו מציגים פרוטוקול כדי לאפיין את Voc בריכוז בזמן אמת באמצעות nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה (שניה-nanoESI-HRMS). המקור שניה-nanoESI תוצרת בית בקלות הוקם בהתבסס על מקור nanoESI מסחרי. מאות פסגות נצפתה המופחת-רקע ספקטרום המונית של והבל הפה, ואת הערכים דיוק מסת הם-4.0-13.5 עמודים לדקה ו--20.3-ppm 1.3 המצבים זיהוי יונים חיוביים ושליליים, בהתאמה. הפסגות שהוקצו להרכב אלמנטלים מדויקת על פי המסה מדויק דפוס איזוטרופי. פחות מ 30 s משמש למדידה נשיפה אחת, וזה לוקח בערך 7 דקות למדידות משוכפל שש.

מבוא

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

להתפתחות מהירה של שיטות אנליטיות מודרני, מאות חומרים אורגניים נדיפים (Voc) זוהו האנושי והבל הפה1. Voc אלו נובעות בעיקר מכתשי אוויר (~ 350 מ"ל עבור מבוגר בריא), שטח מת אנטומי אוויר (~ 150 מ ל)2, אשר מושפעות על ידי הגוף חילוף החומרים3,4,5,6,7 ,8 , זיהום סביבתי9, בהתאמה. כתוצאה מכך, אם מזוהה, Voc אלו הם מבטיחים כדי לשמש סמנים אבחון מחלת וחשיפה סביבתית בצורה לא פולשנית.

למרות ספקטרומטר מסה גז כרומטוגרפיה (GC-MS) היא השיטה הנפוצה ביותר לניתוח כמותיים של בריכוז Voc2, טכניקות MS ישיר, אשר פותחו עבור אנליזת נשימה בזמן אמת, יש יתרונות הגיע הזמן רזולוציה, הכנה מראש דוגמה פשוטה. טכניקות MS ישיר, כגון העברת פרוטון התגובה MS (PTR-MS)10, נבחר צינור זרימה יון MS (לנפות-MS)11, ספקטרומטריית electrospray משני יינון MS (SESI-MS)12,13 (גם בשם עקורה ספקטרומטריית electrospray יינון MS,14,EESI-MS15), עקבות גז באטמוספירה מנתח (טגה)16 ו פלזמה יינון MS (PI-MS)17 נחקרו בשנים האחרונות.

בין כל ישירה MS הטכניקות, SESI הוא ידוע יינון רך אוניברסלי טכניקה19,20,21; המקור זה קל להיות אישית, בשילוב לסוגים שונים של ספקטרומטרים המוני, למשל, זמן טיסה ספקטרומטר מסה8,15, מלכודת יונים מסה ספקטרומטר14 ו- orbitrap ספקטרומטר מסה12 ,18. עד עכשיו, SESI-MS בהצלחה שימש באבחון מחלות נשימה22, מודד שעון ביולוגי3,6,23, פרמקוקינטיקה7,8, ו חשיפת מסלולים מטבוליים4, וכו '. לאחרונה, מקור SESI מסחרי הפך זמין.

במחקר זה, מקור יינון נתיישב וקומפקטי nanoelectrospray משנית (שניה-nanoESI) היה להגדיר, מצמידים בספקטרומטר ברזולוציה גבוהה. הוצגו מדידות בזמן אמת של Voc בריכוז נשימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אזהרה: נא עיין כל גליונות נתונים גשמי בטיחות (MSDS) לפני השימוש. אנא השתמש ציוד מגן אישי המתאים, למשל, חלוק, כפפות, משקפי מגן, מכנסיים באורך מלא ונעליים סגורות).

1. להגדיר את מקור שניה-nanoESI

  1. להגדיר מקור שניה-nanoESI על-פי תהליך SESI, דהיינו, הגז נשימה הציג עד להצטלבות של הפלומה ספקטרומטריית electrospray, מיונן מאת droplets טעונה (איור 1). מקורות נבנה במעבדות בודדות תלויים הממשק של ספקטרומטר מסה בשימוש24,25. . הנה, להגדיר את מקור שניה-nanoESI מבוססים על מקור nanoESI מסחרי (איור 2) וליישם את פאול benchtop orbitrap ספקטרומטר מסה.
    הערה: הגוף העיקרי של המקור הוא תא מפלדת מעוקב (אורך 25 ממ, ממ ז 13) (איור 2b) עם מפרץ צר (זיהוי 4 מ מ) להציג את נימי nanoESI לתוך החדר. לכן, החדר הוא לא אטום לגמרי (איור 2b).
  2. להתקין שני צינורות פלדה אל חלד (אורך 8 מ מ, יתר 5 מ"מ, תעודת זהות 3 מ"מ) משני צידי החדר לאספקה גז.
  3. לצייד קוורץ שני חלונות (זיהוי 14 מ מ) העליונה או התחתונה של התא כדי לבדוק את המיקום של הקצה של nanoESI נימי, תרסיס nanoESI העיניים או מיקרוסקופ דיגיטלי.
  4. לרתך את התא כדי האצטרובל לטאטא ספקטרומטר מסה.
    הערה: העיצוב עשויים להשתנות בהתאם הגיאומטריה מסוים של הממשק לחץ אטמוספרי של ספקטרומטר מסה שימוש במעבדות בודדות.

2. כלי אופטימיזציה

  1. כיילו את ספקטרומטר מסה בשני מצבי זיהוי יונים חיוביים ושליליים על פי הוראות היצרן. על-ידי החלת כיול, ספקטרומטר מסה פרמטרים, כגון עדשה פוטנציאל ומצבים זיהוי, המותאמים בצורה מיטבית כדי לתת רגישות טובה וצורה שיא ערך ברזולוציה שצוינה. הרזולוציה המונית של 70000 משמש כאן.
    1. לבצע ולידציות Q Exactive מלאה באמצעות המקור ESI מסחרי; עם זאת, ניתן לבצע כיול מסה כל מקורות תואם, כולל אלה מותאמים אישית.
  2. הגדר את הטמפרטורה של הצינור העברה יון (ITT) ספקטרומטר מסה > 100 ° c למרות הטמפרטורה הגבוהה ביותר ניתן להגדיר ב- 350 ° C, זה עלול לגרום הפירוק של תרכובות מסוימות. לפיכך, 150° C משמש בניסוי זה.
    הערה: עבור ספקטרומטרים המוני הכולל של דיזה דגימה במקום ITT, הטמפרטורה של הדגימה כגדולים מוגדרת > 100 מעלות צלזיוס.
  3. עבור ה ESI הממס זרימה וקצב, בחר הממס ESI המתאים על בסיס מאפיינים של הממס (למשל, קוטביות, התנודתיות) ותרכובות יישוב (למשל, זיקה פרוטון). תערובת של מים מתנול ב יחסי שונים כבר בשימוש נפוץ כמו ESI ממס25. בניסוי זה, להשתמש במים המכילים חומצה פורמית 0.1% (v/v), עבור יעילות גבוהה יינון היה דיווח זה19,של הממס13,23. הגדר את קצב הזרימה של הממס ESI בטווח של 0-1.5 μL/min ו- nL 200/min.
    הערה: דגה ESI ממס למשך 30 דקות לפני השימוש.
  4. מיטוב שניה-nanoESI מקור פרמטרים, בעיקר nanoESI מתח והמיקום עצה נימי nanoESI. המתח בדרך כלל נע בין 2.0 4.5 kV. שימוש 2.5 kV כאן.
    הערה: מתח גבוה ESI מוחל כמו עליות קצב זרימה. ניתן לכוונן את המרחק בין הקצה כגדולים ספקטרומטר מסה של 1 5 מ מ. לאחר אופטימיזציה, רמת העוצמה מנורמל (NL) נצפו בספקטרום המוני צריך להיות > 1 x 106 הווריאציות של יון סה כ chromatogram (טיק) צריך להיות < 10% בשני מצבי זיהוי של יונים חיוביים ושליליים. ספקטרום המונית של טיק מתקבלים בטווח המונית של m/z 50-750.
  5. גז טהור חלות על המקור. זהו שלב אופציונלי, מכוון הפחתת השפעת Voc מהאוויר מקורה. טוהר גבוהה גז חנקן (N2, 99.99%) או אוויר טהור יכול לשמש. עם הנוכחות של גז טהור, NL שנצפתה קשת המוני צריך להיות > 1 x 105 ואת הווריאציות של טיק צריך להיות < 10% בשני מצבי זיהוי של יונים חיוביים ושליליים. טוהר גבוהה N2 היה כאן, וכשאשר 0.8 L/min.
    הערה: קצב זרימה הכולל טהור גז וגז הנשימה צריך להיות גבוה יותר קצב הזרימה דרך כגדולים של ספקטרומטר מסה.

3. מדידה של והבל הפה

  1. לשאוף את האוויר מקורה ולבצע נשיפה רגיל לנשום את כל האוויר מהריאות בספיקה קבועה. לפקח על קצב הזרימה נשיפה של manometer או מד זרימה גלוי לנושא. השתמש אבובים טפלון (PTFE) כדי לספק גז נשימה23.
    1. כדי למנוע את עיבוי של אדי מים בתוך הצנרת, מחממים את הצנרור בטמפרטורה של 80-100 oC7,23,27 או להשתמש Nafion מייבש28,29. בניסוי זה, הנושא כשהבטן סחוטה ב 0.4 L/דקה נשלט על ידי מד זרימה.
    2. להתחבר לים של מד זרימה כדי אבובים Nafion (באורך 60 ס מ) כדי להסיר את אדי מים והבל הפה ולהתחבר בשקע של מד זרימה אבובים PTFE (באורך 13 ס מ, זיהוי 4 מ מ). זה לוקח < 30 s למדידה נשיפה אחת.
    3. לבצע 4-6 מדידות משוכפל28,29.
    4. כדי למזער את ההשפעות מבלבלים, יש משתתפים אכילה, שתייה, צחצוח שלהם השיניים לפחות 30 דקות לפני מדידות23.
      הערה: כדי למזער את ההשפעה של Voc מהאוויר מקורה, דווח לשאוף גז טהור במקום אוויר מקורה26. כאשר נעשה שימוש אבובים Nafion, כמה תרכובות קוטבי יאבדו.
    5. במהלך המדידה, תמשיכו לחפש אם עוצמת יון חורג מהמגבלה לינאריות לזיהוי של המכשיר או לא. הרוויה של אות יכול להוביל שיא החפץ לא ממש לנבוע המתחם במדגם. על ידי שאיפת אויר דרך האף, הוסרו חלק אמביינט Voc וחלקיקים; עם זאת, ראוי לציין כי תרכובות מעברי האף עשוי גם להיות מזוהה.

4. לקבל טביעת אצבע הנשימה ואת עקבות הזמן של תרכובת

  1. להשיג chromatograms, ספקטרה המוני. השתמש בתוכנה (למשל, Xcalibur) chromatograms שיא, ספקטרה המוני. כי זה ניתוח MS ישירה, אין הפרדה כרומטוגרפי מתבצעת, chromatogram יון סה כ (טיק) מציין למעשה את עקבות הזמן כל הסימנים זוהה ספקטרום המונים יון שחולצו chromatogram (EIC) מראה את עקבות הזמן מתחם שצוין.
    הערה: עבור ספקטרומטרים המוני מסחריים אחרים, chromatograms ואת ספקטרה המוני ניתן להשיג על ידי תוכנת רכישת הנתונים המתאימים.
  2. להשיג טביעת אצבע והבל הפה על-ידי בחירת מספר סריקות הטיק כאשר והבל הפה נמדד. להשיג קשת המוני המייצג בממוצע סריקות אלה על-ידי התוכנה.
    1. כדי למנוע רקע הפסגות של טביעת האצבע נשימה, השתמש בכלי לחסר רקע בתוכנה. עיין במדריך למשתמש שסופקו על-ידי היצרן. בקצרה, בחר מספר זהה של סריקות כאשר אין מדגם נשימה הוא הציג, להחסיר רקע הספקטרום המונית של טביעת האצבע נשימה.
      הערה: בשיטה זו, הסף לזיהוי התכונות בטביעת האצבע נשימה מוגדרת בתור שלוש פעמים סטיית תקן של האות רקע. עבור ספקטרומטרים המוני, מסחריים אחרים חיסור רקע יכול להתבצע על ידי התוכנה רכישת הנתונים המתאימים.
  3. להשיג את עקבות הזמן של תרכובת שצוין. בחר הפסגה של תרכובת יישוב טביעת האצבע נשימה, ואת הזמן עקבות ולהעריך את נרכשת לאחר מכן ע י התוכנה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 3 מראה את טביעות נשימה בטווח המונית של m/z 50-750 שנרשם תחת בשני מצבי זיהוי של יונים חיוביים ושליליים. פסגות 291 (שיא עוצמת > 5.0x104) ושל פסגות 173 (שיא עוצמת > 3.0x104) נצפו בטביעות נשימה מופחתים-רקע מצבי זיהוי יונים חיוביים ושליליים, בהתאמה. כדי לזהות פסגות ההרים ספקטרום המוני, נא עיין פרסומים קודמים עבור פרטים12,18,24

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בונים את מקור שניה-nanoESI מבוססים על מקור nanoESI מסחרי, היעילות יינון הוא גבוה מזה של שימוש של מקור ESI30. בנוסף, היעילות יינון בהמשך משופרת בתוך תא סגור, כמו זה מבודד את התהליך מהאוויר רקע הסביבה, ו באותו זמן מקלה על ערבוב בין המדגם גז הפלומה ספריי. על ידי שימוש של שניה-nanoESI, פחות צורך הפרמטרים ניתן למטב בהשוואה למקור ESI, שמקל על ההתקנה, יישום ותחזוקה.

אם אין אות נצפית או הרגישות יורדת באופן משמעותי בעת ביצוע ניתוח הנשימה על ידי שניה-nanoESI-MS, אחד צריך לבדוק את...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מבחינה כלכלית בתמיכתם הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (מספר 91543117).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מים טהוריםבמיוחד Merck Millipore, ארה"בעמידות MPGP04001 >18.2 MΩ · ס"מ
חומצה פורמיתסיגמא-אולדריץ', ארה"בF0507קורוזיבי לדרכי הנשימה.
גז חנקןגואנגג'ואו Shiyuan Gas Co. Ltd., סיןN.A.aטוהר >99.99%
Q ספקטרומטר מסה היברידי אקטיבי מרובע-אורביטראפיThermo Scientific, ארה"ב02634L(S/N)היזהרו ממקור NanoESI במתח גבוה ובטמפרטורה גבוהה
Thermo Scientific, ארה"בES002373(S/N); ES071(P/N)היזהרו ממשאבת Nano LC במתח גבוה ובטמפרטורה גבוהה
Thermo Scientific, ארה"ב5041.0010A(P/N)/
Xcalibur software (גרסה 3.0)Thermo Scientific, ארה"בBRE0008596/
Dino-Lite מיקרוסקופדיגיטלי Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., סיןCQ401833R(S/N)/
Nafion tubingPerma Pure LLC, ארה"בME60/
צינורות PTFE (תעודת זהות 4 מ"מ)דונגגוואן Hongfu חומר בידוד ושות' בע"מ, סיןNAהיזהרו מאובדן אפשרי של תרכובות קוטביות
בקר זרימת המוניםLine-Tech, קוריאהM15122007 (S/N)/
מד זרימהמפעל מד אוטומציה תעשייתית Yuyao, סין40784/
aNA: לא זמין.

מקורות

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. De Lacy Costello, B., et al. A review of the volatiles from the healthy human body. J. Breath Res. 8 (1), 014001-014030 (2014).
  2. Phillips, M., Greenberg, J. Ion-trap detection of volatile organic compounds in alveolar breath. Clin. Chem. 38 (1), 60-65 (1992).
  3. Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Circadian variation of the human metabolome captured by real-time breath analysis. PLoS One. 9 (12), 0114422-0114438 (2014).
  4. Garcia-Gomez, D., et al. Secondary electrospray ionization coupled to high-resolution mass spectrometry reveals tryptophan pathway metabolites in exhaled human breath. Chem. Common. 52 (55), 8526-8528 (2016).
  5. Garcia-Gomez, D., et al. Real-time quantification of amino acids in the exhalome by secondary electrospray ionization-mass spectrometry: A proof-of-principle Study. Clin. Chem. 62 (9), 1230-1237 (2016).
  6. Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Brown, S. A., Zenobia, R., Dallmann, R. Gauging circadian variation in ketamine metabolism by real-time breath analysis. Chem. Common. 53 (14), 2264-2267 (2017).
  7. Gamez, G., et al. Real-time, in vivo monitoring and pharmacokinetics of valproic acid via a novel biomarker in exhaled breath. Chem. Common. 47 (17), 4884-4886 (2011).
  8. Li, X., et al. Drug pharmacokinetics determined by real-time analysis of mouse breath. Angew. Chem. Int. Ed. 54 (27), 7815-7818 (2015).
  9. Amorim, L. L. A., Cardeal, Z. L. Breath air analysis and its use as a biomarker in biological monitoring of occupational and environmental exposure to chemical agents. J. Chromatogr. B. 853 (1-2), 1-9 (2007).
  10. Bajtarevic, A., et al. Noninvasive detection of lung cancer by analysis of exhaled breath. BMC Cancer. 9, 348(2009).
  11. Smith, D., Wang, T. S., Pysanenko, A., Španěl, P. A selected ion flow tube mass spectrometry study of ammonia in mouth- and nose-exhaled breath and in the oral cavity. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22 (6), 783-789 (2008).
  12. Li, X., Huang, L., Zhu, H., Zhou, Z. Direct human breath analysis by secondary nano-electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry: Importance of high mass resolution and mass accuracy. Rapid Commun. Mass Spectrom. 31 (3), 301-308 (2017).
  13. Martínez-Lozano, P., Fernandez de la Mora, J. Electrospray ionization of volatiles in breath. Int. J. Mass Spectrom. 265 (1), 68-72 (2007).
  14. Zeng, Q., et al. Detection of creatinine in exhaled breath of humans with chronic kidney disease by extractive electrospray ionization mass spectrometry. J. Breath Res. 10 (1), 016008-016015 (2016).
  15. Chen, H. W., Wortmann, A., Zhang, W. H., Zenobi, R. Rapid in vivo fingerprinting of nonvolatile compounds in breath by extractive electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Angew. Chem. Int. Ed. 46 (4), 580-583 (2007).
  16. Benoi, F. M., Davldson, W. R., Lovett, A. M., Nacson, S., Ngo, A. Breath analysis by atmospheric pressure ionization mass spectrometry. Anal. Chem. 55 (4), 805-807 (1983).
  17. Bregy, L., Martínez-Lozano Sinues, P., Nudnova, M. M., Zenobi, R. Real-time breath analysis with active capillary plasma ionization-ambient mass spectrometry. J. Breath Res. 8 (2), 027102-027110 (2014).
  18. Gaugg, M. T., et al. Expanding metabolite coverage of real-time breath analysis by coupling a universal secondary electrospray ionization source and high resolution mass spectrometry-a pilot study on tobacco smokers. J. Breath Res. 10 (1), 016010-016020 (2016).
  19. Martínez-Lozano, P., Zingaro, L., Finiguerra, A., Cristoni, S. Secondary electrospray ionization-mass spectrometry: breath study on a control group. J. Breath Res. 5 (1), 016002-016012 (2011).
  20. Martínez-Lozano Sinues, P., Zenobi, R., Kohler, M. Analysis of the exhalome a diagnostic tool of the future. Chest. 144 (3), 746-749 (2013).
  21. Martínez-Lozano Sinues, P., Fernandez de la Mora, J. Direct analysis of fatty acid vapors in breath by electrospray ionization and atmospheric pressure Ionization-Mass Spectrometry. Anal. Chem. 80 (21), 8210-8215 (2008).
  22. Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Breath analysis in real time by mass spectrometry in chronic obstructive pulmonary disease. Respiration. 87 (4), 301-310 (2014).
  23. Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Zenobi, R. Monitoring diurnal changes in exhaled human breath. Anal. Chem. 85 (1), 369-373 (2013).
  24. Chen, H. W., Zenobi, R. Neutral desorption sampling of biological surfaces for rapid chemical characterization by extractive electropray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 3 (9), 1467-1475 (2008).
  25. Li, X., Hu, B., Ding, J., Chen, H. W. Rapid characterization of complex viscous samples at molecular levels by neutral desorption extractive electrospray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 7 (6), 1010-1025 (2011).
  26. Gordon, S. M., Szidon, J. P., Krotoszynski, B. K., Gibbons, R. D., O'Neill, H. J. Volatile organic compounds in exhaled air from patients with lung cancer. Clin. Chem. 31 (8), 1278-1282 (1985).
  27. Ding, J. H., et al. Development of extractive electrospray ionization ion trap mass spectrometry in vivo breath analysis. Analyst. 134 (10), 2040-2050 (2009).
  28. Basum, G., Dahnke, H., Halmer, D., Hering, P., Mürtz, M. Online recording of ethane trances in human breath via infrared laser spectroscopy. J. Appl. Physiol. 95 (6), 2583-2590 (2003).
  29. Tøien, Ø Automated open flow respirometry in continuous and long-term measurements: design and principles. J. Appl. Physiol. 114 (8), 1094-1107 (2013).
  30. Huang, L., Li, X., Xu, M., Huang, Z. X., Zhou, Z. Identification of relatively high molecular weight compounds in human breath using secondary nano electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry. Chem. J. Chinese U. 38 (5), 752-757 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ESINano ESI

מאמרים קשורים