פרוטוקול עבור אפיון ההרכב הכימי של והבל הפה בזמן אמת באמצעות nanoelectrospray משני יינון מצמידים ברזולוציה גבוהה ספקטרומטר מסה הוכח.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אנליזת נשימה בזמן אמת באמצעות Nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
תרכובות אורגניות נדיפות (Voc) בריכוז עוררו עניין רב, מאז הם יכולים לשמש סמנים ביולוגיים עבור אבחון מחלת וחשיפה סביבתית בצורה לא פולשנית. בעבודה זו, אנו מציגים פרוטוקול כדי לאפיין את Voc בריכוז בזמן אמת באמצעות nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה (שניה-nanoESI-HRMS). המקור שניה-nanoESI תוצרת בית בקלות הוקם בהתבסס על מקור nanoESI מסחרי. מאות פסגות נצפתה המופחת-רקע ספקטרום המונית של והבל הפה, ואת הערכים דיוק מסת הם-4.0-13.5 עמודים לדקה ו--20.3-ppm 1.3 המצבים זיהוי יונים חיוביים ושליליים, בהתאמה. הפסגות שהוקצו להרכב אלמנטלים מדויקת על פי המסה מדויק דפוס איזוטרופי. פחות מ 30 s משמש למדידה נשיפה אחת, וזה לוקח בערך 7 דקות למדידות משוכפל שש.
מבוא
להתפתחות מהירה של שיטות אנליטיות מודרני, מאות חומרים אורגניים נדיפים (Voc) זוהו האנושי והבל הפה1. Voc אלו נובעות בעיקר מכתשי אוויר (~ 350 מ"ל עבור מבוגר בריא), שטח מת אנטומי אוויר (~ 150 מ ל)2, אשר מושפעות על ידי הגוף חילוף החומרים3,4,5,6,7 ,8 , זיהום סביבתי9, בהתאמה. כתוצאה מכך, אם מזוהה, Voc אלו הם מבטיחים כדי לשמש סמנים אבחון מחלת וחשיפה סביבתית בצורה לא פולשנית.
למרות ס....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
אזהרה: נא עיין כל גליונות נתונים גשמי בטיחות (MSDS) לפני השימוש. אנא השתמש ציוד מגן אישי המתאים, למשל, חלוק, כפפות, משקפי מגן, מכנסיים באורך מלא ונעליים סגורות).
1. להגדיר את מקור שניה-nanoESI
- להגדיר מקור שניה-nanoESI על-פי תהליך SESI, דהיינו, הגז נשימה הציג עד להצטלבות של הפלומה ספקטרומטריית electrospray, מיונן מאת droplets טעונה (איור 1). מקורות נבנה במעבדות בודדות תלויים הממשק של ספקטרומטר מסה בשימוש24,25. . הנה, להגדיר את מקור שניה-nanoESI מבוססים על מקור nanoESI מסחרי (איור 2) וליישם את פאול....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 3 מראה את טביעות נשימה בטווח המונית של m/z 50-750 שנרשם תחת בשני מצבי זיהוי של יונים חיוביים ושליליים. פסגות 291 (שיא עוצמת > 5.0x104) ושל פסגות 173 (שיא עוצמת > 3.0x104) נצפו בטביעות נשימה מופחתים-רקע מצבי זיהוי יונים חיוביים ושליליים, בהתאמה. כדי לזהות פסגות ההרים ספקטרום המוני, נא עיין פרסומים קודמים עבור פרטים12,18,24
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בונים את מקור שניה-nanoESI מבוססים על מקור nanoESI מסחרי, היעילות יינון הוא גבוה מזה של שימוש של מקור ESI30. בנוסף, היעילות יינון בהמשך משופרת בתוך תא סגור, כמו זה מבודד את התהליך מהאוויר רקע הסביבה, ו באותו זמן מקלה על ערבוב בין המדגם גז הפלומה ספריי. על ידי שימוש של שניה-nanoESI, פחות צורך הפרמטרים ניתן למטב בהשוואה למקור ESI, שמקל על ההתקנה, יישום ותחזוקה.
אם אין אות נצפית או הרגישות יורדת באופן משמעותי בעת ביצוע ניתוח הנשימה על ידי שניה-nanoESI-MS, אחד צריך לבדוק את.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
עבודה זו מבחינה כלכלית בתמיכתם הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (מספר 91543117).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מים טהורים | במיוחד Merck Millipore, ארה"ב | עמידות MPGP04001 >18.2 MΩ · ס"מ | |
| חומצה פורמית | סיגמא-אולדריץ', ארה"ב | F0507 | קורוזיבי לדרכי הנשימה. |
| גז חנקן | גואנגג'ואו Shiyuan Gas Co. Ltd., סין | N.A.a | טוהר >99.99% |
| Q ספקטרומטר מסה היברידי אקטיבי מרובע-אורביטראפי | Thermo Scientific, ארה"ב | 02634L(S/N) | היזהרו ממקור NanoESI במתח גבוה ובטמפרטורה גבוהה |
| Thermo Scientific, ארה"ב | ES002373(S/N); ES071(P/N) | היזהרו ממשאבת Nano LC במתח גבוה ובטמפרטורה גבוהה | |
| Thermo Scientific, ארה"ב | 5041.0010A(P/N)/ | ||
| Xcalibur software (גרסה 3.0) | Thermo Scientific, ארה"ב | BRE0008596 | / |
| Dino-Lite מיקרוסקופ | דיגיטלי Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., סין | CQ401833R(S/N) | / |
| Nafion tubing | Perma Pure LLC, ארה"ב | ME60 | / |
| צינורות PTFE (תעודת זהות 4 מ"מ) | דונגגוואן Hongfu חומר בידוד ושות' בע"מ, סין | NA | היזהרו מאובדן אפשרי של תרכובות קוטביות |
| בקר זרימת המונים | Line-Tech, קוריאה | M15122007 (S/N) | / |
| מד זרימה | מפעל מד אוטומציה תעשייתית Yuyao, סין | 40784 | / |
| aNA: לא זמין. |
מקורות
- De Lacy Costello, B., et al. A review of the volatiles from the healthy human body. J. Breath Res. 8 (1), 014001-014030 (2014).
- Phillips, M., Greenberg, J. Ion-trap detection of volatile organic compounds in alveolar breath. Clin. Chem. 38 (1), 60-65 (1992).<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
