מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.
השימוש במודלים חיוני לצורך הבנה טובה יותר של MH, אחד הגורמים העיקריים עבור היצרות העורקים. במאמר זה נדגים מודל חסיפה מאתר בלון, אשר ניתן להשוות עם כלי ויצר מודלים פגיעה בבעלי חיים גדולים. דגם חסיפה העורקים עם אחרים-קטטרים מחקה את ההגדרה הקלינית ומוביל שינויים דומים pathobiological, פיזיולוגיים. בקצרה, לאחר ביצוע חתך אופקי ב אבי העורקים abdominalis, קטטר בלון להיות מוכנס לתוך הכלי, מנופח, הציג retrogradely. האינפלציה של הבלון יוביל אינטימה פציעה, overdistension של כלי השיט. לאחר הסרת הקטטר, החתך אבי העורקים תהיה סגורה עם אוקיי יחיד. המודל המוצג במאמר זה הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הוא מתאים במיוחד להערכת יקר סוכני טיפולית ניסיוני, אשר יכול להיות מיושם באופן חסכוני. באמצעות זנים נוקאאוט-עכבר, וצריך להעריך את ההשפעה של גנים שונים על פיתוח MH.
היצרות עורקים בתוך העורקים הכליליים והיקפי יש השפעה גדולה על התחלואה ואת התמותה של חולים1. אחד כבסיס מנגנון פתולוגי הוא myointima היפרפלזיה (MH), אשר מאופיין על ידי התפשטות מוגברת, הגירה, סינתזה של חלבונים מטריצה חוץ-תאית השריר החלק בכלי הדם תאים (SMC)2. התקן SMC ממוקמים בשכבת המדיה של כלי השיט ולהעביר על גירוי על פני השטח של לומן. אותות מופחתים כוללים גורמי גדילה, ציטוקינים, תא-תא מגע, ליפידים, מטריצה חוץ-תאית רכיבים ו הטיה מכני ולמתוח כוחות3,4,5,6. פציעות של הקיר כלי, פתולוגי או iatrogenic, תאי אנדותל לגרום נזק תאי שריר חלק, לעורר תגובות דלקתיות, ובכך להוביל MH7.
מודלים בבעלי חיים שונים זמינים כעת ללמוד פגיעה עורקית ו היפרפלזיה myointima. חיות גדולות כמו חזירים או כלבים יש את היתרון של שיתוף, עורק דומה ו אנטומיה כלילית עם בני אדם, מתאימות במיוחד עבור מחקרים חוקרת אנגיופלסטיה טכניקות, הליך והתקני8. עם זאת, חזיר הדגמים יש החיסרון של9,גבוהה יותר thrombogenicity10, בעוד כלבים יש רק בתגובה כלי פציעה11מתון. בנוסף, כל הדגמים בעלי חיים גדולים דורשים דיור מיוחדים, ציוד ו צוות, אשר מחוברים עם עלויות גבוהות, אינם זמינים ב מוסד. הדגמים בעלי חיים קטנים כוללים חולדות ועכברים. בהשוואה לחולדות, עכברים יש את היתרונות של עלות נמוכה יותר את קיומו של מגוון רחב של דגמים מדהימה. המודל המתואר בסרטון הזה יכול להיות משולב עם ספקיות-/-עכברים שקיבלו עם דיאטה מערבית לחקות מקרוב את ההגדרה הקלינית של אנגיופלסטיה כלי טרשת עורקים12. דגמים קודמים המושרה פגיעה בכלי הדם דרך תיל פציעה13, לייבוש הנוזלים14, האביב15או פציעה השרוול16. מאז מהות הפגיעה ישפיע במידה רבה את הפיתוח ואת חוקת MH, באמצעות צנתר בלון כדי לגרום לפציעה כלי היא הדרך הטובה ביותר כדי לחקות את ההגדרה הקלינית.
במאמר זה אנו מתארים שיטה לזירוז MH עם קטטר בלון בעכברים. השימוש של קטטר בלון (1.2 מ"מ x 6 מ"מ) עם יציאת RX (איור 1 א') מאפשר גירוד השכבה intimal, במקביל, תנאי הגיוס של overdistension של כלי השיט. שני הגורמים הללו הם גורמים חשובים עבור התפתחות MH. הזמן תצפית עבור דגם זה הוא 28 יום17.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בעלי חיים קיבל טיפול אנושי בדרישות המדריך העקרונות של חיות מעבדה, שהוכנו על ידי המכון של מעבדה חיה המשאבים, שפורסם על ידי מכוני הבריאות הלאומיים. כל הפרוטוקולים בעלי חיים אושרו על ידי הרשות המקומית אחראית (' Amt לדנציג Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (משרד הבריאות, הגנת הצרכן) המבורג ').
1. קטטר הכנה
הערה: עיין טבלה של חומרי מידע לגבי הצנתר.
2. העכבר הכנה
3. histopathology
4. immunofluorescence מיקרוסקופ
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חסיפה בלון הוא מודל מתאים ללמוד את התפתחות MH בעכברים. חיות להתאושש טוב הניתוח והצג פוסט-פעולה מצב גופני מעולה. הקמנו מודל זה בעכברים 50 עם פחות משיעור המוות 3% עקב הליך כירורגי. דמויות 1B -C הצג את השלבים החשובים כירורגי. לאחר חתך בעור לאורך לינאה אלבה, לזהות את אבי העורקים abdominalis. במקום מלחציים השתלה (איור 1B). עושים חתך קטן באמצע אב העורקים, לקבוע צנתר בלון לתוך כלי הקיבול שקופיות הוא יי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal ומאפשרת חקר התהליכים הפתולוגיים כבסיס ובדיקות של תרופות חדשות או אפשרויות טיפוליות.
השלב הקריטי ביותר ב פרוטוקול זה הוא חסיפה של אבי העורקים. טיפול מיוחד צריך להיות משולם במהלך שלב זה, כפי חסיפה מופרז יוביל היווצרות מפרצת וכישלון מודל. מצד שני, אם חסיפה מבוצע דיו, יפתחו myointima קטן מדי. לכן, האינטנסיביות של השלב חסיפה חיונית התוצאה ואת ההצלחה של מודל זה בעל חיים.
לגבי הליך כירורגי, חיוני שתי החומות של כ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים אין לחשוף.
המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann על סיוע טכני שלה.
D.W. נתמכה על ידי קרן kade ב Max. סמטת קיבלו מענקים מן Fondation Kröner אחר (2012_EKES.04) פתוח (DE2133/2-1_. ס ס קיבל מענקי מחקר פתוח (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 10-0 תפר אתילון | Ethicon | 2814G | |
| 3 מ"ל מזרק | BD רפואי | ||
| 37% HCl | סיגמא-אולדריץ' | H1758 | |
| 5-0 תפר פרולן | Ethicon | ||
| 6-0 תפר פרולן | Ethicon | 8706H | |
| חומצה פוקסין | סיגמא-אולדריץ' | F8129-25G | תמיסת אחזור אנטיגן מכתים טריכרום |
| Dako | S1699 | ||
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | מכתים טריכרום |
| משחת עיניים ואף | Bayer | 1578675 | משחת עיניים |
| תמיסת בטדין | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | צ'ארלס ריבר | מספר מלאי 000664 | |
| אפליקטור מהדק | Fine Science Tools | 18056-14 | JAW DIMS: 4 x 0.75 מ"מ אורך: 13 מ"מ |
| קולגן 3 | abcam | ab7778 | נוגדן |
| DAPI | תרמו פישר | D1306 | |
| חמור נגד עיזים IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | נוגדן משני |
| חמור נגד ארנב IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | נוגדן משני |
| חמור נגד ארנב IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | משני נוגדן |
| חמור נגד ארנב IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | נוגדן משני |
| אתנול 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| אתנול 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| אתנול מוחלט | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | נוגדנים |
| מלקחיים משובחים | כלים מדעיים | עדינים11251-20 | |
| מלקחיים | סטנדרטיים כלי מדע עדין | 11023-10 | |
| חומצה אצטית קרחונית | סיגמא-אולדריץ' | 537020 | |
| קוצץ שיער | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| ערכת צריבה בטמפרטורה גבוהה | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX משפר אותות | Invitrogen | I36933 | פתרון חסימה |
| ירוק בהיר SF | Waldeck | 1B-211 | מכתים טריכרום |
| מהדק מיקרוכירורגי | Fine Science Tools | 18055-04 | מיקרו-סרפין - 4 מ"מ |
| MINI TREK קטטר הרחבה כלילית 1.20 מ"מ x 6 מ"מ / החלפה מהירה | Abbott | 1012268-06U | |
| הידרט חומצה מוליבדטופוספורית | Merck | 1.00532.0100 | צביעת טריכרום |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: מחזיק | |
| Fine Science Tools | 12075-14 | ||
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome צביעת |
| פרפין | Leica ביו-מערכות | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית | #157135S | |
| תמיסת Ponceau S | Serva Electrophoresis | 33427 | צביעת טריכרום |
| מדלל נוגדנים ראשוני | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold | Mounting Solution Thermo Fischer | P36930 | פתרון הרכבה לשקופיות מוכתמות אימונופלואורסצנטיות |
| עדין להחלפה | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome מכתים |
| רימאדיל | פייזר | 400684.00.00 | קרפרופן |
| כלי מדע עדינים | 14028-10 | ||
| מספריים כלים | מדעיים | עדינים בסגנון Vannas15000-03 | |
| מדלל נוגדנים משני | Dako | S0809 | |
| דבק מהיר פעולה MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| מתלה שקופיות | טד פלה | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | נוגדן |
| SMA | abcam | ab21027 | צלחת |
| מכתים | נוגדנים טד פלה | 21075 | |
| מיקרוסקופ כירורגי | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | סרט |
| כירורגי נספג hemostat Transpore 3M | 1527-1 | ||
| U-100 מזרק אינסולין | BD | ||
| כלי מדע עדין כלים | 18603-14 | ||
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| ערכת המטוקסילין ברזל Weigerts | Merck | 1.15973.0002 | טריכרום מכתים |
| קסילן | Th. גייר | 3410 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.