מאמר שיטה

סינתזה והערכה של מעכב ספיגת סידן מיטוכונדריאלי מבוססי רותניום

DOI:

10.3791/56527

⸱

26 באוקטובר 2017

 , 
1Department of Chemistry and Chemical Biology, Cornell University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול עבור סינתזה, טיהור, אפיון מעכב מבוססי רותניום של ספיגת הסידן מיטוכונדריאלי מוצג. הליך כדי להעריך את יעילותה בתאים בתרבית של permeabilized הוא הפגין.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מפרטים את סינתזה ולטיהור סידן מיטוכונדריאלי מעכב ספיגת, [(או2) (NH3)4Ru Ru (ממוצע-O) (NH3)4(או2)]5 +. הסינתזה אופטימיזציה של מתחם זה מתחילה [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2 ב 1 מ' NH4או במיכל סגור, מניב פתרון ירוק. טיהור מתבצע עם כרומטוגרפיה קטיונים. מתחם זה מאופיין, אומתו ספקטרוסקופיה מול UV ו- IR כדי להיות טהורים. המאפיינים המעכבת ספיגת סידן מיטוכונדריאלי הם העריכו בתאים הלה permeabilized על-ידי קרינה פלואורסצנטית ספקטרוסקופיה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סידן מיטוכונדריאלי הוא מווסת מפתח עבור מספר תהליכים חיוניים לתפקוד תאים נורמליים, כולל הפקת אנרגיה אפופטוזיס. 1 , 2 , 3 uniporter סידן מיטוכונדריאלי (MCU), חלבון טרנספורטר יון ונותק מיטוכונדריאלי ממברנה פנימית, מווסת זרם של יונים של סידן לתוך המיטוכונדריה. 4 , 5 , 6 מעכבי כימי של לפשעים חמורים הם כלי רב ערך עבור המשך המאמצים לחקור את תפקוד ואת תפקידי הסלולר לשנע חלבון וסידן מיטוכונדריאלי הזה. מתחם [(HCO2) (NH3)4Ru Ru (ממוצע-O) (NH3)4(O2CH)]3 +, Ru360, הוא אחד מעכבי סלקטיבי ידוע רק עבור לפשעים חמורים עם ערךד K המדווחת של 24 מיקרומטר.7 ,8,9,10 מתחם זה ממוקם הטומאה נפוצה מצאו ניסוחים מסחרי של רותניום אדום (RuRed), di triruthenium-ממוצע-אוקסו לגשר hexacation של הנוסחה [(NH3) 5 (ממוצע-O) Ru Ru (NH3)4(ממוצע-O) Ru (NH3)5)]6 +, אשר שימש גם בתור מעכב ספיגת סידן. למרות Ru360 זמין מסחרית, זה מאוד יקר. יתר על כן, סינתזה של בידוד של Ru360 קוראים תיגר על ידי טיהור קשה נהלים ושיטות אפיון דו-משמעי

לאחרונה דיווחנו הליכים חלופיים כדי לגשת Ru360 אנלוגי, [(או2) (NH3)4Ru Ru (ממוצע-O) (NH3)4(או2) Cl5. 11 מתחם זה מעכב לפשעים חמורים עם זיקה גבוהה, הדומה Ru360. ב פרוטוקול זה, נתאר שלנו סינתזה היעיל ביותר של מתחם זה, המתחיל [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2. טיהור של המוצר באמצעות שרף קטיונים חומציים מאוד מפורט, יחד עם מלכודות נפוצות עבור הליך זה. אנחנו גם להציג שיטות אפיון והערכת טוהר מורכבים, ניסחו בגישה פשוטה לבדיקת יעילותה על חסימת ספיגת הסידן מיטוכונדריאלי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
הערה

: מרוכז חומצות ובסיסים המשמשים סינתזה זו. השתמש כל נוהלי בטיחות המתאים בעת ביצוע התגובה כולל השימוש של פקדים הנדסה (fume הוד), ציוד מגן אישי (עיקרון השוויון הפוליטי) כולל בטיחות משקפיים, כפפות, חלוק המעבדה, באורך מלא מכנסיים ונעליים סגורות.

1-הכנת [(או 2) (NH 3) 4 Ru (ממוצע-O) Ru (NH 3) 4 (או 2)] Cl 5

  1. סינתזה של Cl [Ru (NH 3) 5 קלרנית] 2 12
    1. g 1.00 התמוססות של RuCl 3 · n H 2 O (40% Ru לפי משקל, 4.1 mmol) ב 5 מ של H 2 O. מגניב הפתרון חום כהה 0 ° C באמבט קרח. להוסיף 11 מ ל (0.23 mol) של 80% הידרזין מימה פתרון באופן dropwise. התגובה הראשונית תהיה נמרצת עם הגז האבולוציה, וכתוצאה מכך פתרון חום. תן הפתרון שיתקבל מערבבים בטמפרטורת החדר במשך 16 שעות; הפתרון הסופי יהיה כהה חא
      זהירות: הידרזין היא בחריפות רעילים ומסרטנים. בנוסף, נטול מים צורות של ריאגנט הזה הם חומר נפץ. כמו תמיד, השתמש וקולטי עיקרון השוויון הפוליטי, fume המתאימה בעת הטיפול. לא להתרכז אלה פתרונות ליובש.
    2. כדי פתרון זה, להוסיף כ 5-10 מ של HCl מרוכזת כדי להתאים את ה-pH ל- 2. בשלב זה, הפתרון יהיה צהוב-חום בצבע.
    3. חום פתרון זה ב 105 ° C תוך ערבוב במשך 1-2 h. מוצק צהוב לזרז מתוך פתרון. כאשר אין יותר לזרז בעליל טפסים, מסירים מהאש.
    4. לאפשר תערובת התגובה כדי להתקרר לטמפרטורת החדר, ולאחר מכן מקם באמבט קרח 0 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות לאסוף את המוצק צהוב על-ידי סינון ואקום לשטוף עם 5 מ ל כל אחד אתנול וביו -דיאתיל אתר.
    5. נמסים לחלוטין את המוצר הגולמי ב- 15-25 מ של מים חמים. מקררים 10 מ"ל של פתרון HCl מרוכזת בבקבוקון מסנן על-ידי הצבתו באמבט קרח. לסנן את הפתרון צהוב בתוך תמיסת HCl צוננת לזירוז משקעים של מוצק טהור צהוב חיוור. לסנן את התמיסה ולשטוף עם 5 מ ל כל אחד של 0.5 M HCl, אתנול ואתר.
    6. Characterize מתחם באמצעות IR ספקטרוסקופיה. לאמת טוהר על ידי זיהוי תדרי מתיחה-3226 ס מ -1 ס מ 1604 -1, 1297 ס מ -1, 801 ס מ -1. הטומאה קטין נפוצים ב 2069 ס מ -1 מוקצה [Ru (NH 3) 5 N 2] Cl 3.
  2. סינתזה של Cl [(או 2) (NH 3) 4 Ru Ru (ממוצע-O) (NH 3) 4 (או 2)] 5
    1. להמיס 100 מ ג (0.34 mmol) [Ru (NH 3) 5 קלרנית] Cl 2 ב- 50 מ של 1 מ' NH 4 או מגרגרי לחץ עגול עם תחתית הקיר כבד 200 מ. ברפיון שווי הבקבוק עם פקק, לחמם את תערובת התגובה ב 75 מעלות צלזיוס במשך 6-אייץ להסיר מהאש ומערבבים בטמפרטורת החדר במשך 4 ימים להניב פתרון ירוק כהה-
      זהירות! חימום של תוצאות כלי אטום שיצטברו לחץ. הקפד להשתמש כלי זכוכית לחץ-בטוח המתאים. התגובה הזו, המטרה של איטום הספינה היא למזער אובדן של NH גז 3. לכן, למקם את פקק באופן רופף כדי לאפשר את שחרורו של לחץ עודף.
  3. טיהור באמצעות כרומטוגרפיה קטיונים
    1. בגביע, 25 מ ל להשעות 5 g-קטיון שרף (למשל, Dowex 50WX2 200-400 מחוט (טופס H +) 10 מ ל 0.1 M HCl.
    2. טען הזה slurry לתוך עמודה 10 מ"ל (בקוטר 10 מ מ, גובה 15 ס מ) מודבקת עם מאגר הממס 50 מ. לשטוף את השרף כ 20-30 מ של 0.1 M HCl, עד eluate חסר צבע.
    3. להחזיר הפתרון הירוק התגובה מבודד בשלב 1.2.1. כדי פתרון זה, להוסיף HCl מרוכזת כדי להתאים את ה-pH ל- 2, ובשלב צבע פתרון משתנה לחום.
    4. טען הפתרון acidified אל העמודה שרף-קטיון שהכין בשלב 1.3.2 בעדינות pipetting זה על גבי השרף. תן את eluate לחלוטין לנקז, להמשיך לטעון את הפתרון. חזור על תהליך זה עד הפתרון כולו נוספה. החלק העליון של השרף יהיה חום כהה/שחור. השרף תגרום להקטנת נפח מעט.
    5. שימוש חרוזי זכוכית כדי לכסות את החלק העליון של השרף. אלה ימנע השרף שמפריעים כאשר פתרונות חדשים מתווספים.
    6. Elute את העמודה עם 20 מ של 1 M HCl.
    7. Elute את העמודה עם ריכוז HCl מוגברת 1.5 M (≈ 50 מ ל). פתרון צהוב יתחיל להוריד את העמודה. להעלות את ריכוז HCl עד 2 מ' ולהמשיך eluting עד eluate חסר צבע או ירוק-צהוב חיוור מאוד. הנפח הכולל של 150-200 מ ל יידרש לתהליך זה.
    8. להגדיל את ריכוז HCl עד 2.5 מ' (20-50 מ"ל). לאסוף את eluate כשברים במבחנות. להגדיל את 3 M HCl. המוצר elute עמודה כמו פתרון ירוק-חום. שבר אדום-חום יכול גם להתחיל תיפרדי העמודה. כמו שברים אלה הם זיהומים האדומים מחומצן רותניום, לא בריכה עם שברים ירוק-חום.
  4. איפיון ואימות של טוהר [(או 2) (NH 3) 4 Ru Ru (ממוצע-O) (NH 3) 4 (או 2) Cl 5
    1. מבחן כל השברים מן שלב 1.3.8. על ידי UV-vis ספקטרוסקופיה. כדי לבצע משימה זו, להוסיף 100 µL של השבר נתון לתוך 2 מ"ל של 3 מ' NH3, לנתח ידי UV-vis ספקטרוסקופיה. שברים המכיל מוצר טהור תהיה להקה גדולה ספיגת ב 360 nm ו של ספיגת פחות אינטנסיבי על 600 ננומטר. ספיגת-480 או 533 ננומטר הוא מרמז על האדומים מחומצן רותניום וזוהמה רותניום אדום, בהתאמה.
    2. מאגר שברים המכיל מוצר טהור, מתאדים הפתרון ליובש אידוי רוטרי. המוצר יהיה מבודד כמו מוצק ירוק-חום. התשואות הם בדרך כלל גודל 5-15 מ ג (10-20% תשואה). יחיד-גבישים, מתאים עקיפה של קרני רנטגן, יכולה להיות מושגת על ידי פעפוע אדי אתנול לתוך פתרונות מימית של המתחם-
    3. כדי לוודא טוהר, לנתח את המתחם על ידי UV-vis ספקטרוסקופיה בפתרון של תמיסת באגירה פוספט pH 7.4 (PBS). טוהר עשויים להידרש, על ידי לקיחת היחס בעוצמה של 360 nm ו 600 nm פסגות. יחס זה הוא 31 עבור תרכובת טהורה. עבור תרכובות טמא, היחס יהיה קטן יותר.
    4. לנתח את הדגימה בתוך המדינה מוצק ידי ספקטרוסקופיית אינפרא-אדום. להקות האבחון הינם 3234 ס מ -1 ס מ 3151 -1, 1618 ס מ -1, 1313 ס מ -1, 815 ס מ -1. להקות הטומאה נפוצים הם ראו ב 1762 ס מ -1 ו- 1400 ס מ -1, האופייניים NH 4 Cl. רותניום אדום ניתן לזהות על ידי להקות 1404 ס מ -1, 1300 ס מ -1, 1037 ס מ -1 ו ס מ 800 -1.
  5. הערכה של עיכוב ספיגת סידן מיטוכונדריאלי על-ידי קרינה פלואורסצנטית ספקטרוסקופיה
    זהירות! ההליכים הבאים שימוש בתרבית של תאים. העבודה צריכה להתבצע בברדסים זרימה שכבתית המתאימה שאושרו עבור בטיחות ביולוגית ברמה 2 מחקר (BSL2).
    ​ הערה: [(או 2) (NH 3) 4 Ru Ru (ממוצע-O) (NH 3) 4 (או 2) Cl 5 להתייחס כמו [Ru] בסעיף זה
    1. להפוך buffered גלוקוז המכיל תמיסת מלח (BGSS) התקשורת וזמינותו. BGSS הוא פתרון הכוללת 110 מ מ אשלגן כלורי, 2 PO 1 מ מ ח' 4, 1 מ MgCl 2, 20 מ מ 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic חומצה (HEPES), succinate נתרן 5 מ מ, 30 מיקרומטר אתילן גליקול-bis(β-aminoethyl ether)-N, N , N ', N '-חומצה tetraacetic (EGTA). לשלב את הכל חוץ EGTA, להתאים את ה-pH ל 7.4. להוסיף EGTA והתאם pH ל 7.4. עבור 50 מ של מדיה assay להוסיף 0.5 מ"ל של גלוקוז 1 מ"ג/מ"ל.
    2. הלה התרבות התאים ב- 500 ס מ 2 צלחות פטרי ב- Dulbecco ' s בינוני נשר שונה (DMEM) עם 10% עוברית שור סרום (FBS) ב חממה humidified עם 5% CO 2-37 ° C. להגביר את הלה גדל התאים ב- 100 מ מ פטרי על ידי זריעה אותם בצלחת פטרי 2 ס מ 500. 115 מ ל שאמצעי האחסון מדיה סה כ צלחת גדולה. כל מנה גדולה תניב כ-18 מיליון תאים, מספיק בשביל שני ניסויים ספקטרוסקופיה של זריחה.
      1. לגדל את התאים עד שיגיעו 90-95% confluency. להסיר מדיה, ולשטוף את התאים עם 15 מ"ל pH 7.4 PBS. להוסיף 15 מ"ל חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) של 1 מ מ ב- PBS, תקופת דגירה של 10 דקות לנתק את התאים. להעביר את התאים 14 מ"ל סביב צינורות בז התחתון
    3. לספור תאים באמצעות trypan blue ו- hemocytometer עם מיקרוסקופ הפוכה, ולחשב את המספר הכולל של תאים ונפח של התקשורת צריכה להגיע 7.5 מיליון תאים לכל אמצעי אחסון 1.8 mL בינוני. Centrifuge התאים 10 דקות ב × 5310 ג'י Decant תגובת שיקוע והוסף את הנפח מחושב של BGSS. Resuspend תאים בעדינות.
      1. בשביל זה assay, הכנת מלאי פתרונות של 40 מ מ digitonin ב דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד), 1 מ מ סידן ירוק-5N H 2 O, ו- 10 מ"מ CaCl 2 H 2 O. [Ru] מניות פתרונות, מוכן במים טהורים, נע בין 1-3 מ מ.
        ​ הערה: סידן ירוק-5N הוא רגישים לאור. לאחסן בחושך, למזער חשיפה קלה.
    4. התקנה של fluorimeter כדי לרגש-506 nm וקריאה הפליטה-532 ננומטר עם cuvette-מחזיק נשלטת על 37 ° C. הכן cuvette אקריליק עם בר מערבבים או גלגל, ההשעיה תא 1.8 mL מ 1.5.2 לעיל, 1.8 µL digitonin פתרון, 3.6 & #181; L סידן ירוק-5N (פתרון), µL 9 [Ru] (עבור פתרון מניות 1 מ"מ, 5 מיקרומטר הריכוז הסופי). דגירה תאים למשך 15 דקות fluorimeter.
      1. לקרוא את הנתונים כיחס עירור/פליטה במקום בליעת raw. פרקטיקה זו ממזערת את השגיאות המשויכות תנודות עוצמת מקור האור.
      2. לבצע את הניתוח הראשון מדגם בהיעדר [Ru] כדי למדוד את ההשפעה של התוספת של CaCl 2 על התגובה של התאים.
      3. בגין ניתוח על fluorimeter עם ההגדרות המתוארות 1.5.4. חכו כ 2 דקות כדי ליצור בסיס יציב פליטה, ולאחר מכן להוסיף µL 1.8 CaCl 2 (10 מיקרומטר ריכוז סופי). עוצמת הפליטה יגדיל מיידית על התוספת של CaCl 2 ולאחר מכן תרקב במשך דקות יוני הסידן הזנת המיטוכונדריה. המתן לסיום הריקבון (≈ 5 דקות). להוסיף בולוסים סידן נוספים כדי לקבוע את התגובה ספיגת סידן מיטוכונדריאלי של תאים לא שטופלו [Ru].
    5. ב cuvette אחר המכיל 5 מיקרומטר [Ru], חזור על הניסוי כמתואר לעיל ב- 1.5.4.3. בנוכחות החומר המדכא, עוצמת הפליטה להגדיל, אבל לא ריקבון. התבוננות זו מרמזת על חסם ספיגת הסידן מיטוכונדריאלי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטה זו מתארת סינתזה של סידן מיטוכונדריאלי ספיגת מעכב [(או2) (NH3)4Ru Ru (ממוצע-O) (NH3)4(או2)] Cl5 החל מ [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2, חומר המוצא ידועה ruthenium(III). [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2 מאופיין ספקטרוסקופיית אינפרא-אדום, עם הלטראלית ב 3200 ס מ-1, 1608 ס מ-1, 1298 ס מ-1ו- 798 ס מ-1 (איור...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סידן מיטוכונדריאלי ספיגת מעכב [(או2) (NH3)4Ru Ru (ממוצע-O) (NH3)4(או2) Cl5 יכול להיות מסונתז מן [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2, ruthenium(III) ידועה החל חומר, כפי שמתואר בהליך זה. הסינתזה של [Ru (NH3)5קלרנית] Cl2 מושגת בקלות עם קושי קלה. לאחר ערבוב RuCl3 עבור 16 h ב הידרזין מימה, ה-pH של התמיסה צריך להיות מותאם לערך של 2 עם HCl. הירידה pH הוא קריטי כדי להשיג את המוצר הרצוי. אם ר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי אוניברסיטת קורנל. עבודה זו עשוי להשתמש במרכז קורנל עבור חומרים משותפים מכוני מחקר, אשר נתמכים באמצעות תוכנית ה-NSF MRSEC (גרנט DMR-1120296). S.R.N. מאשר תמיכה של ה-NSF בוגר מחקר לאגודה (גרנט DGE - 1650441), ד ר דייב Holowka לקבלת סיוע עם הניסויים סידן. כל דעה, ממצאים, מסקנות או המלצות לידי ביטוי בחומר זה הם אלה של המחברים (s), אינן משקפות בהכרח את הנופים של הקרן הלאומית למדע.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
רותניום טריכלוריד הידראטלחץ כימי3750
חומצה הידרוכלורית מרוכזתJ.T. Baker9535
אמוניום הידרוקסיד מרוכזMallinckrodt Chemical WorksA669C-2 1
Dowex 50 WX2 200-400 MeshAlfa Aesar13945
סידן ירוק 5NInvitrogenC3737
DigitoninAldrich260746
DMSOAldrich471267
EGTAAldrichE3889
KClUSB20598
KH2PO4AldrichP3786
MgCl2Fisher ScientificM33-500
HEPESFluka54466
נתרן סוקסינטאלפא Aesar33386
EDTAJ.T. Baker8993-01
גלוקוזאולדריץ'G5000
200 בקבוק תחתון עגולChemGlassCG-1506-14
פקק זכוכיתChemGlassCG-3000-05
עמוד זכוכית 10 מ"מ x 15 ס"מ עם מאגריםמותאם אישית - בדומה לעמודי Chemglassבדומה ל- CG-1203-20
DMEMCorning10-017-CV
FBSGibco10437028
PBSCorning21-040-CV
צינורות בז תחתון עגולFisher Scientific14-959-11B 
500 ס"מ2 צלחותפטרי קורנינג431110
טריפן כחולThermoFisher Scientific15250061
HemacytometerAldrichZ359629
קובטות אקריליותVWR 58017-875
ספקטרומטר UV-Vis זריזדגם קארי 8454 
ספקטרופלואורמטרSLM דגם 8100C
ספקטרומטר IRBruker Hyprion FTIR עם חיבור
צנטריפוגהALC דגם PM140R
מיקרוסקופ אור הפוךVWR ברקוד 89404-462
ATR

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. De Stefani, D., Rizzuto, R., Pozzan, T. Enjoy the trip: Calcium in mitochondria back and forth. Annu. Rev. Biochem. 85, 161-192 (2016).
  2. Contreras, L., Drago, I., Zampese, E., Pozzan, T. Mitochondria: the calcium connection. Biochim. Biophys. Acta. 1797 (6-7), 607-618 (2010).
  3. Giorgi, C., et al. Mitochondrial calcium homeostasis as potential target for mitochondrial medicine. Mitochondrion. 12 (1), 77-85 (2012).
  4. De Stefani, D., Raffaello, A., Teardo, E., Szabò, I., Rizzuto, R. A forty-kilodalton protein of the inner membrane is the mitochondrial calcium uniporter. Nature. 476 (7360), 336-340 (2011).
  5. Baughman, J. M., et al. Integrative genomics identifies MCU as an essential component of the mitochondrial calcium uniporter. Nature. 476 (7360), 341-356 (2011).
  6. Kamer, K. J., Mootha, V. K. The molecular era of the mitochondrial calcium uniporter. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 16 (9), 545-553 (2015).
  7. Ying, W. -L., Emerson, J., Clarke, M. J., Sanadi, D. R. Inhibition of mitochondrial calcium ion transport by an oxo-bridged dinuclear ruthenium ammine complex. Biochemistry. 30 (20), 4949-4952 (1991).
  8. Emerson, J., Clarke, M. J., Ying, W. -L., Sanadi, D. R. The component of "ruthenium red" responsible for inhibition of mitochondrial calcium ion transport. Spectra, electrochemistry, and aquation kinetics. Crystal structure of µ-O-[(HCO2)(NH3)4Ru]2Cl3. J. Am. Chem. Soc. 115 (25), 11799-11805 (1993).
  9. Matlib, M. A., et al. Oxygen-bridged Dinuclear Ruthenium Amine Complex Specifically Inhibits Ca2+ Uptake into Mitochondria in Vitro and in Situ in Single Cardiac Myocytes. J. Biol. Chem. 273 (17), 10223-10231 (1998).
  10. Oxenoid, K., et al. Architecture of the mitochondrial calcium uniporter. Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).
  11. Nathan, S. R., et al. Synthetic Methods for the Preparation of a Functional Analogue of Ru360, a Potent Inhibitor of Mitochondrial Calcium Uptake. Inorg Chem. 56 (6), 3123-3126 (2017).
  12. Allen, A. D., Senoff, C. V. Preparation and infrared spectra of some ammine complexes of ruthenium(II) and ruthenium(III). Can. J. Chem. 45 (12), 1337-1341 (1967).
  13. Murphy, A. N., Bredesen, D. E., Cortopassi, G., Wang, E., Fiskum, G. Bcl-2 potentiates the maximal calcium uptake capacity of neural cell mitochondria. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (18), 9893-9898 (1996).
  14. Deak, A. T., et al. Assessment of mitochondrial Ca⁺ uptake. Meth. Molec. Biol. 1264, 421-439 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Ruthenium 360UV VisIRHeLaRuthenium BrownAmmonium Hydroxide

מאמרים קשורים