מאמר זה מתאר את ההכנה והערכה של חבל הטבור spheroids מטריקס-derived בתאי גזע mesenchymal עם דגם פגם הדו-צדדיים גיד ברך בחולדה. מודל זה היתה משויכת תחלואה מקובל היה למצוא כדי לזהות הבדלים בין הגידים אינו מטופל ומטופל ו בין שני הטיפולים נבדק.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכה של תאי גזע טיפולים במודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות
במאמר זה
סיכום
תקציר
רפואה רגנרטיבית מספק חלופות הרומן לתנאי זה אתגר טיפולים מסורתיים. שכיחות התחלואה של tendinopathy על פני מינים, בשילוב עם סגולות הריפוי מוגבלת של רקמה זו, תתבקש החיפוש אחר טיפולים הסלולר והם יהיו. לדחוף את התפתחות ניסיוניות ללמוד את יעילותם. חבל הטבור מטריקס-derived בתאי גזע mesenchymal (UCM-MSC) הם מועמדים מושך כי הם בשפע, קל לאסוף, לעקוף את החששות אתית ואת סכנת היווצרות טרטומה, עדיין דומים בתאי גזע עובריים פרימיטיביים יותר מקרוב יותר עניין MSCs. משמעותיות רקמות-derived מבוגרים התמקדה משקם כאסטרטגיה כדי לשפר את המאפיינים של MSCs דרך היווצרות ספרואיד. זה טכניקות פרטים נייר כדי לבודד UCM-MSCs, להכין spheroids בסרט משקם, לנתח את השפעת היווצרות ספרואיד על פני השטח סמן ביטוי. כתוצאה מכך, יצירת מודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות מתואר ויוו השרשת UCM-MSC spheroids שנוצר בסרט משקם. סיבוך לא נצפתה במחקר לגבי תחלואה, הלחץ בעליה אפקטים או זיהום ברקמות. הציון פונקציונלי של החולדות המופעלים על 7 ימים היה נמוך מזה של חולדות רגילה, אך חזר להיות תקין תוך 28 ימים לאחר הניתוח. עשרות היסטולוגית ריפוי רקמות אישרו הנוכחות של קריש ב פגמים שטופלו מוערכים ב 7 ימים, היעדר התגובה גוף זר, ואת מתקדמת הריפוי 28 ימים. מודל פגם זה גיד פיקת הדו-צדדיים שולט הבין-וריאציה באמצעות יצירת פקד פנימי בתוך כל עכברוש, היה הקשורים עם תחלואה מקובל, והתירו גילוי של ההבדלים בין הגידים לא מטופל וטיפולים.
מבוא
פציעה בגיד הוא אחד הגורמים השכיחים ביותר של ניוון שרירים וכאב משמעותי על פני מינים1. ברפואה וטרינרית, פציעות גיד רצועה הם עניין מיוחד בסוסים, כפי 82 אחוז פציעות כל סוסי מרוץ לערב מערכת השלד, 46% של אלה משפיעים על הגידים והרצועות2,3. היווצרות רקמה צלקתית משפיע על תכונות ביו-מכני של הגידים נרפא ומסביר הפרוגנוזה שמרו על החזרה לשימוש אתלטיק לאחר פציעות גיד כופף; re-פגיעה מתרחשת תוך שנתיים ב עד 67% של סוסים שמרני4. רפואה רגנרטיבית מספק חלופות הרומן תנאי כי האתגרים טיפולים מסורתיים. טיפול בתאי גזע עצמיים הפיק מספר5,מעודד תוצאות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של ווסטרן אוניברסיטת למדעי הבריאות.
1. בידוד והרחבה של MSCs חברת מטריקס אקווין חבל הטבור
- להשיג את השליה מארה למבוגרים (בהריון) לאחר שנצפה foaling ואת גילוח ורחיצה כירורגית לבודד את חבל הטבור מן השליה. שמור את חבל הטבור buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) עם 1% פניצילין-סטרפטומיצין (P/S) ב 4 ° C במהלך העברה עד עיבוד.
- לשטוף את חבל הטבור פעמיים עם טמפרטורת החדר PBS עם 1% P/S בשפופרת 50 מ ל. חתך חבל הטבור לחלקים 2-inch-ארוכת על צלחת 150 מ מ, שטיפת הטמפרטורה בחדר PBS עם 1% P/S בשפופרת 50 מ ל שתיים או שלוש פעמים, עד רוב הדם שוטפים החוצה.
- ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
במחקר הנוכחי, התוצאות מוצגים אומר ± SD (סטיית תקן). התאים הם בודדו אותנו מהמתרחש חבלים חבל הטבור של 6 סוסות, אחוז שורות תאים מבודדים לבטא כל סמן תא השטח תחת מיזוג רגיל או משקם הושוו עם מבחן פרידמן, כמו ניתוח השונות פרמטרית עם חזר אמצעים. ליצירת דגם של גיד פגם, חולדות 8 שימשו להערכת 7 ימים לאחר הניתוח, חולדות 12 שימשו להערכת 28 ימים. תוצאות של תוצאות תפקודי מוצגים אומר SEM ± (שגיאת התקן של הממוצע), בהשוואה באמצעות t-המבחן. UCM נבחר כמקור הסלולר בשל שפע, נוחות של אוסף, והתפשטות מעולה יחסית .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
תאים לסוסים נבחרו עבור פרויקט זה, כי בסופו של דבר אנחנו מתכוונים לבחון את המועמדים גישות ניהול של tendinopathies טבעי אצל סוסים. ואכן, פציעות גיד אצל סוסים הם מושך כמודלים הטבעי של tendinopathy באדם עקב הדמיון ביולוגי בין הסוסים כופף דיגיטלי שטחית גיד אכילס בני41. תא השטח סמני CD44, CD90, CD105, CD34 ו- MHC II נבחרו עבור immunophenotyping של תאים, בהתאם לקריטריונים המומלצים על ידי האגודה הבינלאומית הסלולר42. במחקר שנערך לאחרונה, eqUCM-MSCs היו חיובי CD44 שלילי עבור CD34 ו- .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים יש אין ניגוד אינטרסים לחשוף.
תודות
המחברים רוצה להכיר את ד ר סו, PhD, אותה לניתוח סטטיסטי של הנתונים. המחברים גם תודה ד ר מקלור, לוטרינריה, DACLAM, לה עצות על ההרדמה, כאב ניהול פרוטוקולים השתמשו במחקר. פרויקט זה נתמך על ידי מענקים ממשרד מדעי אוניברסיטת ווסטרן לבריאות של סגן עבור מחקר (12678v) וקרנות 1433 סעיף USDA (2090).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| PBS 10x | Hyclone | SH30258.01 | מתכלה |
| מסוג IA | Worthington | LS004197 | |
| DMEM מתכלה עם גלוקוז | נמוך Hyclone | SH30021. FS | מתכלה |
| סרום בקר | עוברי Hyclone | SH30910.03 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין מתכלה 100x | Hyclone | SV30010 | מתכלה |
| 0.25% | Hyclone | SH30042.01 | |
| Accutase | מתכלה טכנולוגיות תאים חדשניות | AT104 | מתכלה |
| טריפן כחול | Hyclone | SV30084.01 | מתכלה |
| דימתיל סולפוקסיד | Sigma | D2650 | מתכלה |
| צ'יטוזן | סיגמא | C3646 | |
| נתרן הידרוקסיד | Sigma | S8045 | |
| סרום בקר מתכלה אלבומין | היקלון | SH30574.01 | מתכלה |
| צינור פוליסטירן תחתון עגול | קורנינג | 149591A | מתכלה |
| עכבר נגד סוסים CD44 (FITC) | AbD serotec | MCA1082F | עכבר מתכלה |
| נגד חולדות CD90 (FITC) | AbD serotec | MCA47FT | עכבר מתכלה |
| נגד סוסים MHC-II (FITC)AbD | serotec | MCA1085F | עכבר מתכלה |
| IgG1 (FITC) - בקרת איזוטיפ | AbD serotec | MCA928F | |
| עכבר מתכלה חד-שבטי [SN6] ל-CD105 (FITC) | abcam | ab11415 | מתכלה |
| IgG1 (FITC) - בקרת איזוטיפ | abcam | ab91356 | עכבר מתכלה |
| אנטי אנושי CD34 (FITC) | BD | BDB560942 | מתכלה |
| IdG1 kappa (FITC) | BD | BDB555748 | מתכלה |
| 7-AAD | BD | BDB559925 | מתכלה |
| BD Accuri C6 זרימה ציטומטר | BD | ציוד | |
| ואקוטיינר 5 מ"ל | Med Vet International | RED5.0 | |
| Sigma | C3821 | ||
| כלוריד | Sigma | C5670 | מתכלה |
| Sevoflurane | JD Medical | 60307-320-25 | |
| חולדות מתכלות | נהר צ'ארלס | 400 | חיית ניסוי |
| ערכת ניתוח חולדה | מכשיר הרווארד | ציוד | 728942 |
| להב כירורגי #15 | MEDLINE | MDS15115 | מתכלה |
| MD's Baytril (2 מ"ג/טבליה), רימדיל (2 מ"ג/טבליה)Bio | Serv | F06801 | |
| פוליגלקטין מתכלה 910, 5-0 | Ethicon | J436G | מתכלה |
| Eosin alchol shandon | Thermo מדעי | 6766007 | מתכלה |
| האריס המטוקסילין | תרמו מדעי | 143907 | מתכלה |
מקורות
- Rossdale, P. D., Hopes, R., Digby, N. J., offord, K. Epidemiological study of wastage among racehorses 1982 and 1983. Vet Rec. 116 (3), 66-69 (1982).
- Black, D. A., Tucci, M., Puckett, A., Lawyer, T., Benghuzzi, H. Strength of a new method of achilles tendon repair in the rat - ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
