כתב יד זה מתאר שיטה של גרימת סטטוס אפילפטיקוס בזריקה פילוקרפין מערכתית ואת הפיקוח התקפים חוזרים ונשנים ספונטנית בבעלי חיים באמצעות וידאו אלחוטית טלמטריה העוויתיים המערכת. פרוטוקול זה יכול להיות מנוצל ללמוד את המנגנונים pathophysiologic של אפילפסיה כרונית, epileptogenesis התקפים חריפה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
המודל פילוקרפין של אפילפסיה של אונה רקתית EEG ניטור באמצעות מערכת Radiotelemetry בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
אפילפסיה של האונה הרקתית (TLE) היא הפרעה נוירולוגית נפוצה בבגרות. ללימודים translational של אפילפסיה כרונית, פילוקרפין-induced סטטוס אפילפטיקוס (SE) נבחרה לעתים קרובות כדי לסכם התקפים חוזרים ונשנים ספונטנית (SRS). כאן אנו מציגים פרוטוקול האינדוקציה SE על-ידי הזרקת בקרום הבטן (i.p.) פילוקרפין ובפיקוח של התקפים חוזרים כרונית בבעלי חיים באמצעות וידאו אלחוטית טלמטריה מערכת העוויתיים (EEG). להדגים שינויים התנהגותיים בולטים שדורשים תשומת לב אחרי הזרקת פילוקרפין ו שלהם קורלציה עם אובדן עצביים בהיפוקמפוס 7 ימים, פילוקרפין שלאחר 6 שבועות. אנו מתארים גם את ההליכים ניסיוני של השרשה אלקטרודה עבור וידאו ו- EEG הקלטה ולאחר ניתוח תדירות ומשך של התקפים חוזרים ונשנים כרונית. לבסוף, נדון על סיבות אפשריות מדוע לא מושגות התוצאות הצפויות בכל מקרה ומקרה. זה מספק סקירה בסיסית של מידול אפילפסיה כרונית עכברים והנחיות לפתרון. אנו מאמינים שפרוטוקול זה יכול לשמש בסיס עבור דגמים מסוימים של אפילפסיה כרונית, epileptogenesis.
מבוא
TLE הוא אחד הנפוצים epilepsies רכשה1. אנשים עם אפילפסיה לחוות התקפים חוזרים ונשנים בשל חריגה פעילויות עצביים במוח2,3. בהתחשב בכך TLE לעתים קרובות בלתי פתיר, חשוב להבין את המנגנונים הבסיסיים שבבסיס הפיתוח של אפילפסיה.
מודלים בעלי חיים יכולים לסכם את איפיוני המפתח של TLE האנושי יכול להציע הערכה טובה יותר של TLE פתופיזיולוגיה, אשר מאפשר לנו לעקוב ולטפל גורמים קריטיים epileptogenesis בקלות. ביניהם, SE chemoconvulsants-induced כבר בשימוש נרחב4,5. שלא כמו דגמים אחרים של אפילפסיה, כגון גירוי חשמלי אשר מציג אין בהיפוקמפוס טרשת נפוצה וחזקים SRS6,7,8, הזרקה מערכתית של chemoconvulsants דימה קליניים בפתוגנזה של TLE אנושי, דהיינופגיעה מוחית ראשונית, תקופה כמוס, אפילפסיה כרונית של שלב וקיימות SRS5,9,10. לכן, טכניקה זו יכול להיות מנוצל במחקרים שונים להסביר את המנגנונים של נזק מוחי חריפה, epileptogenesis או דיכוי התקף. יתר על כן, histopathological שינויים המושרה על ידי chemoconvulsants דומים לאלה לראות TLE אנושי, מתן של רציונל נוסף לשימוש של TLE מודלים מכרסמים10,11,12. ראוי לציין, נזקים מבניים מעורבים ההיפוקמפוס היה עקבי שפירטתי בשני המודלים חומצה - ו פילוקרפין-induced SE kainic. עם זאת, בהשוואה להזרקת חומצה kainic, המודל פילוקרפין יכול לייצר SRS עמידים יותר בעכברים, אשר יכולים להציע יתרונות ובודאי ללמוד אפילפסיה כרונית כאשר בוחנים את הזמינות רחב של העכבר הטרנסגניים קווים5, 13 , 14 , 15. Moreover, התקדמות פרכוס לאחר הזרקת פילוקרפין היא בדרך כלל מהיר יותר במודל חומצה kainic, מתן ראיות נוספות לשימוש יעיל של מודל פילוקרפין של אפילפסיה.
כאן, נדגים שיטה של SE גרימת על ידי הזרקה i.p. של פילוקרפין ועל ידי ביצוע וידאו ומעקב EEG באפילפסיה כרונית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים ניסיוני אושרו על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה הקתולית של קוריאה, בוצעו לפי מוסדות לאומיים של בריאות המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (NIH פרסומים מס ' 80-23).
1. SE אינדוקציה
- לרכוש עכברים C57BL/6NHsd זכר בן שבוע 8, שוקלים כל עכבר. לאחר מכן, השתמש עט מרקר כדי לסמן את הזנב של עכברים כל לזיהוי קל שלהם במהלך אינדוקציה SE.
- לחשב את הסכום של סקופלומין מתיל ברומיד (סקופלומין; 2 מ"ג/ק"ג), hemisulfate "טארביטליין" ("טארביטליין"; 2 מ"ג/ק"ג), פילוקרפין הידרוכלוריד (פילוקרפין; 280 מ"ג/ק"ג) מבוסס על משקל העכבר ולהוסיף תמיסת מלח (0.9% NaCl, 10 מ"ל/ק"ג) כדי להפוך פתרונות.
הערה: לדוגמה, אם המשקל של העכבר הוא 25 גרם, הסכומים הבאים מוחלים: סקופלומין, "טארביטליין": 2 מ"ג/ק"ג * (25 גרם של 1,000 גרם) = 0.05 mg, תמיסת מלח: 10 מ"ל/ק"ג * (25 גרם של 1,000 גרם) = 0.25 mL, פילוקרפין: 280 מ"ג/ק"ג * (25 גרם של 1,000 גרם) = 7 מ ג , מלוחים: 10 מ"ל/ק"ג * (25 גרם של 1,000 גרם) = 0.25 mL. - לטעון את התערובת סקופלומין ו "טארביטליין" במזרק 1 מ"ל עם מחט 30 גרם. להזריק את הפתרון intraperitoneally לתוך כל עכבר ולאחר מכן חזור העכברים לכלובים. ב 30 דקות לאחר ניהול סקופלומין "טארביטליין", להזריק פילוקרפין פתרון לתוך כל עכבר (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 30 G מחט). מיד לאחר ההזרקה פילוקרפין, מקום העכברים אינקובטור (28-30 מעלות צלזיוס) להשגחה.
- בזהירות לפקח על אופן הפעולה של העכברים עד SE הוא המושרה. אם התקפים מוטוריים הלימבי המתאימים לשלב 3 ומעלה בהתאם המידה של ראסין מזוהים, רשום את הזמן ונטר העכברים כדי לקבוע אם ההתקפים מתרחשים בתדירות גבוהה יותר. ברגע רצופה התקפים מוטוריים האחרון יותר מ 2 דקות, מקם את העכבר בתוך כלוב חדש בטמפרטורת החדר ולשמור על פיקוח עבור h 3 כדי לקבוע אם התקפים עוויתית שלהם להמשיך SE מושרה. המתת חסד העכברים שנכשלו להיכנס במהירות בערך שעתיים לאחר ההזרקה פילוקרפין.
הערה: קנה המידה של ראסין; שלב 1, הפה ותנועה פנים; שלב 2, הראש מהנהן; שלב 3, קלונוס forelimb; שלב 4, לגידול עם קלונוס forelimb; שלב 5, לגידול ונופל עם forelimb קלונוס16. אם העכבר לא מועברים אל הכלוב בטמפרטורת החדר מיד לאחר אינדוקציה SE, העכבר יכול למות עקב מכת חום. - לסיים התנהגותית חריפה התקפים ב-3 שעות לאחר תחילת SE באמצעות הזרקת פתרון דיאזפם (i.p.; 10 מ"ג/ק"ג; 1 מ"ל מזרק 30 G מחט). הפוך את הפתרון דיאזפאם על ידי דילול 5 מ"ג/מ"ל של דיאזפאם בשמן קיק מוקשה 35 10% polyoxyl על-ידי הוספת תמיסת מלח (i.p.; 10 מ"ל/ק"ג; 1 מ"ל מזרק 30 G מחט).
הערה: 10% polyoxyl 35 מוקשה שמן קיקיון פתרון: 1 מ"ל polyoxyl 35 שמן קיק מוקשה פתרון + 9 מ ל תמיסת מלח. אחסן את הפתרון בטמפרטורת החדר. לדוגמה, אם משקל הגוף העכבר 25 גרם, להזריק µL 250 של דיאזפאם פתרון: דיאזפאם 5 מ"ג/מ"ל µL 50 + 200 µL 10% polyoxyl 35 קסטור מוקשה שמן פתרון = 250 דיאזפאם 1 מ"ג/מ"ל µL. - עבור עכברים המזויפים, לבצע זריקה i.p. תערובת סקופלומין מתיל ברומיד, "טארביטליין" hemisulfate (i.p.; שני 2 מ"ג/ק"ג, 10 מ"ל/ק"ג. מזרק 1 מ"ל; 30 G מחט). 30 דקות מאוחר יותר, להזריק תמיסת המלח intraperitoneally (i.p.; 10 מ"ל/ק"ג; 1 מ"ל מזרק 30 G מחט).
הערה: אם משקל הגוף העכבר 25 גרם, להזריק µL 250 של תמיסת. סאלין במקום פילוקרפין. - לאחר ההזרקה דיאזפם (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 30 G מחט), לנהל 1 מ"ל של דקסטרוז 5% לכל לעכבר הבודד (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 26 גרם מחט).
הערה: 1 מ"ל של הזרקת דקסטרוז 5% מספק מקור אנרגיה, לחות שיכולים להגביר שיעור ההישרדות. - במהלך הטיפול שלאחר בחממה (28-30 מעלות צלזיוס), תנגב את הפרשות יתר כגון רוק, דמעות, וצואה.
- יום 1 לאחר אינדוקציה SE, שוקל העכברים ולשמור אותם בחממה (28-30 מעלות צלזיוס) ליום אחד נוסף. יום 2, לאחר אינדוקציה SE, שוקל העכברים ולהחזיר אותם לכלוב שלהם הביתה. לספק לחות צ'או כדי להקל על ההחלמה שלהם.
הערה: בניסוי זה, היה שיעור התמותה של C57BL/6NHsd לאחר סיום SE 8.57% בממוצע (3 החוצה של עכברים 35 שנבדקו). - למדוד את משקל הגוף של בעלי החיים מדי יום עד 7 ימים שלאחר פילוקרפין ולהזריק העכברים עם דקסטרוז 5% (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 26 גרם מחט) כאשר משקל הגוף לא גדל. לעצור את הגוף משקל ניטור כאשר העכברים להתחיל להחזיר את משקל הגוף ומכלה צ'או לחים ללא קושי-2 ימים לאחר ההזרקה פילוקרפין.
הערה: אם משקל הגוף של עכבר לא גדלה עד 7 ימים פוסט SE, אל תכלול את העכבר הניסוי, המתת חסד על ידי פחמן דו-חמצני. בהתאם הרקע של העכבר, מוות יכול להתרחש מעת לעת; עם זאת, במקרה של C57BL/6NHsd, פחות מ 1% של עכברים מתו בניסויים אלה. עם ההישרדות של יותר מ- 7 ימים לאחר אינדוקציה SE, העכברים רק לעתים נדירות מתים במהלך תקופת כמוס.
2. ההשתלה ניתוח עבור ניטור וידאו EEG
- להכין עכברים בן שבוע 12 (4 שבועות לאחר אינדוקציה SE) כדי לבצע בדיקות וטלמטריה ההשתלה עבור ניטור EEG.
הערה: התזמון של השרשה יכול להיות שונה בהתאם למטרות ניסיוני זנים העכבר. - לפני הניתוח, עזים ומתנגד את העכבר עם תערובת (4:0.5) של קטאמין (50 מ"ג/מ"ל) והפתרון חריגות השירותים הווטרינריים (23.3 mg/mL) מומס בתוך תמיסת מלח במינון של 2.5 µL/גרם משקל (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 26 גרם מחט). לנטר את קצב הנשימה ואת המאמץ הנשימתי של העכבר במרווחי זמן קבועים (15 דקות מרווח זמן מירבי), להעריך את עומק הרדמה על ידי רפלקס הנסיגה פדלים.
- מקם את העכבר בתוך מסגרת stereotaxic עם האוזן ברים, צלחת הנשיכה, למרוח את המשחה הוטרינר בשתי העיניים כדי למנוע עיוורון.
- כדי לשמור על תנאים סטריליים במהלך הניתוח, גילוח כירורגי אתרים בעזרת סכין גילוח. להיות זהירים כדי למנוע זיהום פרווה של השדה הכירורגי. לאחר הגילוח, לחטא את העור עם אתנול 70% פתרון יוד.
הערה: בניתוח יש לבצעו בצורה aseptic לובש כפפות סטריליות ומסכות, באמצעות טכניקות aseptic וציוד מעוקר. - לאחר שנוכח העומק של הרדמה, עושים חתך קו האמצע של העור כדי לחשוף את הגולגולת. להכין שני נקבים עם מקדח המצורפת את המנגנון stereotaxic בקואורדינטות של Bregma ציר anteroposterior (AP): +0.1 מ מ, ציר mediolateral (מ"ל): +0.1 מ מ (הפניה) ו- AP: −0.2 מ"מ, ML: +0.22 מ מ (קליפת הקודקודית הימנית)13.
- יש לנגב את העור עם צמר גפן ספוג PBS חילופי, ואחריו אתנול 70% פתרון יוד. עושים חתך האורך באמצע הראש במספריים כדי לחשוף את למבדה (הנקודה שבו לפגוש את הווריד, את התפר lambdoid) את Bregma (נקודת החיתוך של התפר הפרונטליים מאת התפר המשונן), למיקום היעד.
- לזהות אתרים אנטומיים כגון למדא ו- Bregma. מקם את המקדחה Bregma, הערה ה-X, Y נקודת ציון עבור נקודה זו.
- השתמש ספרים אטלס של המוח או לאור הפניות כדי לקבוע את נקודות הציון המתאים של האזורים במוח להקלטה EEG. לאחר מכן, לחשב את נקודות הציון הברגים (הפניה ורישום) בעזרת הקואורדינטות Bregma נמדד בשלב 2.5.2.
- הורידו לאט את המקדחה לעשות חור burr להיות נזהר שלא הוספת את המקדחה רחוק מדי בנקודת שבו הגולגולת הופך לדליל.
- הוסף הגופה של ערוץ יחיד אלחוטי המשדר EEG מאחורי העורף של הצוואר subcutaneously ומניחים גמיש מוביל ליד הגולגולת.
- להכניס בורג פלדה אל חלד (2 מ מ אורך) בתוך כל חור burr עם פינצטה והדק אותו באמצעות הנהג בורג על ידי סיבוב בכיוון השעון. ודא שהבורג לא הוכנס גם עמוק על-ידי התאמת זווית הסיבוב בורג ולמנוע נזק השכבה הקשה של המוח או של רקמות המוח.
- מפשיטים את המעיל בידוד 2 מ מ מהקצה של ההפניות ולמתוח את החוט מספיק זמן כדי לעגל הפיר בורג עבור חיבור טוב בין החוט את הבורג. להתחבר ההפניה הפניה הבורג הקדמי ואת ההקלטה להוביל הבורג בקליפת הקודקוד. לאחר מכן, להחיל מלט שיניים כדי לאבטח את מכלול שלם במקום מבלי לחשוף חלקי המתכת.
- לאחר אימות כי הבטון שיניים התייבש לחלוטין על ידי בדיקה חזותית, תפר את העור, להחיל משחה mupirocin אקטואלי. הצב את העכבר בתוך חממה של 30 מעלות צלזיוס לבד עד זה יחלים מהניתוח (בערך 30 דקות). לאחר מכן, להחזיר את העכבר לכלוב הביתה עד ניטור וידאו EEG רציף מתחילה.
הערה: לאחר הניתוח, כל עכבר מוזרק (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 30 G מחט) עם 5 מ"ג/ק"ג של גנטמיצין (אנטיביוטיקה), 5 מ"ג/ק"ג של ketoprofen (משככי כאבים). בעלי החיים צריך לפקח עד שהם הופכים מהיותו באופן מלא. עכברים מושתל משדר לקבל תקופת החלמה של 1 בשבוע.
3. וידאו ו- EEG ניטור וניתוח
- במקום עכבר לכלוב נפרד ולמקם את הכלוב על גבי הלוחות למשדר האלחוטי בו כלוב פאראדיי מותקן כדי למנוע הפרעה של אותות חשמליים כל מקורות כולל מחשב, AC קווים של מקלטי סמוכים.
הערה: עיין במדריך המסופקים על ידי היצרן. יש לנקוט כדי למנוע כתמים עיוורים. - רישום הפעילות החשמלית באמצעות מערכת אלחוטית וידאו EEG טלמטריה.
- פתח את התוכנה עבור הקלטת וידאו EEG. לחץ על "חומרה" ובחר "עריכת תצורה". להתאים את השפופרת, המשדר מושתל לתוך כל עכבר. לחץ על "ערוץ תצורה" ואשר שכל הערוצים פעילים. לחץ על "תצורת וידאו" כדי לסנכרן את הוידאו עם הנתונים EEG (רזולוציה של 40 x 480 וקצב המסגרות של 30.00).
הערה: להתקין מצלמת ה-IP עם רגישות גבוהה אם זה קריטי כדי לאסוף את איכויות תמונה טובה כי אפשר לזהות שינויים התנהגותיים עדינים של העכברים בלילה. - לחץ על "הגדרת" ו- "P3 הגדרת" מידע בעלי חיים בודדים הקלט, המצלמה תואם של הגדרת הגרף.
- לחץ על "רכישת" ו- "A/D קצב הדגימה" תעריפי דגימה ההתקנה. לחץ על "שם ערכת הנתונים" כדי לייעד ניסוי.
הערה: קצב הדגימה של EEG צריך להיות גבוהה מ- 500 הרץ. עקב גודל וידאו גדול וגודל נתוני EEG, מומלץ כי רק 24 שעות של נתונים מטופלות בכל הפעלה במקום להשתמש 2-שבוע-הקלטה רציפה כקובץ אחד. נתונים ניתן לשמור בנפרד במרווחים של 8 שעות או 12 שעות במקרה של מחסור בזיכרון RAM. - להפעיל את המשדר עם פס מגנטי ולחץ על "התחל רכישה" כדי לאסוף את הקלטת וידאו EEG. לפקח באופן רציף את העכבר על-ידי מערכת וידאו EEG לפחות 2 שבועות.
הערה: עבור עכברים C57BL/6, SRS נוטה להתרחש בקבוצות בימים האחרונים כ 5.2 ומשך התקופה ללא פרכוס זה ימים בערך 6.717.
- פתח את התוכנה עבור הקלטת וידאו EEG. לחץ על "חומרה" ובחר "עריכת תצורה". להתאים את השפופרת, המשדר מושתל לתוך כל עכבר. לחץ על "ערוץ תצורה" ואשר שכל הערוצים פעילים. לחץ על "תצורת וידאו" כדי לסנכרן את הוידאו עם הנתונים EEG (רזולוציה של 40 x 480 וקצב המסגרות של 30.00).
- לקבוע את ההתקף התדירות והמשך על ידי בדיקה ידנית באמצעות התוכנה לניתוח.
- לסמן את האזור מציג SRS ולייצא את הנתונים לניתוח סטטיסטי. להיות זהירים כדי לא לכלול חפצים EEG זה יכול להיווצר על ידי גירוד בראש או לעיסה; אלה ניתן להסיר על ידי בדיקת הנתונים וידאו.
הערה: SRS מוגדר של התפרצות פתאומית של עולה פעילות אפילפטית החוזרות על עצמן (≥ 3 הרץ) זה נמשכת עבור יותר מ-10 ס' התנהגויות עוויתית יכול להיות מלווים לעתים קרובות בפרץ של עולה פעילות. Non-עוויתי התקפים יכולים להדגים גם פעילות electrographic עולה בלי התנהגויות עוויתי. תפיסה הפסקת מוגדר המתרחשים כאשר הקוצים ירי חוזר לפעילות בסיסית. - לניתוח של תדירות ההתקפים, לחלק את המספר הכולל של מקרים SRS שזוהו במהלך 2 שבועות על ידי המספר הכולל של הקלטה ימים עבור כל בעל חיים בודדים.
- לצורך ניתוח של משך ההתקף, למדוד את הזמן שמראש בסוף אפילפטית spiking פעילויות.
- לסמן את האזור מציג SRS ולייצא את הנתונים לניתוח סטטיסטי. להיות זהירים כדי לא לכלול חפצים EEG זה יכול להיווצר על ידי גירוד בראש או לעיסה; אלה ניתן להסיר על ידי בדיקת הנתונים וידאו.
- לאחר סיום הקלטת וידאו EEG, לתקן את המוח עם 4% paraformaldehyde על-ידי transcardial זלוף. עזים ומתנגד העכבר, להזריק פתרון (4:0.5) של קטאמין (50 מ"ג/מ"ל), חריגות השירותים הווטרינריים (23.3 mg/mL) מומס בתוך תמיסת מלח במינון של 10 משקל הגוף μL/g (i.p.; מזרק 1 מ"ל; 26 גרם מחט). ברגע העכבר הוא אישר עמוקות עכשיו, לבצע transcardial זלוף.
- לפני לבודד את מוח העכבר, לאחזר את המשדר מן העכבר לשימוש חוזר לאחר ניקוי.
- הסר את הבטון שיניים מסביב ההפניות באמצעות מלקחיים.
- לטבול את קצה ללידים עם מלט שיניים אצטון 100% עד הבטון שיניים היא התפרקה.
- להסיר רקמות מזהמים בסביבה המשדר על ידי שטיפה זה עם מים מזוקקים.
- יש לשטוף המשדר עם אתנול 70% עבור 3 שעות ואוויר יבש זה לאחסון. מייד לפני השימוש הבא, יש לשטוף את הבורג ואת המשדר עם 70% אתנול, ואחריו מים מזוקקים, ומניחים אותם בתוך תמיסת מלח.
הערה: יש לנקוט כדי להימנע חותך את החוטים גמיש כאשר עריפת ראשו העכבר מאז, אם ההפניות גמיש קצרות מדי, הרעש השרשה הבא, הקלטת וידאו EEG יכול להגדיל.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
SE מוצלח יכול לגרום מוות תאים בהיפוקמפוס ו- SRS (איור 1 ואיור 2). אנו הסתיים התקפים חריפה התנהגותית בזריקה דיאזפם ב-3 שעות לאחר תחילת SE, הקריב העכברים 7 ימים או 6 שבועות מאוחר יותר.
ניטור וידאו EEG, העכברים קיבלו שתל כירורגיה-4 שבועות לאחר SE, SRS במקרים הוערכו 2 שבועות מ- 5-7 שבועות לאחר תחילת SE.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
עבודה זו מתארת את נהלי ניסיוני של אינדוקציה SE והערכה של התקפים כרונית.
מספר גורמים יכולים להשפיע על אינדוקציה SE מוצלחת. ניטור התנהגותית מדויק על-פי קנה המידה של ראסין הינה קריטית לפיתוח של SRS. הראש מהנהן, קלונוס forelimb, גידול, ונפילה הן גולת התנהגותית של התקפים חריפה מתפתחת SE שלב4,16. לאחר ההתקף הראשון מנוע מזוהה, אורך המרווח בין ההתקפים עוויתית מאוחר יותר מקטין לפני הכניסה SE. יתר על כן, SE צריך להתקיים במשך לפחות 6 שעות אלא אם ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי המענק הלאומי מחקר קרן של קוריאה (NRF) במימון הממשלה קוריאנית (ה-NRF-2014R1A1A3049456), מענק של קוריאה בריאות טכנולוגיית R & D פרויקט דרך קוריאה בריאות תעשיית פיתוח המכון (KHIDI), במימון משרד הבריאות & רווחה, הרפובליקה של קוריאה (HI15C2854).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| C57BL/6 | Envigo | C57BL/6NHsd | |
| סקופולמין מתיל חנקתי | סיגמא | S2250 | הכינו מלאי 10X |
| מלח טרבוטלין המיסולפט | סיגמא | T2528 | הכינו 10X מלאי |
| פילוקרפין הידרוכלוריד | סיגמא | P6503 | |
| קטמין הידרוכלוריד | תאגיד | ||
| קסילזין הידרוכלוריד | באייר קוריאה | ||
| דיאזפאם | SAMJIN | ||
| שמן קיק (Kolliphor EL) | Sigma | C5135 | פוליאוקסיל 35 שמן קיק מוקשה |
| Saline Daihan Pharm. Co. | |||
| 5% דקסטרוז | דייהאן פארם ושות' | ||
| תמיסת יוד (Povidin) | של פירסון | ||
| (Terramycin) | פייזר | ||
| כחול ניילון | AILEE | NB617 | |
| Mupirocin (Bearoban) | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd | ||
| Ketoprofen | Samchundang Pharm. Co., Ltd | 5 מ"ג/ק"ג | |
| Gentamicin | Huons, Ltd. | 5 מ"ג/ק"ג | |
| מזרק 1 מ"ל | Sung shim medial Co., Ltd. | ||
| 26 מחט | מד סונג שים מדיאל ושות', בע"מ | 26 גרם * 13 מ"מ (1/2 אינץ') | |
| 30 מחט מד | Sung shim medial Co., Ltd. | 30 גרם * 13 מ"מ (1/2 אינץ') | |
| סכין גילוח | דורקו | ||
| מקדחה | Saeshin דיוק ושות', בע"מ | 207A, 35K (מהירות) | |
| טלמטריית וידאו/מערכת EEG | מדעי הנתונים הבינלאומית. | גרסה 5.20-SP6 | |
| משדר מושתל | מדעי הנתונים הבינלאומי. בע"מ | ETA-F10 | |
| בורג | Sungho Steel | M1.4, אורך 2 מ"מ נירוסטה | |
| חומר שיניים קודקוד | Dentimex | ||
| Acetone | Duksan כימיקלים טהורים ושות', בע"מ | CAS 67-64-1 | |
| פרפורמלדהיד (PFA) | מיליפור | 1.04005.1000 | 4 % |
| סוכרוז | סיגמא | S9378 | תמיסה 30% ב 0.01 M PBS |
| קרזיל סגול אצטט | סיגמא | C5042 | |
| אתנול | EMD Millipore Co. | UN1170 | |
| קסילן | Duksan כימיקלים טהורים ושות', בע"מ | UN1307 | |
| חומצה אצטית קרחונית | Junsei כימית | 31010-0350 | |
| FSC33 Clear | Leica biosystems | להקפאת רקמות | |
| DPX הרכבה להיסטולוגיה | סיגמא | 6522 | |
| מלקחיים | כלים מדעיים עדינים | 11002-12 | |
| מספריים | Solco ביו-רפואי | 02-2445 | |
| מסגרת סטריאוטקסית | דוד קופף מכשירים | E51070012 |
מקורות
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Epilepsy. N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. Epileptogenesis in the immature brain: emerging mechanisms. Nat Rev Neurol. 5 (7), 380-391 (2009).
- Cavalheiro, E. A. The pilocarpine model of epilepsy. Ital J Neurol Sci. 16 (1-2), 33-37 (1995).
- Curia, G., Longo, D., Biagini, G., Jones, R. S., Avoli, M. The pilocarpine model of temporal lobe epilepsy. J Neurosci Methods. 172 (2), 143-157 (2008).
- Morimoto, K., Fahnestock, M., Racine, R. J. Kindling and status epilepticus models of epilepsy: rewiring the brain. Prog Neurobiol. 73 (1), 1-60 (2004).
- Levesque, M., Avoli, M. The kainic acid model of temporal lobe epilepsy. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 37 (10), 2887-2899 (2013).
- Sharma, A. K., et al. Mesial temporal lobe epilepsy: pathogenesis, induced rodent models and lesions. Toxicol Pathol. 35 (7), 984-999 (2007).
- Hellier, J. L., Dudek, F. E. Chemoconvulsant model of chronic spontaneous seizures. Curr Protoc Neurosci. 9, Chapter 9 Unit 9 19(2005).
- Pitkanen, A., Lukasiuk, K. Molecular and cellular basis of epileptogenesis in symptomatic epilepsy. Epilepsy Behav. 14, Suppl 1 16-25 (2009).
- Mathern, G. W., Adelson, P. D., Cahan, L. D., Leite, J. P. Hippocampal neuron damage in human epilepsy: Meyer's hypothesis revisited. Prog Brain Res. 135, 237-251 (2002).
- Turski, W. A., et al. Limbic seizures produced by pilocarpine in rats: behavioural, electroencephalographic and neuropathological study. Behav Brain Res. 9 (3), 315-335 (1983).
- Brulet, R., Zhu, J., Aktar, M., Hsieh, J., Cho, K. O. Mice with conditional NeuroD1 knockout display reduced aberrant hippocampal neurogenesis but no change in epileptic seizures. Exp Neurol. 293, 190-198 (2017).
- Cho, K. O., et al. Aberrant hippocampal neurogenesis contributes to epilepsy and associated cognitive decline. Nat Commun. 6, 6606(2015).
- Cavalheiro, E. A., Santos, N. F., Priel, M. R. The pilocarpine model of epilepsy in mice. Epilepsia. 37 (10), 1015-1019 (1996).
- Racine, R. J. Modification of seizure activity by electrical stimulation. II. Motor seizure. Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 32 (3), 281-294 (1972).
- Hester, M. S., Danzer, S. C. Accumulation of abnormal adult-generated hippocampal granule cells predicts seizure frequency and severity. J Neurosci. 33 (21), 8926-8936 (2013).
- Shibley, H., Smith, B. N. Pilocarpine-induced status epilepticus results in mossy fiber sprouting and spontaneous seizures in C57BL/6 and CD-1 mice. Epilepsy Research. 49 (2), 109-120 (2002).
- Borges, K., et al. Neuronal and glial pathological changes during epileptogenesis in the mouse pilocarpine model. Exp Neurol. 182 (1), 21-34 (2003).
- Pavlova, M. K., Shea, S. A., Bromfield, E. B. Day/night patterns of focal seizures. Epilepsy Behav. 5 (1), 44-49 (2004).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
