איפיון תאים סרטניים באמצעות חוט רפואי עבור לכידת מחזורי תאים סרטניים: בגישה 3D בהתבסס על Immunofluorescence ודגים דנ א

CTCs מייצגות צעד. מפתח של סרטן תאים הפצתו¹. הנוכחות שלהם בדם ההיקפי של חולים היא משויכים (גרורתי) relapse ומחלות התקדמות^2,3. CTC בידוד ואפיון ממחזור הדם של חולי סרטן היא סוג של ביופסיה נוזלי לא פולשנית. בשנים האחרונות זה הפך יותר ויותר ניכר כי ניטור של התקדמות, בתגובה של גידולים טיפולים שונים באמצעות ניתוח מסוג זה מספק מידע קליני חשוב^4,5. ביופסיה נוזלי שימושית יותר כאשר הניתוח הוא לא ריאלי או כאשר רקמת הגידול העיקרי אינו זמין, קרי, לחבלות ללא biopsiable. ומכאן, גישה זו הוא מבטיח בהגדרות סרטן ספציפיים כגון NSCLC גרורתי, איפה הנוכחות של CTCs הוכח יש תפקיד שלילי prognostic⁶. NSCLC הוא גידול זה נהנה במיוחד ממוקד גישות טיפוליות^7,8,9 תוכנן לפעול על מולקולות ספציפיות (מטרות מולקולריות) ידוע להיות מעורב הגידול, התקדמות, ו התפשטות המחלה. לפיכך, נדרש זיהוי מטרות מוגדרות במהלך התקדמות המחלה. CTC חקירה היא גישה אבחון מאוד מעניינת כדי לזהות ולנטר סמים מטרות ללא צורך רקמות ראשי או גרורתי. לדוגמה, זיהוי ALK translocations גנים בתאים NSCLC קשורה רגישות crizotinib, טיפול ממוקד ספציפי¹⁰. עם זאת, כיום, הגילוי של ALK translocations תבוצע רק על aspirates פיין-מחט או ביופסיות קטן; כתוצאה מכך, ללא גידול רקמות ALK ניתוח אינה אפשרית. CTCs אלטרנטיבה פוטנציאל הגידול חקירות מבוסס-רקמות, מייצגים גישה מאוד מבטיח של אבחון לוויה.

למרות חשיבותם פוטנציאליים, CTCs הן עדיין נושא הוויכוח הגדול בין מחקר, בעיקר בגלל נדירותם (1-10 תאים/מ"ל של דם היקפיים¹¹). ביופסיה נוזלי שיטות להשתמש כמות מוגבלת של דם (קרי, 1-30 מ"ל)^12,13, אבל זה יוצר מצב של רגישות שיוצרת איתור CTCs. לפיכך, המחקר היא מוצדקת כדי למצוא גישות והתקנים המתפתח לביצוע ביופסיות נוזלי CTC, ממוקדות על נפח גדול יותר של דם היקפיים.

מכשיר חלופי, חוט רפואי functionalized (ראה טבלה של חומרים), פותחה כדי להתגבר על מגבלות דגימה דם ולקבל ניתוח יותר נציג של CTCs. החוט הזה functionalized הוא מכשיר רפואי שאושרו על-ידי CE הלוכד את CTCs ישירות מן הדם של חולי סרטן¹. הוא מורכב של חוט פלדה אל חלד 16-ס מארוך (איור 1 א') עם טיפ 2-ס מארוך functionalized מצופה בשכבה 0.2-מיקרומטר-עבה של זהב. השכבה בתורו מכוסה על ידי שכבה הידרוג 1 ל 5 מיקרומטר-עבה polycarboxylate covalently בשילוב עם נוגדנים נגד EpCAM, אחד של אנטיגנים ביטוי נרחב ביותר על פני השטח של CTCs¹⁴. Functionalized קצה החוט הוא הציג לתוך הווריד של הזרוע של החולה ונשאר בעמדה במשך לפחות 30 דקות. גישה זו מאפשרת בידוד של CTCs ויוו, ישירות בדם ההיקפי, וכדי מסך כ 1.5 – 3.0 L של דם (כ 300-fold יותר מאשר אמצעי האחסון המשמש גישות אלטרנטיביות)¹.

Pantel et al. הראו את היעילות של גישה זו לבודד CTCs ישירות לתוך הורידים הזרוע של חולי סרטן ריאות¹⁵. הם ביצעו immunofluorescence תיל מכתים לזהות CTCs באמצעות נוגדנים קונבנציונאלי מכוונת נגד EpCAM פאן-cytokeratin, ואת CD45 לגילוי leucocyte. החוט נבחנה תחת מטוס מיקרוסקופ אופטי פלורסצנטיות¹⁵. המחברים הראו כי המכשיר הצליח לבודד את CTCs, אך הם לא לחקור כל מטרות הטיפול בנושא, כגון ALK translocations.

השיטה הציג שמטרתו לזהות בשם CTCs ב NSCLC שורות תאים על בסיס פרמטרים פנוטיפיות שהיו קיימות בעבר, למשל, הגישה החיובית EpCAM, הנוכחות של סמנים מולקולריים, למשל מצב ALK (איור 1b). הליך זה 3-יום-ארוך משלב חוט functionalized immunofluorescence מכתים עם ה-DNA זריחה -מקומיים-הכלאה (דנ א דגים), בשם חיסונית-DNA-דגים. בהתחשב בכך CTCs הם ישויות נדיר, היתרון של פרוטוקול זה היא כי ניתן לאפיין CTCs על החבל זהה מבחינת תכונות immunophenotypic והן rearrangements דנ א.

1. חיסונית-DNA דגים על Coverslip 2D

1. Coverslip תא מחסידי והכנה זריעה
   הערה: בצע את כל השלבים הבאים תחת ברדס זרימה בתנאים סטריליים.
   1. לטבול את coverslip לתוך 100% אתנול לחטא אותם.
      הערה: אנו משתמשים 12 מ"מ × 12 מ"מ הנתמכות על-ידי סיליקון בריבוע coverslips (ריאגנטים כל מופיעים בטבלה של חומרים).
   2. מקם את coverslips צלחת פטרי (קוטר 100 מ מ). באמצעות יבש כפה זרימת האוויר במשך 5 דקות.
   3. לשטוף צלחת פטרי עם פוספט 15 מ"ל עקר 1 × Dulbecco buffered תמיסת מלח (PBS).
   4. לשטוף את צלחת פטרי עם 10 מ"ל של מדיום מלאה (ראה טבלה 1).
   5. זרע תאים חסיד (תאים 1,650,000 בערך 10 מ"ל של מדיום, נספר על-פי ניתוח FACS) על ידי הטלת בעדינות התליה תא אל הפטרי להשיג יופיצ תא אחיד (כ-30,000 תאים/cm²).
      הערה: עבור ~ 70% הנהרות, מחסידי תאים צריך להיות תרבותי על coverslips לפחות 48 שעות.
2. קיבוע ו- permeabilization
   התראה: אצטון הוא דליק גירוי החומר הנדיף. השתמש פלסטיק עמיד רק אצטון או מיכלי זכוכית (לא PVC או PVDF).
   הערה: בצע את הפעולות הבאות תחת ברדס fume כימי.
   1. הסר את המדיום תרבות באמצעות של pipet שואבת חד פעמיות.
   2. לשטוף את צלחת פטרי עם 1 × PBS.
   3. באמצעות פינצטה, לשטוף את coverslips בטבילת אותם לתוך גביע זכוכית המכיל 5 מ של 1 × PBS.
   4. יבש את coverslips על נייר סופג.
   5. לתקן את התאים על coverslip במועט זה לתוך פתרון אצטון 100% 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
   6. להסיר את coverslip על ידי פינצטה. יבש coverslip באמצעות זרם אוויר מאולץ במשך 5 דקות.
      הערה: הפרוטוקול ניתן להשהות בשלב זה. Coverslip צריך להיות מאוחסן ב-20 ° C.
3. Immunofluorescence יום 1
   הערה: בשלב זה כרוך של דגירה (O/N) לילה (~ ח 16).
   1. לשטוף את coverslips ב 1 × PBS פעמיים.
   2. ירידה µL 100 נוגדן דילול מאגר (לפרטים, ראה טבלה 1 ) על גבי coverslip דגירה למשך 30 דקות ב- RT.
      הערה: פתרון אחסון צריך להיות מותאם על בסיס השטח coverslip על מנת לכסות את coverslip כולו, למנוע את הסיכון של גלישה.
   3. מכינים את תערובת נוגדנים (טבלה 1) באמצעות 1:20 דילול של נוגדן ראשוני monoclonal מצומדת באמצעות מאגר דילול fluorochrome, נוגדנים, כמפורט בגליון הנתונים המסופקים על ידי היצרן.
      הערה: מומלץ בחום להשתמש נוגדנים חד-שבטיים מצומדת עם thermostable fluorochrome. אם fluorochrome thermostable משמש, הטמפרטורה מנוצל במהלך השלבים DNA-דג של הפרוטוקול עלול לגרום נזק fluorochrome את ולהעלים את פליטת פלורסנט. ב פרוטוקול זה, הסכמנו על נוגדן EpCAM-FITC (1:20 דילול), אשר לא הראה שום בעיות משמעותיות עם טמפרטורת שימוש.
   4. יש לשטוף את coverslips פעמיים ב 1 × PBS.
   5. מקום coverslips התא בצד למעלה לח תא ושחרר 100 µL של המיקס נוגדן על coverslip.
      הערה: פתרון אחסון צריך להיות מותאם על בסיס השטח coverslip כדי לכסות את כל coverslip ולהפחית את הסיכון של גלישה.
   6. דגירה O/N (~ 16 h) בחושך ב 4 º C.
4. Immunofluorescence יום שני
   1. לחסום נוגדן הדגירה ע י שטיפת על coverslips ב 1 × PBS פעמיים.
      הערה: חנות coverslips שקוע 100 µL של 1 × PBS ב 4 ° C בתוך תא עם סביבה לחים קבוע בחושך עד וזמינותו דגים מבוצע.
5. יום ה-DNA דו-מימדית-דגים 2
   התראה: תשומת לב מיוחדת ישולם עד טמפרטורה גבוהה של כלי הנגינה ואת החדר לח.
   1. להגדיר את הכלאה תנור, תנור חום יבש (~ h 3 לפני שמתחילים את פרוטוקול ה-DNA-דג). הגדר את התנור הכלאה ב 75 ° C, להגדיר את התנור חום יבש ב 37 מעלות צלזיוס, מגניב הפתרון האס 0.4 × (ה-pH = 7.0 ± 0.1) (למתכון האס ראה טבלה 1) עד 4 ° C.
      הערה: מצב ה-pH של מאגרי דגים הוא קריטי: pH = 7.0 ± 0.1.
   2. לשטוף את coverslip שלוש פעמים תוך קר כקרח × 0.4 האס פתרון.
   3. יבש את coverslip תחת ברדס fume כימי 10 דקות בחושך.
   4. מערבולת 10 s ולבצע סיבוב מהיר למטה (בקצב מרבי) של המכשיר מהקיר של בדיקה-הצינור.
   5. מניחים בצד התא coverslip למטה על ירידה של 5 µL של דגים בדיקה על שקופית בעלת חותם כל הקצוות של coverslip עם דבק גומי.
      התראה: הבא שני השלבים לערב בטמפרטורות גבוהות. ללבוש כפפות מגן.
   6. מכניסים את השקופית תא לח כהה בתנור הכלאה במשך 8 דקות ב 75 ° C עבור דנטורציה DNA מלאה.
   7. להזיז את החדר לח לתנור חום יבש ב 37 ° C O/ש
6. דנ א דו-מימדית-דג יום 3
   1. הגדר את המים הרותחים ב-72 מעלות ומניחים צנצנת מכתים שקופיות עם מאגר האס × 0.4 לתוכו (טבלה 1). לאחר 30 דקות, לבדוק את הטמפרטורה של המאגר האס 0.4 ×, אשר חייב להיות ב- 72 ± 1 ° C.
   2. להכין שני בקבוקונים זכוכית: אחת עם 2 × האס + 0.05% Tween מאגר (ה-pH = 7.0 ± 0.1) (טבלה 1) עוד אחת עם מים מזוקקים.
   3. להסיר את החדר לח מהתנור, בזהירות להסיר את הבטון גומי של השקופית, לנתק את coverslip עם פינצטה.
   4. לשטוף את coverslip בטבילת ב × 0.4 האס למשך 2 דקות ב- 72 מעלות צלזיוס.
   5. לשטוף את coverslip על ידי שילוב של 2 × האס + 0.05% מאגר Tween ב-30 s.
   6. יש לשטוף את coverslip במים מזוקקים.
   7. יבש את coverslips ברדס fume כימי 10 דקות בחושך.
   8. הר של coverslip נוזלי הרכבה בינוני עם µg/mL 1.5 של 4´, 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי) כדי counterstain DNA הכולל. למקם את הצד התא coverslip למטה על ירידה של 5 µL של הרכבה בינונית בשקופית, הקש את הפינצטה-coverslip כדי לקבל את האוויר החוצה, לאטום עם לק.
      הערה: טעינת אמצעי אחסון בינוני צריך להיות מותאם על בסיס גודל השטח coverslip.
7. מיקרוסקופ דו-מימדית התבוננות וניתוח
   הערה: ניתן לרכוש תמונות עם מערכות שונות מיקרוסקופ.

1. לרכוש תמונות באמצעות מצלמה דיגיטלית 12 סיביות ו × 20/נה 0.50 ויעד 40 × / 0.65 נה עם המסננים המתאימים עבור אדום (עירור: 599 ננומטר, פליטת: 588 nm) וירוק (עירור: 509, פליטת: 524), וכחול (עירור: 367 ננומטר, פליטת: 452 nm) רגשים.
2. ניתוח תמונות בעזרת כלי תוכנה של בחירה.
   הערה: כדי להעריך את ההכתמה immunofluorescence ולוקליזציה ALK-בדיקה, השתמשנו ImageJ. ניתן לאחסן שקופיות ב-20 ° C בחושך לתקופה מקסימלית של 3 שבועות. לאחסון ממושך, אנחנו מציעים באמצעות הרכבה ספציפיים בינוני לאחסון לטווח ארוך.

2. חיסונית-DNA דגים על חוט

1. תא ספייק סנכנ על חוט (תמיכה ב 3D)
   הערה: הגדרת ראשוני כרוך מדויקת מבחר מחסידי תאי שורות בהתבסס על EpCAM-חיוביות. החוט הוא functionalized עם נוגדנים anti-EpCAM כך רק תאים EpCAM-חיוביות מוכתמים.
   הערה: אל תיגע החלק functionalized של הכבל כדי למנוע נזק.
   הערה: כל השלבים צריך להתבצע תחת תא למינארי בתנאים סטריליים.
   1. Resuspend את כל התוכן של בקבוקון T75 (80% הנהרות) בבקבוקון מ ל באמצעות 4 מיליליטר בינוני מלא; עבור יישום ספייק-in יחיד, תאים כ 2,000,000 מומלץ להגדיל את הידבקות תאים לכבל.
   2. להסיר את החוט מאריזתו זכוכית.
   3. טובלים את החלק זהב functionalized של החוט לתוך המבחנה, המבטיח כי החוט-בסימפטומים ולא במחלה עצמה הוא אטומה למים מתאים המבחנה. חותם עם סרט מעבדה.
      הערה: השימוש של שפופרת 5 מ ל מומלץ כדי לאפשר התאמה נכונה בין את החוט ממגר את המבחנה.
   4. תקופת דגירה של 30 דקות ב- RT ב rotator הרכבת התחתית (0-120 זווית).
   5. יש לשטוף את החוט שלוש פעמים בפתרון 1 × PBS באמצעות 3 צלוחיות נקי שונים.
2. קיבוע ו- permeabilization
   התראה: אצטון הוא חומר דליק. זה יכול לגרום לגירוי דרכי הנשימה. השתמש רק פלסטיק עמידים אצטון או מיכלי זכוכית (לא PVC או PVDF).
   הערה: בצע את הפעולות הבאות תחת ברדס fume כימי.
   1. מילה נהדרת את החוט.
   2. לתקן התאים בטבילת החוט בפתרון אצטון 100% 10 דקות RT. בשימוש שפופרת 5 מ.
      הערה: החוט-בסימפטומים ולא במחלה עצמה אל תבוא במגע עם מקבע
   3. מילה נהדרת את החוט למשך 5 דקות ב- RT.
      הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן. החוט להיות מאוחסן ב-20 ° C. כאשר לארוז את החוט לאחסון לטווח ארוך, למקם את החוט-הפקק ליד הקצה functionalized והכנס בקפידה את החוט לתוך הצינורית זכוכית אחסון, דואגת שלא יגרמו נזק הטיפ functionalized. לסגור את הזכוכית לאחסון ולאחסן (אנכי או אופקי) ב-20 ° C.
3. Immunofluorescence יום 1
   הערה: בשלב זה כרוך של דגירה O/N (~ ח 16).
   1. לשטוף פעמיים בפתרון 1 × PBS באמצעות שפופרת 5 מ.
   2. דגירה החוט במאגר דילול נוגדן למשך 30 דקות ב- RT באמצעות שפופרת 5 מ.
   3. להכין µL 150 של נוגדן לערבב לדילול monoclonal נוגדן ראשוני מצומדת עם fluorochrome במאגר דילול נוגדן, כמפורט בגליון הנתונים. כך למשל, נוגדן EpCAM-FITC היה בשימוש של 1:20 דילול.
   4. להשתמש טיפ p200 לביצוע דגירה, כדלקמן: לחלץ את החוט החוט-בסימפטומים ולא במחלה עצמה ולהוסיף בעדינות את החוט דרך החור גדול יותר של הקצה. הכנס את הסוף unfunctionalized ראשון, לאט משוך את החוט דרך החור קטן יותר עד החלק זהב נמצא מעבר לבור גדול יותר.
   5. זרוק בעדינות µL 150 של המיקס נוגדנים (לדוגמה אנטי EpCAM_FITC נוגדנים 1:20 מדולל) לתוך הקצה. כדי למנוע את סיכון היווצרות בועה, בעדינות מסובבת את החוט עד החלק functionalized הוא צלל לחלוטין.
   6. תנעל את החור של הקצה. עטיפה בסרט מעבדה סביב החור יכול לעזור.
   7. דגירה אנכית O/N (~ 16 h) בחושך ב 4 º C.
4. Immunofluorescence יום שני
   1. לחסום נוגדן הדגירה ע י שטיפת את החוט פעמיים ב 1 × PBS.
   2. הכנס מחדש את חוט התיל-בסימפטומים שלה.
      הערה: חנות 1 X PBS ב 4 ° C ב- 5 מ"ל בקבוקון עד וזמינותו דגים מבוצע.
5. יום ה-DNA 3D-דגים 2
   התראה: תשומת לב מיוחדת ישולם עד לטמפרטורה גבוהה של כלי נגינה, הקאמרית לח.
   1. להגדיר את הכלאה תנור, תנור חום יבש (~ h 3 לפני שמתחילים את פרוטוקול ה-DNA-דג). להגדיר את התנור הכלאה ב 75 ° C, להגדיר את התנור חום יבש ב 37 מעלות צלזיוס, מגניב הפתרון האס 0.4 × (ה-pH = 7.0 ± 0.1) עד 4 ° C.
      הערה: מצב ה-pH של מאגרי דגים הוא קריטי והוא חייב להיות 7.0 ± 0.1.
   2. לשטוף את החוט 3 פעמים תוך קר כקרח × 0.4 האס פתרון.
      הערה: להחזיק את החוט בחשכה למנוע fluorochrome photobleaching במהלך ההליכים הבאים.
   3. יבש למשך 10 דקות בחושך מתחת לארון fume.
   4. מערבולת ולסחוט המכשיר עבור 5 s.
   5. ירידה µL 10 של המכשיר לתוך theglass microtubes. מכסים עם סרט מעבדה.
   6. לסובב את microtubes כדלקמן: עוטף את microtube שם, נייר סופג יבש לתוך צינור 50-mL, ומתפתלים בקצרה.
   7. בזהירות מניחים את החוט מיובשים לתוך microtube והכנס את החוט-בסימפטומים ולא במחלה עצמה. חותם עם דבק גומי.
      התראה: הבא שני השלבים לערב בטמפרטורות גבוהות.

שימוש בהליך המתואר לעיל אפשרי לבצע assay דגים חיסונית-DNA של CTCs (או תאים שווי ערך אחרים) מועשר על ידי החוט functionalized. לפני הגדרת פרוטוקול זה, התאימות של שני טכניקות היה נחוש (חיסונית-זריחה עם דגים) על תקן תומך 2D. נבחרו שני NSCLC תא קווים שונים לבטא EpCAM (חובה לדבוק החוט יחד עם נוגדנים נגד EpCAM). יש להם מצב ALK אחר, אשר שימושי לבדוק את תנאי התחלה שונה. הראשון, NCI-H1975, יש גנים ALK פראי סוג (WT), ואילו השנייה, NCI-H3122, מאופיין על-ידי ALK translocations.

מערכת זיהוי הפסקה-apart ALK ג'ין וזמינותו דגים היה בשימוש. המערכת כוללת שני רגשים, אחד (כתום) hybridizing לאזור proximal בתוך ALK 2p 23, אחד (ירוק) hybridizing דיסטלי כדי ALK. ב- 2D תומך, דגים חיסונית-DNA מסופקים אותות מוגדרים היטב גם נוגדנים וגם בדיקה (איור 2). בפרט, שניהם תא קווים הראה לוקליזציה ממברנה EpCAM מוגדרים היטב. יתר על כן, בדיקה אותות הופיע בהיר וחד: NCI-H1975 תאים הראה חופפים הגששים כתום וירוק, המאשרת את המצב wildtype של ג'ין ALK (איור 2 א, ב'). לעומת זאת, NCI-H3122 תאים הראה אותות חופפים יחיד נקודות ירוקות, המשקף מחיקה של ג'ין ALK (איור 2 c, d). כאשר וזמינותו חיסונית-DNA דגים בוצעה ב- 3D תמיכה functionalized תיל, נוגדנים, בדיקה אותות היו בדרך כלל פחות מוגדר יותר על התמיכה 2D. EpCAM מכתים היה גלוי. אותות לווין ALK היו פחות המוגדר אך עדיין לידי ביטוי את מצב ALK הצפוי (איור 3). תוצאות המחקר הראו כי immunofluorescence מכתים לא התערבו עם אותות ה-DNA דגים. הגששים hybridized במיוחד עם המטרות שלהם. שורת התאים NCI-H3122 הראה מצב גנטי ALK סוטה (איור 3b), בניגוד NCI-H1975, עם גן ALK פראי סוג (איור 3 א).

איור 1 : Functionalized תיל, סידור סכמטי של הגששים הפסקה-apart ALK, ערכה של דפוסי הצפוי ALK שחלוף, מחזיק מיוחד. תיבות () אדום לסמן את שלושת החלקים העיקריים של הכבל: functionalized קצה חוט ממגר, עצה functionalized האו ם. הטיפ functionalized הוא החלק הכי עדינה הסמויה, והוא לא חייב להיות נגע במהלך הטיפול כדי למנוע ניתוק התא או נזק. (b) ירוק ו אדום רגשים כל בהתאמה לאגד רצפים ויוצאת של מנחלת ALK ג'ין (בצד השמאל). בצד הימין, מוצגים exemplificative דפוסי ALK הסדרים. לוקליזציה שיתוף אדום וירוק אותות על תאים נורמליים; אותות נפרדים ירוק ואדום עולה של ALK ג'ין כרומוזום הפסקה (טרנסלוקציה של ג'ין ALK) אות אחת colocalization כתום ירוק (סוטה תא-1). אות אדומה אחת שני אותות ירוק עולה על אובדן אות אדום אחד, רומז על טרנסלוקציה כרומוזומלית, מחיקה (סוטה תא-2). (ג) כבל בעל; התיבות האדומות לסמן אזורים שבהם טיפול נחוץ בעת טיפול החוט במהלך ניתוח מיקרוסקופ. הכבל יכול לעבור ניתוח 360 מעלות על-ידי הפעלת מסובב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2 : דגים חיסונית-DNA assay על תמיכה דו-ממדית (coverslip). (, b) NCI-H1975 תאים חיובי חלש עבור EpCAM. אותות EpCAM FITC היו ניכר. הגששים הכתום והירוק של ALK ההפסקה-apart. לא, המאשרת את המצב WT של ג'ין ALK בתור תא NCIH1975. הצגת אותות לזווג יותר משני תאים נכחו עקב אנאפלואידיה שלהם. (c, d) בשורה תא NCIH3122 EpCAM-ביטוי גבוהה, immunofluorescence אותות היו בהירים, אשר היה הדגישה ב צמתי תא-תא. דגים מחיקות מאושרות ניתוחים של הגן ALK, טיפוסי של הקו הסלולרי. חצים אדומים מציינים יחיד הגששים ירוקה (ללא המקביל כתום הגששים), המשקף ALK ג'ין מחיקה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: Assay חיסונית-DNA דגים באמצעות הכבל functionalized כמו תמיכה ב 3D. תמונה () נציג של NCI-H1975 תאים על החבל. למרות הצורה התלת-ממדית של התאים על החבל להקשות לרכוש תמונות באופן מלא בפוקוס, אות EpCAM הוא טוב לעין בכל התאים. תמונה (b) נציג של NCI-H3122 תאים על החבל. ALK הגששים הראה ג'ין מחיקה (חצים אדומים), ראיתי כאמור על התמיכה 2D. האותות רקע גלוי היו ככל הנראה עקב הנוכחות של השכבה פולימר. עם זאת, היא לא משמעותית השפיעה ניתוח זיהוי או קרינה פלואורסצנטית התא. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

טבלה 1: פתרונות מתכונים.

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.