שלב בצילום מואץ, ללא תווית, כמותיים הדמיה המחקר של תאים סרטניים אנושיים רדום ופעיל

סיכום

סרטן רדום ופעיל תא פנוטיפים מאופיינים באמצעות הדמיה שלב כמותית. מבחני התפשטות ההעברה, מורפולוגיה תאים משולבים, מנותח בשיטה פשוטה אחת.

תקציר

רכישת פנוטיפ האנגיוגנזה היא מרכיב חיוני של הבריחה מן הגידול תרדמה. למרות מספר הקלאסי במבחנה מבחני (למשל, הפצה, העברה ואחרים) ומודלים ויוו פותחו כדי לחקור ולהעמיד לאפיין פנוטיפים תא האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה, שיטות אלו הן זמן עבודה אינטנסיבית, ולעיתים קרובות דורשים ריאגנטים יקר, מכשירים, כמו גם מומחיות משמעותית. במחקר שנערך לאחרונה, השתמשנו תקופה כמותיים הרומן הדמיה (ה-QPI) טכניקה לנהל את אפיוני בצילום מואץ ללא תיוג של תאים KHOS האנושי אוסטאוסרקומה האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה. פאנל של פרמטרים הסלולר, כולל תא, התפשטות, חיות וצורות, נמדדו באופן כמותי, נותחה באמצעות ה-QPI. מרומן זה ואף הגישה הכמותית מספקת הזדמנות ללמוד באופן רציף, לא פולשני תהליכים תאיים הרלוונטיים, התנהגויות, ואת מאפייני תאים סרטניים, סוגי תאים אחרים בצורה פשוטה משולב. הדו ח מתאר פרוטוקול הניסוי שלנו, כולל הכנה תא, ה-QPI רכישה של ניתוח נתונים.

מבוא

אחד המחסומים המוקדם התפתחות, התקדמות של גידול מוצק הוא הרכישה של פנוטיפ אנגיוגנזה, סימן היכר של סרטן. התקדמות זו כוללת מגוון רחב של תהליכים הביוכימי והמולקולרי^1,2,3. אתגר טכני במחקר של שלב זה מפתח בהתקדמות הגידול היא היעדר כלים כדי לאפיין באופן רציף ולא באופן כמותי להבדיל בין פנוטיפים האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה של תאים סרטניים חיים בצורה בלתי לא משוחדת. מבחני מסורתי בשימוש כדי לחקור את התנהגויות הסלולר של תאים האנגיוגנזה ושאינם-אנגיוגנזה בדרך כלל דורשים ריאגנטים יקר וכלי נגינה, למשל, התפשטות/נדידת תאים מבחני^{4,5, <....}

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על-ידי החולים ועדת בוסטון לילדים אבטחה מוסדיים.

1. תא הכנה

1. מפשיר KHOS-A ו- N תאים
   1. לחמם תרבות בינוני, כלומר, של Dulbecco ששינה בינוני נשר בתוספת 10% עגל עוברית (vol/כרך) סרום (FBS) ו- 1% (vol/כרך) פניצילין/סטרפטומיצין.
   2. קח את הבקבוקונים קריוגני של תאים ממיכל חנקן נוזלי, לטבול התחתון של הבקבוקונים לתוך מים חמים בתוך אמבט מים 37 ° C, לנער בעדינות את הבקבוקונים ההקפאה כדי להאיץ את תהליך שהביקושים. לשמור את המכסה של בקבוקונים קריוגני פנייה אל המים כדי למנוע זיהום. ברגע תאים הם הקרת, לעקר את המבחנה הקפאה על ידי ריסוס 70% אתנול פתרון. ותנגב את המבחנה.
   3. ....

תוצאות

איור 1 מציג אפיון מורפולוגיה תאים טיפוסיים. התמונות מוצגות שמעורבת (איור 1 א'-ב') ותמונות 2D (איור 1C-D). תא אופטי עוביים (מחושב מקדם שבירה, מרחק אופטי) הם לכמת באמצעות פרופיל או מדידה התא כולו. פיזור מתווה של האזור ואת עובי של KHOS-A, KHOS-N תאים נמדד עבור כל תא שורטטו, כמו באיור 1E-G, שבו פנוטיפים שני אלה מוצגות דפוסי .......

דיון

במחקר זה, אנו מתארים במבחנה, לא פולשנית, ללא תווית שיטה באמצעות ה-QPI לאפיין באופן כמותי את פנוטיפים האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה של תאים אנושיים אוסטאוסרקומה. מספר פרמטרים הסלולר יש נותחו בו זמנית בשיטה זו משולבים, תפוקה גבוהה, כולל אזור תא, עובי התא, נפח התאים, קצב התפשטות, הכפלת זמן ההעברה הישירות, תנועתיות מהירות, הגירה, תנועתיות.

לעומת מבחני קונבנציונלי זה להעריך תא מורפולוגיה והתנהגויות תא, שיטה זו לא רק חוסך זמן ועבודה, אלא גם מספק מידע מדויק ומפורט יותר. לדוגמה, המיקום של מערכת ה.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
בקבוק T75	קורנינג, ניו יורק, ארה"ב	353136
צלחות 6 בארות	קורנינג, ניו יורק, ארה"ב	3506
Dulbecco' s שונה Eagle medium (DMEM)	Thermo Fisher Scientific, MA, ארה"ב	11965092
סרום בקר עוברי (FBS)	אטלנטה ביולוגית, ג'ורג'יה, ארה"ב	S11550
פניצילין סטרפטומיצין	תרמו פישר סיינטיפיק, MA, ארה"ב	15140122
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)	תרמו פישר סיינטיפיק, MA, ארה"ב	10010023
בקמן Z1 קולטר נגד	בקמן קולטר, אינדיאנה, ארה"ב	Z1
HoloMonitor M4	שלב הדמיה הולוגרפית Phi AB, לונד, שוודיה	M4	מיקרוסקופ
הולוליד	שלב הדמיה הולוגרפית Phi AB, לונד, שוודיה	PHI 8020
HStudioM4	שלב הדמיה הולוגרפית Phi AB, לונד, שוודיה	תוכנת	HStudioM4