הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אוונס ממוטבת כחול פרוטוקול כדי להעריך את דליפת דם העכבר

28.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57037

⸱

12 בספטמבר 2018

 ,  ,  , 
1Cardiovascular Pulmonary Research Laboratory, University of Colorado Denver, 2Division of Pulmonary Sciences and Critical Care Medicine, University of Colorado Denver, 3Denver VA Medical Center

במאמר זה

סיכום

במאמר זה מתואר פרוטוקול חסכוני, אופטימיזציה, ופשוט אשר משתמשת בשיטת צבע כחול אוונס להערכת extravasation פלזמה באיברים של עכברים FVBN אשר ניתן להתאים לשימוש זנים אחרים, מינים, ואת שאר איברים או רקמות.

תקציר

דליפת דם, או פלזמה extravasation, יש מספר סיבות, עשוי להיות עם תוצאה חמורה או סימפטום מתגובה דלקתית. מחקר זה עשוי להוביל בסופו של דבר הידע החדש בדבר הגורמים או דרכים חדשות כדי לעכב או לטפל extravasation פלזמה. חשוב כי החוקרים יש כלים מתאימים, כולל את השיטות הטובות ביותר הזמינות, לימוד פלזמה extravasation. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול, שימוש בשיטת הצבע הכחול אוונס, להערכת extravasation פלזמה באיברים של עכברים FVBN. פרוטוקול זה היא פשוטה במכוון, כדי גדול תואר ככל האפשר, אבל מספק נתונים באיכות גבוהה. אוונס כחול צבע נבחר בעיקר כי זה קל עבור המעבדה הממוצע להשתמש. השתמשנו פרוטוקול זה לספק ראיות ותמיכה עבור ההשערה כי neprilysin האנזים עשויה להגן את להערכת כנגד פלזמה extravasation. עם זאת, פרוטוקול זה ייתכן השפעול בשימוש ויש להתאים בקלות לשימוש זנים אחרים של עכברים או מינים אחרים, רבים איברים שונים או רקמות, עבור מחקרים אשר עשוי לכלול גורמים אחרים, חשובים להבנת, מניעת או לטיפול extravasation פלזמה. פרוטוקול זה הותאם בהרחבה, שונה מן הפרוטוקולים הקיימים, המשלב אמינות, להקל על השימוש, הכלכלה, ואת הזמינות הכללית של חומרים וציוד, הפיכת פרוטוקול זה מעולה עבור המעבדה הממוצע להשתמש ב לכימות פלזמה extravasation של איברים.

מבוא

דליפת דם באברים מתייחס extravasation, או דליפה של פלזמה דם דרך פערים מיוצר על אנדותל של פוסט venules נימי באיברים. Extravasation פלזמה או חדירות כלי דם מוגבר, אשר עשויה לנבוע סוג מתגובה דלקתית, זו עשויות להיות השלכות חמורות. לכן חשוב כי תופעה זו, את הסיבות, מאפננים, וההשלכות, הם למדו והבינו, באופן דומה, כי החוקרים יש יופי כלים, פרוטוקולים שבה ללמוד אותן. הפערים אנדותל עשויים להיווצר באמצעות שורה של גירויים, אך בדרך כלל מיוצרים על ידי הפעולה של נוירוטרנסמיטורים פפטיד ו/או tachykinins על endothelia. אחד המתווכים המתרחשים באופן טבעי העיקריים של תהליך זה, דבר המתבטא פלזמה מוגברת extravasation, הוא undecapeptide tachykinin neuropeptide, חומר P1.

שיטות כדי לחקור ולמדוד את חדירות כלי דם או פלסמה extravasation, אשר להשתמש במאפיין אלבומין-איגוד של צבע כחול אוונס, פותחו, ידועים בדרך כלל עבור דיוק, פשטות, הכלכלה, ביטחונם, היכולת לאפשר קביעת extravasation פלזמה רקמות כמה בבת אחת, אם כן רצוי2,3,4,5,6,7,8,9 . פרוטוקול זה אוונס כחול להערכת extravasation פלזמה באיברים של עכברים FVBN משתמשת כל אלה, אך מוסיף כמה שינויים חשובים, זה עושה את זה בדרך כלל שימושי וישימה עבור מחקרים עתידיים, מעורבים הממוצע המעבדה מבצעת או יהיה לנהל מחקרים חשובים של גורמים הקשורים extravasation פלזמה או חדירות כלי דם. ב פרוטוקול זה, חומר P הוא הציג העכברים-1 nmol/ק ג, אשר מרחיב את extravasation של פלזמה על-ידי 1.5-fold. זה מגביר את הרגישות של הפרוטוקול, וכתוצאה מכך תוצאות הנצפה, השגה בקלות רבה יותר. גורמים נוספים שמשפיעים על חדירות, כמו פפטידים שונים אחרים, כימיקלים או כמה צורות של פגיעה רעילים, עשוי להשתמש בו או נחקר על ידי מעבדות אחרות, כרצונכם. זריקות ומוחלף נמצאים בשימוש פרוטוקול זה להציג את אוונס כחול, חומר P מערכתית, אשר דורש ניתוח מסוף. עם זאת, ומוחלף זריקות5,7,10, גם לאחר התחשבות הטכניקות הנדרשות מסוף כירורגי, קלים יותר לשלוט ולהוביל הייצור של תוצאות עקביות יותר מהאחרים זריקות ורידים, כולל הזנב הווריד זריקות4,9. למרות שזה עשוי להיות אפשרי אוונס כחול מועברת על ידי זריקות סינוסים ורידים רטרו-מסלולית, אין הפניות בספרות נמצאו זה להשתמש בשיטה זו של מסירת אוונס כחול. אולם, לגבי זריקות וריד הזנב, רמה גבוהה של מומחיות ותרגול לשלוט בטכניקה זו reproducibly באופן משמעותי מגביל את השימוש זריקות אוונס כחול מוצלחת. לעומת זאת, בשיטת הזרקת אלטרנטיביות. ווריד הצוואר כפי שמתואר הפרוטוקול שלנו מציע פתרון טכנית השגה. שגרה מכריע עבור זלוף של הוורידים של העכבר, לבצע רק לאחר ההקרבה של אוונס perfused כחול העכבר, מסיר עודפי צבע כחול אוונס, בוצע שעבר סטנדרטיזציה של פרוטוקול זה. שיטות שתואר לעיל זלוף כבר בזהירות בדק, שונה כדי לקבל את ההליך הנוכחי. שינויים אחרים המתוארים כאן הם כל ממוטבת, פשוטה וזולה.

ישנן כמה מגבלות חשובות של השיטה צבע כחול אוונס. לדוגמה, רגישות נמוכה המשויכות לעתים שיטה זו עלולה למנוע כמה נוספים ברוטו פתולוגיים ומאפיינים היסטולוגית בדיקה של רקמות מחיות המוזרק כחול אוונס. עם זאת, אלה ומגבלות אחרות הובילו לפיתוח שיטות אלטרנטיביות ומודלים זה, בכל זאת, עדיין להשתמש אוונס כחול. המדד של אוונס כחול על-ידי קרינה פלואורסצנטית (במקום visual-טווח) ספקטרוסקופיה עשוי להגביר את הרגישות של השיטה. בנוסף, קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופיה של אוונס מוכתם כחול רקמות פותחה כדי לאפשר התבוננות דליפת דם מיקומים ברורים יותר11. בנוסף, לכל הגוף הדמיה וסריקה של-חיים בעבר הזריקו אוונס כחול12 מאפשר חקירה של ריכוזים אוונס כחול באופן רציף, במקום ספציפי אחד נבחר הזמן בנקודה של הניסוי. עם זאת, שיטה זו דורש את הזמינות של מתקני הדמיה המתאימה, וזה עשוי להיות יקר מאוד. השינויים הכרוכים אוונס כחול והושמעה בסוג במבחנה של מודל, כגון בתא תרבות או דגם chorioallantoic13 (CAM) גם תוארו. מודלים אלה מפוקח על-ידי קרינה פלואורסצנטית, מיקרוסקופ intravital14 , לאפשר כימות של חדירות כלי דם שינויים לאורך זמן, אבל עלול להעלות שאלות הנוגעות דוגמנות מדויק של תנאים ויוו ו אולי גם יקר.

היו שיטות אחרות שפותחו כדי לקבוע ולכמת דליפת דם או חדירות, שאינן כוללות את הניהול של אוונס כחול. שיטות אלה עשויה להשתמש של מולקולה פלורסנט המתאים (כגון אלבומין או fluorescein), או isotopically עם תוויות או אחרת מתויג מולקולה, לחיות חיות (או לתא תרבות או chorioallantoic (CAM) מודלים13, ואחריו לא פולשנית הדמיה (PET סריקה, MRI, מיקרוסקופ intravital, כל הגוף סריקה) או על-ידי פולשני הדמיה (מיקרוסקופ פלואורסצנטי)3,12,15. למרות הטכניקות הללו עשויים להציע מספר יתרונות על פני אחרים אוונס שיטות כחול, יש להם גם חסרונות, אשר עשויים לכלול שלהם ניכר המורכבות הנדרשות מומחיות, משאבים, עלויות כספיות גבוהות.

Neprilysin16 (peptidase האנזים NEP, הידוע גם בשם CD10, גברת או Enkephalinase) הוצע להיות מעורב עיכוב פלזמה extravasation, לפחות בחלקו, דרך מטבוליזם אנזימטי איון אנדוגני פ חומר לפיכך, ברקמות שבו מתרחשת תא השטח peptidase NEP, ייתכנו הנחתה השפעת חומר P, ככל הנראה על ידי פעילות peptidase NEP.

בתחילה, בדקנו עבור חומר P-induced פלזמה extravasation ניצול פרוטוקול זה אוונס כחולה ששונו, עם FVBN פראי סוג (WT) ועכבר נוקאאוט (KO) NEP. NEP מעורבות פלזמה בתוספת חומר P extravasation נחשד ממחקרים אלה הראשונית, אנו מתארים אלה, בהמשך הניסויים תפקיד של NEP מעורבים פלזמה extravasation. עם זאת, המוקד של כתב יד זה אינה NEP או תפקידה פלזמה extravasation, אלא מעדיף extravasation פלזמה הניסויים עצמם. התוצאות NEP הן נציג של סוג התוצאות שניתן להשיג באמצעות שימוש של פרוטוקול זה שונה. השיטה אוונס כחול כדי למדוד פלזמה extravasation יש כבר אופטימיזציה, שינוי, כפי שיתואר בפירוט להלן עבור עכברים FVBN.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההנחיות הבינלאומי, הלאומי, ו/או מוסדיים החלים על טיפוח ועל השימוש בבעלי חיים (עכברים) הובילו ב הניסויים המתוארים בכתב היד.

שיטה זו משתמשת עכברים בוגרים FVBN, בגילאי 16-20 שבועות, יימצא אופטימלית לצורך מחקר זה. יום 1 כולל שלבים 1-5 וכוללת יום 2 שלבים 6-7 (איור 1).

1. ציוד הכנה

  1. מאובטח על אספקה נאותה של סטריליות, חד פעמיות מזרקים ומחטים, אם חריגות קטמין/השירותים הווטרינריים משמש ההרדמה (כפי שמומלץ). אם איזופלוריין משמש ההרדמה, בדוק את מיכל החמצן ואת רמת נוזלים של איזופלוריין כדי לוודא שלא יהיו אספקה נאותה לניסוי לפני שמתחילים. בנוסף, להרכיב את nosecone נושם מעגלים ולצרף אותם אל תיבת אינדוקציה; לצרף המיכלים פחם חדשים המעגלים נשימה. הכן תיבת אינדוקציה על ידי הפעלת את החמצן, ברור כי השלב השני קורא כ 50 psi.
  2. הפעל את כרית החימום כדי 37 מעלות צלזיוס.
  3. להכין את החללית טמפרטורה רקטלית לניתוח.

2. העכבר הכנה

שלב זה כולל הרדמה, הסרת שיער, מיצוב (למבוגרים FVBN עכברים-גיל 16-20 שבועות).

  1. שוקל העכברים ולהקליט את המשקולות.
  2. עזים ומתנגד העכברים.
    1. לנהל את ה-IP קטמין, חריגות השירותים הווטרינריים (80-100 מ"ג/ק"ג ו- 7.5-16 מ"ג/ק"ג, בהתאמה). עם זאת, מומלץ להתחיל עם מינונים נמוכים יותר של קטמין, חריגות השירותים הווטרינריים (30 מ"ג/ק"ג ועל 6 מ"ג/ק"ג, בהתאמה).
    2. לשמור על ההרדמה עם 0.1 - 0.25 פעמים הראשוני מינונים של קטמין/חריגות השירותים הווטרינריים במהלך הניתוח. קטמין חריגות השירותים הווטרינריים היו agent(s) הרדמה להתמקד במחקר מסוים זה, כפי יותר הפארמצבטית, שרידות נצפו. ניתן למצוא את agent(s) הרדמה להתמקד במחקרים אחרים יהיו שונים.  אם איזופלוריין, להכניס את העכבר תא אינדוקציה והפעל איזופלוריין ל 5% עד העכבר מאבד הכרה מלאה. לאחר מכן השתמש nosecone האף שוכן בגובה 1.5-2.5% איזופלוריין תוצרי הלמידה ההליך.
  3. לפקח על העכברים כל 2-3 דקות על ידי צביטה הבוהן כדי לבדוק לעומק המתאים של הרדמה.
  4. לגלח את האזור הצוואר הגחון של העכבר.
  5. הנח את העכבר במצב פרקדן על משטח preheated. אבטח את כפות הידיים וכפות הרגליים של העכבר על פני השטח כירורגית עם קלטת.
  6. במקום דמעות מלאכותיות משחה על גבי העיניים כדי למנוע ייבוש במהלך הניתוח.

3. ניתוח פרטי

  1. עושים חתך 1 ס מ בצוואר הגחון ממש מעל ומוחלף.
  2. החל טיפות אחת או שתיים של לידוקאין (1-2%) אל אזור החתך לניהול כאב וכדי לקדם את התרחבות. המתן 2 דק. עבור לידוקאין שהשינויים ייכנסו לתוקף.
  3. לחשוף ולבודד נכון הפנימי, ווריד הצוואר באמצעות עמום. . תקשור את הווריד 4-0 בתפר ומשכו בעדינות את הסוף rostral של כלי השיט עם עוצר דימום. לחתוך חור, באמצעות מספריים בסדר, בערך 3 מ מ מתחת או סימטרית לעניבה, בערך באמצע הקוטר של הווריד.
  4. מארק קטטר פוליויניל PV-1 1.5 ס מ מהקצה להכניס אותו לתוך ומוחלף על דרך החור באמצעות מרחיב כלי השיט ו לשרשר את הצנתר לקראת הסוף סימטרית של כלי השיט, כ- 1.5 ס מ.
  5. לקשור את הצנתר באופן מאובטח בתוך החלק סימטרית של כלי השיט (להלן גזירה), עם 4-0 משי. לקשור את החלק rostral של כלי השיט החיצוני של הקטטר עם הקצוות של התפר ששימש לקשור rostral ומוחלף, בשלב 3.3.
  6. נעץ העור באופן רופף חזרה יחד הקטטר עם 4-0 משי כדי למנוע איבוד חום הגוף והתייבשות רקמות.
  7. להתחבר הקטטר המזרק המכיל heparinized מלוחים (10 U/mL) ומורידים את הקטטר.

4. זריקות

  1. להזריק את הפתרון אוונס כחול (50 μL של פתרון 30 מ"ג/מ"ל תמיסת מלח, נורמלי, unheparinized, 0.9% או כ 50 מ"ג/ק"ג) לתוך הצנתר ומוחלף, ואחריו נפח קטן של מלוחים heparinized לרוקן את הקו.
  2. 2 דקות אחר כך, להזריק חומר P (100 μL של פתרון 0.3 μM saline 0.9% נורמלי, unheparinized, או 1 nmol/ק ג), ואחריו נפח קטן של מלוחים heparinized לרוקן את הקו. חומר P מגבירה את extravasation של פלזמה חלבונים דרך השכבה אנדותל; ב פרוטוקול זה, הוא יוצר באופן שגרתי של הגדלת פלזמה הערכים extravasation של 1.5-fold, המקל פלזמה extravasation ערכים למדוד.
  3. לחכות 18 דקות לאחר מוזרק חומר P. במהלך תקופה זו, הצבע הכחול אוונס equilibrate, לזרום.
  4. לסיים את הניסוי 18 דקות לאחר ההזרקה של חומר P (20 דקות לאחר ההזרקה אוונס כחול) ע י הקרבת את העכבר עם נקע בצוואר הרחם. סביר להניח כי העכבר ניתן ישירות cervically נקע, בלי הראשון לתת מנת יתר של סם הרדמה, כמו העכבר הוא כנראה עדיין היטב anesthetized מהניתוח. עם זאת, אם זה הכרחי, ממנת יתר של חומרי הרדמה קטמין/חריגות השירותים הווטרינריים, איזופלוריין או פנטוברביטל יכול להינתן, ואחריו נקע בצוואר הרחם.

5. בידוד איברים

  1. לפתוח את החזה של העכבר, כוח המשיכה-perfuse (מגובה של-51 ס מ או 20") של הלב וכלי הדם עם 50 מ של 50 מ מ סודיום ציטרט, pH 3.5. pH 3.5 משמר ככל הנראה מחייב אוונס כחול אלבומין.
  2. בלו 1-5 האיברים הרלוונטיים (רקמות) עם איזמל ויבתר (למשל שלפוחית השתן, הכליה, הקיבה, הכבד, הלבלב, צינתור או דיסטלי קולון, מעי, תריסריון, האגף העור, האוזניים, הזנב, הלב, ו/או הריאות) ולהסיר כל תוכן שיורית, אם נוכח.
  3. יש לשטוף את האיברים בתוך בטמפרטורת החדר (RT) באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS; 1.44 g של נה2HPO4, 0.24 גר' ח'2PO4, 8.0 גר' של NaCl ו- g 0.20 של אשלגן כלורי ב- 1 ליטר, pH 7.4).
  4. כתם האברים ברקמות לחצי כל איבר ואיבר, שוקלים כל חצי (רטוב משקולות, ב- g).
  5. יבש אחד חצי של הרקמה בתנור ייבוש ב 150 ° C, על רדיד, במשך 48 שעות.
  6. מקם את רקמות אחרות חצי נפח עקבית (עד 200 µL) של formamide ב microfuge הצינור עבור 48 שעות (ועד 72 h) כדי לחלץ את אוונס כחול.

6. מדידה של רקמות OD

  1. הסר µL 50 של אוונס חלוטים כחול formamide (לאחר 48-72 h RT הדגירה) צינור microfuge והמקום לבאר אחת של צלחת פוליסטירן 96-ובכן. יש להיזהר לא העברת רקמות חתיכות יחד עם formamide.
  2. במקום 50 µL של formamide חדש, טהור לתוך כל אחד שתי בארות ריק של צלחת 96-ובכן עבור החסר.
  3. למדוד ולהקליט את יתר620 של כל טוב של הלוחית 96-ובכן בקורא צלחת ספיגת. 620 ננומטר הוא ספיגת מקסימום של אוונס כחול.

7. חישוב של פלזמה Extravasation

  1. שוקל הרקמה יבש חצי אשר כבר בתנור במשך 48 שעות.
  2. לחשב את יחס משקל משקל רטוב/יבש ספציפי האיבר ריבית כל לעכבר הבודד, החל המשקל הרטוב של רקמה זו חצי (שלב שהושג ב- 5.4), מחולק לפי משקל יבש של זו רקמת אותו חצי (שלב שהושג ב- 7.1).
  3. לחשב משקל יבש (ב- g) של הרקמה חצי formamide על ידי חלוקת המשקל הרטוב של הרקמה חצי לפני זה בוצעה ב- formamide (שהושג בשלב 5.4) על-ידי רטובה: יחס משקל יבש של איבר מסוים ריבית (שחושבו בצעד 7.2).
  4. לחשב את הערכים620 OD מתוקן . החל יתר620 ערך מכל קידוח ניסיוני של צלחת 96-ובכן (מכיל אוונס חלוטים כחול formamide מרקמות כל, שהושג בשלב 6.3), לחסר ריק טוב OD620 הערך (את יתר620 הערך הממוצע של שתי הבארות המכיל formamide טהור, מוכן בשלב 6.2, כמנת620 הערכים שהתקבלו בשלב 6.3) מכל ערך ניסיוני.
  5. לחשב את הערך extravasation פלזמה על-ידי חלוקת את המתוקן OD620 (שלב מחושבים ב- 7.4) לפי המשקל היבש של הרקמה חצי formamide (שלב מחושבים ב- 7.3). היחידות של פלזמה extravasation יהיה OD620/g משקל יבש.
  6. ניתוח נתונים, אקספרס כמו הממוצע ± ב- SEM סטטיסטית להשוות בין קבוצות על ידי מבחן t או בכיוון אחד השונות מבחן מרובה-השוואה של Scheffé (lycofs01.lycoming.edu), לפי הצורך.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1, תיאור סכמטי של התהליך מוצג, אשר נמצא את התוצאה הערכים extravasation עקבי ואמין ביותר של חומר P-induced פלזמה, מן האיברים של עכברים FVBN. הליך זה בדרך כלל לוקח שני ימי עבודה, מופרדים על-ידי לפחות 48 שעות של זמן המתנה. זה אפשרי להפיץ את זה אפילו יותר, אם זה נעשה באופן עקבי עבור כל ניסויים לצורך השוואה. לדוגמה, לאחר האברים מבודדות על יום 1, האיברים ניתן פלאש קפוא חנקן נוזלי ומאוחסנים ב-80 מעלות צלזיוס; על בקפידה מפשיר את האיברים (תוך כמה ימים עד שבוע 1),...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כפי שצוין לעיל, המחקר של פלזמה extravasation יוביל בסופו של דבר הידע החדש בדבר הגורמים או דרכים חדשות כדי לעכב או לטפל extravasation פלזמה. באמצעות צבע כחול אוונס, שימוש מוצלח של פרוטוקול extravasation פלזמה (לעיל), הוכח בכתב היד הנוכחי. למרות שהנתונים המוצגים בחזרה ההשערה כי NEP עשויה להגן על להערכת נגד extravasation פלזמה, זו מטרה משנית תוך זמן קצר, עם המטרה העיקרית היא להציג את פרוטוקול אופטימיזציה אשר עשוי לשמש בקלות במעבדה הממוצע עבור מחקר עתידי של פלזמה extravasation. פרוטוקול דיווח בזאת מתמקדת הסתגלות מחקרים עתידי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

המחברים רוצים להודות אנדי Poczobutt, ד ר Jori Leszczynski עזרה יקר, עריכות כתב היד הזה.  הנתמכים על ידי מענקים שהתקבלו מתוך הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון (NHLBI RO1 HL078929, PPG HL014985 ו- RO3 HL095439), המחלקה לענייני חיילים משוחררים של (Merit ביקורת).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
איזופלורןוטרינר אחד200-070הרדמה בשאיפה
וטרינר אחד200-055הזרקה הרדמה
קסילזיןמעבדות לויד139-236הרדמה להזרקה
(10,3 ו-1 סמ"ק)בקטון דיקינסון309604, 309657, 309659
מחטים (20G1,23G1 & 26G1/2)בקטון דיקינסון305178, 305193, 305111
תא אינדוקציה איזופלורןVetEquip9414431 ליטר
 VetEquipRC2בקר מעגל מכרסמים 2
מיכל חמצןAirgasUN 1072100%
כרית חימוםCWE Inc.בקר טמפרטורהTC-1000
בדיקת טמפרטורת פי הטבעתCWE Inc.10-09012עכבר
(למכרסמים)OhausCS 2000
כלים כירורגיים-מספרייםכלים מדעיים עדינים15000-00Vannas מספריים קפיצים להב ישר 3 מ"מ (כלי חיתוך)   
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדינים11151-10מלקחיים עדינים במיוחד (בידוד כלי עכבר)
כלים כירורגיים-המוסטטיםכלים מדעיים עדינים13009-12המוסטטים של הלסטד-יתושים (ניתוח קהה, החזקת רקמה)
כלים כירורגיים -נהגי תפריםכלי מדע עדין12502-12נהגי תפרים אולסן-הגר (תפירה)
כלים כירורגיים-מלקחייםבסדר כלים מדעיים11627-12מלקחיים תנין אדסון-בראון (אחיזת רקמות תפירה, חולדה)
כלים כירורגיים-מספרייםכלים מדעיים עדינים14110-15מספריים בחיתוך קשיח מאיו 15 ס"מ (ניתוח, דיסקציה, עצמות, חולדה)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלים מדעיים עדינים18025-10מלקחיים לקשירת תפרים (משמשים ל-Millar cath)
כלים כירורגיים-מספרייםכלי מדע עדינים14078-10Lexer מספריים לתינוקות ישר (ניתוח, עכבר)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדינים11254-20Dumont #5 מלקחיים עדינים (כלי חולדה, דיסקציה)
כלים כירורגיים-מספרייםכלי מדע עדין14082-09מספריים דיסקטור 12 מ"מ (ניתוח, עכבר חולדה)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדין11051-1010 ס"מ מלקחיים של Graefe (אחיזת רקמות, עכבר חולדה)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדין11251-35דומונט 5/45 מלקחיים (מבוא לכלים)
כלים כירורגיים-מחזיריםכלי מדע עדינים17012-11מחזירי וייטלנר 2/3 שן (כירורגית חולדות)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלים מדעיים עדינים11294-00דומונט #4 מלקחיים (בידוד כלי דם חולדות, עכברים)
כלים כירורגיים-מלקחייםפיין כלים מדעיים11297-00Dumont #7 מלקחיים (אחיזת רקמות, דיסקציה)
כלים כירורגיים-מספרייםכלי מדע עדין14058-11מספריים קשתית חתוכה קשה (דיסקציה של עכבר, עצמות)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדין11009-13מלקחיים משוננים ומעוקלים של סמקן (אחיזת רקמות, חולדת עכבר)
כלים כירורגיים-המוסטטיםכלי מדע עדין13003-10המוסטטים מעוקלים של הרטמן (ניתוח קהה, החזקת רקמה)
כלים כירורגיים-מלקחייםכלי מדע עדין11006-12מלקחיים משוננים של אדסון (אחיזת רקמות)
קוצץקלטת אוסטרA5
פישרברנד159015G
משחת דמעות מלאכותיתAkorn Inc13985-600-03
לידוקאיןהוספירה0409-4277-012% הניתנים להזרקה
TygonPV-1
אוונס כחולסיגמא אולדריץ'E2129
חומר PBachem H-1890
heparinSagent Pharmaceuticals25201-400-10תמיסת מלח 1000 U/ml
Hospira0409-7138-090.9% נתרן כלורי
פנוברביטל Vortech0298-9373-68
נתרן ציטראטפישר סיינטיפיקBP327-1
PBSסיגמא אולדריץ'P4417-50TAB 
Kimwipes לספיגהפישר סיינטיפיק06-666A
פורממידסיגמא אולדריץ'47670
מיקרו-איזוןדנבר מכשירAPX-60
צינורות מיקרופוגהפישר סיינטיפיק07-200-534
פוליסטירן 96 צלחת בארבקטון דיקנסון
קוראBioTekSynergy 2
ג'ל פוליאקרילאמידBio-Rad3450014 
חלבון משקל מולקולרי סטנדרטיBio-Rad1610374
Protran נתמך ניטרוצלולוזאמרשם (GE)10600015
קופסת ג'לBio-Rad1658005
TrisFisher ScientificBP152-1
Tween20Sigma AldrichP-1379
נתרן כלוריפישר מדעיS271-1
נוגדן פוליקלונלי ראשוני NEP מו"פ & D SystemsAF1182
דוקסיציקלין צ'אוטקלד (HARLAN)TD.130750 
עכברים מסוג פרא FVB/NJג'קסון001800
נוגדן משני (אנטי ארנב עז)ZyMed81-6120
תמיסת ECL-Western Lightening PlusPerkinElmerNEL104001EA
סרטפירס34091
קטמין מזרקי מעגלי נשימה אף רפואית איזון צנתרי פוליוויניל צלחת ספיגה 351172

מקורות

  1. Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. Substance P. Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).
  2. Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig skin. Int Arch Allergy Appl Immunol. 91 (3), 232-238 (1990).
  3. Szabo, A., Menger, M. D., Boros, M. Microvascular and epithelial permeability measurements in laboratory animals. Microsurgery. 26 (1), 50-53 (2006).
  4. Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. J Vis Exp. (73), e50062(2013).
  5. Moitra, J., Sammani, S., Garcia, J. G. Re-evaluation of Evans Blue dye as a marker of albumin clearance in murine models of acute lung injury. Transl Res. 150 (4), 253-265 (2007).
  6. Figini, M., et al. Substance P and bradykinin stimulate plasma extravasation in the mouse gastrointestinal tract and pancreas. Am J Physiol. 272 (4), Pt 1 785-793 (1997).
  7. Awad, A. S., et al. Selective sphingosine 1-phosphate 1 receptor activation reduces ischemia-reperfusion injury in mouse kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 290 (6), 1516-1524 (2006).
  8. Lu, B., et al. The control of microvascular permeability and blood pressure by neutral endopeptidase. Nat Med. 3 (8), 904-907 (1997).
  9. Gendron, G., Simard, B., Gobeil, F., Sirois, P., D'Orleans-Juste, P., Regoli, D. Human urotensin-II enhances plasma extravasation in specific vascular districts in Wistar rats. Can J Physiol Pharmacol. 82 (1), 16-21 (2004).
  10. Xu, Q., Qaum, T., Adamis, A. P. Sensitive blood-retinal barrier breakdown quantitation using Evans blue. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (3), 789-794 (2001).
  11. Saria, A., Lundberg, J. M. Evans blue fluorescence: quantitative and morphological evaluation of vascular permeability in animal tissues. J Neurosci Methods. 8 (1), 41-49 (1983).
  12. Fricke, I. B., et al. In vivo bioluminescence imaging of neurogenesis - the role of the blood brain barrier in an experimental model of Parkinson's disease. Eur J Neurosci. 45 (7), 975-986 (2017).
  13. Pink, D. B., Schulte, W., Parseghian, M. H., Zijlstra, A., Lewis, J. D. Real-time visualization and quantitation of vascular permeability in vivo: implications for drug delivery. PLoS One. 7 (3), 33760(2012).
  14. Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy. Nat Rev Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).
  15. Vandoorne, K., Addadi, Y., Neeman, M. Visualizing vascular permeability and lymphatic drainage using labeled serum albumin. Angiogenesis. 13 (2), 75-85 (2010).
  16. Turner, A. J., Nalivaeva, N. N. Proteinase dysbalance in pathology: the neprilysin (NEP) and angiotensin-converting enzyme (ACE) families. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 52 (4), 40-48 (2006).
  17. Lu, B., Gerard, N. P., Kolakowski, L. F., Finco, O., Carroll, M. C., Gerard, C. Neutral endopeptidase modulates septic shock. Ann N Y Acad Sci. 780, Mar 22 156-163 (1996).
  18. Dempsey, E. C., et al. Neprilysin null mice develop exaggerated pulmonary vascular remodeling in response to chronic hypoxia. Am J Pathol. 174 (3), 782-796 (2009).
  19. Karoor, V., Oka, M., Walchak, S. J., Hersh, L. B., Miller, Y. E., Dempsey, E. C. Neprilysin regulates pulmonary artery smooth muscle cell phenotype through a platelet-derived growth factor receptor-dependent mechanism. Hypertension. 61 (4), 921-930 (2013).
  20. Chu, P., Arber, D. A. Paraffin-section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Pathol. 113 (3), 374-382 (2000).
  21. Bircan, S., Candir, O., Kapucuoglu, N., Serel, T. A., Ciris, M., Karahan, N. CD10 expression in urothelial bladder carcinomas: a pilot study. Urol Int. 77 (2), 107-113 (2006).
  22. Koiso, K., Akaza, H., Ohtani, M., Miyanaga, N., Aoyagi, K. A new tumor marker for bladder cancer. Int J Urol. 1 (1), 33-36 (1994).
  23. Wick, M. J., et al. Protection against vascular leak in neprilysin transgenic mice with complex overexpression pattern. Transgenic Res. 25 (6), 773-784 (2016).
  24. Natah, S. S., Srinivasan, S., Pittman, Q., Zhao, Z., Dunn, J. F. Effects of acute hypoxia and hyperthermia on the permeability of the blood-brain barrier in adult rats. J Appl Physiol. 107 (4), (1985) 1348-1356 (2009).
  25. Scholzen, T. E., et al. Neutral endopeptidase terminates substance P-induced inflammation in allergic contact dermatitis. J Immunol. 166 (2), 1285-1291 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Substance PKnockout
אוונס ממוטבת כחול פרוטוקול כדי להעריך את דליפת דם העכבר
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.