הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תלת מימדי רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים

9.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57157

⸱

3 באפריל 2018

 ,  , 
1Department of Pharmacology, The Nippon Dental University, 2Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Nippon Dental University Hospital

במאמר זה

סיכום

המטרה של הפרוטוקול היא לבנות מודל של דלקת חניכיים אנושי בתוך חוץ גופית. מודל זה רקמות מטפחת שיתוף שלושה סוגים של תאים אנושיים, HaCaT keratinocytes, fibroblasts חניכיים ו מקרופאגים THP-1, בתנאים תלת מימדי. מודל זה ניתן להחיל כדי לחקור מחלות חניכיים, כגון דלקת חניכיים, חניכיים.

תקציר

מחלות חניכיים (כגון דלקת חניכיים חניכיים) הם הגורמים המובילים ואובדן שיניים אצל מבוגרים. דלקת חניכיים היא physiopathology היסוד של מחלות חניכיים. הנוכחי ניסיוניות של מחלות חניכיים הוקמו בסוגים שונים של בעלי חיים. עם זאת, physiopathology של מודלים בעלי חיים שונה של בני האדם, ולכן קשה לנתח מנגנונים תאית ומולקולרית ולהעריך תרופות חדשות למחלות חניכיים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לשחזור רקמה דלקתית אנושית במקבילות של חניכיים (iGTE) במבחנה. ראשית, אנו בונים רקמה אנושית במקבילות של חניכיים (GTE) על ידי ניצול שני סוגים של תאים אנושיים, כולל האדם חניכיים fibroblasts (דבורה שחר) העור האנושי keratinocytes עוריות (HaCaT), בתנאים תלת מימדי. אנו יוצרים מודל הפצע באמצעות כבטלן רקמות לחורר ב GTE. ומונוציטים THP-1 הבא, אנושי מעורבב עם ג'ל קולגן מוזרקים לתוך החור GTE. על ידי adimistration של 10 ננוגרם למ"ל phorbol פעילים-12 13-אצטט (PMA) עבור 72 h, הבדיל THP-1 תאים לתוך מקרופאגים אל טופס מוקדים דלקתיים ב GTE (iGTE) (IGTE גם יכול להיות stumilated עם µg/mL 2 של lipopolysaccharides (LPS) במשך 48 שעות ליזום דלקת ). IGTE הוא במבחנה המודל הראשון של דלקת חניכיים באמצעות תאים אנושיים עם ארכיטקטורה תלת מימדי. IGTE משקפת שינויים פתולוגיים משמעותיים (immunocytes activition, תאיים אינטראקציות בין fibryoblasts, תאי אפיתל, ומונוציטים ו מקרופאגים) במחלות חניכיים. GTE GTE פצועים, iGTE יכול לשמש כלי רב-תכליתי ללמוד ריפוי הפצע, התחדשות רקמות, דלקת, תא-תא אינטראקציה, וכן תרופות פוטנציאליות מסך למחלות חניכיים.

מבוא

מחלות חניכיים הן הגורם המוביל לאובדן שיניים בקרב מבוגרים. דלקת חניכיים חניכיים מחלות חניכיים הנפוץ ביותר בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. שניהם מציגים בתיווך biofilm אקוטי או כרוני שינויים דלקתיים חניכיים. דלקת חניכיים מאופיין על ידי דלקת חריפה, ואילו חניכיים בדרך כלל מציג כמו דלקת כרונית. ברובד היסטולוגית, רכיבים חיידקי להפעיל את ההפעלה של תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים, לימפוציטים, תאי פלזמה ותאים תורן1,2. אלו תאים חיסוניים, במיוחד מקרופאגים, אינטראקציה עם תאים מקומיים (כולל תאים אפיתל חניכיים, fibroblasts, תאי אנדותל, תאי העצם) וכתוצאה מכך נגעים דלקתיים רקמת חניכיים3,4. גרסאות ניסיוניות של מחלות חניכיים הוקמו בסוגים שונים של בעלי חיים, כגון חולדות, אוגרים, ארנבות, חמוסים, הולכי על ארבע, פרימטים. עם זאת, physiopathology של מודלים בעלי חיים שונה של בני האדם, ולכן קשה לנתח מנגנונים תאית ומולקולרית ולהעריך תרופות חדשות של מחלות חניכיים5. טיפוח ושיתוף של חיידקים חניכיים, תאים אפיתל אוראלי אנוש טפט שימש לחקור את המנגנון של דלקות חניכיים6. ובכל זאת, טפט תרביות של תאים דרך הפה חסר תלת מימדי (3D) הסלולר הארכיטקטורה של רקמות שלם; לכן, הם לא יכול לחקות את המצב במבחנה .

כאן, 3D רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים (iGTE) הוקם כדי לייצג מחלות חניכיים במבחנה. זה דגם התלת-ממד של מחלות חניכיים נמצא במיקום ביניים בין תרביות תאים חד שכבתי חייתיים. שלושה סוגים של תאים אנושיים, כולל HaCaT keratinocytes, חניכיים fibroblasts THP-1 מקרופאגים, הן מעובדות במשותף על ג'ל קולגן, מגורה על ידי מאתחלי דלקתיות לבנות iGTE. IGTE מקרוב מדמה את התנאים ויוו של תאית התמיינות תאים תאים אינטראקציה, הפעלת מקרופאג בחניכיים. מודל זה יש לא מעט אפליקציות אפשריות סמים הקרנת ובדיקות גישות חדשות תרופתי במחלות חניכיים, כמו גם עבור ניתוח מנגנונים תאית ומולקולרית ריפוי הפצע, דלקת ו התחדשות רקמות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול זה תוכנן כדי ליצור רקמה אנושית חניכיים מקבילות, הפצע חניכיים דגמים ומודלים דלקת חניכיים. העור האנושי keratinocytes עוריות (HaCaT) נמסרו באדיבותו של פרופסור נורברט אי Fusenig של Deutsches Krebsforschungszentrum (היידלברג, גרמניה)7. האדם חניכיים fibroblasts (HGFs) הם בודדו אותנו מהמתרחש רקמות חניכיים על פי פרוטוקולים שפורסמו בעבר8. הסכמה מדעת הושג מראש, ואת המחקר אושרה בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי ועדת האתיקה, ניפון שיניים אוניברסיטת בית הספר של החיים וברפואת שיניים טוקיו (מספר אישור: NDU-T2012-35). פרוטוקול שלבים 1-3 צריכה להתבצע בשכונה התרבות תאים.

1. הכנת רקמות אנושיות 3D במקבילות של חניכיים (GTE) (איור 1 א')

  1. מיקס קולגן סוג ג'ל-A עם 10% מרוכזים MEM-אלפא ו- 10% שיקום מאגר (2.2 גרם של NaHCO3 ו- g 4.47 HEPES ב 100 מ ל 0.05 N NaOH) בצינור סטרילי 15 מ"ל על-ידי pipetting. לשמור על הפתרון קולגן מעורבים על הקרח, עד נעשה שימוש.
  2. מקום 24-ובכן תרבות מוסיף (נקבוביות בגודל 3.0 מיקרומטר) לתוך צלחת 24-. טוב.
  3. הסר HGFs פני התרבות באמצעות פתרון טריפסין-EDTA 0.25%. להשעות את התאים 10 מ"ל של תרבות בינוני A (MEM-אלפא + 20% FBS + 1% GlutaMAX). לספור את התאים על ידי מונה תא Bürker-טורק.
    1. לחלץ את הכמות הרצויה של תאים (1-5 x105 תאים/mL) ולאחר מכן צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x g.
    2. להשעות התאים הפתרון קולגן מעורבת. לשמור את התערובת על הקרח עד השלב הבא.
  4. להוסיף 0.5 מ"ל של תערובת תא-קולגן (0.5-2.5 10x5 תאים/טוב) תותב תרבות מבלי לייצר בועות. דגירה את התערובת למשך 10-30 דקות באווירה humidified עם 5% CO2 -37 ° C עד מצב של קרישת חסר את התערובת לתוך ג'ל.
    הערה: להוסיף את התערובת קולגן לתוך המרכז של התותב תרבות, כדי למנוע היווצרות קולגן ג'ל שוויוני.
  5. להוסיף 1 מ"ל של המדיום תרבות לתוך הבאר ו 0.5 mL לתוך תותב. דגירה לצלחת תרבות עבור 24 שעות או למשך הלילה באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 º C.
  6. להסיר HaCaT תאים מפני השטח תרבות באמצעות פתרון טריפסין-EDTA 0.25%. להשעות את התאים 10 מ"ל של מדיום B (DMEM + 10% FBS + 1% GlutaMAX) ולספור את התאים. תמצית הנידרשת של תאים (1 – 5 x5 10 תאים/מ ל) עם פיפטה, צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x g... להשעות את התאים בינוני ב'.
  7. הסר את המדיום הכיסויים תרבות, אשר מכילים את התערובת דבורה שחר-קולגן, על ידי השאיפה. להוסיף 0.5 mL HaCaT תא השעיה (0.5-2.5 10x5 תאים/טוב) על התערובת דבורה שחר-קולגן. דגירה התרבויות עבור 24 שעות או לילה.
    הערה: בנקודת זמן זו, המדיום בתרבות טוב צריך להיות A בינוני, ואילו המדיום בעלון תרבות צריכה להיות בינוני B.
  8. להחליף את המדיום תרבות עם אופנוע בינוני (תרבות משותפת בינוני) (MEM-אלפא + 15% נוקאאוט סרום החלפת + 1% GlutaMAX) + 5% FBS. להוסיף 1 מ"ל של המדיום תרבות לתוך התרבות טוב ו 0.5 mL לתוך תותב תרבות. דגירה התרבויות במשך 24-48 שעות.
  9. להחליף את המדיום תרבות עם אופנוע בינוני + 1% FBS. להוסיף 1 מ"ל לתוך התרבות טוב ו 0.5 mL לתוך תותב תרבות. דגירה התרבויות עבור 24 שעות או לילה.
  10. להחליף את המדיום תרבות בתרבות היטב עם 0.7-1 מ ל אופנוע בינוני. הסר את המדיום לחלוטין תותב תרבות (פני תרבות צריך להיחשף אוויר). תקופת דגירה התרבויות של 1-2 שבועות. לשנות את המדיום בתרבות טוב פעמיים בשבוע.
    הערה: אל תתנו את עליית רמת בינוני מעל פני השטח תרבות (השכבה העליונה מורכבת keratinocytes). תמיד לשמור על פני תרבות יבש.

2. הכנת GTE פצועים (איור 1B)

  1. להכין כבטלן הרקמה 1 – 3 מ מ קוטר. לעקר את זה עם החיטוי ב 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
  2. לדחוף את ניקוב רקמות בניצב לתוך GTE בקשר עמוק 300 מיקרומטר, חור בתוך הרקמה כדי לדמות פצע.
  3. בשלב זה, השתמש את הפצועים GTE עבור חוקרים התחדשות וריפוי רקמת הפצע. לחלופין, לתקן GTE באמצעות 10% פורמלין נייטרלי בופר לביצוע ניתוח היסטולוגית.

3. הכנת GTE דלקתיים (iGTE) (איור 1B)

  1. לטפח THP-1 תאים על פי הדוח הקודם9.
  2. מיקס קולגן סוג ג'ל-A עם 10% מרוכזים RPMI 1640, 10% שיקום מאגר (2.2 גרם של NaHCO3 ו- g 4.47 HEPES ב 100 מ ל 0.05 N NaOH) ו- 10 ננוגרם למ"ל ובחום. לשמור הפתרון קולגן מעורבים על הקרח עד השימוש.
  3. ספירה 1 – 2 x 10 תאים6 THP-1, צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x ג להשעות תאי 1 מ"ל של הפתרון קולגן מעורב. לשמור את התערובת על הקרח עד השלב הבא.
  4. להוסיף 10-30 µL THP-1-קולגן התערובת לתוך האזור הפצוע של GTE. להחליף את המדיום תרבות 0.7-1 מ ל אופנוע בינוני המכיל 10 ננוגרם למ"ל של ובחום.
  5. דגירה התערובת באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 מעלות צלזיוס במשך 72 h.
  6. להשתמש במודל על חקירת דלקת חניכיים או מחלת חניכיים (לדוגמה, להוסיף תרופות אנטי דלקתיות פוטנציאליים iGTE כדי לראות את השפעותיה על שחרור ציטוקינים10). לחלופין, השמט 72 h PMA-טיפול, להוסיף 2 µg/mL של LPS לתוך התרבות, דגירה הרקמה באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות11,12.

4. קיבוע ואת כל Immunostaining הר GTE ו iGTE תרבויות

  1. קיבוע של התרבויות.
    1. הסר את המדיום תרבות הצלחת 24-. טוב. לשטוף את רקמות 2 פעמים עם פוספט buffered סליין (הציבורי).
    2. להוסיף 1 מ"ל של 10% פורמלין נייטרלי בופר את הכנס, 1 מ"ל התרבות היטב. השאירו את הצלחת 24-ובכן מקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
    3. הסר את 10% פורמלין נייטרלי בופר ביום המחרת.
    4. עבור כל הר immunostaining, לשטוף את רקמות 3 - 4 פעמים עם PBS לאחר קיבוע.
    5. עבור hematoxylin אאוזין (H & E) צביעת ואת immunostaining רגיל, להמשיך עם התייבשות, פרפין הטבעה ואת חלוקתה.
      הערה: עבור כל הר immunostaining, שלב זה יכול להיות מושמט.
  2. כל הר immunostaining
    הערה: פרוטוקול זה שונה מזו בהפניה 13.
    1. לשטוף את הרקמות 3 x ב- PBS 0.5-1%, טריטון, 10-30 דקות בכל פעם.
    2. דגירה הרקמות פעמיים במשך 30 דקות במאגר חסימה (PBS 1% טריטון + 10% BSA), בטמפרטורת החדר.
    3. לשטוף את רקמות 2 × במאגר חסימה, 5 – 10 דקות בכל פעם.
    4. להוסיף 50 µL של נוגדן ראשוני פתרון-נדרש הדילול/הריכוז התוספות. השתמש סרט דק פלסטיק תיאחז לעטוף את הכיסויים כדי למנוע ייבוש הרקמה.
    5. תקופת דגירה הרקמה של 1-2 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס.
    6. לשטוף את הרקמות 3 פעמים, במשך 30 דקות ב- PBS 1% טריטון + 10% BSA. לשטוף שוב שלוש פעמים, במשך 5 דקות ב- PBS 1% טריטון.
    7. להוסיף 50 µL של נוגדנים משניים במאגר חסימה (PBS 1% טריטון + 10% BSA) ו µL 5 בפתרון Hoechst 33342 (הכתם תא חי NucBlue) כל הכנס. השתמש סרט דק פלסטיק תיאחז לעטוף את הכיסויים כדי למנוע ייבוש הרקמה.
    8. תקופת דגירה של 1-2 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס. לעטוף את הצלחת 24-ובכן במגבת נייר רטוב, אז את זה לתוך ערכת פלסטיק כדי לשמש במהלך הדגירה.
    9. לשטוף את הרקמות 3 פעמים, במשך 10 דקות ב- PBS 1% טריטון
    10. השימוש מחט חדה לחתוך את הקרום של התותב תרבות, כדי להשיג את הרקמה. מקם את הקרום לשקופית.
      הערה: הרקמה צריך להיות על הקרום.
    11. להוסיף 2-3 טיפות של קרינה פלואורסצנטית הר בינוני. מכסים את הרקמה עם כיסוי זכוכית, חנות ב 4 ° C בחושך עד הניתוח.
    12. הצג את רקמות עם לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (LSM).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

HaCaT התאים מוצג מורפולוגיה תקין טיפוסי בהסתכלות מיקרוסקופית שלב-ניגודיות (איור 2 א). סורק אלקטרון מיקרוסקופיות (SEM) תמונות הראה כי HaCaT תא משטחים כוסו על ידי רבים microvilli. חיבורי המערכת בין תאים HaCaT היו מתווכת על-ידי תהליכים קרום (איור 2B). תאים HaCaT הביע אפיתל חניכיים סמן K8/1814, המציין כי HaCaT תאים מתאימים עבור שחזור חניכיים (איור 2C).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מבוסס על שיטות ליצירת רקמת חניכיים מקבילות ושווי רקמת שומן תת עורית מתוארת על ידי הקודם דוחות8,21,22. למרות זאת הוא שיטה פשוטה וקלה, כמה צעדים דורשים תשומת לב מיוחדת. לדוגמה, התערובת קולגן יש לשמור בקירור עד השימוש כדי למנוע היווצרות ג'ל בפתרון. בעת הוספת את התערובת קולגן לתוך תותב תרבות, ודא כי הפתרון הוזרק במרכז של התותב, כדי למנוע יצירת ג'ל מוטה (כמו איור 3B). גם לפריצת חור GTE לוקח מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים ללא ניגוד אינטרסים.

תודות

עבודה זו נתמך בחלקה של החברה יפן לקבלת מענק הסיוע קידום המדע (JSPS) למחקר מדעי (26861689 ו- 17 K 11813). המחברים רוצה להודות מר נתנאל גרין לצורך הגהה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קולגן מסוג I-ANitta Gelatin Incלהכנת דרמיס של GTE
MEM-alphaThermo Fisher Scientific11900073מדיום תרבית
תאים הכנס תרבית תאים (לצלחת 24 בארות), גודל נקבוביות 3.0 μ מקורנינג, בע"מ353096לתרבית רקמות
GlutaMAXתרמו פישר35050061מגיב תרבית תאים
DMEMתרמו פישר מדעי31600034תרבית תאים
מדיום החלפת סרוםתרמו פישר מדעי10828028מגיב תרבית תאים
אגרוף רקמותShibata מערכת שירות ושות', בע"מSP-703עבור ניקוב חורים ב- GTE
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific31800022מדיום תרבית תאים
BSASigma-AldrichA3294לצביעה חיסונית
Hoechst 33342 (כתם תאים חיים NucBlue)Thermo Fisher ScientificR37605לתיוג גרעינים
פלואורסצנטי הר בינוניDakoלהרכבת דגימות לאחר צביעה
חיסוניתנוגדן אנטי-ציטוקרטין 8+18 [5D3]abcamab17139לזיהוי
מיקרוסקופ אלקטרונים סריקתהיטאצ'י, בע"מ.HITACHI S-4000לתצפית על טופוגרפיית פני השטח וההרכב של דגימות
מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקליLSM 700; קרל זייס מיקרוסקופיה ושות', בע"מLSM 700להתבוננות בצביעה אימונופלואורסצנטית של דגימות
Anti-Cytokeratin 19 נוגדןabcam ab52625לזיהוי נוגדן
אפיתל אנטי-וימנטיןabcamab92547לזיהוי פיברובלסטים ומקרופאגים מופעלים
נוגדן Anti-TE-7MilliporeCBL271לזיהוי פיברובלסטים בדרמיס
Anti-CD68 נוגדןSigma-AldrichSAB2700244לזיהוי מקרופאגים
Human CD14 נוגדניםR& D SystemsMAB3832-SPלזיהוי מקרופאגים
Alexa Fluor 594-מצומד עז משני נגד ארנב נוגדן ThermoFisher ScientificA11012לצביעה אימונופלואורסצנטית
Alexa Fluor 488-מצומד עז משני נגד עכבר נוגדן ThermoFisher ScientificA11001לצביעה אימונופלואורסצנטית
EVOS FL מערכת הדמיית תאיםThermo Fisher Scientificלצפייה בצביעת האימונופלואורסצנציה של הדגימה
תאי THP-1Riken בנק תאי BRCRCB1189להכנת iGTE
PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate)Sigma-AldrichP8139לבידול תאי THP-1
אפיתל

מקורות

  1. Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease. Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).
  2. Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage. Frontiers in Immunology. 3, 118(2012).
  3. Koh, T. J., DiPietro, L. A. Inflammation and wound healing: The role of the macrophage. Expert reviews in molecular medicine. 13, e23(2011).
  4. Mescher, A. L. Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration. Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).
  5. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental Animal Models in Periodontology: A Review. The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).
  6. Han, Y. W., et al. Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells. Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).
  7. Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).
  8. Xiao, L., Miwa, N. Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment. Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).
  9. Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  10. Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease. J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).
  11. Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli. Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).
  12. Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages. BMC Immunol. 8, 1(2007).
  13. Abcam. Whole mount fluorescent immunohistochemistry. , Available from: http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/whole_mount_fluorescent_ihc.pdf (2017).
  14. Shetty, S., Gokul, S. Keratinization and its disorders. Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).
  15. Klinge, B., Matsson, L., Attström, R. Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study. J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).
  16. Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease. J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).
  17. Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).
  18. Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).
  19. Holness, C. L., Simmons, D. L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins. Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).
  20. Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. Vimentin is secreted by activated macrophages. Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).
  21. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system. Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).
  22. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent. Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

HaCaTTHP 1PMALPSH and E
תלת מימדי רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.