מיקרוסקופיה קונפוקלית מגלה התא קולטן משטח צבירת דרך התמונה המתאם ספקטרוסקופיה

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מיקרוסקופיה קונפוקלית מגלה התא קולטן משטח צבירת דרך התמונה המתאם ספקטרוסקופיה

6.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57164

⸱

2 באוגוסט 2018

Adam C. Parslow¹^,² , Andrew H.A. Clayton³ , Peter Lock⁴ , Andrew M. Scott¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Tumour Targeting Laboratory, Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine, La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology, Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre, Austin Health, ⁶Department of Medicine, University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy, Austin Health

במאמר זה

סיכום

נוגדנים לאגד היעד הקולטנים על פני השטח של התא יכול להתייעץ קונפורמציה והשינויים קיבוץ באשכולות. שינויים דינמיים אלה יש השלכות על אפיון פיתוח תרופות בתאי המטרה. פרוטוקול זה מנצל מיקרוסקופיה קונפוקלית וספקטרוסקופיה של המתאם תמונה דרך ImageJ/פיג'י לכמת את מידת קולטן קיבוץ באשכולות על פני התא.

תקציר

מיקרוסקופיה קונפוקלית מספק מתודולוגיה נגיש כדי ללכוד אינטראקציות סלולרי תת קריטי אפיון ופיתוח נוסף של ניסויים פרה-קליניים סוכנים המסומנת הגששים פלורסנט. עם הפיתוחים האחרונים בתחום תרופות ציטוטוקסיות נוגדן מבוסס מערכות אספקה, הבנה התיקונים. הנגרמת על ידי סוכנים אלה בגדר של צבירת קולטן, הפנמה יש חשיבות קריטית. פרוטוקול זה ממנף את המתודולוגיה ומבוססת של immunocytochemistry פלורסנט והפצה קוד פתוח פיג'י של ImageJ, עם autocorrelation מובנה, פונקציות מתמטיות תמונה, כדי לבצע קורלציה מרחבית תמונה ספקטרוסקופיה (ICS). פרוטוקול זה quantitates את עוצמת פלורסנט של קולטני שכותרתו כפונקציה של אזור קרן של מיקרוסקופ קונפוקלי. זה מספק מדד כמותי של מצב צבירה מולקולת המטרה על פני התא. מתודולוגיה זו מתמקדת האפיון של תאים סטטי עם פוטנציאל להתרחב חקירות הטמפורלי של קולטן מצבור. פרוטוקול זה מציג מתודולוגיה נגיש לספק כימות של קיבוץ באשכולות אירועים המתרחשים על פני התא, ניצול טוב הוקמה ללא-התמחות מכשיר הדמיה וטכניקות.

מבוא

התפתחות נוגדנים טיפולית הראו הצלחה בטיפול של הגידול במספר סוגים¹. הפיתוחים האחרונים של נוגדן תרופתיים conjugates (ADC) כמו מנגנוני מסירה עבור תרכובות ציטוטוקסיות הרחיבה את הדרישות להבנת הדינמיקה של אינטראקציות נוגדן: קולטן בתא פני השטח². בעקבות מיקוד מוצלחת של נוגדנים לקולטן פני שטח התא, קומפלקסים אלה יכול לגרום דפוסים צבירת דומים לאלה הנהוגות ליגנד: נוגדן אינטראקציות³. שינויים קולטן צבירת יכול לגרום שינויים ממברנה תוצאה ההפנמה של הקולטן והסרה שלו מפני השטח של התא. בהקשר של המספר המשלים נוגדן-סמים, תהליך זה לאחר מכן משחרר את המטען ציטוטוקסיות לתוך endosomes למביטה ובעקבות כך הציטופלסמה, וכתוצאה מכ....