הקמנו פרוטוקול כירורגיים חדשניים עבור שני הפוטונים הדמיה של עכברים חיים כבד עם הפלישה מינימלי. בטכניקה זו, זיהינו את מבנה נתונים היסטוריים של הכבד במהלך endotoxemia ליפופוליסכריד-induced. אנו צופים כי שיטה זו עשויה להיות מנוצל כדי לקבוע את היעילות של טיפול שונים ריאגנטים ליקוציט הכבד ההעברה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שני הפוטונים הדמיה Intravital של לויקוציטים במהלך התגובה החיסונית בכבד עכבר שטופלו ליפופוליסכריד
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
אלח דם הוא סוג של זיהום חמור העלולה לגרום לכשל איברים ורקמות נזק. למרות שיעור תמותה ותחלואה קרדיווסקולרית המשויך אלח דם גבוהה מאוד, לא ישירה טיפול או מנגנון הקשורות איברים נבדקה בפירוט בזמן אמת. הכבד הוא האיבר מפתח שמנהל רעלים וזיהומים בגוף האדם. במסמך זה, כיוונו לבצע הדמיה intravital של העכבר הכבד לאחר אינדוקציה של endotoxemia כדי לעקוב אחר על תנועתיות של תאים חיסוניים, כגון נויטרופילים ומקרופגים דרכים הכבד (LCMs). בהתאם לכך, תיכננו שיטה כירורגית לחשיפה של הכבד עם כירורגיה זעיר פולשנית. עכברים הוזרקו intraperitoneally ליפופוליסכריד (LPS), אנדוטוקסין נפוצות. באמצעות הגישה כירורגי הרומן שלנו עבור חשיפה intravital הדמיה של גיוס העכבר כבד, שמצאנו כי נויטרופילים בחלבון פלואורסצנטי LPS שטופלו LysM-ירוק (GFP) העכבר הכבד היה גדל לעומת זאת, באגירה פוספט הכבד שטופלו תמיסת מלח. לאחר הטיפול LPS, המספר של נויטרופילים גדל באופן משמעותי עם הזמן. בנוסף, שימוש בעכברים CX3Cr1-GFP, אנחנו בהצלחה דמיינו הכבד מקרופאגים תושב בשם איכות המזון. לכן, כדי לחקור את היעילות של ריאגנטים חדש כדי לשלוט ניידות המערכת החיסונית ויוו, קביעת תנועתיות של המורפולוגיה של נויטרופילים ו- LCMs בכבד עשוי לאפשר לנו לזהות את האפקט הטיפולי של האיבר כשל ורקמות הנזק שנגרם על ידי הפעלת לויקוציטים באלח דם.
מבוא
הכבד הוא האיבר חילוף החומרים העיקריים אצל יונקים; היא פועלת כמו מגדל פיקוח עבור אנרגיה, הורמונים, ניקוי רעלים1. בשל חשיבותה, חוקרים ניהלו ניסויים במבחנה , ויוו רבים התירי את השינויים בכבד בעת דלקת. מיקרוסקופ intravital שימש כדי ללכוד תמונות בשידור חי כבד2 . אכן, הכבד שונים בשיטות הדמיה כבר הציגה2,3,4,5,6. עם זאת, על מנת לפתח בגישה כירורגית פשוטה יותר ולהשיג ייצוב של איבר המטרה של תאים חיסוניים, תיכננו את פרוטוקול פשוט יכול להנחות חוקרים כדי ל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים נערכו בהתאם לקווים המנחים של טיפול בעלי חיים מוסדיים ושל שימוש הוועדה של Yonsei אוניברסיטת המכללה לרפואה, קוריאה. חלבון פלואורסצנטי ירוק-LysM (GFP; gfp / +) עכברים8 ו- CX3Cr1-GFP (gfp / +)9 עכברים בגיל 8-12 שבועות של גיל שימשו עבור הדמיה intravital. כל כלי ניתוח היו בלוק חיטוי באלכוהול 70%.
1. אישית מעוצבת העכבר הכבד הדמיה קאמרית עם תמיכה כלים
- העכבר הכבד הדמיה עיצוב החדר
- להפוך תא של גודל הבא עבור כבד עכבר הדמיה (איור 1): בחדר הפנימי (120 מ"מ אורך × 160 מ מ רוחב × 30 מ מ גובה), החדר החיצוני (100 מ מ אורך × 100 מ מ רוחב × 24 מ מ גובה), ב....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הומצאה תא הדמיה פשוטה ויציבה מאוד. החלק התחתון של תא היה מכוסה סיליקון, אשר מנעו החלקה של העכבר הגוף והאיברים. בנוסף, בגלל הסיליקון יש את הכמות הנכונה של גמישות, זה יכול למנוע נזק הצפוי המושרה על ידי הלחץ של השקופית כיסוי (איור 1 א', ג). דבק השני, רקמות-כספת (הוטרינר בונד) הוחלה על מנת לתקן את הכבד שחולצו על המיטה סיליקון בצורת עיגול. שיטה זו אפשרה לנו להימנע רועד נגרמת על ידי פעימות הלב או תנועה respirational. לבסוף שקופית כיסוי מתכת היה להצ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הכבד נחקרה באופן פעיל על ידי הרבה קבוצות3,10, בשל חשיבות תפקודה. למשל, היימן ואח הציע שיטה עדינה באמצעות agarose. למרות ששיטה זו נמצאה להיות מדויק מאוד, ההגדרה agarose לוקח זמן. עם זאת, עם המתודולוגיה שלנו, כל ההליכים יכול להתבצע בתוך 30 דקות, צמצום גורמים אחרים מבלבלים. שנית, ייצוב הכבד הוא מאוד חשוב כי פעימות יכולים להפריע את הוידאו. כדי למנוע תופעה זו, אנחנו לטאבים העכברים למצב חימום נכון.
צעד קריטי נוסף פרוטוקול זה היה ייצור של המס.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי מענק של נבחרת מחקר קרן של קוריאה (ב- NRF) ממומן על ידי ממשלת קוריאה (MSIP; מענק מס 2016R1A2B4008199 Y-מ'. ח'), ו משרד הבריאות & רווחה, הרפובליקה של קוריאה (להעניק את המספר: HI14C1324).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תא מעוצב בהתאמה אישית | מכשירי | בגודל מעוצב בהתאמה אישית | |
| שקופית כיסוי מתכת | מכשירי תא חי בגודל | מעוצב בהתאמה אישית | |
| כיסוי זכוכית | מיקרוסקופיה אלקטרונית מדעי # | 72204-03 | |
| Sylgard 184 ערכת אלסטומר סיליקון | דאו קורנינג | ||
| ארלנמאייר | דוראן | 21 216 36 | |
| צלחת תרבית תאים (סוג שטוח) | HYUNDAI Micro Co. | H31006 | |
| Desiccator | ADARSH | 55204 | |
| High Q Bond SE 5 mL | BJM LAB | כדי להפוך סכר קבוע למחמם | |
| גומי סיליקון גמיש | Omega | SRFR / SRFG SERIES, M1250/0800 | |
| DC ספק כוח | Toyotech | DP30-03A | |
| מלח | תוצרת בית | ||
| ליפופוליסכרידים (LPS) מסלמונלה enteria serotype enteritidis | Sigma-Aldrich | L6011 | |
| Texas Red Dextran | Thermo Fisher Scientific | D1830 | |
| 15 מ"ל צינור חרוטי פוליפרופילן בהירות גבוהה | FALCON | 14-959-49B | |
| 0.45 μ מסנן m (מסנן מזרק מיניסארט) | Sartorius | 16555k | |
| 1.5 מ"ל מיקרו שפופרת, ענבר | אקסיג'ן | MCT-150-X | לחסימת אור |
| 1 מ"ל | מזרק קוריאה חיסון | KV-S01 | |
| 3 מ"ל מזרק | קוריאה KV-S03 | ||
| 10 מ"ל מזרק | קוריאה KV-S10 | ||
| 0.3 מ"ל מזרק אינסולין | בקטון דיקינסון | 324900 | |
| קרם להסרת שיער 100 מ"ל | גוף טבעי | ||
| צמר גפן | ABDI | ||
| Zoletil 50 5 מ"ל | Virbac | ||
| Rompun 10 מ"ל | באייר | ||
| חימום צלחת Live | Cell Instruments | PH-S-10 | גודל מותאם אישית |
| בקר DC | Cell Instruments | CU-301 | |
| מספריים מיקרו-חתך | מכשיר הרווארד | 72-5418 | |
| מספריים | Roboz | RS-5882 | |
| מלקחיים | Roboz | RS-5137 | |
| וטרינר בונד | 3M | 1469SB | |
| תוכנת ZEN (מהדורה שחורה) | תוכנית קרל זייס | עבור LSM 7 מגה פיקסל | |
| LSM 7 מגה פיקסל | קארל זייס | ||
| Volocity | Perkinתוכנית ניתוח אלמר |
מקורות
- Girard, J. R., et al. Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat. J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).
- Marques, P. E., et al. Imaging liver biology in vivo using conventional co....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
