דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

סיכום

אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה המשמשת לטיפול של סרטן לבלב מקומי מתקדם. להיות טכניקה חדשה יחסית, ההשפעות של חמתו על הגידול הם הבינו כהלכה. פיתחנו מודל העכבר syngeneic המאפשרת לימוד השפעת חמתו על סרטן הלבלב.

תקציר

סרטן הלבלב (PC), מחלה אשר הורג כ 40,000 חולים כל שנה בארצות הברית, הוא התחמק בהצלחה מספר גישות טיפוליות כולל את האסטרטגיות immunotherapeutic מבטיח. אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה שגורם מוות של תאים סרטניים ללא הרס של מבנים סמוכים סילוק, ובכך מאפשר את ההליך שיבוצע בגידולים קרוב מאוד אל כלי הדם. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו גורמת מוות של תאים אפופטוטיים להיפגע הדרגתית, יחד עם נמק אבלציה מיידית המושרה, נמצא כעת בשימוש קליני למטופלים שנבחרו עם מחשב מקומי מתקדם. פולשני, ללא-יעד הליך מסוים כמו חמתו יכול לגרום מספר עצום של תגובות ב microenvironment הגידול. מעט מחקרים עסקו השפעת חמתו על הגידול בסוגי סרטן אחרים, אבל אף אחד לא התמקדו PC. פיתחנו מודל syngeneic עכבר של מחשב תת עורית (SQ), orthotopic גידולים יכולים להיות מטופלים בהצלחה עם חמתו באווירה מבוקרת מאוד, להקל על הליך פוסט האורך מחקרים שונים. מודל זה בעל חיים משמש מערכת איתנה כדי לבחון את השפעות חמתו, דרכים לשפר את היעילות הקלינית של חמתו.

מבוא

אדנוקרצינומה ductal הלבלב (PC) צפוי להיות הגורם המוביל השני של מקרי מוות מסרטן בארה ב סביב 2020¹. הרוב המכריע של חולים שאובחנו עם המחשב ימותו בסופו של דבר בשל מחלה גרורתית מרוחקת². Microenvironment PC הוא לשמצה לדיכוי המערכת החיסונית ואת chemoresistant. משתית desmoplastic שלה מכיל את המחסור בתאי T אפקטור (אנטי הגידול) חשיבותו של לויקוציטים לדיכוי המערכת החיסונית, כולל סרטניים הקשורים מקרופאגים (תאמי), משתיק קול נגזר מיאלואידית תאים (MDSCs) ו- T רגולטורי תאים (Tregs)³ . אלה מושתתות את הצורך לפתח אסטרטגיות עם מודאלים מרובים לנטרל השפעות אלו של microenvironment.

חמתו פותחה כשיטה הלא-thermal סרטן אבלציה. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו אינו גורם לנמק coagulative מהירה אבל במקום תוצאות אפופטוטיים להיפגע הדרגתית לתא המוות⁴. חשוב עבור גידולים בלבלב, חמתו, אינה חשופה להשפעות "מפזר החום", ניתן לבצע ליד כלי הדם⁵. כיום משמש קלינית, למטופלים שנבחרו עם מקומי מתקדם או גבולית resectable סרטן הלבלב, ויש 510(k) לאישור ה-FDA⁶ טכנולוגיה זו. בסדרת הגדול ביותר שפורסם חמתו עבור PC⁷, חציון ההישרדות של חולים שעברו חמתו היה בערך כפול ההישרדות של חולים שטופלו מודרני כימותרפיה לבד ללא כריתה^8,9.

מספר מחקרים הראו שאבלציה תרמית זה גורם לתגובה החיסונית מערכתית בסוגים אחרים הגידול (שבתוך צ'ו. et al. ¹⁰)-Radiofrequency אבלציה (RFA) בגידול בעלי חיים מודלים הפניות לתא T מוגברת מחלחל^11,12, כולל גידול תאים הרוצח מופעל הטבעיים (NK) hepatocellular סרטן המטופלים^{13, בת 14}. ירידה Tregs לדיכוי המערכת החיסונית חולי סרטן ריאות¹⁵. מספר קטן יותר של מחקרים בחנו מערכת החיסון, microenvironmental, ותגובות פציעה חמתו¹⁶. חמתו הוכח לעורר תגובה חיסונית מערכתית במודלים של העכבר immunocompetent שבו הצמיחה של תאי הכליה (contralateral) משני allografts הייתה מצומצמת או למניעה על ידי חמתו של גידול ראשוני שבועיים לפני¹⁷. הם גם ציין כי עכברים immunocompetent נדרש פחות מתח עבור רגרסיה מלאה מאשר עכברים immunocompromised. זה היה שיערו כי חמתו עלולה לגרום במצגת אנטיגן משופרת לעומת לנמק coagulative של אבלציה תרמית, אבל זה לא נחקרה באופן ספציפי.

פיתחנו מודל syngeneic העכבר של המחשב האישי משורת תא 4580 KPC-לוק (מתנה ג'יי ג'יי Yeh ב אוניברסיטת צפון קרוליינה), אשר נבעה גידול שהתפתח במהלך LSL-קראס זכר^{G12D / +}; LSL-Trp53^{R172H / +}; PDX1^{Cre / +}; LSL-ROSA26 ^{לוק / +} העכבר, לחקור את ההשפעות המקומי ומערכתית של חמתו^18,19. זו שורת התאים לבטא לוציפראז הוא immunogenic גם tumorigenic בעכברים C57BL/6 immunocompetent כאשר מוזרק קמ ר או orthotopically ומייצרת באופן אמין גרורות בכבד כאשר הוא מוזרק הטחול. אנחנו נעזרו גנרטור הדופק ניתן לתיכנות גל מרובע כדי לספק 100-µs פולסים של חשמל ביחס מתח/מרחק של 1,500 V/ס מ באמצעות בדיקה מערך שני-מחט (מופרדות על ידי 5 מ מ) או פלטינה פינצטה-trodes קמ ר או orthotopic גידולים, בהתאמה, ב עכברים לדגמן את ההשפעות של חמתו של חיים קטן.

פרוטוקול

ניסויים בבעלי חיים כל לבצע הפעולות הבאות שפרוטוקול זה תאושר על ידי בהתאמה אכפת לי חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC). כל ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי IACUC UCSD.

1. רכישת חיות הנמען

הערה: שורת התאים 4580 KPC-לוק הוקמה מגידול וביצועו LSL-קראס^{G12D / +}; LSL-Trp53^{R172H / +}; PDX1^{Cre / +}; LSL-ROSA26 ^{לוק / +} העכבר (KPC), אשר הוא מודל הנדסה גנטית של PC על רקע C57BL/6. היתרון של הקו הסלולרי הוא והוא צורונים מבטא לוציפראז-הפעלת פיקוח על הגידול במודלים orthotopic. עם זאת, שורות תאים אחרים עשוי לשמש גם כל עוד הם תואמים הרקע הגנטי של העכברים הנמען.

1. לקבוע מראש את קבוצות הניסוי ואת המספר של בעלי חיים לכל קבוצה.
2. בחר את הגיל (6 - 10 - בן שבועיים עכברים מומלץ) ומשמשת מין החיות בשימוש על פי ההשערה לבין הקו הסלולרי.

2. התרבות תאים

1. שימוש Dulbecco המתואמת של הנשר בינוני (DMEM): תערובת מזין F12 מדיה (50: 50) המכיל 10% סרום שור עוברית (FBS) ו 1% סטרפטומיצין פניצילין אנטיביוטיקה (צמיחה מלאה מדיה) כדי לגדל תאים 4580 KPC-לוק.
2. אם קפוא, להפשיר את התאים 4 ימים לפני ההשתלה הגידול.
3. לגדל את התאים ב 37 ° C עם 5% CO לחות₂ ו- 95% בתנאים אספטי.
4. Trypsinize התאים עם 0.25% טריפסין למשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני שהם מגיעים > 80% confluency ולנטרל את טריפסין על-ידי הוספת פעמיים את עוצמת הקול של צמיחה מלאה מדיה.
   הערה: תאים אלה אינם קובעים גידולים ביעילות בעכברים אם הם משמשים ב- 100% confluency או אם הם נמצאים passaged עבור יותר מ-12 שעות. לפיכך, מומלץ להקפיא את התאים על המעברים קודמות confluency אופטימלית.
5. לספור את התאים באמצעות hemocytometer והמשך הגידול אינדוקציה אם נאותה מספרים קיימים (0.5 - 1 x 10⁶ תאים/עכבר...). אם לא, הרחב את התאים עבור קטע נוסף עד מספרי הטלפון הנייד נאותה מתקבלים.

3. אינדוקציה של גידולים קמ ר

1. להכין את החומרים הדרושים: P1000 P100 פיפטות וטיפים, מזרק 1-mL, 25 גרם ומחטים, קרום המרתף מטריקס (BMM), DMEM מדיה הבזליים, 1.5-mL צנטריפוגה צינורות. לשמור כל חומר סטרילי וקר (4 ° C) עד הסוף של ההליך. גם על קוצץ שיער, מטליות אלכוהול מוכנים לשימוש בבעלי חיים.
2. Trypsinize (לפי שלב 2.4) לספור את התאים ו resuspend אותם על ריכוז של 2-4 x 10⁷ תאים למ"ל של DMEM קר.
3. הוסף אמצעי שווה של 100% BMM כדי להפוך השעיה התא האחרון ב- 50% BMM. עוצמת הקול הסופי צריך סכום 50 µL של התא השעיה על העכבר בכל הנדרש. הכינו 10% עודף כדי להכיל את שטח מת במזרק ועל שגיאות pipetting.
4. להציב המתלים כרכים µL 550 מ ל 1.5 צנטריפוגה צינורות aliquot בקרח.
5. לרסן את החיות (עכברים C57BL/6 זכר 6 - בן שבועיים) באמצעות restrainer או באופן ידני.
   הערה: לחלופין, עכברים יכול להיות מרדימים עם 2.5% איזופלוריין גז חמצן בספיקה של 2 ל'/דקה באמצעות מכשיר אידוי של דיוק.
6. לגלח את האתר של הזרקה, אשר הוא עדיף על חיילינו מעל רגל, משתמש בטלוויזיה. בעזרת ספוגית אלכוהול, ניקוי האתר של הזרקת פעמיים.
7. לצייר µL 250 תאים השעיה-ריכוז סופי של 1-2 x 10⁷ תאים/מ ל מזרק קר 1-mL ולהסיר כל בועות אוויר על-ידי הזזת את הבוכנה למעלה ולמטה. מחט 25 גרם לצרף המזרק, הקפד למלא את החלל בתוך המחט.
8. הכנס היטב את המחט מתחת לעור בזווית של 30 מעלות לגוף ליד לאגפים, מוודא שהמחט פירס לא חלל הצפק או את מערכת השרירים של הגפיים.
9. לרדד את המחט מקבילה לגוף, ולשטח קמטים על העור. לאט לאט להחדיר 50 µL תא השעיה. . תחזיקי את המחט באתר של הזרקת 10 s כדי לאפשר את BMM לגבש כדי למנוע דליפה כלשהי.
10. לסגת לאט את המחט שומרים. על זה מקביל ללא כל תנועה הצידה. בעדינות לנקות את האתר של הזרקת עם ספוגית אלכוהול ולשחרר את העכבר לדיור שלה.
    הערה: אם העכבר היה מרדימים במהלך ההליך, לפקח על החיה עד זה חוזר רפלקסים שקמה בעצמה אחרי שמפילים שלה.
11. נטר את צמיחת הגידול באופן קבוע באמצעות מחוגה עד שהוא מגיע 5 מ מ קוטר.

4. אינדוקציה של גידולים Orthotopic

1. להכין את החומרים הדרושים. אוטוקלב כלי כירורגי כמו מספריים, אזמלים, המחט נהגים, והצביע ומלקחיים שקצהו שטוח. שמור בהישג יד התפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, העין סיכה, גאזה כותנה, 10% povidone יוד פתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, הבופרנורפין ו סוכנים הרדמה.
2. המתת חסד עכבר התורם (רצוי של רקע אותו נדרש עבור דגם orthotopic) נושא גידול SQ KPC באמצעות תא מילוי איטי CO₂ . לסלק את הגידול SQ בקפידה בתנאים סטריליים בשכונה BSL-2 באמצעות מלקחיים סטרילי ולא microscissors זמן קצר לפני orthotopic-השרשה. במהלך הגידול כריתה לטפל לא כדי לנקב חלל הצפק. ולשטוף את הגידול באופן מיידי עם 2 חילופי PBS סטרילי.
3. באמצעות ואזמלי מנתחים סטרילי, מינצ הגידול נכרת לחתיכות³ 1 מ מ למקם אותם על צלחת פטרי המכילות קר סטרילי DMEM מדיה הבזליים, לאחסן בקירור עד ההשרשה.
4. לנהל את העכבר הנמען 0.05 - 1 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין כאבים גואנגצ'אנג, 30 דקות לפני הניתוח.
5. עזים ומתנגד עכברים הנמען עם 2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה) באמצעות מכשיר אידוי של דיוק (או סוכנים אחרים הרדמה). תמשיך עכברים 37 ° C חימום pad עבור מכלול של ההליך. חומר סיכה חלות על העיניים כדי למנוע לייבוש. מבחן עומק הרדמה על ידי חוסר המזעזעות רפלקס בתחילה, ואשר המטוס כירורגית בהרדמה היעדרה של רפלקס פדלים קמצוץ הבוהן עדין. לשמור את ההרדמה במהלך כל תהליך כירורגי.
6. הנח את העכבר על גבו, בעדינות להפוך את זה על הצד השמאלי שלו, כך נחשף בצד שמאל של הבטן. להסיר את שיער בטן של העכבר באמצעות קרם depilatory ולנקות עם גזה כדי להבטיח שאין שיער חינם מזין את החתך פוסט של הבטן. להכין את הבטן השמאלית ניתוח באמצעות 3 מחזורים של 10% povidone יוד ואחריו מגבונים אלכוהוליים לחטא את העור.
7. באמצעות אזמל סטרילי, לבצע חתך רוחבי או עקיפה 1.5 ס מ של העור, 1 ס"מ משמאל האמצע, מתחת בית החזה, המדיאלי מעט את הטחול. לאחר מכן, להרחיב את החתך דרך מערכת השרירים בבטן, שיקוף החתך שטחית שמעליה.
8. לאתר הטחול משתמש שטוח משופעת מלקחיים, בעדינות להחצין את זה של חלל הבטן. . משכי הטחול באמצעות של המוליך כותנה סטרילי, למצוא בזנב הלבלב מצורף בתחתית של הטחול.
9. בעזרת מלקחיים שקצהו שטוח, תמשוך בזנב הלבלב רוחבית.
10. לאסוף פיסת גידול טחון דק אחד מן העכבר התורם עם קצה מחט סטרילית פיין (6-0) הפתולוגיים ומקם אותה בעזרת המלקחיים סטרילי.
11. בעוד בעדינות היציבה בגוף/הזנב הלבלב רוחבית, הכנס את המחט של התפר המכיל מקטע הגידול לזנב של הלבלב. עוברים את התפר באיטיות דרך הרקמות, מחזיק את הגידול בקשר עם זנב הלבלב. להחיל אחד או שני תפרים נוספים בהתאם התמצאות החלקיק ביחס הרקמה.
12. הסר את המחט לחלוטין מן הרקמה ולשמור את הלבלב/טחול המוחצנים של 60 נוספים s תוך פיקוח עבור סימנים של דימום או דליפה. לאחר מכן, להפנים אותם בעדינות לתוך חלל הבטן בעזרת מלקחיים בוטה.
13. לסגור מערכת השרירים בבטן באמצעות גם בתפר שנספג 6-0 תפר רציף או מופרע וסגור צמוד העור באמצעות 3-0 עד 6-0 קטעה תפרים נספגים. להפסיק את ההרדמה בשלב זה.
14. לאפשר את העכבר כדי לשחזר בכלוב בבית שלה עם גישה חופשית מזון ומים. מניחים את הכלוב על כרית החימום כדי להקל על שחזור. לפקח על סימנים חיוניים כגון נשימה, זלוף וכו ', במהלך תהליך ההחלמה.
15. לאשר את סימני בטעותו רפלקס ברגע משחזרת את העכבר, ויכול אז החזרה לכלוב לדיור קבוע.
16. לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג 8-12 שעות לאחר הניתוח, ו- h כל 8-12 לאחר ההליך כנדרש סימנים של כאב.
17. לפקח על הגידול באמצעות ביולומינסנציה של ויוו מערכת הדמיה (ראה את הטבלה של חומרים).
    1. בעקבות הגידול על ידי הדמיה מתחיל ביום 4 לאחר orthotopic-השרשה, ולבצע הדמיה פעמיים בשבוע.
    2. ביום הדמיה, לנהל (הזרקת בקרום הבטן) 30 מ"ג/ק"ג של D-luciferin כדי anesthetized העכבר הנמען (2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה)) 10 דקות לפני הדמיה.
    3. תמונת לפעילות לוציפראז באמצעות הגדרת הפריה חוץ גופית ללא מסננים כלשהם פליטה למשך תקופה מינימלית של חשיפה של 5 ב imager הפריה חוץ גופית עם הבמה מחוממת חינם אוטומטי-זריחה, תוך שמירה על ההרדמה על העכברים.

5. חמתו של גידולים קמ ר

1. להכין את החומרים הדרושים: כיכר electroporator גל, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות (מערך המחט לעומת פינצטה-מפעילה), מתאמים. לשמור על התפרים סטרילי (המוזרק 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, הבופרנורפין ו הרדמה גם בקרבת מקום.
2. לחטא את פינצטה או מחט מערך אלקטרודות באמצעות גז עיקור. Autoclaving אינו מומלץ. השתמש מעקר חרוז זכוכית כדי לעקר את האלקטרודות בין בעלי חיים.
3. לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג כדי העכברים נושאות 30 דקות לפני ההליך.
4. בצע את שלבים 4.4-4.5 לזירוז בהצלחה הרדמה בעכברים, ברגע השתל הגידול SQ מגיע בקוטר 5 מ מ.
5. הנח את העכבר anesthetized על הצד כדי לגשת הגידול SQ לאגף. להסיר את השיער בעזרת קוצץ ועור נקי בעזרת ספוגית אלכוהול.
6. לשימוש גידולים מ ר, שני מחטים מערך אלקטרודות. לרומם את העור ישירות תחת אתר גידול באמצעות מלקחיים והכנס האלקטרודות דרך העור מקבילה לגוף מוודא שהם לא לחדור חלל הצפק. פעם אחת דרך העור, מיקום האלקטרודות באופן כזה שהם סוגר את הגידול.
7. לתכנת את electroporator כדי לספק 100 µs פולסים בתדר של 1 הרץ על 1,500 V ס עבור סכום כולל של 150 פולסים. לספק את פולסים באמצעות דוושת רגל. להפריד כל ערכה של פולסים 10 על-ידי 10 s, על מנת לאפשר פיזור חום, לאשר את המיקום הנכון של האלקטרודות.
   הערה: ללא שימוש סוכני משתק, עכברים יחוו התכווצות שרירים עם חמתו שיכולים לגרום תזוזה של האלקטרודות. אלא אם כן מאובטח באופן ידני.
8. הסר את האלקטרודות לאחר מינון מלא, אשר לא יעלה על הרשומה ס' 200 המתח בפועל תימסר, אשר מוצג על electroporator. לאפשר העכברים להתאושש בעקבות חמתו לפי השלבים 4.14-4.16.

6. חמתו של גידולים Orthotopic

הערה: חמתו של גידולים orthotopic כרוך ניתוח הישרדות נוסף על העכבר אותו וכך מצריכים אישור מיוחד IACUC המקומית לפני תחילת.

1. להכין חומרים הדרושים: אוטוקלב כלים כירורגיים כמו מספריים, כמו מה, אזמל, המחט נהגים, הצביע מלקחיים, והודיע במול מלקחיים. זכור בקרבת מקום גם כן: תפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, 10% povidone יוד הפתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, גל מרובע electroporator, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות שלהם מתאמים, הבופרנורפין ו הרדמה.
2. להעריך את העכברים עבור orthotopic הגידול על ידי הדמיה ויוו (ראה שלב 4.17) על ידי הזרקת 30 מ"ג/ק"ג של D-Luciferin intraperitoneally.
   הערה: הגידולים orthotopic הינם אידיאליים עבור חמתו הטיפול 8-10 ימים שלאחר ההשתלה כאשר הגידולים הם בבירור, עדיין סגורים על הלבלב כפי שניתן לראות בתמונות הפריה חוץ גופית לוציפראז (ראה את התוצאות נציג).
3. בצע שלבים 4.4-4.9, כדי לאתר את הגידול מושתל. אם הגידול לא קל לאתר, להשתמש מלקחיים לרודולף בוטה כדי להזיז את הקיבה והטחול בעדינות כדי לזהות את הגידול.
4. להחצין את הגידול עם מלקחיים לרודולף בוטה וללכוד את הגידול בחוזקה אלקטרודות הפלטינה של פינצטה-מפעילה. לספק את פולסים אלקטרופורציה כפי מתוכנת בשלב 5.7 באמצעות electroporator את גל מרובע בסדרות של 10 פולסים נשלט על-ידי המתג רגל.
5. שמור את הגידול מוחצן s 60 לפחות פוסט חמתו לעקוב אחר סימנים של דימום. הוסף את הגידול בחזרה לתוך חלל הבטן סגירת החתך שתואר קודם (צעדים 4.13-4.16), לפקח על העכבר עד זה יחלים.
6. נטר את ההשפעות של חמתו על הגידול באמצעות ויוו לוציפראז הדמיה לפי שלב 4.17.

תוצאות

עקבנו אחר ההליך המתואר לעיל, ועורר גידולים SQ בשבוע 5-6 זקן פראי סוג C57BL/6 עכברים מחוסן עם עונה 1 פרק 10⁶ תאים עם 50% BMM. כאשר גודל הגידול 5-6 מ מ קוטר, כמה מן העכברים היו מורדמים, גידולים שלהם היו טוחנות, מושתל orthotopically בעכברים C57BL/6 הנמען. חמתו היה שבוצעו 10 ימים שלאחר ההשתלה, כפי שמוצג על ציר הזמן על איור 1. חמתו בוצעה על העכברים הנותרים הנושאת גידולים SQ.

ב ר גידולים, חמתו ...

דיון

במחקר זה, הראו מודל immunocompetent עכבר למחשב זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של חמתו על הגידול. כיום, חמתו משמש כמו טכניקה-thermal אבלציה רק בחולים שנבחרו מאוד מקומי מתקדם PC אין התקדמות המחלה מרוחק לאחר חודשים של טיפול לפני הניתוח. השימוש ולכן הוגבלה כי רוב החולים עם מחשב מקומי מתקדם לפתח מחלה גרורתית מרוחקת²⁰. מודל זה ישמש כבסיס ללימודי להעריך את ההשפעות של חמתו על PC באמצעות טיפול מורחבת פרמטרים ושילובים שונים.

הדבר הכי חשוב שיש לקחת בחשבון במהלך הפרוטוקול הוא הג...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ECM 830 גל מרובע אלקטרופורטור	הרווארד מכשיר	BTX # 45-0002 ( 58018-004)
2 אלקטרודה מערך מחטים	מכשיר הרווארד	45-0167
מתג רגל בטיחות	מכשיר הרווארד	45-0211
פינצטה פלטינה	מכשיר הרווארד	45-0486
DMEM-F12 מדיה	ThermoFisher Scientific	11320-033
סרום בקר עוברי	ThermoFisher Scientific	10437028
Trypsin	ThermoFisher Scientific	25200056
Matrigel	Corning	354230
איזופלורן	סיגמא-אולדריץ', בע"מ
Lacrilube	Fisher Scientific
בופרנורפין	פישר סיינטיפיק
D-לוציפרין	פרקין אלמר	122799
IVIS  מערכת הדמיה ספקטרום In Vivo	פרקין אלמר	124262
זן עכבר C57BL/6J	מעבדת ג'קסון	קו תאים 000664/שחור 6
(KPC-Luc 4580)	מעבדת J.J. Yeh באוניברסיטת צפון קרוליינה
BD מחטי מזרק Precisionglide	Sigma-Aldrich, Inc.
ספוגית אלכוהול (70% אלכוהול איזופרופיל	BD	326895
קליפרים דיגיטליים	ThermoFisher Scientific	14-648-17
אזמלים חד פעמיים, סטרילי	VWR	21909
אפליקטורים עם קצה כותנה	VWR	89198
מחט תפרים, 45 ס"מ, גודל 6-0	מכשיר הרווארד	72-3308
מחט תפרים, 45 ס"מ, גודל 4-0	מכשיר הרווארד	72-3314
פובידון-יוד 10%	BD	29900-404
כרית חימום חד פעמית	קנט סיינטיפיק קורפ	TP-3E
קוצץ שיער עכבר	KENT SCIENTIFIC CORP.	CL8787
וילון כירורגי	הרווארד מנגנון	59-7421
10010023		מדעי מלוח ThermoFisher חוצץ פוספט

79263219090646NC1292810Z192406)