הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מעבדה לגידול של אחרים Muscoid Diptera והזבובים יציב

8.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57341

⸱

3 באוגוסט 2018

 ,  ,  , 
1Agroecosystems Management Research Unit, ARS-USDA

במאמר זה

סיכום

הליך לגידול יציב זבובים (Stomoxys calcitrans) מוצג. ההליך משתמשת בחומרים זמינים באופן מקומי עבור רכיבי תזונה, ציוד ואספקה.

תקציר

זבובים יציבה, Stomoxys calcitrans, הם מזיקים רציני של בעלי חיים, בני אדם, חיות מחמד וחיות ברחבי העולם. במהלך השנים האחרונות 20 + שינויים בשיטות אגרונומית הביא התפרצויות רציניות של זבובים יציב במספר מדינות. התפרצויות אלו משובשות רעייה ונופש האנושית וכתוצאה מכך דרישות הציבור להגברת מאמצי מחקר וניהול של המזיק הזה. הליך פשוט וזול לגידול זבובים יציב במחקרי מעבדה מוצג. ההליך משתמש רכיבי תזונה מקומי זמין, ציוד ואספקה. ההליך יכול להתאים לגידול שאר הזבובים muscoid כולל הפנים זבוב (זבוב רפואי), זבוב הורן (Haematobia irritans) של זבוב הבית (זבוב דומסטיקה). ההליך מייצרת puparia לטוס יציב ממוצע של 12.5 מ"ג ו ~ 35% ביצה להישרדות למבוגרים. זבובים כ 3000 מיוצרים כל פאן.

מבוא

זבובים יציבה, Stomoxys calcitrans (ל'), הם זבובים hematophagous עקיצות מכאיבות אשר לשבש את התנהגות רועה צאן, לגרום לכאב, סבל כדי בת זוג בעלי חיים וכן לשבש פעילויות פנאי בני אדם ברחבי העולם. זבובים יציב ילדותי להתפתח ההתססה עניין וגטטיבית, מזוהם לעתים קרובות עם פסולת בעלי חיים. שינוי שיטות האגרונומי של יבולים יצרו התפרצויות רציניות של זבובים יציב יבול משקעים, ירקות אוסטרליה1, קני סוכר ברזיל2, ואננס קוסטה ריקה3. למרות 14 זבובים יציבה לכל בעלי חיים נחשבים הסף כלכלית4, תצפיות של יותר מ-2,000 זבובים לכל חיה שנעשו במהלך התפרצויות האחרונות5. רמות התפשטות להפחית את הפרודוקטיביות המארח כדי קרוב לאפס והוא יכול לגרום לתמותה6. בעקבות התפרצויות agronomically המשויך, זבובים יציב מקבלים עניין מחודש, הביקוש מעבדה מושבות גדל באופן דרמטי.

לגבי כל holometamorphic חרקים, זבובים יציב להשיג את כל החומרים המזינים הדרושים לצמיחה במהלך השלב לא בשלה או זחל. לכן, מרכיב חשוב של מערכת rearing הוא זחל דיאטה או המצע. הזחלים לטוס יציב נצפו פיתוח במגוון רחב של סובסטרטים ב השדה7 והם תלויים הקהילה מיקרוביאלית של המצע8,9. מצעים זחל טבעי מורכבים בעיקר מפרקים או ההתססה חומרים וגטטיבי לעיתים קרובות מזוהם עם פסולת חנקני.

לגידול מעבדה, יציב סובסטרטים זחל לטוס מורכבים בדרך כלל וגטטיבי בחומר, מקור נוסף חנקן. חומרים רבים שימשו דיאטות זחל לטוס יציב. תזונת הזחל הראשונה חיקה מצעים טבעיים וכללה ההתססה שיבולת שועל קש ו סוס או פרה זבל10,11. מקורות פחמימות כוללים חיטה סובין12,13,14, אספסת ארוחה12,13,14 , ניסוח המסחרי שפותחה על ידי התמחויות כימי יצרני האגודה (CSMA, 33% סובין חיטה, ארוחה אספסת 27%, 40% קבלת שמרי בגרגרים)13,14,15,16. מקורות חנקן כוללים שמרים ההשעיה12, קמח דגים, אמוניום ביקרבונט17. חומרים אינרטיים bulking כלולים לעיתים קרובות דיאטות כולל קליפות שיבולת שועל12, פסולת13, ורמיקוליט16,13,שבבי עץ18 ו מגורען קליפות בוטנים14.

אחת ממטרותיהם העיקריות מעבדה לגידול היא לייצר מוצר דומה גם פיזיולוגית "סוג הפרוע" ככל האפשר כדי בכך שמוכר יפיקו תוצאות שיקוף של אוכלוסיות שדה. פעולה זו דורשת כי ב מטלטלין ומבחר ניתן למזער לשמור גנטי גיוון ומשאבים תזונתי להיות דומות לאלה בשטח. מטרות משניות הם כדי למזער את העבודה והוצאות. רכיב מרכזי של צמצום הוצאות הוא השימוש של רכיבי תזונה מקומי זמין. הזבוב יציבים לגידול מערכת הציג פותחה כדי עונים על קריטריונים אלה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. אוסף ביצי (איור 1)

  1. הכנת כוס מדרבן, מניחים בקצה אחד של בד ~ 500 מל הספל מלא במים חמים (~ 40 ° C). חופפים את צידי הכוס ותקן עם גומייה. מקפלים את קצוות הבד לקצה האחורי של הגביע.
  2. המקום מדרבן גביע בכלוב של בת 8-10 יום זבובים עבור הנקבה Gravid ה ~ 2 יציבה זבובים oviposit על הבד.
  3. הסר גביע מדרבן ביצי הכלוב ולשטוף את הבד egging לתוך סיר קטן עם בקבוק לחיץ לשטוף.

2. מכינים פאן לגידול זחל

  1. להכין בינוני (כמויות פאן לגידול 1)
    1. לשלב סובין חיטה (500 גרם), שבבי עץ (200 גרם), ארוחה דגים (115 גרם) במחבת צלחת פלסטיק 10 L ומערבבים היטב.
    2. להוסיף מים (~ 25 ° C, 1600 mL) אמוניום ביקרבונט (50 גרם) ומערבבים עד התפרקה.
    3. להוסיף מים פתרון החומרים היבשים ולערבב להבטיח שום חומר unwetted. רמה בינונית בסיר אבל לא לדחוס.
  2. להוסיף ביצים לטוס יציב
    1. להפוך פארו רדוד בינוני אורך המחבת.
    2. להפקיד 1 מ"ל של ביצי זבוב יציב (~ 8,000 ביצים) בפארו עם ביצה פיפטה (איור 2).
      הערה: ביצה פיפטה שנעשו על ידי חיתוך של פיפטה בוגר פלסטיק בנקודה הרצויה, הוספת 100 mesh מסך והדבקה פיפטה שוב ביחד.
    3. מכסה ביצים עם שכבה דקה של המדיום כדי למנוע לייבוש.
    4. לכסות את המחבת עם הכריות, לסגור עם גומייה, תווית. מניחים סירים בחדר זחל (23 ± 2 ° C, 30%-50% RH, 12:12 [L:D] h photoperiod).
      הערה: התפתחות הזחל לוקח 10-14 ימים ממועד ההטלה.

3. הגולמי עיבוד, הזחלים העבר אל הקצה של המדיום 7 – 9 ימים לאחר ההטלה ואת Pupariate לפי ימים 13 או 14

  1. Puparia סקופ, נמצא בעיקר בקצוות של שניקית את הקרום מתפתח על פני השטח של המדיום, את והניח במחבת נקייה.
  2. למלא פאן, puparia, ½ ל ¾ מלאה במים. לשבור את הגושים של puparia, בינוני. סובין חיטה ורכיבים חלבון של המדיום לשקוע תוך כדי puparia > לצוף יום בן19.
  3. הסרת חומרים צפים, puparia ורכיבים מסוימים בינונית עם מסננת, שטיפת דרך סדרה של הנפות (מס ' 5, #7, #12, #20) כדי להסיר בינוני הנותרים. המסננת #12 אוספת את puparia ושומר #20 פסולת מוצקה מלהיכנס לטמיון. לשטוף puparia בין הנפות עם ריסוס הכיור.
  4. לשטוף puparia, בתוך המסננת #12, לתוך מחבת נקייה. למלא את המחבת ½ מלא במים. שופכים puparia צף לתוך מסננת ולאפשר את המים העודפים לנקז.
  5. העברת גמע puparia למסך ייבוש עם מאוורר ולהשאיר עד יבש (איור 3).

4. הגולמי מדף, שיטה חלופית עבור איסוף Puparia הוא עם מדף הגולמי18

הערה: המדף עשוי פיסת פלסטיק גזור מהקצה של מחבת מאכל 10 L (10.2 ס מ גובה x 10.2 ס מ x 31.9 ס מ).

  1. להכין בינוני כפי שמתואר 2.1. להתחדד בינונית במחבת מקצה אחד עמוק על ס"מ ~2.5 ס"מ ~7.5 עמוק בצד השני.
  2. במקום מדף על בינוני במים הרדודים של פאן לגידול, הקלטת כדי למנוע את הזחלים זוחל לצד המדף (איור 4).
    1. עיתוני ספוג (~14.5 x 9.0 x 4.5 ס מ3, תאית regenerated) לעטוף אותו מטלית ספוגה מים (30.5 x 42 ס מ2, כותנה) ובמקום על המדף בערך חצי סנטימטר של המדיום.
  3. להוסיף ביצים, כמתואר ב- 2.2 והמשך כמו קודם.
    1. בדוק מחבתות מדי יום כדי להבטיח הספוג יישאר לח.
  4. שטיפה puparia מן המדף, ספוג בד לתוך תבשיל נקי במחבת ויוצקים לתוך מסננת 14 ימים לאחר ההטלה.

5. בקרת איכות

  1. שוקלים כל puparia מיוצר פאן (wt סה כ.).
  2. לבודד 100 puparia, שוקל והניח 9 ס מ פטרי.
  3. מבוגרים רוזן וסקס ~ 5 – 8 ימים מאוחר יותר כדי לקבוע שיעור הופעתה ואת יחס. חנות צלחות פטרי עם הבוגרים במקפיא לספירת במועד מאוחר יותר אם יש צורך. זבובים מחולקים למינים לפי הצורה של העיניים שלהם ואת הרוחב של צלחת fronto-מסלולית20 או איברי המין תחת הגדלה נמוכה.
  4. משקל סה כ רשומות, במשקל של 100 puparia, ומספר המתגלים מהזכרים הבוגרים.

6. הכנת דם

  1. לאסוף דם טרי שור מטבחיים המקומי בדליים 19 L המכיל 70 גר' נתרן ציטראט tribasic וגופרית והרכבו של 500 מ ל מים. מערבבים דם נמרצות למשך 5 – 10 דקות וחזר אל המעבדה.
  2. זן דם דרך מסננת כדי להסיר קרישי ומחולק לתוך מיכלים 2 ל', תווית עם התאריך של אוסף וחנות במקפיא (-20 ° C).
  3. הסר מיכל מן המקפיא ומקום במקרר 2 ימים לפני הצורך. דם יכול לשמש עבור ~ 2 שבועות פעם הקרת, המאוחסן במקפיא עד 1 שנה.

7. בוגר תחזוקה

  1. להכין את הכלובים, הקו התחתון כלוב עם קצבים כדי להקל על ניקוי.
  2. מקום 50 גר' יבש הגלמים לטוס יציב (~ 3,500) בכל כלוב. מבוגרים eclose כמה שעות עד כמה ימים לאחר העיבוד הגולמי.
  3. המקום דם טרי ספוג מפית נשית על גג הכלוב כל האכלה. להתחיל האכלה בתוך 24 שעות של וגיחתו למבוגרים וחזור מדי יום עד יום לפני ההטלה (9 – 10 ימים לאחר הופעתם).
  4. לאחר ההטלה (סעיף 1), למקם את הכלוב במקפיא במשך 4-8 h, לנקות לאחר מכן על ידי הסרת את הנייר, שטיפה frass מן הצדדים קומה עם מים חמים, קרצוף כל המשטחים עם אבקת כביסה, כלור. לשטוף את הכלובים עם מים חמים, אפשר להתייבש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הזחלים pupariate 10-14 ימים, מבוגרים להגיח 14 – 16 ימים לאחר ההטלה. משך דור, ביצה, הוא ~ 24 ימים. גידול נתונים עבור מאי 2013 עד ינואר 2017 עם שלושה סוכנים bulking שונים, אוחדו שתי המושבות מוצגים באיור5. קוטונווד נתן את התשואה הטובה ביותר, 3867 ±1442 (figure-results-1 ± סטיית תקן) גלמי במשקל 12.5 מ"ג ±1.6 עם וגיחתו % ±19 74 בהפקת 2,872 ±1294 מבוגר זבובים עבור המושבה הוקמה מעבדה. יחס היה מעט מוטה לטובת 0.97:1 נקבו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

זבובים יציבה ניתן למצוא פיתוח במגוון רחב של סובסטרטים בטבע והתחנכו יכולים להיות סוגים רבים של מדיה במעבדה. השתמשנו שבבי עץ, ורמיקוליט כמו bulking סוכנים. ורמיקוליט עבד, אבל עשה הפרדת puparia של גידול בינוני קשה, היה יקר (~$0.60/pan). אולי בגלל הקשיחות נוסף של הפרדת puparia של המדיום, וגיחתו היה גם נמוך עם ורמיקוליט, 57% לעומת 75% עבור שבבי עץ. קוטונווד שבבי היו דומות ורמיקוליט, אבל לפעמים קשה להשיג. הרכיבים החשובים ביותר להיראות חומר צמח או תאית תסיסה ולשמור על 'פתח' או קצף טוב אמוני ובינוניות חנקן21

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

ברצוננו להודות Weinhold אנתוני וסטודנטים רבים שעבדו איתנו לאורך השנים עבור תמיכה טכנית, כמו גם הצעות לשיפור שלנו חרק לגידול הליכים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DiamaltPremier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ2540
CSMA Fly MediaPurina Animal Nutrition, Arden Hills, MN5S6Z
Thin Maxi PadThe Tranzonic Co., קליבלנד, אוהיו, ארה"ב5001M
עגלManna MannaPro, צ'סטרפילד, מיזורי, ארה"בManna Pro
אמוניוםביקרבונט ספקטרום כימי Manufacturing Corp, Gardena, CAA1125
סובין חיטה,חברת טחינת סימר גסה, Teutopolis, IL
Wood ShavingsTractor Supply Company, Brentwood, TN502770699
הפצת אספקה לצרכןשל קמח דגיםF1550
כלובים למבוגריםכל חברת חלונות אלומיניום, לינקולן, NeCustom45 פעמים; 45 פעמים; 45 ס"מ, 18 פעמים; מסך אלומיניום 16 רשת, גישה למלאי
9 ופעמים; בד כותנה שחור 28 ס"מרוברט קאופמן בדים, לוס אנג'לס, CAK040-114בד אגינג
10 ליטר מחבתות כלים מפלסטיקRubbermaid, סרטוגה ספרינגס, ניו יורקFG2951ARWHTמחבתות זחלים
סטוקינט, כותנה, גליל 12 אינץ' x 25 יארדחברת Tex-Care Medical Company, ברלינגטון, NC91311-225
, צפון סו סיטי, SD

מקורות

  1. Cook, D. F., Dadour, I. R., Keals, N. J. Stable fly, house fly (Diptera: Muscidae), and other nuisance fly development in poultry litter associated with horticultural crop production. J. Econ. Entomol. 92 (6), 1352-1357 (1999).
  2. Dominghetti, T. F., de Barros, A. T., Soares, C. O., Cançado, P. H. Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) outbreaks: current situation and future outlook with emphasis on Brazil. Rev. Bras. Parasitol. Vet. 24 (4), 387-395 (2015).
  3. Solórzano, J. -A., Guilles, J., Bravo, O., Vargas, C., Gomez-Bonilla, Y., Bingham, G., Taylor, D. B. Biology and trapping of stable flies (Diptera: Muscidae) developing in pineapple residues (Ananas comosus) in Costa Rica. J. Insect Sci. 15 (1), 145(2015).
  4. Berry, I. L., Stage, D. A., Campbell, J. B. Populations and economic impacts of stable flies on cattle. Trans. Am. Soc. Agric. Eng. 26, 873-877 (1983).
  5. Taylor, D. B. Area-wide management of stable flies. Area-wide management of insect pests. Vreysen, J., Hendrichs, R., Cardoso Pereira, R. , in press (2017).
  6. Bishopp, F. C. The stable fly (Stomoxys calcitrans L.), an important live stock pest. J.Econ. Entomol. 6 (1), 112-126 (1913).
  7. Hogsette, J. A., Ruff, J. P., Jones, C. J. Stable fly biology and control in northwest Florida. J. Agric. Entomol. 4 (1), 1-11 (1987).
  8. Lysyk, T., Kalischuk-Tymensen, L., Selinger, L., Lancaster, R., Wever, L., Cheng, K. Rearing stable fly larvae (Diptera: Muscidae) on an egg yolk medium. J. Med. Entomol. 38, 382-388 (1999).
  9. Romero, A., Broce, A., Zurek, L. Role of bacteria in the oviposition behaviour and larval development of stable flies. Med. Vet. Entomol. 20, 115-121 (2006).
  10. Glaser, R. W. Rearing flies for experimental purposes with biological notes. J. Econ. Entomol. 17 (4), 486-496 (1924).
  11. Melvin, R. Physiological studies on the effect of flies and fly sprays on cattle. J. Econ. Entomol. 25 (6), 1151-1164 (1932).
  12. Doty, A. E. Convenient method of rearing the stable fly. J. Econ. Entomol. 30 (2), 367-369 (1937).
  13. Bridges, A. C., Spates, G. E. Larval medium for the stable fly Stomoxys calcitrans (L.). Southwest. Entomol. 8 (1), 6-10 (1983).
  14. Hogsette, J. A. New diets for production of house flies and stable flies (Diptera: Muscidae) in the laboratory. J. Econ. Entomol. 85 (6), 2291-2294 (1992).
  15. McGregor, W. S., Dreiss, J. M. Rearing stable flies in the laboratory. J. Econ. Entomol. 48 (3), 327-328 (1955).
  16. Goodhue, L. D., Cantrel, K. E. The use of vermiculite in medium for stable fly larvae. J. Econ. Entomol. 51 (2), 250(1958).
  17. Friesen, K., Berkebile, D. R., Zhu, J. J., Taylor, D. B. Augmenting laboratory rearing of stable fly (Diptera: Muscidae) larvae with ammoniacal salts. J. Insect Sci. 17 (1), 1-6 (2017).
  18. Berkebile, D. R., Weinhold, A. P., Taylor, D. B. A new method for collecting clean stable fly (Diptera:Muscidae) pupae of known age. Southwest. Entomol. 34 (4), 469-476 (2009).
  19. Champlain, R. A., Fisk, F. W., Dowdy, A. C. Some improvements in rearing stable flies. J. Econ. Entomol. 47 (5), 940-941 (1954).
  20. Zumpt, F. The stomoxyine biting flies of the world. , Gustav Fischer Verlag. Stuttgart. (1973).
  21. Wienhold, B. J., Taylor, D. B. Substrate properties of stable fly (Diptera: Muscidae) developmental sites associated with round bale hay feeding sites in eastern Nebraska. Environ. Entomol. 41 (2), 213-221 (2012).
  22. Friesen, K., Berkebile, D. R., Wienhold, B. J., Durso, L., Zhu, J., Taylor, D. B. Environmental parameters associated with stable fly (Diptera: Muscidae) development at hay feeding sites. Environ. Entomol. 45 (3), 570-576 (2016).
  23. Albuquerque, T. A., Zurek, L. Temporal changes in the bacterial community of animal feces and their correlation with stable fly oviposition, larval development, and adult fitness. Front. Microbiol. 5 (590), 1-9 (2014).
  24. Bailey, D. L., Whitfield, T. L., LaBrecque, G. C. Laboratory biology and techniques for mass producing the stable fly, Stomoxys calcitrans (L.) (Diptera: Muscidae). J. Med. Entomol. 12 (2), 189-193 (1975).
  25. Smith, J. P., Hall, R. D., Thomas, G. D. Field studies on mortality of the immature stages of the stable fly (Diptera: Muscidae). Environ. Entomol. 14 (6), 881-890 (1985).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

גידול זבובים יציבים*Stomoxys calcitrans*שיטת איסוף ביציםהתפתחות זחליםבידוד בובותהכנת מצע לזבוביםפרוטוקול הזנת דםניטור בריאות מושבההסתגלות זבובים מוסקידייםאנטומולוגיה מעבדתית
מעבדה לגידול של אחרים Muscoid Diptera והזבובים יציב
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.