שוחרת הגידול טיפולית בתאי גזע mesenchymal (MSCs) מבטיחים לטיפול פולשני גליובלסטומה. השתלת אופטימלית כולל משלוח של MSCs לתוך חלל כריתה הגידול על פיגומים. כאן, טכניקות פרה כדי ללמוד טיפול MSC גליובלסטומה הינם מסופקים לרבות: כריתה הגידול תמונה מונחה; השרשת נזרע MSC פיגומים; טיפול לאחר הניתוח מעקב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
תמונה מונחה כריתה של גליובלסטומה, ההשתלה תוך-גולגולתי של פיגומים נזרע תאי גזע טיפולית
במאמר זה
סיכום
תקציר
גליובלסטומה (GBM), שכיחה ביותר אגרסיבי הסרטן במוח העיקרי, נושא תוחלת חיים של 12-15 חודשים. תוחלת החיים קצרה הוא בחלקו בשל חוסר היכולת של הטיפול הנוכחי, המורכב כריתה כירורגית ולאחריו הקרנות וכימותרפיה, כדי למנוע גידול פולשני מוקדים. טיפול של מוקדים אלה עשוי להשתפר עם tumoricidal האנושי בתאי גזע mesenchymal (MSCs). MSCs התערוכה הגידול חזק tropism, ניתן לתכנן חלבונים אקספרס טיפולית להרוג תאים סרטניים. החידושים במודלים פרה מציינים כי כריתה כירורגית גורם אובדן MSC מוקדמת מפחית את היעילות הטיפולית. היעילות של טיפול MSC יכולים להשתפר על ידי זריעה MSCs על גרדום poly(lactic acid) מתכלה (PLA). MSC משלוח לתוך חלל כריתה כירורגית על גרדום PLA משחזר תא השמירה, התמדה, ורצח הגידול. לחקור את ההשפעות של פלה נזרע MSC השרשה ב- GBM, דרושה מודל פרה מדויק. כאן אנו מספקים פרה פרוטוקול ניתוח כריתה הגידול תמונה מונחה של GBM בעכברים חיסונית לקויה ואחריו מתחילה MSC לגרדום השרשה. MSCs מתוכננים עם בונה lentiviral צורונים אקספרס, מפרישים טיפוליות הקשורות TNFα בתדר אפופטוזיס ליגנד (שובל), כמו גם חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) כדי לאפשר מעקב פלורסנט. באופן דומה, לתאי הגידול U87 מתוכננים mCherry אקספרס ו גחלילית לוציפראז, מתן כפול פלורסנט/זורח מעקב. בעוד בשימוש כיום עבור חוקרים תאי גזע מתווכת מסירת הרפוי, פרוטוקול זה יכול להיות שונה כדי לחקור את ההשפעה של כריתה כירורגית על התערבויות אחרות GBM.
מבוא
גליובלסטומה (GBM) הוא הסרטן השכיח ביותר במוח העיקרי בקרב מבוגרים, עם עגומה חציון ההישרדות של רק 12-15 חודשים1,2,3,4,5. הישרדות שלא חל שיפור משמעותי מאז 2005 כאשר קליני הסטנדרטי העכשווי של כריתה כירורגית מקסימלי ולאחריו הקרנות וכימותרפיה temozolomide הנלווה ו אדג'וונט היה מאומץ6,7. בעוד טיפול זה מספק חולים עם הקלה זמנית של הסימפטומים, סטנדרט של טיפול לטיפול תמיד תוצאות הישנות סרטן פולשני foci להתחמק כריתה, מוגנים מפני טיפולים מערכתית על ידי מחסום הדם....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של אוניברסיטת צפון קרולינה בצ'אפל היל.
הערה: הליך זה מבוצע על עכברים עם גולגולת, כמו גרסה מותאמת של פרוטוקול Mostany ו- Portera-Cailliau19 שבה נמחקת לרקמת העצם זה הוא הוסר בניתוח, עוזב את המוח נגיש עבור הקמת ו בסופו של דבר כריתה של גידולים GBM. בעקבות הניתוח, גידולים נוצרים באמצעות השרשה סטיאוטטי כפי שמתואר אוזאווה ו ג'יימס20. ואנחנו משתילים עונה 1 פרק 10-5 U87 mCh-Fl התאים בקואורדינטות סטיאוטטי הבאים (ב מ מ bregma): (2.5, 0 -0.5).
1. תא תרבות, לגרדום הכנה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תאים סרטניים U87 היו מתוכנן mCherry אקספרס ו גחלילית לוציפראז (U87 mCh-Fl) לפני ההזרקה, וכדי לאפשר כריתה תמונה מונחה, ביולומינסנציה מעקב (איור 2 א-ג). תאי גזע מהונדסים עם אבחון GFP-Rluc (MSC-GFP) או טיפולית GFP-משפט (MSC-שובל) באופן דומה, נזרע על גבי פיגומים PLA לאשר מצורף והתפשטות (איור דו-ממדי-F).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ניתוח יכול בדרך כלל להסתיים בתוך 30 דקות לכל עכבר, בהתחשב בכך הנקודות הבאות נלקחים בחשבון כדי למקסם את דיוק ולהימנע מלכודות זמן רב. ראשית, ודא שכשהעכבר ממוקם כראוי בכלי stereotaxic לפני הפעלת ההליך. תנועות ראש לא רצויים יגביל דיוק כירורגי של הניתוח, המיקום של הגידול השרשה, וכן מידת כריתה הגידול. לפני כריתה, להסיר לחלוטין את החלק של דורה המכסים את הגידול. דורא קשוח, סיבי מתקשה כמו מייבש במהלך השאיפה. אם שהיישום יוסר, השכבה הקשה של המוח מוקשח עשוי להגביל את העצמות עצה ניידות ולמנוע כריתה מלאה הגידול. במהלך כריתה, כלי הדם ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
ד"ר גליונות, Bagó ו- Hingtgen יש הון עצמי הרפוי בז למי יש רישיון היבטים של תאי גזע וטכנולוגיה לגרדום של UNC בצ'אפל היל.
תודות
המחברים להכיר תרומות העריכה של ד ר קתרין Pietrosimone. PLA פיגומים יוצרו על ידי המעבדה של ד ר אליזבת Loboa, צפון קרוליינה סטייט. עבודה זו נתמכה על ידי קרן המחקרים UNC Lineberger מקיף במרכז לחקר הסרטן של אוניברסיטת סרטן UNC Translational ואת המכון למדעי קלינית (KL2TR001109, UL1TR001111).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| רק עבור מכשיר סטריאוטקסי לעכבר | Stoelting | 51730 | שומר על מיקום ראש יציב במהלך הניתוח |
| פלואורסצנטי מנתח סטריאומיקרוסקופ | Leica | M165 FC | מאפשר הדמיה בזמן אמת של הגידול במהלך הכריתה |
| מערכת מזרק סטריאוטקסי משולב ממונע (ISI) | Stoelting | 53315 | מאפשר נפח וקצב מדויק של הזרקת תאי גידול |
| דבק רקמות | Vetbond 3M | 1469 | דבק סוגי לסגירת פצע עור |
| דמעות מלאכותיות | Akorn | 664268 | מונע התייבשות בעיניים במהלך ניתוח |
| Webcol אלכוהול מכין | Covidien | 6818 | אתר חיטוי חתך |
| קרצוף כירורגי בטדין | Purdue Fredick Company | 6761815117 | אתר חיטוי |
| אפליקטורים עם קצה כותנה | פישרברנד | 23-400-115 | כלי ניתוח |
| מערכת שאיבה E-vac | Argos | EV310 | משאבת ואקום המשמשת לכריתת גידול |
| פיברינוגן ותרומבין המופקים מכפי שהתקבלו TISSEEL | Baxter | כדי לאבטח את הפיגום באופן זמני בחלל הכריתה | |
| IVIS מערכת הדמיה אופטית קינטית in vivo | Caliper Life Science | Bioluminescent Imager | |
| D-Luciferin מלח אשלגן | PerkinElmer | 122799 | חומר הדמיה In vivo |
מקורות
- Adamson, C., et al. Glioblastoma multiforme: a review of where we have been and where we are going. Expert opinion on investigational drugs. 18 (8), 1061-1083 (2009).
- Asthagiri, A. R., Pouratian, N., Sherman, J., Ahmed, G., Shaffrey, M. E. Advances in Brain Tumor ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
