מאמר שיטה

מהדור בתפוקה גבוהה תלת מימדי הגידול Spheroids להקרנה סמים

8.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57476

⸱

5 בספטמבר 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Oncology Drug Discovery: Molecular Pharmacology, Novartis Institutes for Biomedical Research, 2Chemical Biology and Therapeutics, Novartis Institutes for Biomedical Research

במאמר זה

סיכום

במגוון רחב של מחלות אינדיקציות, דגמים רלוונטיים יותר מבחינה פיזיולוגית מתנהג הסמים מפותחת, מיושמים לתוך גילוי תוכניות. המערכת החדשה דגם המתוארים כאן מדגים איך תלת מימדי הגידול יכול להיות תרבותי ולא הוקרן תפוקה גבוהה 1536-ובכן צלחת מערכת מבוססת לחיפוש תרופות חדשות אונקולוגיה spheroids.

תקציר

תאים סרטניים יש באופן שגרתי תרבותי בשני מימדים (2D) על משטח פלסטיק. טכניקה זו, עם זאת, חסרה את הסביבה נכון גידול בנפח גדול חשוף vivo בתוך. גידולים מוצקים גדלים לא כמו סדין המצורפת פלסטיק, אבל במקום כאוסף של תאים המשובטים תלת מימדי (3D) מרחב אינטראקציה עם שכניהם, ועם מאפיינים המרחבי ברורים כגון שיבוש קוטביות סלולרית רגילה. אינטראקציות אלה לגרום תלת-ממד תרבותי תאים לרכוש מאפיינים מורפולוגיים הסלולר רלבנטיות יותר ויוו גידולים. בנוסף, גידול בנפח גדול עומד בקשר ישיר עם סוגי תאים אחרים כגון תאי סטרומה ואת המערכת החיסונית, כמו גם של מטריצה חוץ-תאית של כל סוגי תאים אחרים. המטריקס שהופקדו מורכבת של מקרומולקולות כגון קולגן fibronectin.

בניסיון להגביר את התרגום של ממצאי המחקר באונקולוגיה מן הספסל אל מיטתה, קבוצות רבות החלו לחקור את השימוש במערכות דגם התלת-ממד באסטרטגיות הפיתוח שלהם סמים. מערכות אלו נחשבים רלבנטי יותר מבחינה פיזיולוגית, כי הם מנסים לסכם את הסביבה הטרוגנית ומורכבת של הגידול. מערכות אלו, עם זאת, יכול להיות מורכב למדי,, למרות נוטה צמיחה בשנת 96-ובכן תבניות, וחלק עכשיו אפילו ב- 384, והם מציעים מספר אפשרויות הצמיחה בקנה מידה גדול, הקרנה. זה נצפתה הפער הוביל להתפתחות של השיטות המתוארות כאן בפירוט כדי תרבות גידול spheroids בתפקיד תפוקה גבוהה ב- 1536-ובכן צלחות. שיטות אלה מייצגים פשרה למערכות מורכבות מאוד מבוסס-מטריקס, אשר קשה מסך וקונבנציונאלי מבחני 2D. מגוון רחב של שורות תאים סרטן מחסה מוטציות גנטיות שונות מוקרנים בהצלחה, בחינת היעילות מורכבים באמצעות ספריית אצר של תרכובות מיקוד מסלול Mitogen-Activated קינאז או MAPK. התגובות תרבות ספרואיד משווים לאחר מכן על התגובה של התאים גדלו ב 2D, פעילויות דיפרנציאלית מדווחים. שיטות אלה מספקים פרוטוקול ייחודי לבדיקת פעילות מורכבת בסביבה תלת-ממד תפוקה גבוהה.

מבוא

בעשור האחרון, יותר ויותר מחקרים יש ליישם את השימוש תא תלת-ממד מודלים תרבות כדי להבין את המושגים לא recapitulated באופן מלא על ידי גידול התאים ב- 2D על הפלסטיק. דוגמאות של מושגים אלה כוללים מסעה קוטביות תאים אפיתל רגיל1 שבו יאבדו הכיוון המרחבי של הפסגה, הבסיס שכבות של תאים, כמו גם את התפקיד של מטריצות בוויסות הישרדות, גורל. המחקר האונקולוגי, בפרט, השתמשה דגמי תלת-ממד כדי להבין את הביולוגיה בסיסי של תאים סרטניים, ההבדלים בין 2D and 3D תא תרבות מערכות3,4. הפיתוח של טכניקות מתוחכמות יותר של תרבות תא ושל שלהם התאקלמות נוספת לתבניות רב טוב אפשרה את החיפוש אחר תרופות חדשות הגדרות תלת-ממד. בניגוד לתאים לגדול בתנאים 2D, 3D מודלים של גידולים בטווח המורכבות של מערכות סלולריות בשכבות5 באופן חד-תא-type כדורים בגדלים שונים, הספירות מולטי-cell-סוג מורכב6,7, 8. הגילוי של תרכובות הרומן או תכשירים זה מנע בעוצמה לגרום מוות תאי במערכות אלו דגם התלת-ממד היא, אפוא, עניין גבוהה סמים פיתוח קמפיינים. נקודות הקצה של מבחני אלה הם לעתים קרובות זהים לאלו שבוצעו בתרבויות 2D להעריך שינויים התפשטות תאים, אבל כאשר התנהלה באווירה רלוונטי יותר מבחינה פיזיולוגית, לחפור רמת התלות של ג'ין היעד או מסלול להיות אמיתי חקרו.

כפי שהובאו לעיל, מגוון רחב של מערכות מודל פותחו כדי ללמוד תגובות סמים במערכות תרבות תלת-ממד, אך הרוב להשתמש גם צלחות microtiter 96 או 384-ובכן, אינם בקלות לצורכי תפוקה גבוהה ההקרנה (HTS) התבניות המשמשות לעתים קרובות ב קמפיינים ההקרנה של גילוי סמים. מערכות אלה כוללות שימוש תלוי droplet טכנולוגיות, ספרואיד תרבויות, רוטט תאים עם חלקיקים מגנטיים לזירוז ריחוף, תרביות ג'ל טבעי או סינתטי כגון קולגן, Matrigel או פוליאתילן גליקול (PEG)2 . כאן, אנו מציגים את השיטות מפורט של טכניקה מפותחת בעבר כדי לייצר של שורות תאים סרטן הוקמה בתבנית 1536-ובכן צלחת תרבויות ספרואיד תלת-ממד. ב פרוטוקול זה, מדיום מאוד מוגדרים משמש אשר מונע את הקובץ המצורף של שורות תאים בדרך כלל חסיד9. מערכת זו יש מגבלות (כלומר, זה לא מסכם את הדברים באופן מלא מערכת מודל מורכב של סרטן), אבל בכל זאת, מבחני אלה לאפשר הקרנה תפוקה גבוהה של אוספים גדולים של מולקולות קטנות והשוואות חריץ בצורת הצלב של סמים תגובה בין תרבויות 2D and 3D נגד מגוון רחב של שורות תאים וחיבורים.

הקווים התא שנבחר כדי להדגים השיטות במאמר זה כל הנמל מוטציות בגנים הקשורים את MAPK איתות, שביל אשר הוא מאוד dysregulated ב סרטן, עבור הרפוי רבים אשר הינם זמינים. רבים מן הקווים יש הפעלת מוטציות oncogenic הווירוס קירסטן עכברוש סרקומה המכונה גם קראס, RAS נוירובלסטומה או NRAS, אונקוגן וירוס את הארווי עכברוש סרקומה או HRAS ו של kinases המשויך במהירות מואצת Fibrosarcomas, הידוע גם בשם RAFs. הספרות האחרונות עולה כי מעכבי של צמתים שונים של מסלול זה הן באופן ייחודי יותר אפקטיבי בקבוצת משנה של הקווים התא כאשר גדל תחת תנאים 3D9,10. מחקר אחד מצא כי כאשר תאים סרטניים עם ראס הפעיל היו תרבותי ב- 3D, הם הפגינו רגישות מוגברת של מעכבי MAPK, יתר על כן, כי גישה זו יכולה לזהות מסלולים, ממוקד מעכבי עלול לפספס ב דו-ממדי מסורתי הגדרה. מטרת מחקר זה היא להציג את שיטות השתמשו כדי תרבות שורות תאים אלה, עוד יותר, כדי להדגים את האבחנות השונות התגובות האלה מעכבי אשר יכול להיות שנצפו רק בעת שימוש 3D תא מערכות התרבות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. culturing של הגידול 1536-ובכן 3D Spheroids

  1. להכין טרי הגידול 3D ספרואיד בינוני גבעול (תא בינוני + החלפת סרום נוקאאוט אינסולין-transferrin-סלניום) על-ידי הוספת ריאגנטים הבאים של עד 500 מ"ל של מדיום נשרים שונה של Dulbecco (DMEM/F12): פניצילין x 1/סטרפטומיצין, 10 ננוגרם למ"ל של בן אנוש בסיסי פיברובלסט גורם גידול (bFGF), 20 ng/mL של האדם גורם הגדילה באפידרמיס (EGF), 0.4% אלבומין שור (BSA) (V שבר), 1 x אינסולין-transferrin-סלניום, והחלפת נוקאאוט 1% (KO) סרום (לא להקפיא-הפשרה).
  2. מסנן-לעקר המדיום כולו תוספי דרך מערכת סינון בקבוק-העליון 0.4 מיקרומטר.
  3. ניתוק הקווים התא סרטן, אשר יש גדלים בהתאם לתנאים מומלצים תרבות שגרתית, מן המבחנות תא-תרבות מסורתית בשטיפה 3 x עם פוספט 1 x buffered כמות מספקת של 0.25% טריפסין (1 מ"ל תמיסת מלח (PBS) והוספת לכל 5 ס מ2) עבור 5 דקות כדי ליצור שכבה דקה על פני התאים. לנטרל את טריפסין עם 5 x כמות המדיום המכיל את הנסיוב והמשך לספור את התאים. לדוגמה, השתמש 25 מיליליטר בינוני 5 מ של טריפסין.
  4. התאם את הריכוז של הפתרון תא 62.5 x 104 תאים למ"ל על מנת זרע סך של 500 תאים לכל באר µL 8 ספרואיד בינוני לתוך הלוחות רקמות-תרבות-מטופלים 1536-. טוב.
  5. ב- cabinet בטיחות ביולוגית, זרע את התאים באמצעות קלטת מעוקרות, קטן נירוסטה-ראש-פלדה עם מערכת סינון מבוססת על המשאבה. בין שורות תאים שונים, ריקון הצנרת של הקלטת עם 1-PBS ו- 70% אתנול 10 s.
  6. לחלופין, זרע את התאים באמצעות נוזלי עוזר ממוקם בתוך חדר HEPA-מסוננים באמצעות קלטת מעוקרות, קטן נירוסטה-ראש-פלדה, משאבה סחרור או משאבת מזרק מצורף, בהתאם למספר הצלחות בכל שורה התא זקוק.
  7. חותם את הצלחות באמצעות גושפנקה לנשימה צלחת דבק גם באופן ידני או באמצעות סילר לאיטום של צלחת.
  8. מקם את הצלחות חממה ספינינג שוכן בגובה 10 סל ד ו- 37 ° C עם 5% פחמן דו-חמצני (CO2) ו- 95% לחות יחסית. אפשר את spheroids טופס בתלת-ממד.

2. culturing קווי סרטן 2D 1536-ובכן

הערה: הקווים סרטן 2D 1536-טוב צריך להיות מחונן 24 שעות לפני התוספת של המתחם אל צלחות תלת-ממד

  1. להכין מדיום התא סרטן 2D על-ידי הוספת ריאגנטים הבאים של 500 מ ל מדיום הגידול המתאים עבור השורות שנבחרו: 1 x פניצילין/סטרפטומיצין ו-10% עוברית שור סרום (FBS).
  2. מסנן-לעקר המדיום כולו תוספי דרך מערכת סינון בקבוק-העליון 0.4 מיקרומטר.
  3. ניתוק הקווים התא סרטן, אשר יש גדלים בהתאם לתנאים מומלצים תרבות שגרתית, מן המבחנות תא-תרבות מסורתית בשטיפה 3 x 1 x PBS, הוספת כמות מספקת של 0.25% טריפסין (1 מ"ל לכל 5 ס מ2) במשך כשלוש דקות ליצור שכבה דקה על פני התאים. לנטרל את טריפסין עם 5 x כמות המדיום המכיל את הנסיוב והמשך לספור את התאים. לדוגמה, השתמש 25 מיליליטר בינוני 5 מ של טריפסין.
  4. התאם את הריכוז של הפתרון תא 62.5 x 104 תאים למ"ל על מנת זרע סך של 500 תאים לכל באר µL 8 בינוני מלא לוחות רקמות-תרבות-מטופלים 1536-. טוב.
  5. ב- cabinet בטיחות ביולוגית, זרע את התאים באמצעות קלטת מעוקרות, קטן נירוסטה-ראש-פלדה עם מערכת סינון מבוססת על המשאבה. בין השורות תאים שונים, ריקון הצנרת של הקלטת עם 1-PBS סטרילי ו 70% אתנול 10 s.
  6. לחלופין, זרע את התאים באמצעות נוזלי עוזר ממוקם בתוך חדר רובוטיקה HEPA-מסוננים באמצעות קלטת מעוקרות, קטן נירוסטה-ראש-פלדה, משאבה סחרור או את משאבת מזרק מצורף, בהתאם לנפח של הצלחות בכל תא קו הדרושים.
  7. חותם את הצלחות באמצעות גושפנקה לנשימה צלחת דבק גם באופן ידני או באמצעות סילר לאיטום של צלחת.
  8. מקם את הצלחות חממה ספינינג שוכן בגובה 10 סל ד ו- 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעןת לפני התוספת מורכבים, עם 5% CO2 ו- 95% לחות יחסית.

3. בנוסף במתחם

  1. להכין דילולים מתומן, מקופלים ל- 3 סידורי של מעכבי MAPK ב- 100% דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד) על רובוט נוזלי-טיפול עם ריכוז העליון 10 מ מ. הפרוטאזום Bortezomib משמש פקד חיובי עבור תא מלאה הורג כדי לקבוע את הטווח הדינמי של וזמינותו.
  2. הכל מהיר-ספין assay צלחות וצלחות מתחם ב g x 100 כדי לאסוף את כל עיבוי. להסיר את החותם דבק כל צלחת ומניחים צלחת על הגדרת מנפק אקוסטי כדי להוסיף סך של 8 nL של כל המתחם/דילול המייצגים ריכוז סופי של דימתיל סולפוקסיד 0.1% לכל טוב מנה מורכבת העליון של 10 מיקרומטר.
  3. לאחר השלמת התוספת של המתחם, במקום מכסה תרבות בהזמנה אישית, פלדת תא אשר מונע התאדות בצלחת ומניחים את הצלחת לתוך חממה ספינינג ב 37 מעלות צלזיוס במשך 5 ימים, עם 5% CO2 ו- 95% לחות יחסית.

4. זיהוי ריאגנט תוספת ו את הקניית נתונים גולמיים

  1. לחמם אמצעי אחסון נאותים של ריאגנט פירוק התא המכיל luciferin כדי לזהות שינויים אדנין טריפוספט (ATP) ושינויים, לפיכך, את התפשטות תאים בטמפרטורת החדר או באמבט מים 37 º C. להוסיף סך של µL 3 מהתרכובת זיהוי מכל קידוח באמצעות משאבה סחרור, דגירה את הצלחת בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות לפחות.
  2. ללכוד את הארה על luminometer צלחת.

5. עיבוד נתונים

  1. לחלץ את הנתונים הגולמיים של המכשיר, לנרמל את כל השדות המכילים תרכובות מבחן לממוצע של כל בארות המכיל דימתיל סולפוקסיד לבד של הפקד נייטרלי. משווי זה לחשב את שיעור הצמיחה עיכוב של כל המתחם. זה הושלמה באמצעות הפונקציה נוסחה ב- Microsoft Excel שבה f (x) = {(לדגום ערך יחידות קלות יחסית (RLUs) / (ממוצע דימתיל סולפוקסיד ערך RLUs) * 100)}.
  2. ליצור עקומות מנה-תגובה של IC50s מעכבות על-ידי יצירת גרפים את הערכים של נתונים מנורמל מ שלב 5.1 נגד הריכוז מורכבים באמצעות תוכנית graphing.
    הערה: ניתחנו את הנתונים באמצעות הליוס, כלי תוכנה NIBR פנימי. כדי להשלים פעולה זו, בחרנו בכלי ניתוח עקומת nonparametric.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מגוון של תא סרטני הוקמה קווים ידועה לגדול גם בתנאים תרבות 2D נבדקו באמצעות השיטות המתוארות כאן. להחליפן בתמונות מתוך מגוון של סרטן מוטציה MAPK תא קווים (Calu-6:KRAS, NCI-H1299:NRAS, SK-מל-30:NRAS ולאחר KNS-62:HRAS) ניתן לראות באיור1. תמונות אלה מדגימים כי למרות הקווים תא מורפולוגיות שונות, כל אחד נוצר 3D מבנים הלוחות assay 1536-. טוב. איור 2 מדגים את זה, כאשר נעשה שימוש להקרנה בקנה מידה גדול, רגישות מתחם ההפרש בין תרבויות גדלו ב ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

השיטות המובאות כאן מדגימים פרוטוקול מפורט על איך לייצר spheroids הגידול ב- 1536-ובכן לוחות עבור הקרנות מתחם בקנה מידה גדול. שיטות אלה היו בתחילה ממאמרו של עבודה במכון הסרטן הלאומי שבו הגידול spheroids גדלו במבחני בתפוקה נמוכה ב- 6-ובכן, 96-ובכן צלחות לשאול שאלות אודות יחסי תלות גנטית וגם רגישות מתחם13, 14 , 15. תכונה חיוני וייחודי של פרוטוקול זה היא כי spheroids נוצרות מתאי מסורתי 2D תרבותי רקמות 1536-פלטות באמצעות הגדרה מדיה המ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים הם עובדים של נוברטיס, כמה מהעובדים הם גם בעלי המניות.

תודות

המחברים רוצה להכיר מארק פרר המרכז הארצי לקידום מדעי Translational, מכוני הבריאות הלאומיים שלו תמיכה והדרכה על ההתפתחות הראשונית של מבחני אלה. בנוסף, ברצוננו להודות אליסון פרימן, Mariela Jaskelioff, מיכאל אקר, ג'ייקוב Haling ו- Vesselina קוק קלט מדעי ודיון שלהם כמו פרויקט חברי צוות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Reagents
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM)/F12ATCC30-2006נרכש כפתרון מוכן. קבלה זו נמצאה מועדפת בהשוואה לספקים אחרים.
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM)/F12Lonza12-604Fנרכש כפתרון מוכן.
מכון הזיכרון רוזוול פארק (RPMI)לונזה12-115Qנרכש כפתרון מוכן.
סרום בקר עוברי (FBS)Seradigm1500-500נרכש כפתרון מוכן.
1x 0.25% טריפסין עם חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)היקלוןSH30042.01נרכש כתמיסה מוכנה.
1x פניצילין/סטרפטומיציןGibco15140נרכש כפתרון מוכן.
10 ננוגרם/מ"ל גורם גדילה פיברובסט בסיסי אנושי (bFGF)SigmaF0291השעיה במים סטריליים.
20 ננוגרם/מ"ל גורם גדילה אפידרמלי אנושי (EGF)SigmaE9644השעיה במים סטריליים.
0.4% אלבומין סרום בקר (BSA)SigmaA9418השעיה ב-PBS סטרילי ובמסנן.
1x Insulin Transferrin Selenium (ITS)Gibco51500056
1% KnockOut (KO) החלפת סרוםGibco10828-028הוסף טרי ממש לפני השימוש.
100% דימתיל סולפוקסיד (DMSO)Sigma276855-100ML
CellTiter-GloPromegaG7573נרכש כתמיסה מוכנה.
<חזק>חומרים מתכלים
קלטת קומבי קטנהThermoFisher24073295
קלטת מרובת זרימה קטנהBioTek294085
1536 בארות צלחות TC סטריליות (לבן)קורנינג3727
צלחות TC סטריליות 1536 בארות (שחור)קורנינג3893
צלחותScivaxMBL InternationalNCP-LH384-10<
חזק>ציוד
דבקים אטמיםThermoFisherAB0718
חממת ספינינגLiCONiC
מכסי נירוסטההמכון הגנומי של קרן המחקר נוברטיס (GNF)
ATS מתקן אקוסטיEDS Biosystems
Echo Acoustic DispensorLabcyte
LuminometerEnvision-Perkin Elmer
משאבה פריסטלטית- Multidrop CombiThermoFisher
Liquid Handler-Multiflow FXBioTek

מקורות

  1. Lee, M., Vasioukhin, V. Cell polarity and cancer--cell and tissue polarity as a non-canonical tumor suppressor. Journal of Cell Science. 121 (Pt 8), 1141-1150 (2008).
  2. Nath, S., Devi, G. R. Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model. Pharmacology & Therapeutics. 163, 94-108 (2016).
  3. Weigelt, B., Ghajar, C. M. The need for complex 3D culture models to unravel novel pathways and identify accurate biomarkers in breast cancer. Advanced Drug Delivery Reviews. 69, 42-51 (2014).
  4. Li, Q., Chow, A. B., Mattingly, R. R. Three-dimensional overlay culture models of human breast cancer reveal a critical sensitivity to mitogen-activated protein kinase kinase inhibitors. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 332 (3), 821-828 (2010).
  5. Li, L., Lu, Y. Optimizing a 3D Culture System to Study the Interaction between Epithelial Breast Cancer and Its Surrounding Fibroblasts. Journal of Cancer. 2, 458-466 (2011).
  6. Pickl, M., Ries, C. H. Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab. Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).
  7. Nyga, A., Cheema, U., Loizidou, M. 3D tumour models: novel in vitro approaches to cancer studies. Journal of Cell Communication and Signaling. 5 (3), 239-248 (2011).
  8. Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update. Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).
  9. Mathews Griner, L. A., et al. Large-scale pharmacological profiling of 3D tumor models of cancer cells. Cell Death & Disease. 7 (12), e2492(2016).
  10. Polo, M. L., et al. Responsiveness to PI3K and MEK inhibitors in breast cancer. Use of a 3D culture system to study pathways related to hormone independence in mice. PLoS One. 5 (5), e10786(2010).
  11. Hatzivassiliou, G., et al. RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth. Nature. 464 (7287), 431-435 (2010).
  12. Bhargava, A., et al. Registered report: RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth. Elife. 5, e09976(2016).
  13. Mathews, L. A., Hurt, E. M., Zhang, X., Farrar, W. L. Epigenetic regulation of CpG promoter methylation in invasive prostate cancer cells. Molecular Cancer. 9, 267(2010).
  14. Mathews, L. A., Crea, F., Farrar, W. L. Epigenetic gene regulation in stem cells and correlation to cancer. Differentiation. 78 (1), 1-17 (2009).
  15. Mathews, L. A., et al. Increased expression of DNA repair genes in invasive human pancreatic cancer cells. Pancreas. 40 (5), 730-739 (2011).
  16. Mathews, L. A., et al. A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells. Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).
  17. Horii, T., Nagao, Y., Tokunaga, T., Imai, H. Serum-free culture of murine primordial germ cells and embryonic germ cells. Theriogenology. 59 (5-6), 1257-1264 (2003).
  18. Sun, L., et al. Epigenetic regulation of SOX9 by the NF-kappaB signaling pathway in pancreatic cancer stem cells. Stem Cells. 31 (8), 1454-1466 (2013).
  19. Mathews, L. A., et al. A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells. Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).
  20. Mathews Griner, L. A., et al. High-throughput combinatorial screening identifies drugs that cooperate with ibrutinib to kill activated B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (6), 2349-2354 (2014).
  21. Herter, S., et al. A novel three-dimensional heterotypic spheroid model for the assessment of the activity of cancer immunotherapy agents. Cancer Immunology, Immunotherapy. 66 (1), 129-140 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

throughput1536MAPKATP

מאמרים קשורים